CN103351441A - 一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法 - Google Patents
一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法，其步骤依次为：酶解肠衣，粗品形成，分层折出，乙醇沉淀，粗品分解，精品形成，酒精沉淀，净洗，干澡。其中粗品分解利用了超声波，原料处理量大，且杂质少，有效成份易于分离，净化，提取成本低。综合经济效益显著，超声波具有清洗和灭菌作用，使提取液不易变质，在产品产出率和含量方面，本方法比按酶解、盐析、树脂萃取提取肝素钠的方式提高了20%，缩短了提取时间、降低了工艺运行成本，从而提高了经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法。
背景技术
肝素钠是肝素的钠盐形式产物，是粘多糖硫酸酯类抗凝血药。它是从猪的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质。近年来研究证明肝素钠还有降血脂、抗血凝、抗血栓、抗细胞老化等作用。
传统生产肝素钠的方法一般包括：猪肠粘膜酶解、树脂吸附、洗涤、洗脱、沉淀、精制等步骤，工艺繁琐，树脂吸附难，时间较长，产品收率低。
发明内容
本发明的目的在于对传统生产肝素钠的方法进行改进，提供一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法。
本发明，是在对国内外粗品蛋白肝素提取纯化工艺及降解后的生物活性研究现状分析基础上，研究建立了以猪小肠为原料，在经传统酶解工艺的基础上，采用盐解、超声波分解处理、分层析出的方法提取低分子肝素钠，较传统工艺缩短了提取时间、降低了工艺运行成本、提高了产出率和效率，产品活性亦有提高。
本发明，其工艺步骤包括：
（1）酶解，将收集的半成品肠衣绞碎成糜状作为酶解物料，按酶解物料与水为1:5-6的重量比例加水，用8%的NaOH溶液调整pH值至8.5-9，加入NaCl将盐度调整到3％，搅拌均匀，升温至40℃，按酶解物料重量的0.8-1.2%加入2709碱性蛋白酶，升温至55℃, 恒温搅拌3-3.5小时；
（2）粗品形成，上述步骤结束后，升温至80℃，保温静置30分钟；
（3）分层析出，按酶解物料重量的0.8-1.2％加入氯化铝，搅拌30分钟，再按酶解物料重量的0.08-0.12％加入壳聚糖，搅拌1-1.5小时，静置2-3小时分层，用虹吸方式把上层清液弃去，留下层物料用80目滤布过滤，去除滤渣，滤液静置沉淀后，去上层废液，得下层粗品蛋白；
（4）乙醇沉淀，过滤后的粗品，用95%乙醇反复清洗静泡三次，每次2小时，获得去除水分和杂质的粗品蛋白；
（5）粗品分解，将粗品蛋白用2wt％NaCl溶液溶解，用8%的NaOH溶液调整pH值至8.5-9，升温至40℃，用超声波超声5次，10分钟/次，每次间隔15分钟，保持pH值8.5-9，加温至55℃，保温2-2.5小时，升温至80℃，保温30-40分钟，得精品低分子肝素钠溶液；
（6）乙醇沉淀，加入二倍超声后溶液容积的95%乙醇沉淀，静置12小时以上，得到精品低分子肝素钠沉淀物；
（7）净洗，将所得精品低分子肝素钠沉淀物，用95%乙醇反复清冼三次，每次3-3.5小时，沥干后得精品低分子肝素钠湿料；
（8）干燥，将精品低分子肝素钠湿料送至烘箱，80℃干燥20小时，取出后定标封装，得到低分子肝素钠成品。
本发明，由于采用酶解、盐解、分层沉淀和超声波处理分解结合的方法提取肝素的方案，使产品产出率和含量比按酶解、盐析、树脂萃取提取肝素钠的方式提高了20%，缩短了提取时间、降低了工艺运行成本，从而提高了经济效益。
由本发明所述方法制取的低分子肝素钠，主要作用可作为高级化妆品的活性原料。
具体实施方式
一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法，其工艺步骤包括：
（1）酶解，取半成品肠衣100kg绞碎成糜状作为酶解物加水至650kg，用8%NaOH溶液调pH值至8.5-9，加入NaCl调整盐度为3%，搅拌均匀，升温至40℃，加1kg的2709碱性蛋白酶，保持pH值为8.5-9，升温至55℃, 恒温搅拌3小时；
（2）粗品形成，上述步骤结束后，升温至80℃，保温静置30分钟；
（3）分层析出，加入氯化铝（AE1）1kg，搅拌30分钟，再加入0.1kg壳聚糖（AB2）搅拌1小时；静置2小时分层，用虹吸方式把上层清液弃去，留下层物料用80目滤布过滤，去除滤渣，滤液静置沉淀后，去上层废液，得下层粗品蛋白；
（4）乙醇沉淀，过滤后的粗品，用95%乙醇反复清洗静泡三次，每次2小时，获得去除水分和杂质后的粗品蛋白；
（5）粗品分解，将粗品蛋白用2wt％NaCl溶液溶解，用8%的NaOH溶液调整pH值至8.5-9，升温至40℃，用超声波超声5次，10分钟/次，每次间隔15分钟，然后用NaOH调pH值8.5-9，加温至55℃，保温2小时，升温至80℃，保温30分钟，得精品低分子肝素钠溶液；
（6）乙醇沉淀，加入二倍超声后溶液容积的95%乙醇沉淀，静置12小时以上，得到精品低分子肝素钠沉淀物；
（7）净洗，将所得精品低分子肝素钠沉淀物，用95%乙醇反复清冼三次，每次3小时，沥干后得精品低分子肝素钠湿料；
（8）干燥，将精品低分子肝素钠湿料送至烘箱，80℃干燥20小时，取出后定标封装，得到低分子肝素钠成品。
本实施例可制备干品肝素钠2kg，活性单位5000万-7000万个，其分子量在3000-17000之间，主要适用于高级化妆品的活性原料。其主要技术指标符合有关标准的要求。
Claims (1)
1.一种从猪肠内膜提取物粗蛋白中精制低分子肝素钠的方法，其工艺步骤包括：
（1）酶解，将收集的半成品肠衣绞碎成糜状作为酶解物料，按酶解物料与水为1:5-6的重量比例加水，用8wt%的NaOH溶液调整pH值至8.5-9，加入NaCl将盐度调整到3％，搅拌均匀，升温至40℃，按酶解物料重量的0.8-1.2%加入2709碱性蛋白酶，升温至55℃, 恒温搅拌3-3.5小时；
（2）粗品形成，上述步骤结束后，升温至80℃，保温静置30分钟；
（3）分层析出，按酶解物料重量的0.8-1.2％加入氯化铝，搅拌30分钟，再按酶解物料重量的0.08-0.12％加入壳聚糖，搅拌1-1.5小时，静置2-3小时分层，用虹吸方式把上层清液弃去，留下层物料用80目滤布过滤，去除滤渣，滤液静置沉淀后，去上层废液，得下层粗品蛋白；
（4）乙醇沉淀，过滤后的粗品，用95%乙醇反复清洗静泡三次，每次2小时，获得去除水分和杂质的粗品蛋白；
（5）粗品分解，将粗品蛋白用2wt％NaCl溶液溶解，用8wt%的NaOH溶液调整pH值至8.5-9，升温至40℃,用超声波超声5次，10分钟/次，每次间隔15分钟，保持pH值8.5-9，加温至55℃，保温2-2.5小时，升温至80℃，保温30-40分钟，得精品低分子肝素钠溶液；
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