CN102078418B - 一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物及其制备方法 - Google Patents

一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，该复方中药是由丹参、女贞子、黄连、大蓟、杜仲、白术、三七和佛手八味中药组成，所述制备方法包括如下步骤：将原料药物经过C1-3醇提和/或水提后，合并总提取物，再以不同极性的有机溶剂萃取总提取物得到不同极性的有效部位，将各有效部位混合，得到用于预防或治疗脂代谢紊乱的复方中药。通过本发明制备方法，可以去除中药中大量无效的化学成分，减少了无效成分对产品加工和制剂质量的影响，使该复方中药有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于工业化生产和提高并稳定疗效。

Description

一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及复方中药领域，具体涉及一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物及其制备方法。
背景技术
中国专利200410051250.4公开了一种治疗高脂血症的药物，命名为“复方贞术调脂方”（FTZ），由女贞子、白术、杜仲、三七、大蓟、丹参、黄连、佛手八味中药组成。是经临床十多年应用经验方，用于治疗高脂血症取得理想疗效，实验研究也表明，该方对实验性的大鼠饮食性高脂血症具有很好的降脂作用，该处方专利已经获得授权。
    虽然该复方有良好调节血脂的作用，但是由于是中药复方，有八味中药组成，其化学成分复杂，有效成分并不清楚，实际应用中其产品质量不易获得有效控制，最终将影响产品临床疗效的稳定，且用于制备药物制剂时无效组分太多，服用量大，剂型不能多样化，不利于大规模生产上市，广泛应用受到限制。
发明内容
本发明的目的在于根据现有的“复方贞术调脂方”药物中存在的化学成分复杂、有效成分不清楚、实际应用中其产品质量不易获得有效控制、无效组分太多等缺陷，提供一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物。
本发明的另一目的是提供上述复方中药提取物的制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，有效成分为腊醇、β-谷甾醇、正二十六烷酸、白术内酯Ⅲ、齐墩果酸、小檗碱、药根碱、黄连碱、丹参素、丹酚酸B、 环二十四烷、9,12-十八碳二烯酸、5,7-二甲氧基香豆素、特女贞苷、人参皂苷Rb1 和Rg1、三七皂苷R1、杜仲醇。它们的重量比例是1～5:1～6:1～4:1～4: 1～8: 1～8:1～5: 1～5: 1～6:1～5:1～4:1～3:1～5:1～4:1～8:1～8:1～3:1～4。
上述复方中药提取物的制备方法，该复方中药是由丹参、女贞子、黄连、大蓟、杜仲、白术、三七和佛手八味中药组成，制备方法步骤如下：
将原料药物经过C1-3醇（甲醇、乙醇或丙醇）提和/或水提后，合并总提取物，再以不同极性的有机溶剂萃取总提取物得到不同极性的有效部位，将各有效部位混合，得到防治脂代谢紊乱的复方中药提取物。
具体制备步骤如下：
（1）将原料药三七和女贞子进行C1-3醇提，得到C1-3醇提物，将大蓟、白术、丹参、杜仲、佛手和黄连进行水提、浓缩，得到水提物，合并C1-3醇提物和水提物得到总提取物；
（2）以石油醚萃取步骤（1）得到的总提取物，得到有效提取部位A；
（3）然后以乙酸乙酯萃取步骤（2）石油醚萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位B；
（4）然后再以正丁醇萃取步骤（3）乙酸乙酯萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位C，合并各有效部位，得到防治脂代谢紊乱的复方中药提取物。
所述C1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇。
作为一种优选方案，所述C1-3醇提优选用30～95体积%的乙醇提取1～5次，优选2～3次，每次提取的乙醇体积为药材质量的1～15倍，优选5～10倍，每次提取时间为5 min～10 h，优选5 min～5 h，更优选1～3 h；所述水提优选以水煎煮1～5次，优选2～3次，每次用水的体积为药材质量的1～15倍，优选4～12倍，每次煎煮时间为5 min～10 h ，优选1～3 h；所述浓缩后的浓缩液体积优选药材质量的0.2～5倍，优选1～2倍。
上述制备方法中，有效提取部位A的制备方法如下：加入0.5～15倍，优选5～15倍于被萃取物体积的石油醚，萃取1～5次，优选3～4次，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位A；
有效提取部位B的制备方法如下：（3）然后以乙酸乙酯萃取步骤（2）石油醚萃取后剩下的提取物，加入0.5～15倍，优选5～15倍于被萃取物体积的乙酸乙酯，萃取1～5次，优选3～4次，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位B；
有效提取部位C的制备方法如下：（4）然后再以正丁醇萃取步骤（3）乙酸乙酯萃取后剩下的提取物，加入0.5～15倍，优选5～15倍于被萃取物体积的正丁醇，萃取1～5次，优选3～4次，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位C。
本发明制备得到的防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，有效提取部位A、B和C的重量比为0～1:0～2:0～3。
本发明中，还可以将各个有效提取部位或其组合物按照药剂学上可以接受的载体和一般制剂方法，加工成为口服制剂或注射制剂等形式。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
通过本发明制备方法，可以去除中药中大量无效的化学成分，得到不同的有效提取部位，既保留了中药特色，又使传统中药中的有效成分含量大大提高，减少了无效成分对产品加工和制剂质量的影响，使该复方中药有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于工业化生产和提高并稳定疗效。实验研究表明，本发明方法得到的复方中药提取物对实验性的大鼠高血脂血症具有很好的调血脂作用。
附图说明
图1：实施例2中复方中药提取物（FTZCE）经UHPLC-MS分析得到的指纹图谱；
图2：实施例2中复方中药提取物（FTZCE）促进L-O2肝细胞胆固醇7α羟化酶基因mRNA表达的试验结果图，其中1为marker，2为空白对照，3为FTZ组，4为FTZCE低剂量组，5为FTZCE中剂量组，6为FTZCE高剂量组；
图3：实施例2中复方中药提取物（FTZCE）物对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用试验结果图，其中c为正常L-O2肝细胞HMG-CoA还原酶活性，F1.0、 F5.0、F25.0为1 μg/ml、5 μg/ml、25 μg/ml浓度FTZCE处理后肝细胞HMG-CoA还原酶活性，S10为辛伐他汀10 μg/ml处理后肝细胞HMG-CoA还原酶活性；
图4：实施例2复方中药提取物（FTZCE）促进L-O2肝细胞LDL-R基因 mRNA表达的试验结果，c为正常L-O2肝细胞LDL-R基因基础表达，F1.0、F5.0、F25.0为1、5、25 μg/ml浓度FTZCE处理后肝细胞LDL-R基因表达；
图5：实施例2复方中药提取物（FTZCE）促进L-O2肝细胞HNF4α a基因 mRNA表达的影响图，c为正常L-O2肝细胞HNF4α基因的基础表达，F1.0、F5.0、F25.0为1、5、25 g/ml浓度FTZCE处理后肝细胞HNF4α基因表达；
图6：:实施例2中复方中药提取物（FTZCE）对L-O2肝细胞FXRα基因表达的影响图，c为正常L-O2肝细胞FXRα基因的基础表达，F1.0、F5.0、F25.0为1、5、25 g/ml浓度FTZCE处理后肝细胞FXRα基因表达。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
实施例1 中药复方的总提取物的制备
将女贞子、白术、杜仲、三七、大蓟、丹参、黄连、佛手（重量比为1:1:1:2:1:2:1:1）中的三七、女贞子两药粉碎成粗粉，以药材量的10倍、8倍和6倍的60体积%乙醇分别回流提取三次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇并使醇提部分浓度为1 ml相当于1 g生药；方中其余药材都以八倍、六倍和四倍量的水，分别煎煮提取三次，每次2 h，合并三次水提液，真空减压浓缩至1 g药材/ml提取液，水提体部分和前面醇提部分合并得到中药复方总提取物（FTZ）。
实施例2 复方总提取物的提取部位的制备
以复方总提取物15倍体积的石油醚萃取一次，分离石油醚层；再以10倍体积提取两次，分离得到石油醚层，合并三次的石油醚萃取液，回收石油醚，再于0.08 MPa，60℃真空干燥，得到提取部位A；
萃取后的提取物再分别加15、10、8倍量的乙酸乙酯萃取，得到的乙酸乙酯萃取部位，回收溶剂，于0.07 MPa，60℃下真空干燥，得到复方提取物部位B；
萃取后的提取物再分别以总提物15、10、8倍量的正丁醇分别萃取，得到萃取液合并，回收正丁醇，将萃取物于0.07 MPa，75℃下真空干燥，得到复方提取部位C。
根据中药复方总投料量和得到各提取部位的量，分别计算各提取物的得率。
有效提取部位A的得率在0.10%～0.30%；
有效提取部位B的得率在0.40%～1.00%；
有效提取部位C的得率在 2.00%～4.00%；    
按有效提取部位A、B和C和重量比为1: 2:5混合得复方中药提取物（FTZCE），经UHPLC-MS分析得到的指纹图谱如图1所示，该提取物经测定含有腊醇、β-谷甾醇、正二十六烷酸、白术内酯Ⅲ、齐墩果酸、小檗碱、药根碱、黄连碱、丹参素、丹酚酸B、 环二十四烷、9,12-十八碳二烯酸、5,7-二甲氧基香豆素、特女贞苷、人参皂苷Rb1 和Rg1、三七皂苷R1、杜仲醇等有效成分。
实施例3 复方中药提取物胶囊的制备方法
提取物按照以下重量份组合：
有效提取部位A    1份
有效提取部位B    2份
有效提取部位C   5份。
将上述比例的各提取物，提取部位A与等量的淀粉混合均匀，再与提取部位B混合，最后与提取部位C混合，三者混合均匀后干法制粒，减压干燥后，整粒，填充2号胶囊，抛光，质检包装。
用HPLC方法测定制得的胶囊，其含各有效成分含量结果见表1：
表1  FTZCE胶囊HPLC含量测定结果
Figure 612827DEST_PATH_IMAGE001
实施例4 复方中药提取物对饮食性高脂血症大鼠血脂代谢的影响
1.实验材料
1.1 药品与试剂
复方中药提取物（FTZCE）：同实施例2
中药复方总提取物（FTZ）：为复方贞术调脂方提取物，同实施例1
总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒。
1.2 动物
清洁级SD大鼠、体质量(180-225 g)，由南方医科大学省实验动物中心提供。纯种新西兰雌兔、体质量(1.80-2.20 kg)，由广东省实验动物中心提供。
2．实验方法
2.1对饮食性高血脂模型大鼠的血脂的影响
观察不同剂量的FTZCE对高脂血症整体动物大鼠血清TC、TG、LDL-C，HDL-C的影响。
按文献（郭姣,贝伟剑等复方贞术调脂方对饮食性高脂血症大鼠肝脂酶的作用  中药材 2009;31(4):582-585）报道方法复制并确认高血脂大鼠动物模型成功。
将动物随机分组：将96只大鼠编号称重后随机分为8组，每组12只，设定 ①正常对照组，②高脂模型组，③FTZ组，④洛伐他丁组，⑤非诺贝特组，⑥⑦⑧依次为FTZCE高、中、低剂量各实验组。除正常对照组自由摄取普通饲料外，其余组分别在此基础上每天上午按10 ml／kg量灌胃给予高脂乳剂，4 h后给予相应的药物，其中正常组、模型组给予等量生理盐水，连续给药4周，禁食12 h(不禁水)，第2天清晨末次给药1 h后先从眼眶静脉丛取血，离心、分离血清，分别测定TC、TG、HDL-C、LDL-C。
2.2 对高脂血症新西兰雌兔整体动物模型的血脂代谢的影响
纯种新西兰雌兔去势术+0.5％胆固醇饲料+静注牛血清白蛋白造模。实验动物纯种新西兰长毛兔49只，雌性，体重1.8-2.2 kg，月龄3～4月，由广东省实验动物中心提供。给家兔灌服高脂饲料（高脂饲料的配置比例为：胆固醇0.5％，猪油3％，基础饲料96.5％）。实验兔经过1周适应性喂养后随机分成七个组：① 假手术对照组，②去势高脂模型组和给药各组，③复方贞术调脂方FTZ组，④洛伐他丁组，⑤非诺贝特组，⑥FTZCE大剂量组，⑦FTZCE小剂量组。每组7只。假手术组行假性手术(在卵巢周围切取一小块脂肪组织)，不切除卵巢，术后予普通市售饲料(120～150g/d)；其余6组：模型组和各给药组家兔实施经腹切除双侧卵巢摘除术，上述动物术后予喂饲高脂饲料(120～150g/d)，并给牛血清白蛋白(250 mg/kg)静脉注射(1次/4周)。复方贞术调脂方FTZ组(相当于临床成人日剂量的5倍) 和FTZCE组等给药若干组每天灌胃给药；对照、模型组予同体积的生理盐水和灌胃。实验第12周测体重，血脂测定于12周经耳动脉采血2 mL，每次采血前禁食16 h。全血标本室温静置3 h，2200 r/min离心15 min，上层血清分装后-20℃保存备用。血清总胆固醇、甘油三酯、HDL-C和LDL-C的检测采用全自动生物化学分析仪，步骤参照试剂盒说明书进行。血浆OX-LDL测定采用ELISA法，按试剂盒说明书操作。
2.3 统计学方法
数据用x±s表示，用SSP10.0软件进行方差分析和均数间多重比较。
3 结果
3.1 对饮食高血脂模型大鼠的血脂的影响
研究结果表明，FTZCE可明显降低饮食高血脂模型小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），明显升高高密度脂蛋白（HDL-C），有调节血酯的作用，见表2：
表2  FTZCE对饮食高血脂模型大鼠的血脂的影响
Figure 264389DEST_PATH_IMAGE002
注：与对照组比较**P<0.01；与高脂对照组的比较，▲P<0.05，▲▲p<0.01。
3.2 对饮食高血脂模型新西兰雌兔的血脂的影响
结果表明，FTZCE可明显降低饮食高血脂模型去势新西兰雌兔血清中总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇，明显升高高密度脂蛋白，有调节血酯的作用，见表3：
表3  FTZCE对饮食高血脂模型新西兰雌兔的血脂的影响
Figure 998121DEST_PATH_IMAGE003
注：与对照组比较*P<0.05；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲p<0.01。
实施例5  FTZCE对L-O2人肝细胞血脂代谢关键酶基因表达和活性的影响
1.1方法
1.1.1对L-O2肝细胞胆固醇7-α-羟化酶（CYP7A1）和肝脂酶（HL）活性的影响
按常规培养L-O2人正常肝细胞，待细胞融合后分别加入各种不同浓度的FTZCE和FTZ，见表4，继续培养一定时间后，收集细胞制成细胞匀浆，用HL检测试剂盒，采用比色法检测HL活性，研究上述不同浓度FTZCE对HL酶活性的影响，比较不同浓度FTZCE作用下的肝细胞中HL酶活性。
FTZCE与L-O2肝细胞共育培养一定时间后，收集肝细胞，按( Hylemon et al., 1989，Simultaneous measurement of cholesterol 7 alpha-hydroxylase activity by reverse-phase high-performance liquid chromatography using both endogenous and exogenous [4-14C] cholesterol as substrate. Analysic Biochemistry 182(2): 212-216). 方法制备L-O2肝细胞微粒体，用CYP7A1检测试剂盒，采用HPLC法检测CYP7A1活性( Hylemon et al., 1989)，研究FTZCE对CYP7A1酶活性的影响，比较不同浓度FTZCE作用下的肝细胞中CYP7A1活性变化。
另用Trizol试剂提取L-O2肝细胞中总RNA，RT-PCR法测定肝细胞中CYP7A1、HL酶和低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因表达情况，观察FTZCE对肝细胞中CYP7A1、HL酶和LDL-R基因表达的影响。
1.1.2 对HMG-CoA还原酶活性抑制实验
用上述FTZCE进行体外HMG-CoA还原酶酶活性抑制实验，测定并计算出它们对HMG-CoA还原酶抑制的IC50，并与普伐他汀对比。
1.1.3 对L-O2肝细胞肝核因子4（HNF4α）和法呢醇受体（FXR）基因表达的影响
按常规培养L-O2人正常肝细胞，待细胞融合后分别加入各种不同浓度的FTZCE和FTZ，继续培养24h后，收集细胞，用Trigol试剂提取L-O2肝细胞中总RNA，RT-PCR法测定L-O2肝细胞中CYP7A1及HL酶基因表达情况，观察FTZCE对L-O2肝细胞中HNF4α和FXRα基因表达的影响
1.2统计方法:数据以均值±标准差表示，用方差分析方法进行显著性检验。
1.3 实验结果 
1.3.1 对L-O2肝细胞肝脂酶的影响
不同剂量FTZCE和FTZ处理后L-O2肝细胞肝脂酶（HL）活性显著增加(P<0.01)，并有明显剂量依赖性，结果见表4。说明本发明复方中药复方提取物组合物（FTZCE）对L-O2肝细胞肝脂酶活性具有显著提高作用，有利于加强脂蛋白的清降而降低血甘油三酯和胆固醇。
1.3.2 对L-O2肝细胞CYP7A1的影响
不同剂量FTZCE和FTZ处理后CYP7A1活性显著增加(P<0.01)，且有明显剂量依赖性的增强，结果见表4。说明本发明复方中药复方提取物组合物（FTZCE）对L-O2肝细胞CYP7A1活性具有显著提高作用，有利于促进胆固醇转化成胆汁酸排泄，从而降低血胆固醇。
表4 不同药物对L-O2细胞CYP7A1和HL活性的影响
注：（1）同正常对照组相比，*P<0.05；**P<0.01。
1.3.3 对L-O2肝细胞CYP7A1基因表达的影响
正常组L-O2肝细胞肝脂酶基因表达正常，不同剂量FTZCE处理后L-O2肝细胞CYP7A1基因表达显著增加(P<0.01)，说明本发明植物提取物组合物（FTZCE）对CYP7A1基因表达有明显促进作用(P<0.01)，从而提高肝组织细胞CYP7A1活性。试验结果见图2。图2显示FTZCE对L-O2肝细胞CYP7A1 基因表达有明显促进作用，从而提高肝组织细胞CYP7A1活性。图2中1为marker，2为空白对照，3为FTZ组，4为FTZCE低剂量组，5为FTZCE中剂量组，6为FTZCE高剂量组。
1.3.4 对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用
用L-O2肝细胞微粒体制成HMG-CoA还原酶溶液、HMG-CoA还原酶的活性测定则采用文献方法进行(Kleinsek et al., 1977，Purification of 3-hydroxy-3 -methylglutaryl-coenzyme A reductase from rat liver. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 74, 1431-1435.)分别测定各药物指定浓度下酶活性，求出FTZCE等各药物对HMG-CoA还原酶酶活性的IC50 (μg/ml)。
结果见表5和图3，结果表明FTZCE能明显降低L-O2肝细胞HMG-CoA还原酶酶活性，且呈剂量依赖性关系。FTZCE可抑制HMG-CoA还原酶的活性，不仅阻碍胆固醇合成关键原料HMG-CoA的合成，而且抑制胆固醇的生物合成，产生降胆固醇作用。
表5  FTZCE对L-O2肝细胞-HMG-CoA还原酶活性的IC50 (μg/ml)
Figure 879806DEST_PATH_IMAGE005
图3显示正常L-O2肝细胞有HMG-CoA还原酶活性（c），1，5，25μg/ml浓度FTZCE和辛伐他汀（S10，μg/ml）处理后肝细胞HMG-CoA还原酶活性有显著浓度依赖性降低(P<0.01)。表明FTZCE能降低L-O2肝细胞肝HMG-COA R酶活性，进而可以抑制肝脏TC合成，肝TC含量显著降低。
1.3.5 对肝细胞LDL-R基因表达的影响
正常L-O2肝细胞LDL-R基因有基础表达，1，5，25 μg/ml浓度FTZCE处理后肝细胞LDL-R基因表达显著增加(图4，P<0.01)，有利于胆固醇逆向转运，降低血胆固醇。
1.3.6 对L-O2肝细胞HNF4α 基因表达的影响
正常L-O2肝细胞HNF4α基因有一定的基础表达，1，5，25μg/ml浓度FTZCE处理后肝细胞HNF4α基因表达显著增加((图5)P<0.01)，说明本发明复方提取物组合物（FTZCE）对上调CYP7A1的HNF4α调控因子基因表达有明显促进作用(P<0.01)，从而提高肝组织细胞CYP7A1基因表达。
1.3.7 对L-O2肝细胞FXRα基因表达的影响
正常L-O2肝细胞FXRα基因有一定的基础表达，1，5，25μg/ml浓度FTZCE处理后肝细胞FXRα基因表达显剂量依赖性减少(P<0.01，图6)，说明本发明复方提取物组合物（FTZCE）对FXRα基因表达有抑制作用。FXRα是肝细胞中CYP7A1基因表达的抑制因子，FTZCE通过抑制FXRα表达，从而提高肝组织细胞CYP7A1基因表达。
总之，FTZ和FTZCE对饮食高血脂模型大鼠/家兔都有明显降血脂作用，且呈现一定的量效关系。防治实验性血脂代谢紊乱的作用，其作用机理可能包括：
（1） FTZCE能大大增强高脂血症大鼠肝脏细胞CYP7A1 mRNA表达、增加CYP7A1酶活性，有利于促进胆固醇转化成胆汁酸，而排泄，从而降低血胆固醇。
（2）研究结果已证明，FTZCE能大大增强高脂血症大鼠肝脏细胞肝脂酶（HL） mRNA表达、增加HL酶活性，有利于加强脂蛋白的清降而降低血甘油三酯和胆固醇。 
（3）研究结果已证明， FTZCE能抑制高脂血症大鼠肝脏细胞HMG-CoA还原酶 mRNA表达及其酶活性，抑制胆固醇合成关键原料HMG-CoA的合成，从而抑制胆固醇的生物合成，产生降胆固醇作用。
（4）研究结果已证明， FTZCE对上调CYP7A1的HNF4α调控因子基因表达有明显促进作用(P<0.01)，并能抑制下调CYP7A1基因表达的负性调控因子FXRα基因表达，从而提高肝组织细胞CYP7A1基因表达和酶活性，促进胆固醇转化成胆汁酸而排泄，从而降低血胆固醇。
（5）研究结果已证明， FTZCE能增加肝细胞LDL-R基因表达，有利于胆固醇逆向转运，降低血胆固醇。

Claims (6)

1.一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，有效成分为腊醇、β-谷甾醇、正二十六烷酸、白术内酯Ⅲ、齐墩果酸、小檗碱、药根碱、黄连碱、丹参素、丹酚酸B、 环二十四烷、9,12-十八碳二烯酸、5,7-二甲氧基香豆素、特女贞苷、人参皂苷Rb1 和Rg1、三七皂苷R1、杜仲醇；各成分的重量比例1～5:1～6:1～4:1～4: 1～8: 1～8:1～5: 1～5: 1～6:1～5:1～4:1～3:1～5:1～4:1～8:1～8:1～3:1～4；
所述复方中药提取物的制备方法步骤如下：
（1）将原料药三七和女贞子进行C1-3醇提，得到C1-3醇提物，将大蓟、白术、丹参、杜仲、佛手和黄连进行水提、浓缩，得到水提物，合并C1-3醇提物和水提物得到总提取物，所述C1-3醇为甲醇、乙醇或丙醇；
（2）以石油醚萃取步骤（1）得到的总提取物1～5次，得到有效提取部位A；
（3）以乙酸乙酯萃取步骤（2）石油醚萃取后剩下的提取物1～5次，得到有效提取部位B；
（4）再以正丁醇萃取步骤（3）乙酸乙酯萃取后剩下的提取物1～5次，得到有效提取部位C，合并各有效部位，得到防治脂代谢紊乱的复方中药提取物。
2.根据权利要求1所述防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，其特征在于所述C1-3醇提是指用30～95体积%的C1-3醇提取1～5次，每次提取的C1-3醇体积为药材质量的1～15倍，每次提取时间为5 min～5 h。
3.根据权利要求1所述防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，其特征在于所述水提是指以水煎煮1～5次，每次用水的体积为药材质量的1～15倍，每次煎煮时间为5 min～5 h；所述浓缩后的浓缩液体积为药材质量的0.2～5倍。
4.根据权利要求1所述防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，其特征在于所述有效提取部位A的制备方法是加入0.5～15倍于被萃取物体积的石油醚萃取，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位A。
5.根据权利要求1所述防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，其特征在于有效提取部位B的制备方法是加入0.5～15倍于被萃取物体积的乙酸乙酯萃取，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位B。
6.根据权利要求1所述防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，其特征在于有效提取部位C的制备方法是加入0.5～15倍于被萃取物体积的正丁醇萃取，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位C。
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CN115531463B (zh) * 2022-10-31 2024-03-08 李庆华 一种治疗高脂血症的中药
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1259935C (zh) * 2004-08-30 2006-06-21 广东药学院 一种治疗高脂血症的药物
CN101444549B (zh) * 2008-09-05 2011-08-17 广东药学院 一种用于预防或治疗血脂代谢紊乱的植物提取物组合物及其应用
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