WO2013170769A1

WO2013170769A1 - 一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途

Info

Publication number: WO2013170769A1
Application number: PCT/CN2013/075730
Authority: WO
Inventors: 段震文; 郭树仁; 刘曦
Original assignee: 北京北大维信生物科技有限公司
Priority date: 2012-05-18
Filing date: 2013-05-16
Publication date: 2013-11-21
Also published as: CN103417601B; CN103417601A

Abstract

一种具有调节血脂作用的药物组合物，包含红曲或其提取物，以及绞股蓝或其提取物。所述药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病或肥胖症的药物中的用途以及在制备调节血脂的药物或者试剂中的用途。

Description

一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种具有调节血脂作用的药物组合物及其用途。背景技术

随着人们^增加和生活水平持续提高，摄取的高蛋白、高胆固醇、高糖分食物越来越多，从而导致高脂血症的发病率呈明显上升趋势。高脂血症是动脉粥样硬化症形成的前提，与脑血管疾病的发病率存在明显的相关性。高脂血症又是诱发冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病、肥胖症的重要因素。可见，防治高脂血症对预防心脑血管疾病起着重要作用。

高脂血症是指血中总胆固醇（TC )和 /或甘油三酯（triglyceride, TG ) 过高或高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C )过低。在临床上分为：高胆固醇血症（血清 TC升高）、高甘油三酯血症（血清 TG升高）、混合型高脂血症（TC、 TG 均升高）、低高密度脂蛋白血症（血清 HDL-C水平降低）。

针对不同类型的高血脂症，临床上有不同机理的治疗药物。而对于严重高脂血症及混合性高脂血症患者常需要考虑联合用药。联合用药可增强调脂效果，显著改善血脂谱；但是增加了发生横纹肌溶解症的可能性（刘治军，王滟，杨莉萍，他汀类和贝特类降脂药临床联合应用研究，中国医院用药评价与分析， 2005， 5 ( 1 ) : 59 - 61 )。 NCEP ΑΤΡΠΙ (美国国家胆固醇教育计划成人治疗组 m指导原则 National Cholesterol Education Program， Adult Treatment Panel ΙΠ guidelines, NCEP ATP m)和我国多数专家认为在联合用药时应加强对不良反应监测，并适当减少各自的剂量（钱荣立，对他汀类与贝特类调脂药合用的认识，中华糖尿病杂志， 2004， 12 ( 4 ) ： 303 ) 。我国人群血清 TC水平明显低于西方冠心病高发人群 (李莹. 我国人群血脂的流行病学，中国实用内科杂志， 2004， 24: 259 - 261 ) ; 通过对我国 49252名 > 18岁 31个省、自治区、直辖市常住人口抽样调查：我国 > 18岁居民血脂异常患病率 18.6 %。其中高胆固醇血症患病率为 2.9 % ;胆固醇边缘性升高率为 3.9 % ；高甘油三酯血症患病率为 11.9 % ；低高密度脂蛋白血症患病率为 7.4 % (赵文华，张坚，由悦等，中国 18岁及以上人群血症异常流行特点研究，中华预防医学杂志， 2005， 39 ( 5 ) ： 306 - 31 ) 。我国人群血脂代谢异常类型以高甘油三酯、低高密度脂蛋白血症为主，这与西方人群以高总胆固醇血症为主要特点有所不同。

因此，需要寻找一种针对中国人血脂代谢异常类型的降血脂药物。中医药治疗高脂血症的报道较多，针对不同的病因病机，辨证施治不同，处方也不同。从辨病角度考虑，高脂血症在中医属胸痹、眩晕范畴。而从病机命名角度考虑，则认为属于 "痰浊" 、 "血瘀" 范畴。治疗从高脂血症的病因病机入手，治本应调理肝、脾、腎，治标多从痰浊、血瘀、气滞入手。标本兼治则是通过扶正增强脏腑功能，改善脂质代谢；通过化痰直接消脂；用活血祛瘀药，兼以除浊，促进排泄。

此外，中药具有着独特的优势：药源丰富，毒副作用小，疗效比较确切，又有多种降血脂作用途径，起到多成分多靶点的作用，并且能够灵活组方，因人制宜，所以具有广阔的应用前景。

然而，具有降血脂作用的中药药材种类众多，并且单一一种中药药材的降血脂作用可能并不十分理想。因此，亟需发现新的用于降血脂的中药组合物。发明内容

本发明人经过不懈的努力和创造性的劳动，对大量的中药材进行了深入的研究，惊奇地发现，红曲或其提取物与绞股蓝或其提取物的药物组合物能够有效地降低血脂，具有用于治疗和 /或预防和 /或辅助治疗高血脂症（特别是高甘油三酯血症或低高密度脂蛋白血症）及其相关疾病的潜力。由此提供了下述发明：本发明的一个方面涉及一种药物组合物，包含红曲或其提取物，以及绞股蓝或其提取物。在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物由红曲或其提取物，以及绞股蓝或其提取物组成。在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物包含红曲提取物和绞股蓝提取物。在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物由红曲提取物和绞股蓝提取物组成。

本发明的药物组合物能够用于调节血脂（特别是甘油三酯）。根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲和绞股蓝药材的重量比为 1: 10至 10: 1；优选为 6: 1至 1: 6或 5: 1至 1: 5; 更优选为 4: 1至 1: 4或 1:3至 3: 1；进一步优选为 1:2至 2: 1。在具体的实施方案中，红曲和绞股蓝药材的重量比为 5: 1、 4: 1、 3: 1、 2: 1、 1: 1、 1: 2、 1: 3、 1: 4或 1: 5。红曲提取物可以由红曲菌（红曲霉）或者红曲制备得到，所述红曲菌或红曲可以商购得到。

红曲霉 ( Monascus anka Nakazawa et Sato ) 属真菌门 ( Eumycophyta ) 、子嚢菌纲（ Ascomycetes ) 、真子嚢菌亚纲 ( Euascomycetes ) 、红曲霉属（Monascus ) 。中国科学院微生物研究所和轻工部食品研究所正式收集编目的重要红曲霉有 8种 48个菌株。这 8种为紫红曲霉（ Monascus purpureus )、安卡红曲霉（ M. anka )、红色红曲霉（M. ruber ) 、巴克红曲霉（ M. bakeri ) 、烟色红曲霉 ( M. fuliginosus ) 、发白红曲霉（ M. albidus ) 、錄色红曲霉 ( M. rubiginosus ) 、变红红曲霉（ M. serorubescens ) 。优选的是紫红曲霉。所述红曲菌也可以是在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心（CGMCC ) 保藏的菌种： CGMCC No.0272 (授权公开号 CN 1061537C )、 CGMCC No.0315(授权公开号 CN 1065432C )、 CGMCC No.0316 (授权公开号 CN 1065432C )、 CGMCC No.0317 (授权公开号 CN 1065432C ) 。

下述已知红曲菌菌种也能够实现本发明的目的：

( 1 )发白红曲菌 ( Monascus albidus Sato )

例如 AS 3.570、 AS 3.4440；

( 2 ) 丛毛红曲菌 ( Monascus pilosus Sato )

例如 AS 3.4444、 AS 3.4633, AS 3.4646, AS 3.4647；

( 3 )軟毛红曲菌 ( Monascus pubigerus Sato )

例如 AS 3.4445、 AS 3.4634;

( 4 )红色红曲菌 ( Monascus ruber van Tieghem )

例如 AS 3.549;

( 5 ) 巴斯红曲菌 ( Monascus paxii Lingelsheim )

例如 AS 3.4453;

( 6 )烟色红曲菌 ( Monascus fuliginosus Sato )

例如 AS 3.569、 AS 3.1098、 AS 3.2091、 AS 3.2093, AS 3.2134, IFFI 05035 ( IFFI: 中国轻工业部食品发酵研究所菌种保藏中心）。所述红曲可以通过如下的方法或途径得到：

方法 1: 将红曲霉（商购或选自上述的红曲霉）接种在大米上，经培养制得的红曲米（又名红曲、赤曲、红米、福米、红曲药材）；该红曲米也可以从市场上购买得到，也可以按照国标 GB 4926-2008的方法制备得到。

方法 2: 使用上述的任一种或多种红曲霉菌株，通过如下步骤制得：

①配制培养液：所述培养液由甘油（或麦芽汁或土豆汁）、糖和酵母（或牛肉骨或蛋白胨）的混合物以及水组成，其中甘油（或麦芽汁或土豆汁）占 2-7%，糖占 2-6%，蛋白胨 0-3%，酵母粉占 0 -3%, 牛肉奮 0-3%，少量消泡剂如豆油或花生油 2- 4%。，其余为水，用醋酸调节 pH值为 3.0- 5.0;

②每 100克粳米中，加入 40 - 80毫升培养液，控制 pH值在 2.5 ~ 8.0之间，高温蒸汽（121 )灭菌。待温度冷却到 40 以下后，接种红曲菌菌种。所属红曲菌种优选自下列菌种中的一种或多种：紫色红曲菌（ Monascus purpureus Went )，保藏号为 CGMCC Νο·0272; 红色霉曲菌，保藏号为 CGMCC No.0315; 红色霉曲菌，保藏号为 CGMCC No.0316; 发白红曲菌，保藏号为 CGMCC No.0317, 在 15 - 35 下发酵培养 9天以上，所述菌种可以培养成液体菌种或固体菌种。

③将培养物在 60- 121 温度下灭菌，真空降压 60- 80 左右烘干获得红曲药材。根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物通过如下方法制得：

1 )取红曲药材 1重量份，每次加入 2-10体积份的 50 % - 90 % (v/v) 的乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流 1-3小时，提取 2- 3次；

2)提取液过滤，合并滤液；可选地，回收溶剂（乙醇、甲醇或乙酸乙酯）；

3)将步骤 2) 中得到的滤液浓缩成稠骨。

根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物通过如下方法制得：

1 )取红曲药材 1重量份，每次加入 1 - 4体积份（例如 3体积份 ) 的 70% -80% (例如 75% )的乙醇加热回流 2-3 小时，提取 1-3 次（例如 2次）；

2)提取液过滤，合并滤液；可选地，回收溶剂乙醇； 3)将步骤 2) 中得到的滤液浓缩至 55- 60 时测定相对密度为 0.95 - 1.06的浓缩液。

根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物的制备还包括如下步骤：

4)将步骤 3) 中所述的稠骨或浓缩液进行水沉、离心、收集。根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物的制备还包括如下步骤：

4 )向步骤 3 )中所述的稠骨或浓缩液中加 0.5 - 2.0倍（重量倍数 ) 去离子水并混匀，室温或冷藏（冷藏的温度范围 0- 15 ，优选 5- 10 )放置 2- 12小时，离心，收集沉淀。

5)将步骤 4) 中收集的沉淀干燥并粉碎，例如在 80 下干燥 8 小时，粉碎过 60目筛。根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述绞股蓝提取物通过如下方法制得：

取绞股蓝药材 1重量份，每次加 4-20体积份（优选 8-15体积份）的水或乙醇或乙醇溶液加热提取 1-3小时，提取 2- 4次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨。

根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物中洛伐他汀的含量为 > 0.10% (w/w) ，优选为 > 0.83% (w/w) ，更优选为 > 1.0 % ( w/w )或 > 1.8 % ( w/w )，进一步优选为 > 3.33 % ( w/w )，特别优选为 > 10.0% (w/w) 、 > 20.0 % (w/w)或>30.0% (w/w) 。

根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物中洛伐他汀的含量为 0.10% - 0.83 % (w/w) 、 0.10 % - 1.0% (w/w) 、 0.10 %― 1.8 % ( w/w )、 0.10 %― 3.33 % ( w/w )、 0.10 %― 10.0 % ( w/w )、 0.10 %― 20.0 % ( w/w )、 0.10 %― 30.0 % ( w/w )、 0.83 %― 1.0 % ( w/w )、 0.83 % ― 1.8 % ( w/w )、 0.83 % ― 3.33 % ( w/w )、 0.83 % ― 10.0 % ( w/w )、 0.83 %一 20.0 % ( w/w )、 0.83 %一 30.0 % ( w/w )、 1.0 % - 1.8 % ( w/w )、 1.0 %一 3.33 % ( w/w )、 1.0 %一 10.0 % ( w/w )、 1.0 %一 20.0 % ( w/w )、 1.0 %一 30.0 % ( w/w )、 1.8 %一 3.33 % ( w/w )、 1.8 %一 10.0 % ( w/w )、 1.8 %一 20.0 % ( w/w )、 1.8 %一 30.0 % ( w/w )、 3.33 %一 10.0 % ( w/w )、 3.33 % ― 20.0 % ( w/w )、 3.33 % ― 30.0 % ( w/w )、 10.0 % ― 20.0 % ( w/w )、 10.0% - 30.0 % (w/w)或 20.0% - 30.0 % (w/w) 。

不拘于理论的限制，洛伐他汀含量的一个目的是对该药物组合进行质量控制。

根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述绞股蓝提取物中总皂苷的含量为 > 8% (w/w) ，优选为 >10% (w/w) ，更优选为

> 20 % (w/w) 、 > 30 % (w/w) 、 > 40 % (w/w) 、 > 50 % (w/w) 或>60% (w/ )

根据本发明任一项所述的药物组合物，其中，所述绞股蓝提取物中总皂苷的含量为 8% - 10.0% (Λ tv/w ) 、 8 % - 20.0 % ( w/ 'w) 、 8%

- 30.0 % (w/v , 8% - 40.0 % ( w/w ) 、 8 % - 50.0 % ( w/ 'w) 、 8% 一 60.0 % ( w/w )、 10% - 20.0 % (V ^/w)、 10% - 30.0 % (w. w)、 10% 一 40.0 % ( w/w )、 10% - 50.0 % (V ^/w)、 10% - 60.0 % (w. w )、 20 %

- 30.0 % ( w/w )、 20 % - 40.0 % ( V v/w )、 20 % - 50.0 % ( w. w )、 20 % 一 60.0 % ( w/w )、 30 % - 40.0 % ( V v/w )、 30 % - 50.0 % ( w. w )、 30 %

- 60.0 % ( W/ 、 40 % - 50.0 % ( w/w ) 、 40 % - 60.0 % ( w/w )或

50 %一 60.0 % ( w/w ) 。

本发明的另一方面涉及一种药物制剂，其包含本发明任一项所述的药物组合物，以及药学上可接受的载体或辅料；具体地，所述药物制剂为口服制剂，例如胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、口服液、合剂、或糖浆。本发明的药物制剂的具体剂型可以采用常规的制备方法，例如下面提供了颗粒剂和片剂的制备方法：

颗粒剂：将提取物 I、 Π加入适量淀粉、微晶纤维素、甘露醇或其它稀释剂，再加入羧甲基淀粉钠作为崩解剂，混匀、制成颗粒，干燥，整粒。

片剂：将提取物 I、 Π加入适量淀粉、微晶纤维素、甘露醇或其它稀幹剂，再加入羧甲基淀粉钠作为崩解剂，混匀、制成颗粒，干燥，整粒，压片。本发明的再一方面涉及本发明任一项所述的药物组合物在制备治疗和 /或预防和 /或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病或肥胖症的药物中的用途；具体地，所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症或低高密度脂蛋白血症。

本发明的再一方面涉及本发明任一项所述的药物组合物在制备调节血脂（例如降血脂）的药物或者试剂中的用途；优选地，所述血脂为甘油三醋。

本发明的再一方面涉及一种在体内或体外调节血脂的方法，包括使用有效量的本发明中任一项所述的药物组合物或者本发明任一项所述的药物制剂的步骤；优选地，所述血脂为甘油三酯。

本发明的再一方面涉及一种治疗和 /或预防和 /或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病或肥胖症的方法，包括使用有效量的本发明中任一项所述的药物组合物或者本发明任一项所述的药物制剂的步骤；具体地，所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症或低高密度脂蛋白血症。本发明中，

术语 "红曲" 、 "红曲药材" 具有相同的含义。

术语 "绞股蓝" 、 "绞股蓝药材" 具有相同的含义。

本发明所述体积份与重量份的关系是：重量份 /体积份 =克/毫升。如果没有特别说明，所述 w/w是指重量比， v/v是指体积比。所述乙醇浓度，如果没有特别说明，均指体积浓度。发明的有益效果

本发明的药物组合物能够有效地降低血脂，具有用于治疗和 /或预防和 /或辅助治疗高血脂症（特别是高甘油三酯血症或低高密度脂蛋白血症）及其相关疾病的潜力。此外，本发明的药物组合物的安全性良好。具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例 1: 本发明药物组合物的制备

取上面的方法 1得到的红曲药材 6重量份，每次加入 24体积份 80 %的乙酸乙酯加热回流 2小时，提取 3次；提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨，得提取物 I。

取绞股蓝药材 1重量份：加水煎煮 3次，每次的体积分别为其重量的 10倍、 8倍、 8倍，煎煮时间分别为 2h、 lh、 lh。分别滤过，合并滤液，减压浓缩得提取物 Π。

提取物 I 、 Π加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。实施例 2: 本发明药物组合物的制备

取按照上面的方法 2制得的红曲药材 4重量份，加入 8体积份 90 % 的乙醇加热回流 1小时，过滤；再加入 8体积份 90 %的乙醇加热回流 1小时，过滤；合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨，得提取物 I。取绞股蓝药材 1重量份：加其重量的 15倍水煎煮 2h ，过滤；再加入 10倍水煎煮 lh，过滤；合并滤液，浓缩，得提取物 Π。

提取物 I 、 Π加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。实施例 3: 本发明药物组合物的制备

取按照上面的方法 2制得的红曲药材 1重量份，加入 4体积份 50 % 乙醇回流提取 3小时，提取液过滤；滤渣加入 2体积份 50 %乙醇回流提取 3小时，提取液过滤。合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度 0.95 - 1.06 ( 55 - 60 )。浓缩液中加 2.0倍体积的去离子水混匀，放置 12小时。离心，收集沉淀，得到红曲提取物 I 。

取绞股蓝药材 4重量份：加其重量 10倍水煎煮 1.5h ，过滤；再加入 10倍水煎煮 1.5h，过滤；合并滤液，浓缩，得提取物 Π。

提取物 I 、 Π加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的口服液。实施例 4: 本发明药物组合物的制备

取上面的方法 1得到的红曲药材 1重量份，每次加入 4体积份 80 % 的乙醇加热回流 2小时，提取 2次；提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨，得提取物 I 。

取绞股蓝药材 3重量份：加水煎煮 2次，每次的体积分别为其重量的 10倍、 10倍，煎煮时间均为 2h。分别滤过，合并滤液，减压浓缩得提取物 Π。

提取物 I 、 Π加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的颗粒剂。实施例 5: 本发明药物组合物的制备

取上面的方法 2得到的红曲药材 2重量份，加入 6体积份 70 %的乙醇加热回流 3小时，过滤；再加入 4体积份 70 %的乙醇加热回流 2 小时，过滤；合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨，得提取物 I 。

取绞股蓝药材 1重量份：加其重量的 12倍水煎煮 2h ，过滤；再加入其重量的 12倍水煎煮 lh，过滤；合并滤液，浓缩，得提取物 Π。

提取物 I 、 Π加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的片剂。实施例 6: 本发明药物组合物的制备

取按照上面的方法 2制得的红曲药材 1重量份，加入 3体积份 75 % 乙醇回流提取 3小时，提取液过滤；滤渣加入 2体积份 75 %乙醇回流提取 2小时，提取液过滤。合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度 0.95 - 1.06 ( 55 - 60 )。浓缩液中加 2.0倍体积的去离子水混匀，放置 8小时。离心，收集沉淀，得到提取物 I 。

取绞股蓝药材 1重量份：加其重量的 10倍水煎煮 1.5h ，过滤；再加入其重量的 10倍水煎煮 1.5h，过滤；合并滤液，浓缩，得提取物 Π。

提取物 I 、 Π加入制剂辅料，按照常规工艺，制成临床接受的胶囊剂。实施例 7: 红曲提取物中洛伐他汀含量的测定

检测样品：实施例 1 - 6制备的红曲提取物 1 - 6#样品分别干燥得红曲提取物 1 - 6#样品；红曲提取物 7#样品，其制备方法如下：

7#样品制备方法：取按照上面的方法 2制得的红曲药材 1重量份，加入 4体积份 75 %乙醇回流提取 3小时，提取液过滤；滤渣加入 3体积份 75 %乙醇回流提取 3小时，提取液过滤。合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度 0.95 - 1.06 ( 55 - 60 ) 。浓缩液中加 2.0 倍体积的去离子水混匀，放置 12小时。离心，收集沉淀，干燥，得到红曲提取物 7#样品。色谱条件与系统适用性实验：用十八烷烷键合硅胶为填料：甲醇-水（75: 25 )为流动相；检测波长为 237nm，理论板数按洛伐他汀峰计算不低于 4000。

对照品溶液的制备：精密称取洛伐他汀对照品 10mg，置 50ml量瓶中，加甲醇稀幹至刻度，摇匀，即得（每 1ml中含洛伐他汀 200 g )。

供试品溶液的制备：精密称取 0.3g样品，置 10ml具塞离心管中，精密加 75 %乙醇 10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理 20分钟，取出，称定重量，用 75 %乙醇补足减失的重量，摇匀，离心（ 2000 转 /min ) 10分钟，精密量取上清液 3ml，置已处理好的中性氧化铝柱上（200 - 300 目， 4g，内径 0.9cm ) ，用甲醇 22ml分次洗脱，收集洗脱液，置 25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，弃去初滤液，收集续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μ ΐ,注入高效液相色谱仪，测定峰面积，即得。

实验结果：如下面的表 1所示。

表 1: 红曲提取物样品中的洛伐他汀含量的测定结果

实施例 8: 绞股蓝提取物中总皂苷成分的测定

检测样品：实施例 1 - 6制备的绞股蓝提取物分别干燥得绞股蓝提取物 1 - 6#样品；绞股蓝提取物 7 - 8#样品，制备方法如下：

7#样品制备方法：绞股蓝药材 1重量份：加其重量的 8倍 90 %乙醇回流提取 2次，每次 lh; 合并滤液，浓缩，干燥，得绞股蓝提取物 7#样品。

8#样品制备方法：绞股蓝药材 1重量份：加其重量的 10倍 75 % 乙醇回流提取 4次，每次 3h ；合并滤液，浓缩，干燥，得绞股蓝提取物 8#样品。

对照品溶液的制备：精密称取在 60 减压 2.67Kpa以下干燥 3小时的绞股蓝皂苷 -A对照品适量，加甲醇溶解，制成每 lml含 2mg的溶液。

供试品溶液的制备：精密称取本品 50mg，加甲醇溶解，制成每 lml含 2mg的溶液。

测定法：精密吸取对照品溶液及供试品溶液各 100 μ ΐ, 分别置 15ml具塞试管中，精密加入新配制的含 5 %香草醛冰醋酸溶液与高氯酸（2: 8 ) 的混合液 2ml，摇匀，密塞，置 60 水浴中加热 15分钟，取出，立即放入冰水中冷却 2分钟，精密加入冰醋酸 10ml，摇匀，以试剂作空白，用分光光度仪在 555 ± 5nm波长处测定吸收度，计算，即得。

实验结果：如下面的表 2所示。

表 2: 绞股蓝提取物中的总皂苷含量的测定结果

以下通过药效学试验、毒理学试验证明本发明的效果。

实施例 9: 本发明药物组合物对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三脂血症的影响

1、实验材料：

( 1 )受试药制备：

红曲提取物制备：制法同实施例 4中提取物 I的制法。

绞«提取物制备：制法同实施例 4中提取物 Π的制法。

复方药制备：制法见实施例 4。以上各药均临用前加 1% CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

(2) 高脂乳剂的制备：胆固醇 10g、猪油 40g、胆酸钠 2g、丙硫氧嘧 lg、吐温 - 80 lml、丙二醇 15ml、蒸馏水加至 100ml。

(3)试剂：甘油三酯（TG)试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司。

(4)动物： ICR小鼠，雄性，体重 25- 30g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(5)仪器：酵标仪 ( Versa max tunable » Molecular Devices ) ，离心机： ( Anke LXJ- Π B ) 。

2、方法和结果

(1)方法：取 ICR小鼠 60只，饲养 5天，观察证实健康后将小鼠随机分为 6组，每组 10只，分别为：空白对照组、高脂模型组（ig 高脂乳剂 20ml/kg.d +水）、阳性对照组（ ig高脂乳剂 20ml/kg.d +非诺贝特 300mg/kg )、红曲组（ ig高脂乳剂 20ml/kg.d +红曲浓缩液）、绞股蓝组（ig 高脂乳剂 20ml/kg.d +绞股蓝浓缩液）、复方组（ig 高脂乳剂 20ml/kg.d +复方浓缩液）。上午 8: 30分别灌胃给予高脂乳及其空白溶液；下午 15: 30按组分别灌胃给予水、阳性对照药、各受试药等。连续给药 20d，在第 21d剪尾取血。采用 EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。

(2)结果见表 3。

表 3: 中药复方组合物对高脂小鼠 TG的影响（X士 SD， mg/dl )

给药剂量

高脂乳体甘油三醋组别 (g原药材 n (只）

积 ( ml/kg ) ( mg/dl )

/kg体重 )

空白对照组 20 (水） 10 177 ±30.5 高脂模型组 20 10 290 ±44.5厶厶阳性对照组 300mg/kg 20 10 143士 14.7** 红曲组 20 20 10 190 ±33.7** 绞股蓝组 20 20 10 200 ±34.0** 复方组 20 20 10 166 ±22.4**

ΔΔ表示与空白对照组比较（t检验）， P<0.01; *， **表示与高脂模型组比较（t检验）， Ρ<0·05， 0.01ο

结果：红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂乳模型小鼠血清中 TG 的含量。但在相同给药剂量情况下，红曲组比模型组降低 34%，绞股蓝组比模型组降低 31%，复方组比模型组降低 43%; 复方组小鼠的 TG 降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中 TG的作用。实施例 10: 本发明药物组合物对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三脂血症的影响

1、实验材料：

(1)受试药制备：

红曲提取物制备：制法同实施例 5中提取物 I的制法。

绞«提取物制备：制法同实施例 5中提取物 Π的制法。

复方药制备：制法见实施例 5。

以上各药均临用前加 1% CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

(2) 高脂乳剂的制备：同实施例 9。

(3)试剂：同实施例 9。

(5)仪器：同实施例 9。

2、方法和结果

(1)方法：同实施例 9。

( 2 )结果见表 4。表 4: 中药复方组合物对高脂小鼠 TG的影响（X士 SD， mg/dl )

结果：红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂乳模型小鼠血清中 TG 的含量。但在相同给药剂量情况下，红曲组比模型组降低 34%，绞股蓝组比模型组降低 24%，复方组比模型组降低 47%; 复方组小鼠的 TG 降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中 TG的作用。实施例 11: 本发明药物组合物对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三脂血症的影响

1、实验材料：

(1)受试药制备：

红曲提取物制备：制法同实施例 6中提取物 I的制法。

绞«提取物制备：制法同实施例 6中提取物 Π的制法。

复方药制备：制法见实施例 6。

以上各药均临用前加 1% CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

(2) 高脂乳剂的制备：同实施例 9。

(3)试剂：同实施例 9。 (4)动物： ICR小鼠，雄性，体重 25- 30g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(5)仪器：同实施例 9。

2、方法和结果

(1)方法：同实施例 9。

( 2 )结果见表 5。

表 5: 中药复方组合物对高脂小鼠 TG的影响（X士 SD， mg/dl )

红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂乳模型小鼠血清中 TG的含量。但在相同给药剂量情况下，红曲组比模型组降低 32%，绞股蓝组比模型组降低 21 %，复方组比模型组降低 43 %；复方组小鼠的 TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中 TG的作用。实施例 12: 本发明药物组合物降血脂作用的实验研究

1、实验材料：

(1) 药物

红曲提取物制备：制法同实施例 4中提取物 I的制法。绞«提取物制备：制法同实施例 4中提取物 Π的制法。

复方药制备：制法见实施例 4。

以上各药均临用前加 1% CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

(2)动物： Wistar雄性大鼠，体重 150-200 g。购买自北京维通利华实验动物技^ 限公司。

(3)高脂饲料：胆固醇 2%、胆酸钠〔猪〕 0.5%、猪油 15% (自制）、丙硫氧嘧啶 0.2%、基础饲料粉末 82.3%。将猪油用 40 水浴熔化。胆酸钠、胆固醇、丙硫氧嘧啶用粉碎机粉碎搅拌均匀、加^? 饲料混，再加熔化的猪油拌。总共 1000g原料中加入 50ml水，拌匀。用压面机压成块状（每 30g混合的料压一个饼）。烘干灭菌即得高脂饲料。

(4)试剂：甘油三酯（TG)试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司。

( 5 )仪器：仪器：酵标仪 ( Versa max tunable, Molecular Devices )，离心机： ( Anke LXJ- Π B ) 。

2、方法与结果

( 1 ) 高脂血症造模：

取大鼠 50只，分为空白对照组（10只 )和高脂造模组（40只 )，分别给予正常基础饲料和高脂饲料饲养，连续 4周。于第 28日晚禁食，次曰上午剪尾取血。采用 EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。

(2)方法：将喂正常基础饲料大鼠作为空白对照组：继续喂正常基础饲料，每天灌胃给予 1% CMC水溶液；将高脂造模动物根据血脂 TG水平随机分为 4组，高脂模型组：喂高脂饲料，每天灌胃给予 1% CMC水溶液；红曲组：每天灌胃给予红曲提取物，给药量为 20g (原药材） /kg体重；绞股蓝组：每天灌胃给予绞股蓝提取物，给药量为 20g (原药材） /kg体重；复方组：每天灌胃给予本发明的中药复方提取物，给药量为 20g (原药材） /kg体重。连续喂养 4周，于末次给药后禁食 12h，次日上午剪尾取血。采用 EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。

( 3 )结果见表 6。

表 6: 中药复方组合物对血脂含量的影响（X±SD， mg/dl )

结果表明：红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂饲料喂养造成的高 TG模型大鼠血清中 TG的含量，与模型组比较分别是显著性差异 Ρ < 0.05和极显著性差异 Ρ< 0.01。从 TG降低百分率看：在相同给药剂量情况下，红曲组比模型组降低 21%，绞股蓝组比模型组降低 25%，复方组比模型组降低 39%；复方组小鼠的 TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中 TG的作用。实施例 13: 本发明药物组合物降血脂作用的实验研究

1、实验材料：

(1) 药物

红曲提取物制备：制法同实施例 5中提取物 I的制法。

绞«提取物制备：制法同实施例 5中提取物 Π的制法。

复方药制备：制法见实施例 5。

以上各药均临用前加 1% CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

(3) 高脂饲料：同实施例 12。

(4)试剂：同实施例 12。

(5)仪器：同实施例 12。

2、方法与结果

( 1 ) 高脂血症造模：同实施例 12。

(2) 实验方法：同实施例 12。

( 3 )结果见表 7。

表 7: 中药复方组合物对血脂含量的影响（X士 SD，

结果表明：红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂饲料喂养造成的高 TG模型大鼠血清中 TG的含量，与模型组比较分别是显著性差异 Ρ < 0.05和极显著性差异 Ρ< 0.01。从 TG降低百分率看：在相同给药剂量情况下，红曲组比模型组降低 18%，绞股蓝组比模型组降低 24%，复方组比模型组降低 36%；复方组小鼠的 TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中 TG的作用。实施例 14: 本发明药物组合物降血脂作用的实验研究

1、实验材料：

(1) 药物红曲提取物制备：制法同实施例 6中提取物 I的制法。绞«提取物制备：制法同实施例 6中提取物 Π的制法。

复方药制备：制法见实施例 6。

以上各药均临用前加 1% CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

(3) 高脂饲料：同实施例 12。

(4)试剂：甘油三酯（TG) 、总胆固醇（TC) 、低密度脂蛋白 -胆固醇（LDL-C) 、高密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C) ，用北京中生北控生物科技股份有限公司试剂盒测定。

2、方法与结果

( 1 ) 高脂血症造模：同实施例 12。

(2) 实验方法：同实施例 12。

( 3 )结果见表 8。

表 8: 中药复方组合物对血脂含量的影响（X±SD， mg/dl )

Δ， Δ Δ表示与空白对照组比较（t检验）， Ρ<0·05， Ρ<0.01; *， **表示与高脂模型组比较（t检验）， Ρ < 0·05， Ρ < 0.01ο

结果表明：红曲、绞股蓝、复方均可降低高脂饲料喂养造成的高 TG模型大鼠血清中 TG的含量，与模型组比较分别是显著性差异 Ρ < 0.05和极显著性差异 Ρ < 0.01。从 TG降低百分率看：在相同给药剂量情况下，红曲组比模型组降低 24 %，绞股蓝组比模型组降低 25 %，复方组比模型组降低 37 %；复方组小鼠的 TG降低幅度大于红曲组、绞股蓝组。表明中药复方组合物具有更明显的降低血中 TG的作用。

从 TC、 HDL-C, LDL-C的结果看，绞股蓝组对降低 TC、升高 HDL-C没有显著作用，对降低 LDL-C有一定作用。与红曲组成复方以后，增强了红曲的降低 TC、 LDL-C, 升高 HDL-C的作用。两药合用具有协同增效的作用。实施例 15: 本发明药物组合物的极性毒性实验

1、实验材料：

( 1 )受试药制备：

①取红曲药材 1000g，加入 4000ml 75 %乙醇回流提取 3小时，提取液过滤；滤渣加入 2000ml 75 %乙醇回流提取 2小时，提取液过滤。合并两次滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度 0.95 - 1.06 ( 55 - 60 Γ ) 。浓缩液中加 2倍体积的去离子水混匀，放置 8小试。离心，收集沉淀，得到红曲提取物 I。

②取绞股蓝药材 1000g，加 10L水煎煮 2h，过滤；再加入 10L水煎煮 2h，过滤；合并滤液，浓缩，得 Π。

③复方药制备：将 I、 Π合并，喷雾干燥，临用前加 1 % CMC研磨配制成每 lml药液相当于 3.95g生药。

( 2 )动物： ICR小鼠，雌雄各半，体重 ²0 ± l_g，购买自北京维通利华实验动物技^ T限公司。

2、方法

取体重 20 ± lg的健康小鼠 20只，雌雄各半，禁食过夜，用药液按 0.4ml/10g (相当于生药 158g/kg ) —次灌胃给药。记录并观察小鼠给药后的中毒症状、摄食情况、小鼠的活跃程度，记录动物外观、行为活动、精神状态、食欲、二便、被毛、皮肤、呼吸、眼、口、鼻等有无异常分泌物。连续观察 7d，记录体重变化及死亡情况。如有死亡，及时进行解剖。第 7天，随机解剖受试药组小鼠，观察小鼠的各个系统和器官。

3、结果

按可以灌胃的最高浓度（每 1ml药液相当于 3.95g生药 ) 、最大体积（0.4ml/10g ) 的药量给小鼠灌胃，相当于剂量为 158g/kg。按成人平均体重 60kg计算，相当于成人的日常用量的约 1000倍。说明本复方药物口服的安全性良好。（用量参考《广西中药材标准》第二册 ( 1996年） 6 - 10g/天 ) 实施例 16: 红曲 +绞股蓝 +银杏叶组成的复方与红曲 +绞股蓝组成的复方对高脂饲料喂养模型小鼠高甘油三脂血症的影响

1、实验材料：

( 1 )受试药制备：

红曲提取物制备:取上面的方法 2得到的红曲 2kg，每次加入 80 % 的乙醇 4L加热回流 2小时，提取 2次；提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨，得提取物 I 。

绞股蓝提取物制备：取绞股蓝药材 2kg: 加水煎煮 2次，每次的体积分别为 10倍、 10倍，煎煮时间均为 2h。分别滤过，合并滤液，减压浓缩得提取物 Π。

银杏叶提取物制备：取银杏叶药材 1kg: 加 80 %的乙醇 4L加热回流 2小时，提取 2次；提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨，得提取物 m。

复方 A制备：分别取提取物 I和 Π的一半，加上提取物 m，混合均匀。临用前加 1 % CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。复方 B制备：分别取提取物 I和 Π的一半，混合均匀。临用前加 1 % CMC配制成 lg (生药） /ml (液体）。

2、方法和结果

(1)方法：取 ICR小鼠 40只，饲养 5天，观察证实健康后将小鼠随机分为 4组，每组 10只。空白对照组、高脂模型组（ ig高脂乳剂 20ml/kg.d +水）、复方 A组（ ig高脂乳剂 20ml/kg.d +复方 A ) 、复方 B组（ ig高脂乳剂 20ml/kg.d +复方 B )。上午 8: 30给高脂乳及其空白溶液；下午 15: 30按组分别给水、复方 A、复方 B。分别连续给药 20d，在第 21d剪尾取血。采用 EDTA抗凝制备血浆。按试剂盒方法测定甘油三酯含量。

( 2 )结果见表 9。

表 9: 复方 A和复方 B对高脂小鼠 TG的影响（X士 SD， mg/dl )

ΔΔ表示与空白对照组比较（t检验）， P<0.01; 脂模型组比较（t检验）， Ρ < 0·05， 0.01ο

结果：复方 Α、 Β均可降低高脂乳模型小鼠血清中 TG的含量。但在相同给药剂量情况下，复方 A组比模型组降低 40 %，复方 B组比模型组降低 45 %。表明复方 B比复方 A具有更明显的降低 TG的作用。同时复方 B是复方 A的减方，在少一味药的情况下，降低 TG的作用更加明显。所以可以认为不含其它组分（例如银杏叶提取物）的复方 B优于复方 A。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims

权利要求

1. 一种药物组合物，包含红曲或其提取物，以及绞股蓝或其提取物。

2. 根据权利要求 1所述的药物组合物，其中，所述红曲和绞 « 药材的重量比为 1: 10至 10: 1；优选为 6: 1至 1: 6; 更优选为 4: 1至 1: 4; 进一步优选为 1: 2至 2: 1。

3. 根据权利要求 1所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物中洛伐他汀的含量为 > 0.10% (w/w) ，优选为 > 0.83% (w/w) ，更优选为 > 1.0 % ( w/w )或 > 1.8 % ( w/w )，进一步优选为 > 3.33 % ( w/w )，特别优选为 > 10.0% (w/w) 、 > 20.0 % (w/w)或>30.0% (w/w) 。

4. 根据权利要求 1所述的药物组合物，其中，所述绞股蓝提取物中总皂苷的含量为 > 8 % ( w/w ) ，优选为 > 10 % (w/w) ，更优选为 > 20 % (w/w) 、 > 30 % (w/w) 、 > 40 % (w/w) 、 > 50 % (w/w) 或>60% (w/w) 。

5. 根据权利要求 1所述的药物组合物，其中，所述红曲由选自保藏号为 CGMCC Νο·0272、 CGMCC Νο·0315、 CGMCC Νο·0316、以及 CGMCC No.0317的一种或多种红曲菌菌种制得。

6. 根据权利要求 1至 5中任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物通过如下方法制得：

1 )取红曲 1重量份，每次加入 2-10体积份的 50 - 90 % ( v/v ) 的乙醇、甲醇或乙酸乙酯加热回流 1-3小时，提取 2- 3次；

2)提取液过滤，合并滤液；可选地，回收溶剂（乙醇、甲醇或乙酸乙酯），

3)将步骤 2) 中得到的滤液浓缩成稠骨；

优选地，还包括如下步骤：

4)将步骤 3) 中所述的稠骨或浓缩液进行水沉、离心、收集；具体地，步骤 4)为向步骤 3)中所述的稠骨或浓缩液中加 0.5- 2.0倍（重量倍数）去离子水并混匀，室温或冷藏放置 2- 12小时，离心，收集沉淀；

优选地，还包括如下步骤：

5)将步骤 4) 中收集的沉淀干燥并粉碎，例如在 80 下干燥 8 小时，粉碎过 60目筛。

7. 根据权利要求 1至 5中任一项所述的药物组合物，其中，所述红曲提取物通过如下方法制得：

1 )取红曲 1重量份，每次加入 1 - 4体积份的 70 % - 80 %的乙醇加热回流 2- 3小时，提取 1-3次；

2)提取液过滤，合并滤液；可选地，回收溶剂乙醇，

3)将步骤 2) 中得到的滤液浓缩至 55- 60 时测定相对密度为 0.95 - 1.06的浓缩液；

优选地，还包括如下步骤：

8. 根据权利要求 1至 5中任一项所述的药物组合物，其中，所述绞股蓝提取物通过如下方法制得：

取绞股蓝药材 1重量份，每次加 4 - 20体积份（优选 8 - 15体积份）的水或乙醇或乙醇溶液加热提取 1 - 3小时，提取 2 - 4次，提取液过滤，合并滤液，回收溶剂，浓缩成稠骨。

9. 一种药物制剂，其包含权利要求 1至 8中任一项所述的药物组合物，以及药学上可接受的载体或辅料；具体地，所述药物制剂为口服制剂，例如胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、口服液、合剂或糖浆。

10. 权利要求 1至 8中任一项所述的药物组合物在制备治疗和 /或预防和 /或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病或肥胖症的药物中的用途；具体地，所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症或低高密度脂蛋白血症。

11. 权利要求 1至 8中任一项所述的药物组合物在制备调节血脂的药物或者试剂中的用途；优选地，所述血脂为甘油三酯。

12. —种在体内或体外调节血脂的方法，包括使用有效量的权利要求 1至 8中任一项所述的药物组合物或者权利要求 9所述的药物制剂的步骤；优选地，所述血脂为甘油三酯。

13. 一种治疗和 /或预防和 /或辅助治疗高血脂症、冠心病、动脉硬化、脂肪肝、糖尿病或肥胖症的方法，包括使用有效量的权利要求 1 至 8中任一项所述的药物组合物或者权利要求 9所述的药物制剂的步骤；具体地，所述高血脂症为高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高血脂症或低高密度脂蛋白血症。