CN103364555B - 一种检测呋喃西林代谢物的试剂盒及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测呋喃西林代谢物的试剂盒及方法。试剂盒包括微孔试剂和试纸，所述微孔试剂中冻干有胶体金标记的呋喃西林代谢物特异性抗体，所述呋喃西林代谢物特异性抗体可为呋喃西林代谢物单克隆抗体或呋喃西林代谢物多克隆抗体；所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板依次连接组成，所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体。用本发明试剂盒检测呋喃西林代谢物的方法简单、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

Description

一种检测呋喃西林代谢物的试剂盒及方法

技术领域

本发明涉及一种检测呋喃西林代谢物的试剂盒及方法，具体涉及一种用于检测样品中呋喃西林代谢物的胶体金试纸条，其特别适于动物组织中呋喃西林代谢物残留的检测。

背景技术

硝基呋喃类药物常作为广谱类抗生素用于预防和治疗由沙门氏菌和埃希氏菌引起的猪、牛、家禽及蜜蜂的胃肠道疾病。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，此类药物禁止在治疗和饲料中使用。

由于硝基呋喃类原型药在生物体内代谢迅速，无法检测，但其代谢产物因和蛋白质结合而相当稳定，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。目前用来检测硝基呋喃类代谢物的最常用方法是高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC-MS/MS)等，这些方法灵敏度高、结果准确、重复性好、假阳性少，但样品前处理过程复杂，仪器化程度高价格昂贵，与之相比，免疫方法具有灵敏度高、样品预处理简单、短暂的检测时间、较大的检测样本量等特点，适合现场监控和大量样品的筛查。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测呋喃西林代谢物的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括试纸和微孔试剂，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板；所述微孔试剂中冻干有呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物；呋喃西林代谢物特异性抗体可为呋喃西林代谢物单克隆抗体或呋喃西林代谢物多克隆抗体；反应膜上包括检测区和质控区；当呋喃西林代谢物特异性抗体为呋喃西林代谢物单克隆抗体时，检测区包被呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当呋喃西林代谢物特异性抗体为呋喃西林代谢物多克隆抗体时，检测区包被呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗兔抗抗体。

所述呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物是由呋喃西林代谢物半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物中的呋喃西林代谢物特异性抗体是以呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白作为免疫原制备获得。

所述保护膜粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线。

所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试剂盒的方法，其包括步骤：

1)制备冻干有呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2)制备具有包被呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4)将1)和3)制备好的冻干有呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

具体地说，步骤包括：

1)制备呋喃西林代谢物半抗原；将呋喃西林代谢物半抗原与载体蛋白偶联，制备呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物；

2)用呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌呋喃西林代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物免疫兔，得到呋喃西林代谢物多克隆抗体；

3)提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗体或羊抗兔抗抗体；

4)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

5)将制备的呋喃西林代谢物特异性抗体加入到制备的胶体金中，得到呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物；

6)将呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中后，将微孔试剂加上微孔塞；

7)将样品吸收垫用含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5％～1％体积百分含量)、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；

8)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜；

9)将制备好的微孔试剂和试纸组装成试剂盒，2～8℃条件下保存12个月。

本发明的另一个目的是提供一种应用上述试剂盒检测动物组织中呋喃西林代谢物残留的方法，它包括步骤：

(1)样品前处理方法；

(2)用试剂盒进行检测；

(2)分析检测结果。

本发明中用试剂盒检测样品时，将待检样品溶液滴加于微孔试剂中，混匀后将标有MAX标记线端向下，插入微孔试剂，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向反应膜扩散；若待检样品液中呋喃西林代谢物的含量高，则扩散过程中待检样品液中的呋喃西林代谢物可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上呋喃西林代谢物的抗原结合点，阻止金标抗体与反应膜上呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物结合，检测区不显色，而抗抗体则可与金标抗体结合，质控区显色；若待检样品液中呋喃西林代谢物的含量低或无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与反应膜上呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联结合，检测区显色，同时抗抗体也可与金标抗体结合，质控区显色。如果质控区不显色，则试纸失效。如图4所示。

阳性：当质控区(C)显示出条带，而检测区(T)不显色，判为阳性，用“+”表示。

阴性：当质控区(C)和检测区(T)均显示出条带，判为阴性，用“-”表示。

无效：当质控区(C)不显示条带，试纸失效。

本发明的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。其中，采用高特异性的呋喃西林代谢物单克隆抗体，保证了检测结果的可靠性；将金标抗体冻干在微孔试剂中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。用本发明试剂盒检测呋喃西林代谢物的方法，简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

附图说明

图1为试纸剖面结构示意图。

图2为试纸俯视图。

图3为微孔试剂图。

图4为试纸检测结果判定图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例1检测呋喃西林代谢物的试剂盒的构成

一、试纸(称作试纸条)(图1)

所述试纸是由底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜组成；

所述样品吸收垫1、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序粘贴在底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；

所述试纸的样品吸收垫端粘贴有保护膜，保护膜7覆盖在样品吸收垫上的检测端，在检测端保护膜上印有MAX字样(图2)；

所述反应膜上有检测区4和质控区5，均呈与所述试纸条的长相垂直的条带状，检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一端，质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。检测区包被有呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物(呋喃西林代谢物半抗原-卵清白蛋白的偶联物)，质控区包被有羊抗鼠抗抗体；

所述底板为PVC底板；所述样品吸收垫为吸滤纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

二、微孔试剂(图3)

所述微孔试剂8上冻干有呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物，冻干量0.20～0.25μg/mL；所述微孔试剂具有微孔塞9。

将上述试纸、微孔试剂组装成试剂盒，在2～8℃环境中保存，有效期12个月。

实施例2实施例1中所述试剂盒的制备方法

一、试剂盒的制备

试剂盒的制备方法主要包括以下步骤：

1)制备冻干有呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2)制备具有包被呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被羊抗鼠抗抗体的质控区的反应膜；

3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4)将1)和3)制备好的冻干有呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

下面分步详细叙述：

(一)各部件的制备

1.呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的合成与鉴定

(1)呋喃西林代谢物半抗原的制备

a.取1.0g对羟基苯甲醛溶于乙腈中，加入0.32g碳酸钾，0.1g碘化钠，搅拌。加入溴乙酸乙酯0.44g，装上回流冷凝管，80℃搅拌过夜。反应停止后，蒸干乙腈，加水溶解，乙酸乙酯萃取，蒸干上硅胶柱，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1过柱纯化得产物1.08g；

b.取步骤a得到的1.08g产物溶于乙醇中，加氢氧化钾0.5g，70℃搅拌4h。反应停止后，蒸干乙醇，加水溶解，调节pH值到6，加60ml×3乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，蒸干，上硅胶柱，石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1洗脱得产物0.73g；

c.取步骤b得到的0.7g产物加N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解，在搅拌下加0.41g呋喃西林代谢物的甲醇溶液5ml，60℃搅拌4h。反应停止后，蒸干溶剂，加乙醇重结晶得半抗原产物0.53g。

(2)免疫原的制备

取12mg呋喃西林代谢物半抗原用0.8mlDMF溶解，冷却至10℃，得到溶液I；取氯甲酸异丁酯10μl加入溶液I中，10℃搅拌反应10min得到溶液II；取40mg牛血清白蛋白(BSA)用3.2ml50mmol/LNa₂CO₃溶解与溶液II10℃反应4h，然后4℃过夜；用0.01mol/LPBS4℃透析3d，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。

(3)包被原的制备

取12mg呋喃西林代谢物半抗原，溶解于1mlDMF中，得到溶液I；取15mg碳化二亚胺(EDC)用0.2ml水充分溶解后加入溶液I中，室温下搅拌24h，即可得到溶液II；称取卵清白蛋白(OVA)30mg，使之充分溶解在3.8ml水中，将溶液II逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中，并于室温下搅拌24h，用0.01mol/LPBS4℃透析3d，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；分装，于-20℃保存备用。

(4)呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的鉴定

将载体蛋白、呋喃西林代谢物半抗原、呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物用pH7.4的PBS配成0.5mg/mL的溶液，以0.01mol/LpH7.4PBS调零，用紫外分光光度计在波长200～800nm范围内扫描，得到载体蛋白、呋喃西林代谢物半抗原、呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物的吸收曲线。三者出现不同的吸收曲线，表明呋喃西林代谢物半抗原与载体蛋白偶联成功。

2.呋喃西林代谢物单克隆抗体的制备

(1)动物免疫

将步骤1得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。

(2)细胞融合和克隆化

取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按8∶1(数量配比)比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选得到稳定分泌呋喃西林代谢物单克隆抗体的呋喃西林代谢物单克隆杂交瘤细胞株。

(3)细胞冻存和复苏

将杂交瘤细胞用冻存液制成5×10⁶个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。

(4)单克隆抗体的制备与纯化

增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。

所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20％(质量百分含量)，使碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2％(质量百分含量)；所述细胞培养基的pH为7.4。

3.羊抗鼠抗抗体的制备

以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。

4.呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物的制备

(1)胶体金的制备

用双蒸去离子水将1％氯金酸(购于sigma公司)稀释成0.01％(质量百分含量)，取100ml置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在持续高温、持续搅拌下加入2.5ml1％柠檬酸三钠(购于广州化学试剂厂)，继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水恢复到原体积，4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。

(2)呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下，用0.2mol/L碳酸钾调胶体金的pH值至7.2，按每毫升胶体金溶液中加入50～100μg抗体的标准向胶体金溶液中加入上述呋喃西林代谢物单克隆抗体，继续搅拌混匀10min，加入10％牛血清白蛋白(BSA)使其在胶体金溶液中的终浓度为1％(体积百分含量)，静置10min。12000rpm，4℃离心40min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。

复溶缓冲液：含牛血清白蛋白(BSA)0.3％～0.5％(体积百分含量)、吐温-800.08％～0.2％(质量百分含量)、pH7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。

5.将呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物冻干到微孔试剂上

向微孔试剂微孔板中加入100μl呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物，放入冷冻干燥机中，在冷阱温度为-50℃条件下，预冻3h后，再真空干燥15h，即可取出，得到冻干有呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂，密封保存，呋喃西林代谢物单克隆抗体-胶体金标记物冻干量0.20～0.25μg/mL。

6.样品吸收垫的制备

将样品吸收垫置于含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5％(体积百分含量))、pH7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡2h，37℃烘2h备用。

7.反应膜的制备

包被过程：用磷酸缓冲液将呋喃西林代谢物半抗原-卵清白蛋白偶联物稀释到10mg/mL，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测区(T)，包被量为1.0μg/cm²；用0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释到200μg/mL，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控区(C)，包被量为1.0μg/cm²。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。

(二)各部件的组装

1.试纸的组装

将所述样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次按顺序粘贴在所述底板上；样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；在组装好的试纸样品吸收垫上粘贴保护膜，保护膜上印有MAX标记线。

2.试剂盒的组装

将上述步骤1得到的试纸与微孔试剂组装成试剂盒，在2～8℃的环境中贮存，有效期12个月。

实施例3动物组织中呋喃西林代谢物的检测

1.样品前处理

称取5.0g±0.05g均质的样本至50ml聚苯乙烯离心管中，加入5ml10％三氯乙酸，再加入100μl衍生化试剂(向装有151mg2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加入10ml甲醇溶解混匀)，充分振荡3min；在60℃温箱中孵育1.5h；取出依次加入1ml0.5mol/L磷酸氢二钾溶液、1.5ml2mol/L氢氧化钠溶液和10ml乙酸乙酯，振荡10s，脂肪含量高的样本轻微振荡8-10下，以防样本乳化；3000g以上，室温(20-25℃)离心5min；取8ml乙酸乙酯相至10ml干燥的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；加入1ml正己烷，涡动30s，再加0.8ml样品复溶液(0.2mol/L磷酸盐缓冲液)，涡动10s充分混匀；3000g以上，室温(20-25℃)离心5min；除去上层有机相，取下层100μl用于分析。

2.用试剂盒检测样品

从原包装中取出试剂桶(若低温存放需要预先平衡至室温)，打开后取出所需数目的微孔试剂和试纸条，并做好标记；用微量移液器吸取100μl复溶的样本液，缓慢抽吸且充分与微孔中试剂混匀，将标记好的试纸条插入微孔中——印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中；室温(20℃-25℃)孵育5min后，取出试纸条，判定结果。

3.检测结果分析

阳性：当质控区(C)显示出条带，检测区(T)不显色，判为阳性，用“+”表示，如图4(a)；阴性：当质控区(C)和检测区(T)均显示出条带，判为阴性，用“-”表示，如图4(b)；无效：当质控区(C)不显示条带，试纸失效，如图4(c)和(d)所示。

实施例4试剂盒技术参数的确定

1.灵敏度试验

将呋喃西林代谢物标准品(购自Sigma公司)稀释为0.5、1.0、2.0μg/L；所用稀释液为pH7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

用试剂盒进行检测，结果为：呋喃西林代谢物标准品浓度为0.5μg/L时，试纸条上显示出肉眼可见的两条红色线条，呈阴性；呋喃西林代谢物标准品浓度为1.0、2.0μg/L时，试纸条质控区显色，但检测区不显色，呈阳性，表明本试剂盒检测呋喃西林代谢物的灵敏度为1.0μg/L。

2.假阳性率、假阴性率试验

取已知呋喃西林代谢物含量大于1.0μg/kg的猪肉、鸡肉、鱼、虾阳性样品各20份和呋喃西林代谢物含量小于1.0μg/kg的猪肉、鸡肉、鱼、虾阴性样品各20份，用3个批次生产的试剂盒分别进行检测，计算其阴阳性率。结果见表1、表2。

表1检测阳性样品结果

表2检测阴性样品结果

结果表明：用3个批次生产的试剂盒检测阳性猪肉、鸡肉、鱼、虾样品时，结果全为阳性，可知阳性样本符合率为100％，假阴性率为0。检测阴性猪肉、鸡肉、鱼、虾样品时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100％，假阳性率为0。本发明的检测呋喃西林代谢物试剂盒可以对动物组织中呋喃西林代谢物残留进行快速检测。

3.特异性试验

特异性常用交叉反应率表示，是指抗体与结构不同的抗原决定簇发生结合的能力。本试剂盒对呋喃西林代谢物的检测灵敏度为1.0μg/L，将呋喃西林代谢物类似物(呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃妥因代谢物)及动物组织中常检的其他药物(链霉素、四环素类、喹诺酮类、磺胺类)用pH7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液进行稀释，用实施例1中所述的试剂盒进行检测。结果显示，用该试剂盒检测呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃妥因代谢物、链霉素、四环素类、喹诺酮类、磺胺类药物时，试纸条质控区和检测区均显色，说明本试剂盒对这些药物无交叉反应。

Claims (7)

1.一种检测呋喃西林代谢物试剂盒的制备方法，其特征在于制备反应膜和微孔试剂，将制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸，所述反应膜上有检测区和质控区，检测区包被有呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体，所述微孔试剂中冻干有呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物，制备呋喃西林代谢物半抗原的步骤如下：

a.取1.0g对羟基苯甲醛溶于乙腈中，加入0.32g碳酸钾，0.1g碘化钠，搅拌，加入溴乙酸乙酯0.44g，装上回流冷凝管，80℃搅拌过夜，反应停止后，蒸干乙腈，加水溶解，乙酸乙酯萃取，蒸干上硅胶柱，石油醚∶乙酸乙酯＝5：1过柱纯化得产物1.08g；

b.取步骤a得到的1.08g产物溶于乙醇中，加氢氧化钾0.5g，70℃搅拌4h，反应停止后，蒸干乙醇，加水溶解，调节pH值到6，每次加60ml乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，蒸干，上硅胶柱，石油醚∶乙酸乙酯＝3：1洗脱得产物0.73g；

c.取步骤b得到的产物0.7g加N，N-二甲基甲酰胺溶解，在搅拌下加0.41g呋喃西林代谢物的甲醇溶液5ml，60℃搅拌4h，反应停止后，蒸干溶剂，加乙醇重结晶得半抗原产物0.53g。

2.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次粘贴在底板上组成，所述微孔试剂上具有微孔塞。

3.如权利要求1所述试纸的制备方法，其特征在于所述保护膜粘贴在样品吸收垫上，作为检测端，上面有MAX标记线。

4.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于所述检测区位于靠近有MAX标记的保护膜的一端，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

5.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于所述呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物由呋喃西林代谢物半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

6.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于所述呋喃西林代谢物特异性抗体-胶体金标记物中的呋喃西林代谢物特异性抗体是以呋喃西林代谢物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述呋喃西林代谢物特异性抗体为呋喃西林代谢物单克隆抗体或呋喃西林代谢物多克隆抗体。

7.一种检测动物组织中呋喃西林代谢物残留的方法，其包括步骤：

1)样品前处理；

2)用权利要求1-6任一项所述方法制备的试剂盒进行检测；

3)分析检测结果。