CN103417601B - 一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途 - Google Patents
一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于中药领域,涉及一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途。具体地,所述药物组合物包含红曲或其提取物,以及绞股蓝或其提取物。本发明还涉及所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病、或肥胖症的药物中的用途以及在制备调节血脂的药物或者试剂中的用途。本发明的药物组合物能够有效地降低血脂,具有用于治疗和/和预防和/或辅助治疗高血脂症(特别是高甘油三酯血症或低高密度脂蛋白血症)及其相关疾病的潜力。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,涉及一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途。
背景技术
随着人们收入增加和生活水平持续提高,摄取的高蛋白、高胆固醇、高糖分食物越来越多,从而导致高脂血症的发病率呈明显上升趋势。高脂血症是动脉粥样硬化症形成的前提,与脑血管疾病的发病率存在明显的相关性。高脂血症又是诱发冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病、肥胖症的重要因素。可见,防治高脂血症对预防心脑血管疾病起着重要作用。
高脂血症是指血中总胆固醇(TC)和/或甘油三酯(triglyceride,TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低。在临床上分为:高胆固醇血症(血清TC升高)、高甘油三酯血症(血清TG升高)、混合型高脂血症(TC、TG均升高)、低高密度脂蛋白血症(血清HDL-C水平降低)。
针对不同类型的高血脂症,临床上有不同机理的治疗药物。而对于严重高脂血症及混合性高脂血症患者常需要考虑联合用药。联合用药可增强调脂效果,显著改善血脂谱;但是增加了发生横纹肌溶解症的可能性(刘治军,王滟,杨莉萍。他汀类和贝特类降脂药临床联合应用研究。中国医院用药评价与分析。2005,5(1):59-61)。NCEPATP Ⅲ(美国国家胆固醇教育计划成人治疗组Ⅲ指导原则NationalCholesterol Education Program,Adult Treatment Panel Ⅲguidelines,NCEP ATPⅢ)和我国多数专家认为在联合用药时应加强对不良反应监测,并适当减少各自的剂量(钱荣立,对他汀类与贝特类调脂药合用的认识,中华糖尿病杂志,2004,12(4):303)。
我国人群血清TC水平明显低于西方冠心病高发人群(李莹.我国人群血脂的流行病学。中国实用内科杂志,2004,24:259-261);通过对我国49252名≥18岁31个省、自治区、直辖市常住人口抽样调查:我国≥18岁居民血脂异常患病率18.6%。其中高胆固醇血症患病率为2.9%;胆固醇边缘性升高率为3.9%;高甘油三酯血症患病率为11.9%;低高密度脂蛋白血症患病率为7.4%(赵文华,张坚,由悦,等。中国18岁及以上人群血症异常流行特点研究。中华预防医学杂志,2005,39(5):306-31)。我国人群血脂代谢异常类型以高甘油三酯、低高密度脂蛋白血症为主,这与西方人群以高总胆固醇血症为主要特点有所不同。
因此,需要寻找一种针对中国人血脂代谢异常类型的降血脂药物。
中医药治疗高脂血症的报道较多,针对不同的病因病机,辨证施治不同,处方也不同。从辨病角度考虑,高脂血症在中医属胸痹、眩晕范畴。而从病机命名角度考虑,则认为属于“痰浊”、“血瘀”范畴。治疗从高脂血症的病因病机入手,治本应调理肝、脾、肾,治标多从痰浊、血瘀、气滞入手。标本兼治则是通过扶正增强脏腑功能,改善脂质代谢;通过化痰直接消脂;用活血祛瘀药,兼以除浊,促进排泄。
此外,中药具有着独特的优势:药源丰富,毒副作用小,疗效比较确切,又有多种降血脂作用途径,起到多成分多靶点的作用,并且能够灵活组方,因人制宜,所以具有广阔的应用前景。
然而,具有降血脂作用的中药药材种类众多,并且单一一种中药药材的降血脂作用可能并不十分理想。因此,亟需发现新的用于降血脂的中药组合物。
发明内容
本发明人经过不懈的努力和创造性的劳动,对大量的中药材进行了深入的研究,惊奇地发现,红曲或其提取物与绞股蓝或其提取物的药物组合物能够有效地降低血脂,具有用于治疗和/和预防和/或辅助治疗高血脂症(特别是高甘油三酯血症或低高密度脂蛋白血症)及其相关疾病的潜力。由此提供了下述发明:
本发明的一个方面涉及一种药物组合物,包含红曲或其提取物,以及绞股蓝或其提取物。在本发明的一个实施方案中,所述药物组合物由红曲或其提取物,以及绞股蓝或其提取物组成。在本发明的一个实施方案中,所述药物组合物包含红曲提取物和绞股蓝提取物。在本发明的一个实施方案中,所述药物组合物由红曲提取物和绞股蓝提取物组成。
本发明的药物组合物能够用于调节血脂(特别是甘油三酯)。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲和绞股蓝药材的重量比为1:10至10:1;优选为6:1至1:6;更优选为4:1至1:4;进一步优选为1:2至2:1。
红曲提取物可以由红曲菌(红曲霉)或者红曲制备得到,所述红曲菌或红曲可以商购得到。
红曲霉(Monascus anka Nakazawa et Sato)属真菌门(Eumycophyta)、子囊菌纲(Ascomycetes)、真子囊菌亚纲(Euascomycetes)、红曲霉属(Monascus)。中国科学院微生物研究所和轻工部食品研究所正式收集编目的重要红曲霉有8种48个菌株。这8种为紫红曲霉(Monascus purpureus)、安卡红曲霉(M.anka)、红色红曲霉(M.ruber)、巴克红曲霉(M.bakeri)、烟色红曲霉(M.fuligmo?sus)、发白红曲霉(M.albidus)、锈色红曲霉(M.rubiginosus)、变红红曲霉(M.serorubescens)。优选的是紫红曲霉。
所述红曲菌也可以是在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏的菌种:CGMCC No.0272(授权公开号CN 1061537C)、CGMCC No.0315(授权公开号CN 1065432C)、CGMCC No.0316(授权公开号CN 1065432C)、CGMCC No.0317(授权公开号CN 1065432C)。
下述已知红曲菌菌种也能够实现本发明的目的:
(1)发白红曲菌(Monascus albidus Sato)
例如AS 3.570、AS 3.4440;
(2)丛毛红曲菌(Monascus pilosus Sato)
例如AS 3.444、AS 3.4633、AS 3.4646、AS 3.4647;
(3)软毛红曲菌(Monascus pubigerus Sato)
例如AS 3.4445、AS 3.4634;
(4)红色红曲菌(Monascus rubber van Tieghem)
例如AS 3.549;
(5)巴斯红曲菌(Monascus paxii Lingelsheim)
例如AS 3.4453;
(6)烟色红曲菌(Monascus fuliginosus Sato)
例如AS 3.569、AS 3.1098、AS 3.2091、AS 3.2093、AS 3.2134、IFFI 05035(IFFI:中国轻工业部食品发酵研究所菌种保藏中心)。
所述红曲可以通过如下的方法或途径得到:
方法1:将红曲霉(商购或选自上述的红曲霉)接种在大米上,经培养制得的红曲米(又名红曲、赤曲、红米、福米);
该红曲米也可以从市场上购买得到,也可以按照国标GB4926-2008的方法制备得到。
方法2:使用上述的任一种或多种红曲霉菌株,通过如下步骤制得:
①配制培养液:所述培养液由甘油(或麦芽汁或土豆汁)、糖和酵母(或牛肉膏或蛋白胨)的混合物以及水组成,其中甘油(或麦芽汁或土豆汁)占2-7%,糖占2-6%,蛋白胨0-3%,酵母粉占0-3%,牛肉膏0-3%,少量消泡剂如豆油或花生油2-4‰,其余为水,用醋酸调节pH值为3.0-5.0;
②每100克粳米中,加入30-80毫升培养液,高温蒸汽(121℃)灭菌。待温度冷却到40℃以下后,接种红曲菌菌种。所属红曲菌种优选自下列菌种中的一种或多种:紫色红曲菌(Monascus purpureusWent),保藏号为CGMCC No.0272;红色霉曲菌,保藏号为CGMCCNo.0315;红色霉曲菌,保藏号为CGMCC No.0316;发白红曲菌,保藏号为CGMCC No.0317,在15-35℃下发酵培养9天以上,所述菌种可以培养成液体菌种或固体菌种。
③将培养物在60-121℃温度下灭菌,真空降压60-80℃左右烘干获得红曲。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物通过如下方法制得:
1)取红曲1重量份,每次加入2-10体积份的50-90%(v/v)的乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流1-3小时,提取2-3次;
2)提取液过滤,合并滤液;可选地,回收溶剂(乙醇、甲醇或乙酸乙酯),
3)将步骤2)中得到的滤液浓缩成稠膏。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物通过如下方法制得:
1)取红曲1重量份,每次加入3体积份的75%的乙醇加热回流2-3小时,提取2次;
2)提取液过滤,合并滤液;可选地,回收溶剂乙醇,
3)将步骤2)中得到的滤液浓缩至在55-60℃下相对密度为0.95-1.06的浓缩液。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物的制备还包括如下步骤:
4)将步骤3)中所述的稠膏或浓缩液进行水沉、离心、收集。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物的制备还包括如下步骤:
4)向步骤3)中所述的稠膏或浓缩液中加0.5-2.0倍(重量倍数)去离子水并混匀,室温或冷藏(冷藏的温度范围0-15℃,优选5-10℃)放置2-12小时,离心,收集沉淀。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物的制备还包括如下步骤:
5)将步骤4)中收集的沉淀在80℃下干燥8小时,粉碎过60目筛。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述绞股蓝提取物通过如下方法制得:
取绞股蓝药材1重量份,每次加4-20体积份(优选8-15体积份)的水或乙醇或乙醇溶液加热提取1-3小时,提取2-4次,提取液过滤,合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物中洛伐他汀的含量为≥0.83%(w/w),优选为≥3.33%(w/w)。通过洛伐他汀的含量控制的一个目的是对该药物组合进行质量控制的。
根据本发明任一项所述的药物组合物,其中,所述绞股蓝提取物中总皂苷的含量为≥8%(w/w),优选为≥20%(w/w)。
本发明的另一方面涉及一种药物制剂,其包含本发明任一项所述的药物组合物,以及药学上可接受的载体或辅料;具体地,所述药物制剂为口服制剂,例如胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、口服液、合剂、或糖浆。本发明的药物制剂的具体剂型可以采用常规的制备方法,例如下面提供了颗粒剂和片剂的制备方法:
颗粒剂:将提取物Ⅰ、Ⅱ加入适量淀粉、微晶纤维素、甘露醇或其它稀释剂,再加入羧甲基淀粉钠作为崩解剂,混匀、制成颗粒,干燥,整粒。
片剂:将提取物Ⅰ、Ⅱ加入适量淀粉、微晶纤维素、甘露醇或其它稀释剂,再加入羧甲基淀粉钠作为崩解剂,混匀、制成颗粒,干燥,整粒,压片。
本发明的再一方面涉及本发明任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病、或肥胖症的药物中的用途;具体地,所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症、或低高密度脂蛋白血症。
本发明的再一方面涉及本发明任一项所述的药物组合物在制备调节血脂的药物或者试剂中的用途;优选地,所述血脂为甘油三酯。
本发明的再一方面涉及一种在体内或体外调节血脂的方法,包括使用有效量的本发明中任一项所述的药物组合物或者本发明任一项所述的药物制剂的步骤;优选地,所述血脂为甘油三酯。
本发明的再一方面涉及一种治疗和/或预防和/或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病、或肥胖症的方法,包括使用有效量的本发明中任一项所述的药物组合物或者本发明任一项所述的药物制剂的步骤;具体地,所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症、或低高密度脂蛋白血症。
本发明所述体积份与重量份的关系是:重量份/体积份=克/毫升。
本发明中,术语“红曲”、“红曲药材”具有相同的含义
术语“绞股蓝”、“绞股蓝药材”具有相同的含义。
发明的有益效果
本发明的药物组合物能够有效地降低血脂,具有用于治疗和/和预防和/或辅助治疗高血脂症(特别是高甘油三酯血症或低高密度脂蛋白血症)及其相关疾病的潜力。此外,本发明的药物组合物的安全性良好。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1:本发明药物组合物的制备
取上面的方法1得到的红曲6重量份,每次加入24体积份80%的乙酸乙酯加热回流2小时,提取3次;提取液过滤,合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏,得提取物Ⅰ。
取绞股蓝药材1重量份:加水煎煮3次,每次的体积分别为其重量的10倍、8倍、8倍,煎煮时间分别为2h、1h、1h。分别滤过,合并滤液,减压浓缩得提取物Ⅱ。
提取物Ⅰ、Ⅱ加入制剂辅料,按照常规工艺,制成临床接受的颗粒剂。
实施例2:本发明药物组合物的制备
取按照上面的方法2制得的红曲4重量份,加入8体积份90%的乙醇加热回流1小时,过滤;再加入8体积份90%的乙醇加热回流1小时,过滤;合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏,得提取物Ⅰ。
取绞股蓝药材1重量份:加其重量的15倍水煎煮2h,过滤;再加入10倍水煎煮1h,过滤;合并滤液,浓缩,得提取物Ⅱ。
提取物Ⅰ、Ⅱ加入制剂辅料,按照常规工艺,制成临床接受的胶囊剂。
实施例3:本发明药物组合物的制备
取按照上面的方法2制得的红曲药材1重量份,加入4体积份50%乙醇回流提取3小时,提取液过滤;滤渣加入2体积份50%乙醇回流提取3小时,提取液过滤。合并两次滤液,减压回收乙醇,浓缩至相对密度0.95-1.06(55-60℃)。浓缩液中加2.0倍体积的去离子水混匀,放置12小时。离心,收集沉淀,得到红曲提取物Ⅰ。
取绞股蓝药材4重量份:加其重量10倍水煎煮1.5h,过滤;再加入10倍水煎煮1.5h,过滤;合并滤液,浓缩,得提取物Ⅱ。
提取物Ⅰ、Ⅱ加入制剂辅料,按照常规工艺,制成临床接受的口服液。
实施例4:本发明药物组合物的制备
取上面的方法1得到的红曲1重量份,每次加入4体积份80%的乙醇加热回流2小时,提取2次;提取液过滤,合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏,得提取物Ⅰ。
取绞股蓝药材3重量份:加水煎煮2次,每次的体积分别为10倍、10倍,煎煮时间均为2h。分别滤过,合并滤液,减压浓缩得提取物Ⅱ。
提取物Ⅰ、Ⅱ加入制剂辅料,按照常规工艺,制成临床接受的颗粒剂。
实施例5:本发明药物组合物的制备
取上面的方法2得到的红曲2重量份,加入6体积份70%的乙醇加热回流3小时,过滤;再加入4体积份75%的乙醇加热回流2小时,过滤;合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏,得提取物Ⅰ。
取绞股蓝药材1重量份:加12倍水煎煮2h,过滤;再加入12倍水煎煮1h,过滤;合并滤液,浓缩,得提取物Ⅱ。
提取物Ⅰ、Ⅱ加入制剂辅料,按照常规工艺,制成临床接受的片剂。
实施例6:本发明药物组合物的制备
取按照上面的方法2制得的红曲药材1重量份,加入3体积份75%乙醇回流提取3小时,提取液过滤;滤渣加入2体积份75%乙醇回流提取2小时,提取液过滤。合并两次滤液,减压回收乙醇,浓缩至相对密度0.95-1.06(55-60℃)。浓缩液中加2.0倍体积的去离子水混匀,放置8小时。离心,收集沉淀,得到提取物Ⅰ。
取绞股蓝药材1重量份:加10倍水煎煮1.5h,过滤;再加入10倍水煎煮1.5h,过滤;合并滤液,浓缩,得提取物Ⅱ。
提取物Ⅰ、Ⅱ加入制剂辅料,按照常规工艺,制成临床接受的胶囊剂。
实施例7:红曲提取物中洛伐他汀含量的测定
检测样品:实施例1-6制备的红曲提取物样品1-6。
色谱条件与系统适用性实验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填料:甲醇-水(75:25)为流动相;检测波长为237nm,理论板数按洛伐他汀峰计算不低于4000。
对照品溶液的制备:精密称取洛伐他汀对照品10mg,置50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml中含洛伐他汀200μg)。
供试品溶液的制备:取本品10粒内容物(对胶囊来说是内容物,对片剂来说是10片),混匀,研细,精密称取约0.3g,置10ml具塞离心管中,精密加75%乙醇10ml,密塞,摇匀,称定重量,超声处理60分钟,取出,称定重量,用75%乙醇补足减失的重量,摇匀,离心(2000转/mi n)10分钟,精密量取上清液3ml,置已处理好的中性氧化铝柱上(200~300目,4g,内径0.9cm),用甲醇22ml分次洗脱,收集洗脱液,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,弃去初滤液,收集续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定峰面积,即得。
实验结果:如下面的表1所示。
表1:红曲提取物样品中的洛伐他汀含量的测定结果
实施例8:绞股蓝提取物中总皂苷成分的测定
检测样品:实施例1-6制备的绞股蓝提取物样品1-6。
对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压2.67Kpa以下干燥3小时的绞股蓝皂苷-A对照品适量,加甲醇溶解,制成每1ml含2mg的溶液。
供试品溶液的制备:精密称取本品50mg,加甲醇溶解,制成每1ml含2mg的溶液。
测定法:精密吸取对照品溶液即供试品溶液各100μl,分别置15ml具塞试管中,精密加入新配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2:8)的混合液2ml,摇匀,密塞,置60℃水浴中加热15分钟,取出,立即放入冰水中冷却2分钟,精密加入冰醋酸10ml,摇匀,以实际作空白,用分光光度仪在555±5nm波长出测定吸收度,计算,即得。
实验结果:如下面的表2所示。
表2:绞股蓝提取物中的总皂苷含量的测定结果
以下通过药效学试验、毒理学试验证明本发明的效果。
实施例9:本发明药物组合物对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三
脂血症的影响
1、实验材料:
(1)受试药制备:
红曲提取物制备:制法同实施例4中提取物Ⅰ的制法。
绞股蓝提取物制备:制法同实施例4中提取物Ⅱ的制法。
复方药制备:制法见实施例4。
以上各药均临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)高脂乳剂的制备:胆固醇10g、猪油40g、胆酸钠2g、丙硫氧嘧啶1g、吐温-801ml、丙二醇15ml、蒸馏水加至100ml
(3)试剂:甘油三酯(TG)试剂盒,北京中生北控生物科技股份有限公司。
(4)动物:I CR小鼠,雄性,体重25-30g,购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(5)仪器:酶标仪(Versa max tunable,Molecular Devices),离心机:(Anke LXJ-ⅡB)。
2、方法和结果
(1)方法:取ICR小鼠60只,饲养5天,观察证实健康后将小鼠随机分为6组,每组10只,分别为:空白对照组、高脂模型组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+水)、阳性对照组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+非诺贝特300mg/kg)、红曲组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+红曲浓缩液)、绞股蓝组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+绞股蓝浓缩液)、复方组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+复方浓缩液)。上午8:30分别灌胃给予高脂乳及其空白溶液;下午15:30按组分别灌胃给予水、阳性对照药、各受试药等。连续给药20d,在第21d剪尾取血。采用EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。
(2)结果见表3。
表3:中药复方组合物对高脂小鼠TG的影响(X±SD,mg/d l)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
结果:红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂乳模型小鼠血清中TG的含量。但在相同给药剂量情况下,红曲组比模型组降低34%,绞股蓝组比模型组降低31%,复方组比模型组降低43%;复方组小鼠的TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中TG的作用。
实施例10:本发明药物组合物对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三
脂血症的影响
1、实验材料:
(1)受试药制备:
红曲提取物制备:制法同实施例5中提取物Ⅰ的制法。
绞股蓝提取物制备:制法同实施例5中提取物Ⅱ的制法。
复方药制备:制法见实施例5。
以上各药均临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)高脂乳剂的制备:同实施例9。
(3)试剂:同实施例9。
(4)动物:ICR小鼠,雄性,体重25-30g,购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(5)仪器:同实施例9。
2、方法和结果
(1)方法:同实施例9。
(2)结果见表4。
表4:中药复方组合物对高脂小鼠TG的影响(X±SD,mg/d l)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
结果:红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂乳模型小鼠血清中TG的含量。但在相同给药剂量情况下,红曲组比模型组降低34%,绞股蓝组比模型组降低24%,复方组比模型组降低47%;复方组小鼠的TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中TG的作用。
实施例11:本发明药物组合物对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三
脂血症的影响
1、实验材料:
(1)受试药制备:
红曲提取物制备:制法同实施例6中提取物Ⅰ的制法。
绞股蓝提取物制备:制法同实施例6中提取物Ⅱ的制法。
复方药制备:制法见实施例6。
以上各药均临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)高脂乳剂的制备:同实施例9。
(3)试剂:同实施例9。
(4)动物:I CR小鼠,雄性,体重25-30g,购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(5)仪器:同实施例9。
2、方法和结果
(1)方法:同实施例9。
(2)结果见表5。
表5:中药复方组合物对高脂小鼠TG的影响(X±SD,mg/dl)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂乳模型小鼠血清中TG的含量。但在相同给药剂量情况下,红曲组比模型组降低32%,绞股蓝组比模型组降低21%,复方组比模型组降低43%;复方组小鼠的TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中TG的作用。
实施例12:本发明药物组合物降血脂作用的实验研究
1、实验材料:
(1)药物
红曲提取物制备:制法同实施例4中提取物Ⅰ的制法。
绞股蓝提取物制备:制法同实施例4中提取物Ⅱ的制法。
复方药制备:制法见实施例4。
以上各药均临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)动物:Wistar雄性大鼠,体重150-200g。购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(3)高脂饲料:胆固醇2%、胆酸钠〔猪〕0.5%、猪油15%(自制)、丙硫氧嘧啶0.2%、基础饲料粉末82.3%。将猪油用40℃水浴熔化。胆酸钠、胆固醇、丙硫氧嘧啶用粉碎机粉碎搅拌均匀、加基础饲料混匀,再加熔化的猪油拌匀。总共1000g原料中加入50ml水,拌匀。用压面机压成块状(每30g混合的料压一个饼)。烘干灭菌即得高脂饲料。
(4)试剂:甘油三酯(TG)试剂盒,北京中生北控生物科技股份有限公司。
(5)仪器:仪器:酶标仪(Versa max tunable,MolecularDevices),离心机:(Anke LXJ-ⅡB)。
2、方法与结果
(1)高脂血症造模:
取大鼠50只,分为空白对照组(10只)和高脂造模组(40只),分别给予正常基础饲料和高脂饲料饲养,连续4周。于第28日晚禁食,次日上午剪尾取血。采用EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。结果见表6。
(2)方法:将喂正常基础饲料大鼠作为空白对照组:继续喂正常基础饲料,每天灌胃给予1%CMC水溶液;将高脂造模动物根据血脂TG水平随机分为4组,高脂模型组:喂高脂饲料,每天灌胃给予1%CMC水溶液;红曲组:每天灌胃给予红曲提取物,给药量为20g(原药材)/kg体重;绞股蓝组:每天灌胃给予绞股蓝提取物,给药量为20g(原药材)/kg体重;复方组:每天灌胃给予本发明的中药复方提取物,给药量为20g(原药材)/kg体重。连续喂养4周,于末次给药后禁食12h,次日上午剪尾取血。采用EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。
(3)结果见表6。
表6:中药复方组合物对血脂含量的影响(X±SD,mg/dl)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
结果表明:红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂饲料喂养造成的高TG模型大鼠血清中TG的含量,与模型组比较分别是显著性差异P<0.05和极显著性差异P<0.01。从TG降低百分率看:在相同给药剂量情况下,红曲组比模型组降低21%,绞股蓝组比模型组降低25%,复方组比模型组降低39%;复方组小鼠的TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中TG的作用。
实施例13:本发明药物组合物降血脂作用的实验研究
1、实验材料:
(1)药物
红曲提取物制备:制法同实施例5中提取物Ⅰ的制法。
绞股蓝提取物制备:制法同实施例5中提取物Ⅱ的制法。
复方药制备:制法见实施例5。
以上各药均临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)动物:Wistar雄性大鼠,体重150-200g。购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(3)高脂饲料:同实施例12。
(4)试剂:同实施例12。
(5)仪器:同实施例12。
2、方法与结果
(1)高脂血症造模:同实施例12。
(2)实验方法:同实施例12。
(3)结果见表7。
表7:中药复方组合物对血脂含量的影响(X±SD,mg/dl)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
结果表明:红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂饲料喂养造成的高TG模型大鼠血清中TG的含量,与模型组比较分别是显著性差异P<0.05和极显著性差异P<0.01。从TG降低百分率看:在相同给药剂量情况下,红曲组比模型组降低18%,绞股蓝组比模型组降低24%,复方组比模型组降低36%;复方组小鼠的TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中TG的作用。
实施例14:本发明药物组合物降血脂作用的实验研究
1、实验材料:
(1)药物
红曲提取物制备:制法同实施例6中提取物Ⅰ的制法。
绞股蓝提取物制备:制法同实施例6中提取物Ⅱ的制法。
复方药制备:制法见实施例6。
以上各药均临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)动物:Wistar雄性大鼠,体重150-200g。购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(3)高脂饲料:同实施例12。
(4)试剂:同实施例12。
(5)仪器:同实施例12。
2、方法与结果
(1)高脂血症造模:同实施例12。
(2)实验方法:同实施例12。
(3)结果见表8。
表8:中药复方组合物对血脂含量的影响(X±SD,mg/dl)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
结果表明:红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂饲料喂养造成的高TG模型大鼠血清中TG的含量,与模型组比较分别是显著性差异P<0.05和极显著性差异P<0.01。从TG降低百分率看:在相同给药剂量情况下,红曲组比模型组降低24%,绞股蓝组比模型组降低25%,复方组比模型组降低37%;复方组小鼠的TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中TG的作用。
实施例15:本发明药物组合物的极性毒性实验
1、实验材料:
(1)受试药制备:
①取红曲药材1000g,加入4000ml 75%乙醇回流提取3小时,提取液过滤;滤渣加入2000ml75%乙醇回流提取2小时,提取液过滤。合并两次滤液,减压回收乙醇,浓缩至相对密度0.95-1.06(55-60℃)。浓缩液中加2倍体积的去离子水混匀,放置8小试。离心,收集沉淀,得到红曲提取物Ⅰ。
②取绞股蓝药材1000g,加10L水煎煮2h,过滤;再加入10L水煎煮2h,过滤;合并滤液,浓缩,得Ⅱ。
③复方药制备:将Ⅰ、Ⅱ合并,喷雾干燥,临用前加1%CMC研磨配制成每1ml药液相当于3.95g生药。
(2)动物:ICR小鼠,雌雄各半,体重20±1g,购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
2、方法
取体重20±1g的健康小鼠20只,雌雄各半,禁食过夜,用药液按0.4ml/10g(相当于生药158g/kg)一次灌胃给药。记录并观察小鼠给药后的中毒症状、摄食情况、小鼠的活跃程度,记录动物外观、行为活动、精神状态、食欲、二便、被毛、皮肤、呼吸、眼、口、鼻等有无异常分泌物。连续观察7d,记录体重变化及死亡情况。如有死亡,及时进行解剖。第7天,随机解剖受试药组小鼠,观察小鼠的各个系统和器官。
3、结果
按可以灌胃的最高浓度(每1ml药液相当于3.95g生药)、最大体积(0.4ml/10g)的药量给小鼠灌胃,相当于剂量为158g/kg。按成人平均体重60kg计算,相当于成人的日常用量的约1000倍。说明本复方药物口服的安全性良好(用量参考《广西中药材标准》第二册,1996年;6~10g/天)。
实施例16:红曲+绞股蓝+银杏叶组成的复方与红曲+绞股蓝组成
的复方对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三脂血症的影响
1、实验材料:
(1)受试药制备:
红曲提取物制备:取上面的方法2得到的红曲2kg,每次加入80%的乙醇4L加热回流2小时,提取2次;提取液过滤,合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏,得提取物Ⅰ。
绞股蓝提取物制备:取绞股蓝药材2kg:加水煎煮2次,每次的体积分别为10倍、10倍,煎煮时间均为2h。分别滤过,合并滤液,减压浓缩得提取物Ⅱ。
银杏叶提取物制备:取银杏叶药材1kg:加80%的乙醇4L加热回流2小时,提取2次;提取液过滤,合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏,得提取物Ⅲ。
复方A制备:分别取提取物Ⅰ和Ⅱ的一半,加上提取物Ⅲ,混合均匀。临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
复方B制备:分别取提取物Ⅰ和Ⅱ的一半,混合均匀。临用前加1%CMC配制成1ml(液体)/g(生药)。
(2)高脂乳剂的制备:胆固醇10g、猪油40g、胆酸钠2g、丙硫氧嘧啶1g、吐温-801ml、丙二醇15ml、蒸馏水加至100ml。
(3)试剂:甘油三酯(TG)试剂盒,北京中生北控生物科技股份有限公司。
(4)动物:ICR小鼠,雄性,体重25-30g,购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。
(5)仪器:酶标仪(Versa max tunable,Molecular Devices),离心机:(Anke LXJ-ⅡB)。
2、方法和结果
(1)方法:取I CR小鼠40只,饲养5天,观察证实健康后将小鼠随机分为4组,每组10只。空白对照组、高脂模型组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+水)、复方A组(ig高脂乳剂20ml/kg.d+复方A)、复方B组(i g高脂乳剂20ml/kg.d+复方B)。上午8:30给高脂乳及其空白溶液;下午15:30按组分别给水、复方A、复方B。分别连续给药20d,在第21d剪尾取血。采用EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。
(2)结果见表9。
表9:复方A和复方B对高脂小鼠TG的影响(X±SD,mg/dl)
△△表示与空白对照组比较(t检验),P<0.01;*,**表示与高脂模型组比较(t检验),P<0.05,0.01。
结果:复方A、B均可降低高脂乳模型小鼠血清中TG的含量。但在相同给药剂量情况下,复方A组比模型组降低40%,复方B组比模型组降低45%。表明这两复方B比复方A具有更明显的降低TG的作用。同时复方B是复方A的减方,在少一味药的情况下,降低TG的作用更加明显。所以可以认为不含其它组分(例如银杏叶提取物)的复方B优于复方A。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述,本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导,可以对那些细节进行各种修改和替换,这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Claims (27)
1.一种用于调节血脂的药物组合物,由红曲提取物,以及绞股蓝提取物组成;所述红曲和绞股蓝药材的重量比为1:10至10:1;所述绞股蓝提取物中总皂苷的重量百分含量为≥8%;
其中,所述绞股蓝提取物通过如下方法制得:
取绞股蓝药材1重量份,每次加4-20体积份的水或乙醇或乙醇溶液加热提取1-3小时,提取2-4次,提取液过滤,合并滤液,回收溶剂,浓缩成稠膏;
所述红曲提取物通过方法Ⅰ或方法Ⅱ制得:
方法Ⅰ:
1)取红曲1重量份,每次加入2-10体积份的体积百分含量为50-90%的乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流1-3小时,提取2-3次;
2)提取液过滤,合并滤液;
3)将步骤2)中得到的滤液浓缩成稠膏;
方法Ⅱ:
(1)取红曲1重量份,每次加入3体积份的75%的乙醇加热回流2-3小时,提取2次;
(2)提取液过滤,合并滤液;
(3)将步骤(2)中得到的滤液浓缩至在55-60℃下相对密度为0.95-1.06的浓缩液。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述红曲和绞股蓝药材的重量比为6:1至1:6。
3.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述红曲和绞股蓝药材的重量比为4:1至1:4。
4.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述红曲和绞股蓝药材的重量比为1:2至2:1。
5.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物中洛伐他汀的重量百分含量为≥0.83%。
6.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述红曲提取物中洛伐他汀的重量百分含量为≥3.33%。
7.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述绞股蓝提取物中总皂苷的重量百分含量为≥20%。
8.根据权利要求1所述的药物组合物,其中,所述红曲由选自保藏号为CGMCC No.0272、CGMCC No.0315、CGMCCNo.0316以及CGMCC No.0317的一种或多种红曲菌菌种制得。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物,其中,还包括回收步骤2)滤液中的溶剂,再对滤液浓缩。
10.根据权利要求9所述的药物组合物,其中,所述溶剂为乙醇、甲醇或乙酸乙酯。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物,其中,还包括如下步骤:
4)将步骤3)中所述的稠膏进行水沉、离心、收集。
12.根据权利要求11所述的药物组合物,其中,步骤4)为向步骤3)中所述的稠膏中加0.5-2.0重量倍数的去离子水并混匀,室温或冷藏放置2-12小时,离心,收集沉淀。
13.根据权利要求11所述的药物组合物,其中,5)将步骤4)中收集的沉淀在80℃下干燥8小时,粉碎过60目筛。
14.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物,其中,步骤(2)中还包括回收溶剂乙醇。
15.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物,其中,还包括如下步骤:
(4)将步骤(3)中所述的浓缩液进行水沉、离心、收集。
16.根据权利要求15所述的药物组合物,其中,步骤(4)为向步骤(3)中所述的浓缩液中加0.5-2.0重量倍数的去离子水并混匀,室温或冷藏放置2-12小时,离心,收集沉淀。
17.根据权利要求15所述的药物组合物,其中,还包括如下步骤:
(5)将步骤(4)中收集的沉淀在80℃下干燥8小时,粉碎过60目筛。
18.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物,其中,每次加8-15体积份的水或乙醇或乙醇溶液。
19.一种药物制剂,其包含权利要求1至18中任一项所述的药物组合物,以及药学上可接受的载体或辅料。
20.根据权利要求19所述的药物制剂,其中,所述药物制剂为口服制剂。
21.根据权利要求19所述的药物制剂,其中,所述药物制剂为胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、口服液、合剂或糖浆。
22.权利要求1至18中任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病或肥胖症的药物中的用途。
23.根据权利要求22所述的用途,其中,所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症或低高密度脂蛋白血症。
24.权利要求1至18中任一项所述的药物组合物在制备调节血脂的药物或者试剂中的用途。
25.根据权利要求24所述的用途,其中,所述血脂为甘油三酯。
26.一种非治疗目的的在体外调节血脂的方法,包括使用有效量的权利要求1至18中任一项所述的药物组合物或者权利要求19至21中任一项所述的药物制剂的步骤。
27.根据权利要求26所述的方法,其中,所述血脂为甘油三酯。
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