CN102160876A - 一种防治动脉硬化的植物提取物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治动脉硬化的植物提取物组合物，包括三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物。本发明还公开了上述组合物的制备方法，是将三七经过C_1-3醇提后，合并总提取物，浓缩再除去总提取物中非皂苷类成分，得三七总皂苷提取物；将黄连加C_1-3醇回流提取，回收C_1-3醇，浓缩后以酸溶解碱沉淀重结晶析出总生物碱提取物，两者混合后得到防治动脉硬化的植物提取物组合物。本发明去除了原复方中药中大量无效的化学成分，有效成分含量大大提高，减少了无效成分对产品加工和制剂质量及安全性的影响，使有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于工业化生产，并显著提高抗动脉硬化药效，防治动脉硬化疗效更稳定更好。

Description

一种防治动脉硬化的植物提取物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药提取物组合物，具体涉及一种防治动脉硬化的植物提取物组合物及其制备方法。

背景技术

动脉硬化是中老年常见多发病。动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是动脉硬化中最常见而重要的类型，其特点是受累动脉的内膜有类脂质的沉着，复合糖类的积聚，继而纤维组织增生和钙沉着，并有动脉中层的病变。本病主要累及大型及中型的肌弹力型动脉，以主动脉、冠状动脉及脑动脉为多见，常导致管腔闭塞或管壁破裂出血等严重后果，为心肌梗塞和脑梗塞的主要病因。它影响大、中动脉，可引起相当严重的后果。冠状动脉粥样硬化时，可造成心肌供血不足，引起心绞痛乃至心肌梗死；脑动脉硬化可引起脑供血不足、眩晕、头痛。后期脑萎缩时，可有精神变态、痴呆等，脑动脉内血栓形成或因动脉粥样硬化引起的小动脉瘤破裂出血引起的脑卒中(中风)，可造成意识丧失、偏瘫、失语等严重后果；肾动脉硬化可引起顽固性高血压；肠动脉硬化可引起消化不良、便秘、腹泻；下肢动脉粥样硬化可引起间歇跛行，严重时发生肢端缺血坏死。

本病常伴有高血压、高胆固醇血症或糖尿病等。脑力劳动者较多见，男性较女性多，近年来本病在我国逐渐增多，对人民健康危害甚大，成为老年人主要病死原因之一。

由于经济社会的发展，工作生活的压力加大，饮食习惯和生活方式的变化等因素导致高脂血症和动脉粥样硬化发病率大增，成为当代社会人类健康的重大威胁，已经引起了WHO和各国政府的高度重视，是医药科研的热点。但迄今对动脉粥样硬化的发病机制还没有完全阐明，临床治疗动脉粥样硬化还没有理想的办法。动脉粥样硬化的病因虽未完全明了，但已知与下述因子（易患因子）有密切关系：①高血压，②高血脂症，③吸烟，④糖尿病，⑤肥胖。动脉粥样硬化的发病机理学说甚多，如脂质浸润学说、血栓源学说、血液动力学学说、中层平滑肌细胞增生学说、动脉内膜损伤学说、受体学说等，现逐渐明确动脉粥样硬化的发病机理是复杂的、综合性的长期过程。新近研究表明，脂质过氧化在动脉粥样硬化发生中起重要作用。

虽然用于降低血脂或调节血液流变学有不少化学药物，但其防治动脉粥样硬化的综合疗效并不理想。尤其因为动脉粥样硬化病因复杂，常与脂代谢紊乱相伴发生，并且血流变学异常和高血脂往往互相影响，而化学药物通常都是针对脂代谢的特别靶点，药理作用比较单一，改善血液流变性和调脂不能兼顾，因此成分单一的化学药难以满足多系统多环节病理改变的复杂疾病动脉粥样硬化需要多靶点药理作用的要求，给化学药防疗动脉粥样硬化性疾病带来了困难。此外，化学药物还有不良反应和用药的费用较高等问题，也成为化学药品的弊端。

临床实践表明，中医药在防治动脉粥样硬化和心脑血管病等方面，因为中医临床的整体观点和辩证论治，中药成分多，可以多靶点、多层次的发挥药效，所以临床疗效确切，具有安全有效的优势。

“复方贞术调脂方”（FTZ），是一种中药组合物，用于治疗高脂血症，取得理想疗效，临床总有效率达91%。全方由女贞子、白术、佛手、杜仲、大蓟、丹参、黄连、三七8味中药组成。该组方FTZ已获国家发明专利授权，专利号： 200410051250.4。

虽然已有不少中药复方有良好的血脂调节和抗动脉硬化功能和临床疗效，但是由于是中药复方制剂，还有许多不足之处：（1）其成分较复杂，其有效成分还不清楚，不易量化，最终将影响产品的临床疗效的稳定性，（2）相对简单的制备工艺，方中有效成分得不到应有的纯化，杂质成分多，服用剂量大，病人服用顺应性不够理想，（3）由于方剂提取物量大，应用范围受到各种限制。

发明内容

本发明的目的在于克服已有技术的不足，提供一种疗效更显著确切，有效成份含量高，易于量化，质量易于控制的防治动脉硬化的植物提取物组合物。

本发明的另一目的是提供一种工艺稳定，重现性好的上述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法。

本发明的又一目的是提供上述防治动脉硬化的植物提取物组合物在制备预防或治疗动脉硬化相关疾病药物和或保健食品中应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

一种防治动脉硬化的植物提取物组合物，包括三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物。三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物的重量百分比优选为1～9:1～3。

一种防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，步骤如下：

（1）三七总皂苷提取物的制备：将原料药物三七经过C_1-3醇提后，合并总提取物，浓缩总提取物得到浓缩液，除去浓缩液中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物；

（2）黄连总生物碱提取物的制备：将原料药物黄连加C_1-3醇回流提取，回收C_1-3醇，浓缩，再以酸溶解碱沉淀重结晶析出黄连总生物碱提取物；

（3）将三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物混合，得到防治动脉硬化的植物提取物组合物。

上述制备方法步骤（1）C_1-3醇提是用30～95体积%的C_1-3醇提取1～5次，优选用65～75体积%的乙醇提取2～3次，，每次提取的C_1-3醇体积为药材质量的1～15倍，优选为5～10倍，每次提取时间为5分钟以上，优选为60~120分钟；所述C_1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选为乙醇，因为乙醇安全性比甲醇更高，也更易获得，提取效果也比丙醇好。

步骤（1）中除去浓缩液中非皂苷类成分采用大孔树脂，大孔树脂与浓缩液的用量比是1kg树脂加浓缩液0.5~5L，优选为1~1.5L。用大孔树脂柱吸附后洗脱用50~95体积%乙醇，优选为75~85体积%乙醇，用量为每1kg大孔树脂用3~20 L乙醇，优选4~6 L乙醇，以1~20 ml/min，优选5~12 ml/min流速洗脱、洗脱至无色；所述大孔树脂为聚酰胺型树脂或聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂。

步骤（2）C_1-3醇回流提取是用50~95体积%，优选为65~75体积% C_1-3醇提取1～5次，优选为2～3次，每次提取的C_1-3醇体积为药材质量的1～15倍，优选为5～10倍，每次提取时间为5分钟以上，优选为60~120分钟。所述C_1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选为乙醇，因为乙醇安全性比甲醇更高，也更易获得，提取效果也比丙醇好。

酸溶解是用醋酸溶解，醋酸用量为C_1-3醇提物的3～10倍，优选为3～5倍；加1~30质量%，优选为10质量%HCl调pH为0.2~4，优选pH为1.5~2.5。加入NaCl重结晶，溶液NaCl浓度约为5～12质量%，优选为6～8质量%；碱沉淀是用1~30质量%，优选为10质量%NaOH溶液，pH为9~13，优选pH为11~12.5，重结晶体积为黄连重量的1~5倍，优选为2~3倍。

本发明的防治动脉硬化的植物提取物组合物有效成分为三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀。其中重量比例比为三七皂苷R1：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：人参皂苷Re：人参皂苷Rg1：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于1～4：1～8：1～3：1～2：1～11：1～10：1～3：1～2：1～3。

当三七总皂苷提取物和黄总生物碱提取物的配比为7：3时，防治动脉硬化的植物提取物组合物有效成分及重量百分含量比分别为：三七皂苷R1：人参皂苷Rg1：人参皂苷Re：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于2.3～2.8：10～12：0.95～1.1：7.6～9.0：1.6～1.9：9.5～11.5：2.4～2.8：1.1～1.3：2.1～2.4。

防治动脉硬化的植物提取物组合物在制备预防或治疗动脉硬化相关疾病药物或保健品中的应用。

所述药物为将本发明防治动脉硬化的植物提取物组合物按照药剂学上可以接受的载体和/或辅料，使用一般制剂方法，加工成为口服制剂或注射制剂等形式。常规辅料有润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂等。口服制剂有片剂、胶囊、散剂、丸剂、粉末、颗粒、晶体、溶液、浸出物、悬剂、汤、糖浆、酏剂、茶、油等形式。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明的防治动脉硬化的植物提取物组合物是在中国发明专利ZL200410051250.4基础上，选取其中的两味中药三七和黄连，用其提取物组成的组合物，该组合物是在进行活性成分群（有效部位）及其组分配伍的活性筛选而获得的最佳配伍。通过本发明制备方法，可以去除复方中药中大量无效的化学成分，得到更有效的中药有效提取部位，既保留了中药特色，又使传统中药中的有效成分含量大大提高，减少了无效成分对产品加工和制剂质量及安全性的影响，使该复方中药有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于大量生产。本发明进一步拓展了上述植物提取物组合物的应用范围，为预防和/或治疗动脉硬化相关疾病提供了一种新产品。本发明与同类防治动脉硬化相关疾病的药物相比，其疗效确切，安全无毒副作用，单独使用或者与其他药物复配都有良好的应用前景。

本发明的防治动脉硬化的植物提取物组合物与复方贞术调脂方（原方FTZ）相比较：

（1）服用量由原来的6g提取物缩减为600mg,缩减为原来的1/10；

（2）药物有效成分的含量提高约10倍；

（3）动物体内试验表明，该植物提取物组合物可以更有效降低血清总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇含量，降低胆固醇在组织里（如肝脏和心脏）的含量，降低血清甘油三酸脂水平，同时也抑制血小板凝集结。另外，本发明产品还能抑制平滑肌的增殖，防止内膜变厚及内皮炎症损害，防止血栓形成，抑制并扭转动脉硬化的损害和进而增进人体的总体健康水平，并且没有观察到明显副作用，增加了用药的安全性。该植物提取物组合物部分指标优于原方，达到了减少服用量而不降低药效的目的。

附图说明

图1：实施例1 防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备（6）片剂的制备项下防治动脉硬化的植物提取物组合物经HPLC分析得到的指纹图谱中三七总皂苷成分的色谱峰图。

图2：实施例1 防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备（6）片剂的制备项下防治动脉硬化的植物提取物组合物经HPLC分析得到的指纹图谱中黄连总生物碱成分的色谱峰图。

具体实施方式

实施例1防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备

一、三七总皂苷提取物的制备

（1）三七总皂苷提取物

称取10 kg三七药材，粉碎，以药材量的8倍、8倍和6倍的75体积%乙醇分别回流提取3次，每次2h，合并提取液用200目滤布过滤，合并滤液。回收乙醇并使醇提部分浓度为1ml相当于1g生药的浓缩液（1.9 L）；上大孔树脂柱吸附，大孔树脂为聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂系列的HPD-100，按1 kg树脂加浓缩液 1.5L上大孔树脂柱吸附, 用水洗至洗脱液近无色，然后用85体积%乙醇4.5 L以10 ml/min流速洗脱、洗脱至流出液无色、合并洗脱液，真空减压回收乙醇并浓缩至为1ml约相当于2 g生药浓缩液（相对密度为1.08～1.10，60℃)，60℃以下干燥得总皂苷提取物0.65 kg。

干燥的方法很多，可用减压干燥，也可用薄膜蒸发干燥等。本发明优选采用喷雾干燥法，其进风口温度80～108℃，出口温度55～60℃，风速5～10m/s，压力0.02～0.1kPa，1～2次干燥。

三七总皂苷提取物用HPLC方法测定含总皂含量为73.8%，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为提取物总重量的25.6%、5.2%、3.1%、32.1%、7.5%。

（2）三七总皂苷提取物

称取10 kg三七药材，粉碎，以药材量的8倍、7倍和5倍的65体积%甲醇分别回流提取3次，每次2h，合并提取液用200目滤布过滤，合并滤液。回收甲醇并使醇提部分浓度为1ml相当于1g生药的浓缩液（2.0 L）；上大孔树脂柱吸附，大孔树脂为聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂系列的HPD-600，按1 kg树脂加浓缩液 1.2 L上大孔树脂柱吸附, 用水洗至洗脱液近无色，然后用90体积%乙醇3.5 L以10 ml/min流速洗脱、洗脱至流出液无色、合并洗脱液，真空减压回收乙醇并浓缩至为1ml约相当于2 g生药浓缩液（相对密度为1.08～1.10，60℃)，60℃以下减压干燥得总皂苷提取物0.64 kg。

三七总皂苷提取物用HPLC方法测定含三七总皂苷含量为75.2%，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为提取物总重量的26.1%、5.3%、3.2%、32.8%、7.6%。

（3）三七总皂苷提取物

称取10 kg三七药材，粉碎，以药材量的8倍、7倍的70体积%正丙醇分别回流提取2次，每次2h，合并提取液用200目滤布过滤，合并滤液。回收正丙醇并使醇提部分浓度为1ml相当于1g生药的浓缩液（1.7 L）；上大孔树脂柱吸附，大孔树脂优选为聚酰胺型AB-8。按1 kg树脂加浓缩液1.3L上大孔树脂柱吸附，用水洗至洗脱液近无色，后用80%乙醇6 L以9 ml/min流速洗脱、洗脱至流出液无色、合并洗脱液，真空减压回收乙醇并浓缩至为1ml约相当于2 g生药浓缩液（相对密度为1.08～1.10，60℃)，60℃以下减压干燥得总皂苷提取物0.62 kg。

三七总皂苷提取物用HPLC方法测定含三七总皂苷含量为72.2%，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为提取物总重量的25.3%、5.0%、3.2%、31.3%、7.2%。

表1不同制备工艺三七总皂苷提取物得率及HPLC含量测定结果（%）

样品序号	得率	三七总皂苷	人参皂苷Rb1	人参皂苷Rd	人参皂苷Re	人参皂苷Rg1	三七皂苷R1
								1	6.5	73.8	25.6	5.2	3.1	32.1	7.5
2	6.4	75.2	26.1	5.3	3.2	32.8	7.6
								3	6.2	72.2	25.3	5.0	3.2	31.3	7.2

二、黄连总生物碱的制备

（4）黄连总生物碱提取物

称取10 kg黄连药材，粗粉碎，以药材量的6倍、5倍和5倍的70%乙醇分别回流提取3次，每次2 h，合并提取液，真空减压回收乙醇浓缩至1.3g药材、ml，得流浸膏2.1kg。加入冰醋酸6 L溶解，充分搅拌，4～10℃放置过夜，离心（5000 r / min，15min），抽滤，弃去沉淀，取上清液，上清液中加10质量%HCl调pH 至2.5，然后加入NaCl，使溶液NaCl浓度约为8质量%，充分搅拌，使NaCl溶解，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物；上清液加10质量%NaOH调pH 至12，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物，合并2次沉淀物，60℃减压干燥，即得黄连总生物碱提取物1.65 kg。

黄连总生物碱提取物用HPLC方法测定含总生物碱含量为57.1%，其中小檗碱35.0%，黄连碱8.6%、表小檗碱4.1%、巴马汀7.6%。

（5）黄连总生物碱提取物

称取10 kg黄连药材，粗粉碎，以药材量的8倍、5倍和4倍的75体积%甲醇分别回流提取3次，每次2 h，合并提取液，真空减压回收甲醇得浸膏2.05kg。加入冰醋酸溶解5.5 L，得酸水提取液，4~10℃放置过夜，离心（5000 r / min，15min），抽滤，弃去沉淀，取上清液，上清液中加10质量%HCl调pH 至3.0，然后加入NaCl，使溶液NaCl浓度约为6质量%，充分搅拌，使NaCl溶解，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物；上清液加10质量%NaOH调pH 至12，静置24h，离心（5000 r / min，15min），收集沉淀物，合并2次沉淀物，60℃减压干燥，即得黄连提取物1.63 kg。

黄连总生物碱提取物用HPLC方法测定含总生物碱含量为55.6%，其中小檗碱34.0%，黄连碱8.4%、表小檗碱4.0%、巴马汀7.5%。

三七总皂苷色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表2中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；流速：1ml/min；柱温：25℃；检测波长：203nm；自动进样器进样。

表2

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0～12	19	81
12～60	19→36	81→64
			60～70	36	64

黄连总生物碱色谱条件：

乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（47:53）；流速：1 mL/min；检测波长：345nm。

三、防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备

（6）片剂的制备

称取按上述（1）法制备三七总皂苷提取物7kg、（4）法制备的黄连总生物碱提取物3 kg，按等量倍增法混合均匀得防治动脉硬化的植物提取物组合物10kg。

上述防治动脉硬化的植物提取物组合物，用HPLC进行分析，得图1、图2指纹图谱。有效成分及重量百分含量比值为：三七皂苷R1：人参皂苷Rg1：人参皂苷Re：人参皂苷Rb1：人参皂苷Rd：小檗碱：黄连碱：表小檗碱：巴马汀等于2.66：11.2：1.05：8.40：1.75：10.5：2.61：1.26：2.31。

取上述防治动脉硬化的植物提取物组合物20kg加淀粉4kg、糊精1kg、65%糖浆1kg，混匀，加80%酒精适量，制成颗粒，干燥，加60g硬脂酸镁拌匀，压制成20万片，包衣，即得0.25g/片（每片含提取物组合物干粉100mg）。

用HPLC方法测定片剂各有效成分含量结果如表3。

表3防治动脉硬化的植物提取物组合物片HPLC含量测定结果

检测项目	含量（mg/片）	检测项目	含量（mg/片）
				人参总皂Rb1	8.40	小檗碱	10.5
人参总皂Rd	1.75	黄连碱	2.61
				人参总皂Re	1.05	表小檗碱	1.26
人参总皂Rg1	11.2	巴马汀	2.31
				三七皂苷R1	2.66

（7）注射液的制备

称取按上述（2）法制备三七总皂苷提取物3kg、（4）法制备的黄连总生物碱提取物2 kg，按等量倍增法混合均匀得防治动脉硬化的植物提取物组合物 5kg。

取防治动脉硬化的植物提取物组合物按常规方法除热源，制成粉针剂。

（8）胶囊剂的制备

称取按上述（1）法制备三七总皂苷提取物6kg、（5）法制备的黄连总生物碱提取物4kg，按等量倍增法混合均匀得防治动脉硬化的植物提取物组合物 10kg。

加工方法：取上述防治动脉硬化的植物提取物组合物干粉10.0k g加糊精5.0kg，混匀，灌装胶囊10万粒，即得0.15g/粒，每粒含防治动脉硬化的植物提取物组合物干粉100mg。

（9）颗粒剂的制备

称取按上述（2）法制备三七总皂苷提取物2 kg、（5）法制备的黄连总生物碱提取物0.5 kg，按等量倍增法混合均匀得防治动脉硬化的植物提取物组合物 2.5 kg。

取防治动脉硬化的植物提取物组合物 2 kg，加白糖粉37.5 kg，25%糊精浆2 kg，混匀，加80体积%酒精适量，制成颗粒，干燥、上机包装成2万小包，即得2.0g/包（每包含防治动脉硬化的植物提取物组合物干粉100mg）。

（10）丸剂的制备

称取按上述（3）法制备三七总皂苷提取物1 kg、（4）法制备的黄连总生物碱提取物1 kg，按等量倍增法混合均匀得防治动脉硬化的植物提取物组合物 2kg。

加淀粉2 kg，混匀，加蜂蜜2 kg泛丸成水泛丸，干燥得5kg干燥丸，包装成2万小包，即得0.25g/包（每包含防治动脉硬化的植物提取物组合物 100mg）。口服，一次1小袋，一日3次。

本发明优选防治动脉硬化的植物提取物组合物配方：重量份数为三七总皂苷提取物9~7份，黄连总生物碱提取物1~3份。上述实施例只是药物组分配比有所不同，可按常规制剂方法制成各种剂型，且均具有本发明所述效果。

实施例2防治动脉硬化的植物提取物组合物对实验性大鼠动脉硬化的作用

实验动物：SD大鼠，SPF级，雄性，体重200 g±20 kg。

方法: 将大鼠适应性饲养一周后，随机分为正常组、模型组、防治动脉硬化的植物提取物组合物低、中、高剂量组（以下简称低剂量组、中剂量组、高剂量组），三七总皂苷提取物（简称PSE）组，黄连总生物碱提取物（简称HAE）组和FTZ（复方贞术调脂方）组。其中正常对照组10只，喂基础饲料，造模组80只，模型组及各给药组采用一次性腹腔注射维生素D3 60万单位/kg，同时每天灌服高脂饲料饲养及10 mL/kg脂肪乳（脂肪乳自配：每500 mL脂肪乳中含胆固醇25 g，胆酸钠5 g，丙硫氧嘧啶2.5 g，猪油75g）的方法制备大鼠动脉硬化模型。低剂量组、中剂量组和高剂量组分别每天灌服防治动脉硬化的植物提取物组合物10 mg /( kg·d)、25 mg /( kg·d)和50 mg /( kg·d)；PSE组灌服三七总皂苷提取物50 mg / ( kg·d)、HAE组灌服黄连总生物碱提取物50 mg / ( kg·d)、辛伐他汀组服用辛伐他汀20 mg/( kg·d)， FTZ组灌服FTZ混悬液500 mg /( kg·d)，正常组和模型组每天灌服等量蒸馏水。每天1次，连续8周天，于末次给药60分钟后，眼静脉丛取血测定血脂、TNFα、IL-1、IL-6、IL-10及NF-kB，并进行腹主动脉血液流变学指标测定。处死大鼠，取腹主动脉、心脏、肝脏等浸泡于10% 的福尔马林中，常规石蜡包埋、切片、HE 染色观察动脉、心脏、肝脏病变情况，并计算中膜厚度与血管内腔半径比值，免疫组化分析采用SABC法观察动脉中膜NF-κB的阳性表达，并观察动脉的病变情况。实验结果见表4、表5。

表4 防治动脉硬化的植物提取物组合物对饮食性大鼠高脂血症血脂谱的作用

（n=10，均数x ±标准差s，单位：mmol/L）

组别	剂量	TC	TG	LDL-C	HDL-C
						正常对照组	/	1.26±0.21**	0.98±0.16**	0.67±0.25**	1.31±0.43**
高血脂模型组	/	2.86±0.27	1.84±0.28	1.26±0.38	1.51±0.42
						辛伐他汀	20 mg/kg	1.72±0.32*	1.47±0.23	0.86±0.26*	2.01±0.50**
FTZ	500 mg/kg	1.64±0.25*	1.23±0.16*	0.78±0.18*	2.15±0.46**
						低剂量组	10 mg/kg	1.66±0.22**	1.29±0.21*	0.81±0.21*	2.13±0.51**
中剂量组	25 mg/kg	1.62±0.31**	1.20±0.19**	0.76±0.18**	2.24±0.64**
						高剂量组	50 mg/kg	1.57±0.26**	1.11±0.23**	0.73±0.20**	2.48±0.61**
PSE	50 mg/kg	1.83±0.35**	1.40±0.29**	0.86±0.21**	2.11±0.56**
						HAE	50 mg/kg	1.79±0.33**	1.36±0.25**	0.83±0.20**	2.19±0.54**

注：与高血脂模型组比，* P ＜0.05，** P ＜0.01。

表4表明，FTZ及防治动脉硬化的植物提取物组合物对动脉硬化模型大鼠的脂代谢异常有显著的调节作用，可明显降低模型大鼠胆固醇和低密度脂蛋白的水平，提高高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值，而且能抑制模型大鼠动脉壁中膜的增厚。

表5 防治动脉硬化的植物提取物组合物对实验性大鼠血TNFα、IL-1、IL-6、IL-10及NF-kB的作用（n=10 均数±标准差，单位：рmol/L）

组别

剂量mg/kg

TNFα

IL1

IL6

NF-KB

IL10

正常对照组

/

1.08±0.11**

1.38±0.21**

1.21±0.25**

1.12±0.15**

1.69±0.28**

模型组

/

2.36±0.27

2.28±0.28

2.76±0.28

2.51±0.38

1.01±0.38

FTZ

500

1.81±0.25*

1.89±0.25*

1.99±0.35*

1.28±0.16*

1.52±0.09*

PSE

50

1.92±0.31*

1.86±0.32*

1.87±0.35*

1.73±0.39*

1.36±0.23**

HAE

50

1.85±0.26*

1.90±0.22**

1.95±0.29**

1.70±0.33

1.38±0.24*

低剂量组

10

1.88±0.25**

1.72±0.24**

1.86±0.30**

1.69±0.28*

1.42±0.26**

中剂量组

25

1.76±0.24**

1.69±0.21**

1.75±0.28**

1.59±0.26*

1.53±0.24**

高剂量组

50

1.48±0.32**

1.61±0.33*

1.66±0.34*

1.43±0.25*

1.61±0.25**

注：与模型组比，* P ＜0.05，** P ＜0.01。

模型组大鼠TNFα、IL-1、IL-6及NF-kB的浓度明显提高、IL-10浓度明显降低，FTZ、PSE、HAE和防治动脉硬化的植物提取物组合物高、中、低剂量可明显降低炎症因子TNFα、IL-1、IL-6及NF-kB的浓度，提高抗炎因子IL-10的浓度，抑制动脉NF-KB过量表达。

对大鼠血液流变学指标的影响：FTZ和防治动脉硬化的植物提取物组合物能降低全血和血浆粘度，抑制血小板聚集，实验结果见表6，表中A表示防治动脉硬化的植物提取物组合物。

表6  防治动脉硬化的植物提取物组合物对实验性高血脂大鼠血液流变学的影响（n＝10）

药物（mg/kg）	A 25	A 50	FTZ 500	模型组	对照组
						全血粘度，高切（200/s）	8.31±0.63★★	7.55±0.31★★	7.92±0.42★★	9.06±0.48	7.01±0.45
全血粘度，低切（3/s）	17.65±2.32★★	16.52±2.03★★	17.34±2.51★★	19.18±2.34	15.18±2.64
						血浆粘度（mpa/s）	2.62±0.35★★	2.56±0.47★★	2.61±0.42★★	2.93±0.39	2.23±0.39
纤维蛋白原（g/L）	4.86±0.33★★	4.77±0.48★★	4.81±0.90★★	5.29±0.38	4.47±0.36
						正常血小板凝集%	48.8±7.9★★	43. 5±4.5★★	45.6±4.1★★	57.0±4.5	37.0±4.5
ADP诱导血小板凝集%	121.1±16.9★★	113.2±15.3★★	62.4±5.6★★	145.1±16.6★★	100.±6.6★★

注：与对照组比较，^★★P<0.01。

表7 FTZ及防治动脉硬化的植物提取物组合物对动脉硬化模型大鼠腹主动脉中膜厚度与内腔半径比值的影响（n=6）

组别	剂量	中膜厚/内腔半径
			正常对照组	/	0. 17 ± 0.01
模型组	/	0. 35 ± 0.04
			FTZ	500mg /kg	0. 23 ± 0.03*
PSE	50mg/kg	0. 25 ± 0.03*
			HAE	50mg/kg	0. 23 ± 0.02**
低剂量组	10mg/kg	0. 24± 0.03*
			中剂量组	25mg/kg	0. 21 ± 0.03**
高剂量组	50mg/kg	0. 19 ± 0.02**

注：与高脂模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01。

病理形态学观察结果表明，正常组大鼠血管结构清晰，内弹力膜完整，中膜平滑肌细胞排列规整，与内弹力膜平行。模型组大鼠主动脉出现动脉粥样硬化斑块，血管内弹力膜损伤断裂，中膜明显不规则增厚，中膜厚度与血管内腔半径之比值明显增大，平滑肌细胞排列紊乱，有向内膜迁移倾向，平滑肌纤维显著紊乱；心肌组织脂质沉积严重，病变区心肌细胞胞质内出现大量红染颗粒；肝脏切片油红O染色呈强阳性。各治疗组大鼠血管内弹力膜断裂较模型组有所减少，部分拉伸变平，中膜平滑肌纤维排列稍紊乱，复方提取物及其三黄提取物给合物低、中、高剂量都有不同程度降低中膜厚度/血管内腔半径比值的作用，低剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.01)，结果见表7。各治疗组大鼠心肌组织和肝组织脂质沉积也显著减轻。

实施例3 防治动脉硬化的植物提取物组合物对氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增生的影响

方法：参考王道生贴块法（王道生，动脉平滑肌细胞培养方法，见徐叔云主编的药理实验方法学，北京:人民卫生出版社,2001:573），选用6周龄雄性SD大鼠断头处死，取胸主动脉中膜，以贴块法培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO₂孵箱中培养，进行大鼠血管平滑肌细胞的原代培养。用第3～5代传代血管平滑肌细胞，进行氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导血管平滑肌细胞增生实验，并观察不同浓度中药复方提取物FTZ及防治动脉硬化的植物提取物组合物对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导血管平滑肌细胞增生的影响。

细胞增殖评价参考Selzman CH等建立的方法（Selzman CH , et a. Class Ⅱcytokine receptor ligands inhibit human vascular smooth muscle proliferation. Surgery ,1998 ,124: 318），SD大鼠血管平滑肌细胞用0.25%胰酶消化，然后在96孔板中以5000个细胞/孔的密度铺板。8 h后，换成无血清、含谷氨酸的DMEM培养基，无血清条件维持48 h以获得同步的细胞生长停止，然后换成含5%FBS的DMEM培养基及相应的实验药剂，Ox-LDL终浓度100μg/ml，与血管平滑肌细胞共同孵育24 h，每组实验重复6次，每一组每次为6孔，对照组为含5%FBS的DMEM培养基，24 h后细胞的增殖率通过应用CellTiter 96 Assay MTS/PES试剂盒确定。

具体方法是MTS/PES 20 μl加入相应的孔中，96孔板在5%CO₂、37℃孵箱中孵育90 min，然后在BOTLD型Multiplate reader以490 nm测量吸光度，每孔重复3次，细胞的增殖率用吸光度来表示。结果如下表，表中防治动脉硬化的植物提取物组合物用A表示。

表8 防治动脉硬化的植物提取物组合物对Ox-LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响(n=6)

注：与Ox-LDL组相比，*P<0.05；**P<0.01。

结果表明，100μg/ml的Ox-LDL能明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05，见表8)。防治动脉硬化的植物提取物组合物单独作用对血管平滑肌细胞细胞增殖率无影响。与对照组相比，防治动脉硬化的植物提取物组合物对Ox-LDL诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖有明显抑制。

实验研究表明，防治动脉硬化的植物提取物组合物可以更有效降低血清总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇含量，降低胆固醇在组织里（如肝脏和心脏）的含量，降低血清甘油三酸脂水平，同时也抑制血小板凝集结。另外，本发明产品还能抑制平滑肌的增殖，防止内膜变厚及内皮炎症损害，防止血栓形成，抑制并扭转动脉硬化的损害，进而提高人体的总体健康水平。

Claims (10)

1.一种防治动脉硬化的植物提取物组合物，包括三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物。

2.根据权利要求1所述的防治动脉硬化的植物提取物组合物，其特征在于所述三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物的重量比为1~9:1~3。

3.权利要求1或2所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，步骤如下：

（1）三七总皂苷提取物的制备：将原料药物三七经过C_1-3醇提后，合并总提取物，浓缩总提取物后得到浓缩液，除去浓缩液中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物；

（2）黄连总生物碱提取物的制备：将原料药物黄连加C_1-3醇回流提取，回收C_1-3醇，浓缩得浓缩液，再以酸溶解碱沉淀重结晶析出黄连总生物碱提取物；

（3）将三七总皂苷提取物与黄连总生物碱提取物混合，得到防治动脉硬化的植物提取物组合物。

4.根据权利要求3所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（1）C_1-3醇提是用30～95体积%的C_1-3醇提取1～5次，每次提取的C_1-3醇体积为药材质量的1～15倍，每次提取时间为5分钟以上；所述C_1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇。

5.根据权利要求3所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（1）中除去浓缩液中非皂苷类成分采用大孔树脂，大孔树脂与浓缩液的用量比是1kg大孔树脂加浓缩液1~5L。

6.根据权利要求4所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于大孔树脂柱吸附后洗脱用50~95体积%乙醇，用量为每1kg大孔树脂用5~20 L乙醇，以1~20 ml/min流速洗脱，洗脱至无色；所述大孔树脂为聚酰胺型树脂或聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂。

7.根据权利要求3所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（2）C_1-3醇回流提取是用50~70体积%C_1-3醇提取1～5次，每次提取的乙醇体积为药材质量的1～15倍，每次提取时间为5分钟以上。

8.根据权利要求3所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（2）所述酸溶解是用醋酸溶解，用1~30质量%HCl调pH为0.1~5。

9.根据权利要求3所述防治动脉硬化的植物提取物组合物的制备方法，其特征在于步骤（2）所述碱沉淀是用1~30%质量NaOH溶液，pH为9~13，重结晶体积为黄连重量的1~5倍。

10.权利要求1或2所述防治动脉硬化的植物提取物组合物在制备预防或治疗动脉硬化相关疾病药物或保健品中的应用。

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