CN103417477B

CN103417477B - 一种以水为基质的多拉菌素o/w型注射液及其制备方法

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Publication number: CN103417477B
Application number: CN201210155335.1A
Authority: CN
Inventors: 周绪正; 张继瑜; 李冰; 李剑勇; 魏小娟; 牛建荣; 杨亚军; 刘希望; 李金善
Original assignee: Lanzhou Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine CAAS
Current assignee: Lanzhou Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine CAAS
Priority date: 2012-05-18
Filing date: 2012-05-18
Publication date: 2015-08-05
Anticipated expiration: 2032-05-18
Also published as: CN103417477A

Abstract

本发明公开了一种以水为基质的多拉菌素O/W（水包油）型注射液及其制备方法，该注射液由OP乳化剂、PEG400、油酸乙酯、多拉菌素、注射用水组成的O/W注射液；发明的关键点是注射液配方组成及各组分的含量确定。该注射液主要是以水为基质，含有少量的有机溶剂，减少了有机溶剂对畜禽和环境的影响，对生产者和使用者的危害小，贮藏、运输更安全;对畜禽毒副作用小；解决了由于传统剂型（油剂）在生产和使用过程中对畜禽的伤害及对环境的污染等问题。

Description

一种以水为基质的多拉菌素O/W型注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于兽药领域，涉及治疗畜禽体内线虫及体外节肢昆虫的药物，具体是指一种以水为基质的多拉菌素O/W型注射液及其制备方法。

背景技术

多拉菌素（Doramectin，简称为DOR）是一种新大环内脂类抗生素，阿维菌素（Avermectins）的第三代衍生物（伊维菌素是第二代），它与伊维菌素的驱虫机制相同，都是通过加强r—氨基丁酸（GABA）的作用来实现，GABA是一种抑制性神经递质，在大脑GABA主抑制突触后神经传导，GABA的释放量增加，是突触后细胞的正常休止位能提高，神经难以将刺激传递给肌肉，肌肉不能收缩，寄生虫麻痹而被驱除，是阿维菌素家族中最优秀的驱虫药之一，在畜牧业生产中得以广泛的应用；但是，由于其极低的水溶性、非常差的保存稳定性和较强的毒性限制了其在临床的广泛应用。目前多拉菌素在国内只有美国辉瑞公司进口的“通灭”和浙江海正药业股份有限公司生产的“海多灭”2种制剂，并且都是油剂注射液，一般都选择毒性大的“N，N-二甲基乙酰胺”作为溶剂，大大限制了该药临床使用和推广普及；而在国外1种原料药一般都有5～8种不同的制剂，依据不同的适应症和动物畜种以及用药的方便程度，满足各种不同级别的临床需求，因此，加速国内兽药制剂的研制和开发，立足国产化，对于促进我国畜牧业发展起到积极作用。

发明内容

针对上述多拉菌素为油剂注射液以及选择毒性大的“N，N-二甲基乙酰胺”作为溶剂不足，本发明的目的在于提供一种以水为基质的多拉菌素O/W型注射液，用于兽医临床抗动物体内线虫和体外节肢昆虫，以此提高了多拉菌素的治疗效果。

本发明的另一目的在于提供上述注射液的制备方法。该方法解决了多拉菌素极难溶于水、稳定性差的缺点，同时降低了传统油剂毒副作用。

本发明的目的是这样实现的：

一种以水为基质的的多拉菌素O/W型注射液，由下列质量百分比的原料组成：

OP乳化剂： 0.75～37.5%；

PEG400： 0.25～12.5%；

油酸乙酯： 0.2～10.0%；

多拉菌素： 0.1～5.0%；

注射用水： 35～ 98.7%；

制备上述注射液的步骤是：

a. 称取OP乳化剂、PEG400 、油酸乙酯、多拉菌素，置于棕色三角瓶中，恒温磁力搅拌器上，以400rpm搅拌0.2h，直至多拉菌素完全溶解，体系均一、透明、澄清为止。

b. 在搅拌条件下向上溶液中慢慢滴加注射用水，随注射用水加入量的增加，溶液体系首先变的比较粘稠，当注射用水达到20-25g时，体系忽然变稀，流动性增大，完全透明，得O/W型多拉菌素注射液；当注射用水用量达35克时，既得多拉菌素含量为5%的O/W型多拉菌素注射液；当注射用水用量达435克时，既得多拉菌素含量为1%的O/W型多拉菌素注射液；当注射用水用量达4935克时，既得多拉菌素含量为0.1%的O/W型多拉菌素注射液。

本发明采用的方法是转相法，此法在配制时有一个转相的过程，这样所形成油珠会更小，整个体系更加稳定。具体过程是先将多拉菌素用油（多拉菌素、油酸乙酯）、表面活性剂（OP乳化剂）、助表面活性剂（PEG400）组成混合溶液完全溶解之后，充分混合形成均匀透明的油相，在油相搅拌的过程中，将注射用水慢慢加入油相，当开始时由于水较少，形成的是W/O型乳液，随着水量的不断增加，体系逐渐由W/O型溶液转变成O/W型溶液；形成O/W型溶液后在含药量0.1%～5%的范围内随意加水稀释，以满足不同药剂使用不同动物畜种的临床需求。

以水为基质的的多拉菌素O/W型注射液为无色、澄清、透明、有淡淡蓝色乳光的溶液，该溶液可被注射用水无限稀释，依据临床需求可控制多拉菌素含量在0.1%～5%之间，密度0.98～1.0g/ml。

本发明的优点和产生的有益效果是：

1、本发明O/W型多拉菌素注射液由OP乳化剂、PEG400、油酸乙酯、多拉菌素组成，以水为基质多拉菌素O/W型注射液，各组分用量均在中华人民共和国药典和兽药典中规定的用量范围之内; 产品的价格低，溶液的流动性好，临床注射时更方便，注射时动物的疼痛感降低；通过本发明为兽医临床提供新型的抗寄生虫药物新制剂，起到对动物寄生虫的治疗和预防作用；解决多拉菌素药物剂型简单，给药方式粗放，不能满足临床上对畜禽主要寄生虫病防治需求的矛盾，同时解决由于缺乏载药系统而很难形成稳定、高效制剂的问题。

2、本发明O/W型多拉菌素注射液依据临床需求可用注射用水将有效药物成分多拉菌素在0.1%～5%的范围内随意稀释，其1‰制剂包括多拉菌素在内的所有辅料含量仅为1.3%，注射用水含量高达98.7%，制剂的安全性非常好，对小体型的宠物使用非常适宜；而按本发明制备的常用的多拉菌素1%制剂，其它辅料的含量为12%，注射用水含量高达87.0%，而目前所有报道成功的多拉菌素制剂基本上都选择毒性大的“N，N-二甲基乙酰胺”作为溶剂，载体系统都为油剂，辅料含量越低药品的毒副作用越小这是众所周知的事实；而且本制剂选择水为载体系统，其流动性、药物的刺激性、给动物注射时的疼痛反应等比现在用化学溶剂制成的注射剂要好许多，并且由于药物流动性好，抽吸和注射时操作容易，并且以水为基质代替传统的油剂，大大降低用药成本，投放市场更容易被兽医和畜主接受。

3、本发明热力学稳定性好，用100℃流通蒸汽灭菌后充分振荡完全可以恢复稳定的状态，贮存稳定性好，久置不分层，甚至在离心加速实验中，12000rpm离心30min也不会分层；本发明防腐性能较好，室温放置24个月不霉变，不变色，含量稳定。

4、本发明选择毒性极小的溶剂系统组成制成载药量高，缓释效果好的多拉菌素注射液，不仅有很高的科技含量而且直接针对临床需求富有实用性，研究成果可广泛应用于农林畜牧各个行业；由于目前国内外尚无同类研究和产品制剂的报道，本发明在国内外市场上将具有广阔前景，应用本发明制备的制剂能为动物体内外寄生虫防治提供一种安全高效的药物，对动物寄生虫病的有效防治和促进畜牧养殖业健康发展、保障公共卫生安全和我国兽药创新研究具有极其重要的意义。

5、本制剂急性毒性试验结果表明，以寇氏法其0.1%制剂对大鼠、小鼠的腹腔注射其半数致死量即LD₅₀值大于10g/kgBW（按原药计算LD₅₀值大于10mg/kgBW），以寇氏法其1%制剂对大鼠、小鼠的腹腔注射，其半数致死量即LD₅₀值依次为7. 65 g/kgBW 、4. 6 g/kgBW（按原药计算LD₅₀值依次为76.5mg/kgBW、46 mg/kgBW），按毒性分级标准属无毒范畴，加上多拉菌素特殊的驱虫机理，药物很难通过哺乳动物的血脑屏障引发毒副反应，其临床推荐用量仅为0.2～0.3 mg/kgBW，因此本制剂临床使用非常安全。

6、本发明制备的O/W型注射液最高含多拉菌素浓度为5%，用注射用水在0.1%～5%的范围内随意稀释。临床可适用猪、马、牛、羊、犬、猫，为动物畜种用药提供方便。

具体实施方式

以下通过试验实例来进一步阐明本发明所述药物的有益效果，及其制备方法，这些试验实例包括了本发明药物的毒理学和药理学试验。

实施例1 ：含量为0.1%～5%的O/W型多拉菌素注射液的制备：

1）称取各药物组分：OP乳化剂37.5克、PEG400 12.5克、油酸乙酯10.0克、多拉菌素5.0、置于棕色三角瓶中，在恒温磁力搅拌器上，以300～500rpm搅拌0.2h，直至多拉菌素完全溶解，体系均一、透明、澄清为止。

2）在搅拌条件下向上溶液中慢慢滴加注射用水，随注射用水加入量的增加，溶液体系首先变的比较粘稠，当注射用水达到25g时，体系忽然变稀，流动性增大，完全透明，当注射用水用量达35克时，既得多拉菌素含量为5%的O/W型多拉菌素注射液，此时其它各种辅料的含量也高达60%，此时因辅料的含量高，毒副作用大，不适于临床使用。

3）继续在搅拌条件下向上溶液中慢慢滴加注射用水，当注射用水用量达435克时，既得多拉菌素含量为1%的O/W型多拉菌素注射液，此时其它各种辅料的含量也同比降至12%，此药物含量为临床常用制剂，适用于猪、马、牛、羊等大、中体形的动物。

4）继续在搅拌条件下向上溶液中慢慢滴加注射用水，当注射用水用量达4935克时，既得多拉菌素含量为0.1%的O/W型多拉菌素注射液，此时其它各种辅料的含量也同比降至1.2%，此药物含量亦为临床常用制剂，适用犬、猫等小体形的动物。

实施例2：1%O/W型多拉菌素注射液含量测定

将制备好的1% O/W型多拉菌素注射液用HPLC法进行含量测定，采用Water s 高效液相色谱仪系列; Luna C18 ( 3μm) 4. 6 mm ×150 mm 色谱;Waters510 型输液泵; TM480 型荧光检测器;U6 K 型进样阀;AST 型数据处理仪;3800 型打印机。流动相为乙腈：甲醇：冰乙酸(64 ∶32 ∶4) ,流速1 mL/ min ;柱温(30. 0 ±0. 5) ℃;激发波长383 nm ,发射波长447 nm ，进样量：20μl。

对照品溶液制备：精密称取多拉菌素对照品:0.0100g，以流动相溶解配置成浓度100.0μg／ml作为储备液。精密量取上述储备液0.2、0.6、1.0、3.0、6.0、10.0μl，分别置l0ml的容量瓶中，加流动相定容、摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液制备：精密称取样品适量，置于100ml容量瓶中，加入流动相适量，超声30min，放冷至室温，加入流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

标准曲线与线性范围分别取上述对照溶液20μl进样测定。以对照品溶液浓度与峰面积的平均值进行曲线回归计算，得方程：Y=0.046X+0.2808, R²=0.9999。结果表明，多拉菌素浓度为1.00～100.0μg／ml时有良好的线性关系。

含量测定：精密量取1% O/W型多拉菌素注射液0.1ml, 置100ml容量瓶中，以乙腈：甲醇：冰乙酸(64 ∶32 ∶4)稀释至刻度，超声混合均匀，静置10min，过滤，取续滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，进样20μl, 记录色谱图，计算峰面积，由标准曲线计算药物含量；结果，其含量为标示量的99~101%，RSD小于1.4％。

实施例3：急性毒性试验结果

（1）0.1%O/W型多拉菌素注射液急性毒性试验结果

昆明种小鼠、Wistar大鼠（清洁级）各30只，雌雄各半，购自兰州大学实验动物中心，许可证号：SCXK（甘）2009-0004；按10g/kg（换算成多拉菌素原药含量为10mg/kg）体重剂量腹腔注射0.1% O/W型多拉菌素注射液后，连续观察7天，未见任何毒副反应，大、小鼠均被毛光滑，活动自如，饮食欲正常，试验期间无1例死亡，试验结果说明0.1% O/W型多拉菌素注射液对大、小鼠腹腔注射用药其最大耐受量LD₀即一只都不死亡的的剂量大于10g/kg体重，那么其半数致死量LD₅₀值必大于该剂量，即大于10g/kg体重，因此按毒性分级标准0.1% O/W型多拉菌素注射液是实际无毒的，该给药剂量剂量大于临床推荐剂量0.2～0.3mg/kg体重的33～50倍，没有任何不良反应，这些都提示0.1% O/W型多拉菌素注射液临床应用非常安全。

（2）1%O/W型多拉菌素注射液急性毒性试验结果

Wister系大白鼠68只,,雌雄各半,体重180～200 g。其中20只进行预试验,采用递增法测得大鼠口服1%多拉菌素注射液LD₀值为5. 3g/kg BW，LD₁₀₀值为13. 9 g/kg BW；按简化寇氏法分组依据此二值可计算出其组间比值r≈ 1. 2，其余鼠48只分6组正式试验，统计死亡率，计算出大鼠口服多拉菌素LD₅₀值。

表1　多拉菌素大鼠急性毒性试验数据统计

组别	剂量g/kgBW	动物数	死亡数	死亡率
					1	13.9	8	8	100%
2	11.5	8	7	87.5%
					3	9.5	8	5	62.5%
4	7.8	8	4	50%
					5	6.5	8	1	12.5%
6	5.3	8	0	0

从表1可见，以1%多拉菌素注射液计, LD₅₀ = 7. 65 g/kgBW,其95%可信限为7. 21～8. 1 g/kgBW。

昆明种小白鼠70只,雌雄均半,体重18～22 g。其中20只进行预试验,采用递增法测得小鼠口服1%多拉菌素注射液LD₀ 值为3. 5 g/kg. BW，LD₁₀₀值为6. 2 g/kg.BW;按简化寇氏法分组据此二值可计算出其组间比值r≈ 1. 15,其余50只分5组作正式试验，统计死亡率,计算出大鼠口服多拉菌素LD₅₀值。

表2　多拉菌素小鼠急性毒性试验数据统计

组别	剂量g/kgBW	动物数	死亡数	死亡率
					1	3.5	10	0	0
2	4.1	10	3	30%
					3	4.7	10	6	60%
4	5.4	10	8	80%
					5	6.2	10	10	100%

从表2可以看出：1%多拉菌素注射液计: LD₅₀ = 4. 6 g/kgBW, 95%可信限为3. 8～5. 5 g/kg BW。

实施例4：长期稳定实验结果

批号为20090405，20090406，20090407三批含量1% O/W型多拉菌素注射液装入100ML玻璃瓶，封口后100℃流通蒸汽消毒，放入25+2℃、RH60+5％的条件下放置，分别于0、3、6、9、12、18、24、36个月取样分析，并与0天的结果进行比较，结果见表4-1。

表3为室温留样考察结果。表3表明：2年内样品有效成分检出、产品外观均无明显变化。由此可知，1% O/W型多拉菌素注射液稳定性较好，该产品至少在2年内是稳定的。

表3 长期试验结果

Claims

1.一种以水为基质的O/W型多拉菌素注射液，由下列质量百分比的原料组成：

OP乳化剂： 0.75～37.5%；

PEG400： 0.25～12.5%；

油酸乙酯： 0.2～10.0%；

多拉菌素： 0.1～5.0%；

注射用水： 35～ 98.7%。

2.制备权利要求1所述注射液的方法，包括以下步骤：

a. 称取OP乳化剂、PEG400、油酸乙酯、多拉菌素，置于棕色三角瓶中，恒温磁力搅拌器上，以300～500rpm搅拌0.2h，直至多拉菌素完全溶解，体系均一、透明、澄清为止；

b. 在搅拌条件下向上溶液中慢慢滴加注射用水，随注射用水加入量的增加，溶液体系首先变的比较粘稠，当注射用水达到20-25g时，体系忽然变稀，流动性增大，完全透明，当注射用水用量达35克时，即得多拉菌素含量为5%的O/W型多拉菌素注射液；当注射用水用量达435克时，即得多拉菌素含量为1%的O/W型多拉菌素注射液；当注射用水用量达4935克时，即得多拉菌素含量为0.1%的O/W型多拉菌素注射液。