CN103349783A - 一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种以多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物及其制备方法，该纳米光敏药物包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物，所述两亲性多糖-叶酸偶联物为多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接形成。该纳米光敏药物体内光学稳定性良好，以多糖-叶酸为载体生物相容性非常好；且该纳米光敏药物在受到一定的波长激光照射下，对正常皮肤无损伤，且可以通过光热治疗根除肿瘤。该纳米光敏药物很好的做到了肿瘤的诊疗一体化。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域，涉及一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物及其制备方法。
背景技术
癌症的治疗方法主要集中在化学疗法、放射疗法、手术疗法，然而，这些方法都有一定的局限性，例如：化疗药物有较大的毒副作用，病人不宜长时间地接受治疗，往往最终使癌症治疗失败；而手术治疗一般具有较大的组织创伤，且手术的风险很大。因此，使用非侵入性的手段，特异性的杀死肿瘤组织而对正常组织没有伤害，是一个亟待解决的科学难题。
光学成像是一种具有高灵敏度和无辐射暴露的成像方法，可较容易地实时监测细胞在体内的分布。近红外荧(Near-infrared imaging,NIR imaging)波长范围在700～1000nm，组织穿透深度可以达到4～10cm，同时在这一波长范围内组织自发荧光较弱，因此使得近红外荧光成像成为目前光学成像中较理想的方法之一。
有机近红外荧光染料和无机近红外荧光量子点(Quantum dots，QDs)是目前近红外荧光成像研究中的两类最具代表性的荧光探针。然而，由于具有重金属元素内核，量子点的潜在毒性极大地限制了其在实验研究和临床研究中的应用。有机近红外荧光染料是另一种具有临床应用价值的荧光化合物，其中最具代表性的包括花菁类染料和酞化青染料等。花菁染料具有很好的稳定性和很强的荧光效应，可用于肝功能评价和血管造影的近红外荧光造影剂。
一些有机荧光探针在一定功率的近红外激光器的照射下放热，具有光热转换效应，由于肿瘤细胞较正常细胞对热更加敏感，因此，可以应用于肿瘤细胞的热疗。但是具有光敏效应的荧光探针多为脂溶性有机物，且由于溶解度较小，很难在人体水溶性环境下溶解并被机体吸收，生物利用度较低，从而导致抗肿瘤效果不好。
因此，如何合成生物相容性好的抗肿瘤光敏药物成为研究热点。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种以多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物及其制备方法，用多糖-叶酸偶联物为载体包裹光敏药物形成纳米光敏药物，该纳米光敏药物体内光学稳定性良好，生物相容性好；且该纳米光敏药物进行激光照射后，在对正常皮肤无损伤的情况下，可以通过光热治疗根除肿瘤。该纳米光敏药物很好的做到了肿瘤的诊疗一体化。
一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物，包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物，所述两亲性多糖-叶酸偶联物为多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接形成。
优选地，所述光敏药物为吲哚青绿染料(ICG)或IR-780碘化物。
所述光敏药物一方面可以作为荧光标记物实时监测细胞在体内的分布，另一方面光敏分子药物对一定波长的光有特征吸收并放热，由于肿瘤细胞较正常细胞对热更加敏感，可以应用于肿瘤细胞的热疗，从而实现对肿瘤细胞的诊疗一体化。
聚合物纳米胶束体系是一种常见的纳米药物载体，主要用于药物的缓释、控释、靶向输送以及增加疏水性药物的溶解性等。它由两亲性（同时具有亲水和亲油组分）的聚合物分子在水溶液中经过自组装制备而成，本发明所述纳米光敏药物以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体，所述载体在水介质中自组装为纳米胶束，包裹光敏药物形成所述纳米光敏药物，从而实现所述纳米光敏药物的高效负载，高度靶向传输以及智能控制释放等优点。
优选地，所述多糖为肝素钠、葡聚糖、海藻酸钠或透明质酸。
优选地，所述多糖经衍生化为所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团。
优选地，所述叶酸经衍生化为所述叶酸结构中γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团。
优选地，所述活性成分颗粒的粒径为90nm～120nm。
优选地，所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物在650nm～850nm的近红外区有特征吸收。
优选地，所述溶剂为水、PBS缓冲溶液或HEPES缓冲溶液。
优选地，所述活性成分颗粒外壳表面暴露有叶酸。
一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米药物的制备方法，包括以下步骤：
S1、取所述多糖或经衍生化的多糖、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺溶于无水二甲基亚砜中活化，加入所述经衍生化的叶酸，在避光条件下，室温反应过夜，多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到所述多糖-叶酸偶联物溶液，分离纯化后，将所述多糖-叶酸偶联物溶液冷冻干燥，得到多糖-叶酸偶联物；所述多糖或经衍生化的多糖和所述经衍生化的叶酸的质量比为1:0.1～1:0.8，所述多糖或经衍生化的多糖和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐以及N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:0.05:0.01～1:0.5:0.2；
取所述多糖-叶酸偶联物加入所述溶剂中，得到浓度为2mg/mL～6mg/mL的多糖-叶酸偶联物溶液；
S2、将所述光敏药物溶于二甲基亚砜中，得到浓度为0.5mg/mL～10mg/mL的光敏药物溶液；
S3、将所述光敏药物溶液缓慢加入所述多糖-叶酸偶联物溶液中，75W～100W超声20min～30min，分离纯化后，得到所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物；所述多糖-叶酸偶联物和所述光敏药物的质量比为1:0.01～1:0.2，所述两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物，包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物。
优选地，所述光敏药物为吲哚青绿染料(ICG)或IR-780碘化物。
优选地，步骤S1取肝素钠、海藻酸钠或透明质酸，或经衍生化的肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，步骤S1的分离纯化方法为：
将所述多糖-叶酸偶联物溶液透析2天，再将透析袋中的所述偶联物溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的偶联物溶液。
优选地，步骤S1取经衍生化的葡聚糖时，步骤S1的分离纯化方法为：
将所述多糖-叶酸偶联物溶液透析2天。
优选地，步骤S1取肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，多糖在反应前需要和三正丁胺反应形成多糖-三正丁胺配合物，从而增加多糖的脂溶性，具体方法为：
将所述多糖溶于超纯水中形成浓度为0.05g/mL～10g/mL的多糖溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的多糖溶液，加入三正丁胺，调所述过柱后的多糖溶液pH为中性，冷冻干燥，得到多糖-三正丁胺配合物。
优选地，步骤S3的分离纯化方法为：取所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物放入透析袋中，透析24h；然后取出透析袋，将透析袋中的所述纳米光敏药物用0.22μm滤器过滤除菌，最终得到纯化后的所述纳米光敏药物。
优选地，所述多糖为肝素钠、葡聚糖、海藻酸钠或透明质酸。
优选地，所述多糖经衍生化为所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团。
优选地，所述叶酸经衍生化为所述叶酸结构中γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团。
优选地，所述活性成分颗粒的粒径为90nm～120nm。
优选地，所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物在650nm～850nm的近红外区有特征吸收。
优选地，所述溶剂为水、PBS缓冲溶液或HEPES缓冲溶液。
优选地，所述活性成分颗粒外壳表面暴露有叶酸。
优选地，所述多糖为肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，所述多糖的衍生化方法为：
a、将所述多糖溶于超纯水中形成浓度为0.05g/mL～10g/mL的多糖溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的多糖溶液，加入三正丁胺，调所述过柱后的多糖溶液pH为中性，冷冻干燥，得到多糖-三正丁胺配合物；
b、将所述多糖-三正丁胺配合物、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶溶于无水N’N-二甲基甲酰胺中形成混合溶液，室温反应12h～48h，透析3天，然后将所述混合溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的混合溶液，加入四丁基氢氧化胺调混合溶液pH为中性，冷冻干燥，所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团，得到所述经衍生化的多糖；所述多糖-三正丁胺配合物和丁二酸酐的质量比为1:0.1～1:10，所述4-二甲氨基吡啶和多糖-三正丁胺配合物的质量比为0.1:1～0.5:1。
优选地，所述多糖为葡聚糖时，所述多糖的衍生化方法为：
将所述多糖、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶溶于无水二甲基亚砜中形成混合溶液，室温反应12h～48h，将所述混合溶液透析3天，取透析袋中的溶液冷冻干燥，所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团，得到所述经衍生化的多糖；所述多糖和丁二酸酐的质量比为1:0.1～1:10，所述4-二甲氨基吡啶和多糖的质量比为0.1:1～0.5:1。
优选地，所述叶酸的衍生化方法为：
取所述叶酸和N,N'-羰基二咪唑溶于无水二甲基亚砜中反应1h～4h，然后加入乙二胺，反应过夜，所述叶酸结构中的γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团，得到所述经衍生化的叶酸溶液，然后将所述经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，然后真空干燥，得到所述经衍生化的叶酸，所述叶酸和所述乙二胺的摩尔比为1:5～1:50，所述叶酸和所述N,N'-羰基二咪唑的摩尔比为1:1。
所述光敏药物一方面可以作为荧光标记物实时监测细胞在体内的分布，另一方面光敏分子药物对一定波长的光有特征吸收并放热，由于肿瘤细胞较正常细胞对热更加敏感，可以应用于肿瘤细胞的热疗，从而实现对肿瘤细胞的诊疗一体化。
聚合物纳米胶束体系是一种常见的纳米药物载体，主要用于药物的缓释、控释、靶向输送以及增加疏水性药物的溶解性等。它由两亲性（同时具有亲水和亲油组分）的聚合物分子在水溶液中经过自组装制备而成，本发明所述纳米光敏药物以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体，所述载体在水介质中自组装为纳米胶束，包裹光敏药物形成所述纳米光敏药物，从而实现所述纳米光敏药物的高效负载，高度靶向传输以及智能控制释放等优点。
综上，本发明有益效果包括以下几个方面：
（1）本发明纳米光敏药物进行肿瘤示踪成像，穿透度深，光强稳定性好，示踪精确；且可以通过光热疗法杀死肿瘤细胞，实现肿瘤的诊疗一体化；
（2）制备方法简单，且容易控制纳米药物的粒径，从而获得粒径均一、稳定性和生物相容性好的纳米药物。
附图说明
图1为本发明一实施方式的两亲性多糖-叶酸偶联物的结构示意图；
图2为本发明一实施方式的以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物的结构示意图；
图3为本发明效果实施例以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物在近红外激光照射下的温度变化图；
图4为本发明效果实施例在小鼠体内注射以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物后小鼠体内荧光变化图；
图5为本发明效果实施例以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物进行光热疗后细胞活性变化图。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物，包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物，所述两亲性多糖-叶酸偶联物为多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接形成。
优选地，所述光敏药物为吲哚青绿染料(ICG)或IR-780碘化物。
优选地，所述多糖为肝素钠、葡聚糖、海藻酸钠或透明质酸。
多糖是所以生命有机体的重要组成部分，在控制细胞分裂、调节细胞生长以及维持生命有机体正常代谢等方面有重要的作用。同时，多糖具有优良的生物相容性并能够在生物体中酶解成易被活体吸收、无毒副作用的小分子物质，此外，多糖来源广泛，价廉易得，其主链结构还有大量的羟基，易于化学修饰而改善其理化性质，故选择多糖作为所述纳米光敏药物的外壳，具有良好的生物相容性。
优选地，所述多糖经衍生化为所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团。
葡聚糖结构没有羧基，所以必须通过衍生化引入羧基基团。
为了使多糖上能够连接更多的经衍生化的叶酸，本发明将多糖进行衍生化从而使所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团，从而引入更多羧基基团，因此可以和叶酸经衍生化形成的氨基更多地连接，得到更加稳定、分散性更好的两亲性多糖-叶酸偶联物。
优选地，所述叶酸结构中的γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团，从而得到所述经衍生化的叶酸。
叶酸是细胞分裂、生长不可缺少的维生素，所有生长发育或新陈代谢旺盛的组织均需要有足够的叶酸供应。
叶酸受体(Folate receptor，FR)在卵巢癌、肾癌、子宫内膜癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多种肿瘤细胞膜表面过度表达，通常比正常细胞系高出20～200倍，且其表达水平与肿瘤组织的恶性程度及转移侵袭力呈正相关，因此，FR已成为肿瘤靶向治疗研究的新靶点。本发明制备的以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物具有核壳结构，外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物载体，所述载体在水介质中自组装为纳米胶束，包裹疏水性或两亲性的光敏药物形成内核，大部分叶酸分子以疏水作用将光敏药物包裹，还有少量叶酸分子在暴露在外壳表面实现颗粒的肿瘤靶向，利于肿瘤的定位和治疗。
优选地，所述活性成分颗粒的粒径为90nm～120nm。
优选地，所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物在650nm～850nm的近红外区有特征吸收。
优选地，所述溶剂为水、PBS缓冲溶液或HEPES缓冲溶液。
优选地，所述活性成分颗粒外壳表面暴露有叶酸。
图1为本发明一实施方式的两亲性多糖-叶酸偶联物的结构示意图；1表示经衍生化的叶酸，2表示多糖或经衍生化的多糖，两亲性多糖-叶酸偶联物为多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接形成。
图2为本发明一实施方式的以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物的结构示意图；1表示经衍生化的叶酸，2表示多糖或经衍生化的多糖，3表示光敏药物，从图中可以看出，本发明制备的以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物具有核壳结构，外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物载体，载体上的经衍生化的叶酸和光敏药物连接，包裹光敏药物形成内核，还有少部分叶酸露在外壳表面以提供靶向结构，利于肿瘤的定位和治疗。
一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米药物的制备方法，包括以下步骤：
S1、取所述多糖或经衍生化的多糖、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于无水二甲基亚砜中，加入所述经衍生化的叶酸，在避光条件下，室温反应过夜，多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到所述多糖-叶酸偶联物溶液，分离纯化后，将所述多糖-叶酸偶联物溶液冷冻干燥，得到多糖-叶酸偶联物；所述多糖或经衍生化的多糖和所述经衍生化的叶酸的质量比为1:0.1～1:0.8，所述多糖或经衍生化的多糖和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐以及N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:0.05:0.01～1:0.5:0.2；
取所述多糖-叶酸偶联物加入所述溶剂中，得到浓度为2mg/L～6mg/L的多糖-叶酸偶联物溶液；
步骤S1中，所述多糖的羧基或多糖中经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基发生酰胺化反应，从而连接叶酸和多糖形成所述两亲性多糖-叶酸偶联物；
步骤S1中，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺为反应的活化剂;活化多糖中的羧基或多糖经衍生化形成的羧基，从而使活化后的羧基和叶酸中经衍生化形成的氨基更容易地反应。
优选地，步骤S1取肝素钠、海藻酸钠或透明质酸，或衍生化的肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，步骤S1的分离纯化方法为：
将所述多糖-叶酸偶联物溶液透析2天，再将透析袋中的所述偶联物溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的偶联物溶液。
优选地，步骤S1取肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，多糖在反应前需要和三正丁胺反应形成多糖-三正丁胺配合物从而增加多糖的脂溶性，具体方法为：
将所述多糖溶于超纯水中形成浓度为0.05g/mL～10g/mL的多糖溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的多糖溶液，加入三正丁胺，调所述过柱后的多糖溶液pH为中性，冷冻干燥，得到多糖-三正丁胺配合物；
所述将透析袋中的偶联物溶液过阳离子交换柱的目的是为了去除因增加多糖溶解性加入的三正丁胺或多糖经衍生化时加入的四丁基氢氧化胺；
优选地，步骤S1取经衍生化的葡聚糖时，步骤S1的分离纯化方法为：
将所述多糖-叶酸偶联物溶液透析2天；
S2、将所述光敏药物溶于二甲基亚砜中，得到浓度为0.5mg/L～10mg/L的光敏药物溶液；
S3、将所述光敏药物溶液缓慢加入所述多糖-叶酸偶联物溶液中，75W～100W超声20min～30min，分离纯化后，得到所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物；所述多糖-叶酸偶联物和所述光敏药物的质量比为1:0.01～1:0.2，两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物，包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物。
步骤S3中，超声后，所述载体在水介质中自组装为纳米胶束，包裹疏水性或两亲性的光敏药物形成内核，大部分叶酸分子以疏水作用将光敏药物包裹，还有少量叶酸分子在暴露在外壳表面实现颗粒的肿瘤靶向。
优选地，步骤S3的分离纯化方法为：取所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物放入透析袋中，透析24h；然后取出透析袋，将透析袋中的所述纳米光敏药物用0.22μm滤器过滤除菌，最终得到纯化后的所述纳米光敏药物。
优选地，所述光敏药物为吲哚青绿染料(ICG)或IR-780碘化物。
所述光敏药物一方面可以作为荧光标记物实时监测细胞在体内的分布，另一方面光敏分子药物对一定波长的光有特征吸收并放热，由于肿瘤细胞较正常细胞对热更加敏感，可以应用于肿瘤细胞的热疗，从而实现对肿瘤细胞的诊疗一体化。
聚合物纳米胶束体系是一种最常见的纳米药物载体，主要用于药物的缓释、控释、靶向输送以及增加疏水性药物的溶解性等。它由两亲性（同时具有亲水和亲油组分）的聚合物分子在水溶液中经过自组装制备而成，本发明所述纳米光敏药物以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体，所述载体在水介质中自组装为纳米胶束，包裹光敏药物形成所述纳米光敏药物，从而实现所述纳米光敏药物的高效负载，高度靶向传输以及智能控制释放等优点。
优选地，所述多糖为肝素钠、葡聚糖、海藻酸钠或透明质酸。
优选地，所述活性成分颗粒的粒径为90nm～120nm。
优选地，所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物在650nm～850nm的近红外区有特征吸收。
优选地，所述溶剂为水、PBS缓冲溶液或HEPES缓冲溶液。
优选地，所述活性成分颗粒外壳表面暴露有叶酸。
优选地，所述透析时透析袋的截留分子量为3500。
优选地，所述多糖为肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，所述多糖的衍生化方法为：
a、将所述多糖溶于超纯水中形成浓度为0.05g/mL～10mg/mL的多糖溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的多糖溶液，加入三正丁胺，调所述过柱后的多糖溶液pH为中性，冷冻干燥，得到多糖-三正丁胺配合物；
b、将所述多糖-三正丁胺配合物、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶（DMAP）溶于无水N’N-二甲基甲酰胺中形成混合溶液，室温反应12h～48h，透析3天，然后将透析袋中的所述混合溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的混合溶液，加入四丁基氢氧化胺调混合溶液pH为中性，冷冻干燥，所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团，得到所述经衍生化的多糖；所述多糖-三正丁胺配合物和丁二酸酐的质量比为1:0.1～1:10，所述4-二甲氨基吡啶和多糖-三正丁胺配合物的质量比为0.1:1～0.5:1。
优选地，所述多糖为葡聚糖时，所述多糖的衍生化方法为：
将所述多糖、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶溶于无水二甲基亚砜中形成混合溶液，室温反应12h～48h，将所述混合溶液透析3天，取透析袋中的溶液冷冻干燥，所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团，得到所述经衍生化的多糖；所述多糖和丁二酸酐的质量比为1:0.1～1:10，所述4-二甲氨基吡啶和多糖的质量比为0.1:1～0.5:1。
所述肝素钠、海藻酸钠或透明质酸脂溶性较差，所以加入三正丁胺和所述肝素钠、海藻酸钠或透明质酸反应形成配合物，从而使多糖可以溶于有机溶剂中，可以和丁二酸酐反应。
所述葡聚糖可以溶于无水二甲基亚砜中，因此不需要和三正丁胺形成配合物。
所述4-二甲氨基吡啶（DMAP）为催化剂。
更优选地，所述透析时透析袋的截留分子量为3500。
步骤a中，将多糖溶液过阳离子交换柱的目的是为了去除多糖溶液中的钠离子，从而使多糖溶液更容易和三正丁胺结合形成配合物。
步骤b中，将透析袋中的所述混合溶液过阳离子交换柱的目的是为了去除三正丁胺。
例如，所述肝素钠中的一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团。
肝素钠的结构式为：
经衍生化的肝素钠的结构式为：
优选地，所述叶酸的衍生化方法为：
取所述叶酸和N,N'-羰基二咪唑（CDI）溶于无水二甲基亚砜中反应1h～4h，然后加入乙二胺，反应过夜，所述叶酸结构中的γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团，得到所述经衍生化的叶酸溶液，然后将所述经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，真空干燥，得到所述经衍生化的叶酸，所述叶酸和乙二胺的摩尔比为1:5～1:50，所述叶酸和N,N'-羰基二咪唑的摩尔比为1:1。
更优选地，所述乙酸乙酯的体积为所述经衍生化的叶酸溶液体积的10～15倍。
所述叶酸结构中的γ位羧基比α位羧基的空间位阻效应小，反应活性更大，因此γ位羧基可以和乙二胺通过酰胺化反应从而在叶酸结构上引入-CONHC2H4NH2基团；引入的-CONHC2H4NH2基团由于比叶酸自带的氨基更加活泼，因此叶酸经衍生化形成的氨基和多糖的羧基或经衍生化多糖的羧基连接，所述叶酸的具体结构式为：
所述经衍生化的叶酸的结构式为：
例如：取经衍生化的肝素钠和经衍生化的叶酸制备两亲性多糖-叶酸偶联物的化学反应方程式为：
本发明载体中多糖无毒，可生物降解，叶酸本身也是人类所需维生素，无毒副作用，两亲性多糖-叶酸偶联物作为载体可以很好地结合疏水性的药物分子，实现药物的高效负载，高度靶向传输；且增加药物的稳定性和溶解性，降低药物的毒副作用；
同时本发明制备方法简单，且容易控制纳米药物的粒径，从而获得粒径均一、稳定性好的纳米药物。
实施例一
1、将10g肝素钠溶于100mL超纯水中形成肝素钠的水溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的溶液，加入三正丁胺调pH为中性，冷冻干燥，得肝素钠-三正丁胺配合物（表示为H-tBu）；
2、将H-tBu10g、丁二酸酐25g、DMAP2g溶于无水N’N-二甲基甲酰胺中得到混合溶液，室温反应24h，然后将混合溶液在截留分子量（MWCO）为3500的透析袋中透析3天，取透析袋中的溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的溶液，然后加入四丁基氢氧化胺调pH为中性，冷冻干燥，得到经衍生化的肝素钠（H-Su）；
3、取1g叶酸、0.404g CDI，溶于30mL无水二甲基亚砜中反应1h，加入2mL乙二胺，反应过夜，得到经衍生的叶酸溶液，然后将经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，真空干燥，得到经衍生化的叶酸（folate-NH2）；乙酸乙酯的体积是经衍生化的叶酸溶液体积的10倍；
4、取2g H-Su、0.4g EDC.HCL、0.2g NHS，溶于30mL无水二甲基亚砜中活化，然后加入0.4g Folate-NH2，避光，室温反应过夜，肝素钠经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到肝素钠-叶酸偶联物溶液，然后将肝素钠-叶酸偶联物溶液在MWCO为3500的透析袋中透析2天，将透析袋中的偶联物溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的肝素钠-叶酸偶联物溶液，冷冻干燥得到肝素钠-叶酸偶联物（HF）。
5、取12mg HF加入3ml水中，制得4mg/mL的HF水溶液；
6、取900μg的IR-780溶于200μL的DMSO中形成IR-780的DMSO溶液；
7、将步骤6制备得到的IR-780的DMSO溶液缓慢加入步骤5制备的HF水溶液中，100W超声30min得到以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米药物（表示为HF-IR-780NPs）；取HF-IR-780NPs溶液加入MWCO为3500的透析袋中，透析24h；取出透析袋，将透析袋中的HF-IR-780NPs溶液经0.22μm滤器过滤除菌，最终得到纯化后的HF-IR-780NPs。
实施例二
1、将葡聚糖10g、丁二酸酐1g、DMAP1g溶于无水DMSO中，得到混合溶液，室温反应12h，将混合溶液在MWCO为3500的透析袋中透析3天，取透析袋中的溶液冷冻干燥，得到经衍生化的葡聚糖（D-Su）；
2、取1g叶酸、0.404g CDI，溶于30mL无水二甲基亚砜中反应4h，加入0.75mL乙二胺，反应过夜，得到经衍生化的叶酸溶液，然后将经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，真空干燥，得到经衍生化的叶酸（folate-NH2）；乙酸乙酯的体积是经衍生化的叶酸溶液体积的10倍；
3、取2g D-Su、0.1g EDC.HCL、0.02g NHS，溶于30mL无水二甲基亚砜中活化，加入0.2g Folate-NH2，避光，室温反应过夜，葡聚糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到葡聚糖-叶酸偶联物溶液，将葡聚糖-叶酸偶联物溶液放入MWCO为3500的透析袋中透析2天后，冷冻干燥得葡聚糖-叶酸偶联物（DF）；
4、取4mg DF加入2mL水中，制得2mg/mL的DF水溶液；
5、取40μg的ICG溶于80μL的DMSO中形成ICG的DMSO溶液；
6、将步骤5制备得到的ICG的DMSO溶液缓慢加入步骤4制备得到的DF水溶液中，75W超声20min得到以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米药物（表示为DF-ICG NPs）；取DF-ICG NPs溶液加入MWCO为3500的透析袋中，透析24h；取出透析袋，将透析袋中的DF-ICG NPs溶液经0.22μm滤器过滤除菌，最终得到纯化后的DF-ICG NPs。
实施例三
1、将100g海藻酸钠溶于10ml超纯水中形成海藻酸钠的水溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的溶液，加入三正丁胺调pH为中性，冷冻干燥，得海藻酸钠-三正丁胺配合物（表示为A-tBu）；
2、将A-tBu1g、丁二酸酐10g、DMAP0.5g溶于无水N’N-二甲基甲酰胺中形成混合溶液，室温反应48h，将混合溶液在MWCO为3500的透析袋中透析3天，取透析袋中的溶液，过阳离子交换柱，收集过柱后的混合溶液，然后加入四丁基氢氧化胺调pH为中性，冷冻干燥，得到经衍生化的海藻酸钠（A-Su）；
3、取1g叶酸、0.404g CDI，溶于30mL无水二甲基亚砜中反应2h，加入7.5ml乙二胺，反应过夜，得到经衍生化的叶酸溶液，然后将经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，真空干燥，得到经衍生化的叶酸（folate-NH2）；乙酸乙酯的体积是经衍生化的叶酸溶液体积的15倍；
4、取2g A-Su、1g EDC.HCL、0.4g NHS，溶于30mL无水二甲基亚砜中活化。加入1.6g Folate-NH2，避光，室温反应过夜，海藻酸钠经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到海藻酸钠-叶酸偶联物溶液，将海藻酸钠-叶酸偶联物溶液放入透析袋中透析2天，取透析袋中的偶联物溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的海藻酸钠-叶酸偶联物溶液，冷冻干燥得海藻酸钠-叶酸偶联物（AF）；
5、取12mg AF加入2mL PBS的缓冲液中，制得6mg/mL的AF溶液；
6、取2400μg的ICG溶于240μL的DMSO中形成ICG的DMSO溶液；
7、将步骤6制备得到的ICG的DMSO溶液缓慢加入步骤5制备得到的AF溶液中，80W超声25min得到以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米药物（表示为AF-ICG NPs）;取AF-ICG NPs溶液加入MWCO为3500的透析袋中，透析24h；取出透析袋，将透析袋中的AF-ICGNPs溶液经0.22μm滤器过滤除菌，最终得到纯化后的AF-ICG NPs。
实施例四
1、将5g透明质酸溶于100mL超纯水中形成透明质酸的水溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的溶液，加入三正丁胺调pH为中性，冷冻干燥，得透明质酸-三正丁胺配合物（表示为Hy-tBu）；
2、将Hy-tBu10g、丁二酸酐1g、DMAP1g溶于无水N’N-二甲基甲酰胺中形成混合溶液，室温反应12h，将混合溶液放入MWCO为3500的透析袋中透析3天，取透析袋中的混合溶液，过阳离子交换柱，收集过柱后的混合溶液，然后加入四丁基氢氧化胺调pH为中性，冷冻干燥，得到经衍生化的透明质酸（Hy-Su）；
3、取1g叶酸、0.404g CDI，溶于30mL无水二甲基亚砜中反应2h，加入2mL乙二胺，反应过夜，得到经衍生化的叶酸溶液，然后将经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，真空干燥，得到经衍生化的叶酸（folate-NH2）；乙酸乙酯的体积是经衍生化的叶酸溶液体积的12倍；
4、取1g Hy-Su、0.4g EDC.HCL、0.2g NHS，溶于30mL无水二甲基亚砜中活化，加入0.4g Folate-NH2，避光，室温反应过夜，透明质酸经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到透明质酸-叶酸偶联物溶液，将透明质酸-叶酸偶联物溶液放入透析袋中透析2天，取透析袋中的偶联物溶液过阳离子交换柱，收集过柱后的偶联物溶液，冷冻干燥得透明质酸-叶酸偶联物（HyF）。
5、取12mg HyF加入3mLHEPES缓冲溶液中，制得4mg/mL的HyF溶液；
6、取900μg的IR-780溶于200μL的DMSO中形成IR-780的DMSO溶液；
7、将步骤6制备得到的IR-780的DMSO溶液缓慢加入步骤5制备得到的HyF溶液中，100W超声20min得到以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米药物（表示为HyF-IR-780NPs）；取HyF-IR-780NPs溶液加入MWCO为3500的透析袋中，透析24h；取出透析袋，将透析袋中的HyF-IR-780NPs溶液经0.22μm滤器过滤除菌，最终得到纯化后的HyF-IR-780NPs。
效果实施例
按照实施例一的方法制备光敏药物和最终产物即纳米光敏药物的质量比不同的纳米光敏药物，并对纳米光敏药物进行粒径、zeta电位、包封效率和载药量等性质进行表征和测试，结果如表1所示。
表1
从表1中可以看出，纳米光敏药物的粒径范围为90nm～120nm，Zeta电位为-30mV～-46mV，包封效率达到98%以上，多分散指数为0.2左右。
在体内，网状内皮系统是很容易清除粒径大于200nm的药物，本发明制备出的纳米药物的粒径范围为90nm～120nm，不容易被网状内皮系统清除，有利于纳米光敏药物接触到肿瘤细胞并发挥诊疗一体化的作用。
Zeta电位是表征胶体分散体系稳定性的数据，Zeta电位（正或负）越高，体系越稳定，即溶解或分散可以抵抗聚集，且本发明制备的纳米光敏药物在1个月时间里，粒径大小无变化，说明本发明制备的纳米光敏药物稳定性很好。
包封效率是药物在体内输送的重要因素，本发明纳米光敏药物达到98%以上说明本发明提供的多糖-叶酸载体可以很好地包裹光敏药物分子，提高纳米药物的生物可利用性。
多分散指数表示物质的粒径的均一度，本发明纳米光敏药物多分散指数较小，表示粒径大小的均匀程度比较一致，说明本发明制备出来的纳米光敏药物粒径容易控制，粒径均一。
图3是两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物在近红外激光照射下的温度变化；照射波长为808nm，照射功率密度为0.6W/cm2；从图3可以看出，本发明纳米光敏药物放热明显。例如，10μg/ml的HF-IR-780NPs在近红外激光照射125s时可升温20℃左右。这样的温度上升情况下，可导致肿瘤细胞的不可逆的损伤。
将体内肿瘤大小为100mm3～200mm3的小鼠（小鼠内的肿瘤位置用虚线圈表示）分为两组，第一组小鼠通过尾部注射的方法注入没有多糖-叶酸偶联物形成载体的IR-780溶液（IR-780溶于助溶剂聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)中，注入量为1kg体重的小鼠注入0.7mg的IR-780），第二组小鼠通过尾部注射的方法注入HF-IR-780NPs（注入浓度和IR-780相同），然后通过Maestro活体荧光成像系统分别在注射后的1h，3h，24h，48h和72h两组小鼠中取图，结果如图4所示（图中的“高”表示荧光强度高，“低”表示荧光强度低）。
从图4可以看出，随着时间的延长，肿瘤细胞的荧光信号越来越强，在注射1h后，第一组和第二组小鼠体内大部分组织都可以检测到荧光信号，在3h和24h两组实验图像中，在两组小鼠的肿瘤上检测到较强的荧光信号，但是第二组的荧光强度要大于第一组的，在72h的图像中，可以看到肿瘤的荧光强度要强于其他组织如肝和肺中的荧光强度，且第二组的荧光强度要大于第一组的，说明，本发明制备得到的纳米光敏药物具有光学成像的作用，且荧光效应强，可以起到追踪肿瘤的作用。且本发明制备的以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物（HF-IR-780NPs）的在小鼠体内的荧光强度要大于没有多糖-叶酸偶联物形成的载体的IR-780，说明本发明制备的纳米光敏药物中的叶酸提供了靶向结构，纳米光敏药物可以较多的聚集在肿瘤周围，有效地进行肿瘤的定位，所以荧光强度更强。
图5为本发明效果实施例以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物光热疗肿瘤细胞后细胞活性变化图。将人体乳腺癌细胞（MCF-7）接种在96孔板中，培养24h小时细胞生长稳定后，将细胞培养液替换成100mL的对照样（对照样为没有多糖-叶酸偶联物载体的IR-780，将IR-780溶于助溶剂聚氧乙烯蓖麻油中形成培养液）和本发明制备的HF-IR-780NPs作为培养液，然后进行细胞的培养1h后，用波长为808nm，功率密度为0.6W/cm2的光照射细胞5min，然后再培养细胞2h，最后用CCK-8法测试细胞活性，同时为了体现光热疗效果，还设置了不经照射的两个对比试验组，即将细胞培养液替换成100mL的对照样培养液和本发明制备的HF-IR-780NPs培养液，只进行细胞的培养，不进行光热疗，最后也采用CCK-8法测试细胞活性。具体试验组如下表所示：
表2
| 编号 | 实验组 | 实验细胞 | 808nm波长 |
| 1 | 对照样未照射 | MCF-7 | 不照射 |
| 2 | HF-IR-780NPs未照射 | MCF-7 | 不照射 |
| 3 | 照射对照样5min | MCF-7 | 照射5min |
| 4 | 照射HF-IR-780NPs5min | MCF-7 | 照射5min |
从图5可以看出，经近红外激光照射的实验组的细胞活性降低速率要远远大于没经近红外激光照射的实验组，说明光热治疗起到了杀灭肿瘤细胞的作用，HF-IR-780NPs实验组比对照样即不含有多糖-叶酸偶联载体的实验组，对肿瘤细胞的杀灭率更大，叶酸受体(Folate receptor，FR)可在乳腺癌肿瘤细胞膜表面过度表达，说明本发明制备的纳米光敏药物中的叶酸提供了靶向结构，有效地进行肿瘤的定位，有利于后续光热治疗。
综上，本发明制备的两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物可以很好地进入生物体内，同时起到荧光成像和肿瘤细胞的光热疗的作用，实现了对肿瘤细胞的诊疗一体化。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物，其特征在于，包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物，所述两亲性多糖-叶酸偶联物为多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接形成。
2.如权利要求1所述的纳米光敏药物，其特征在于，所述光敏药物为吲哚青绿染料或IR-780碘化物。
3.如权利要求1所述的纳米光敏药物，其特征在于，所述多糖为肝素钠、葡聚糖、海藻酸钠或透明质酸，所述多糖经衍生化为所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团。
4.如权利要求1所述的纳米光敏药物，其特征在于，所述叶酸经衍生化为所述叶酸结构中γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团。
5.如权利要求1所述的纳米光敏药物，其特征在于，所述活性成分颗粒外壳表面暴露有叶酸。
6.如权利要求1所述的纳米光敏药物，其特征在于，所述活性成分颗粒的粒径为90nm～120nm。
7.一种以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取所述多糖或经衍生化的多糖、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺溶于无水二甲基亚砜中活化，加入所述经衍生化的叶酸，在避光条件下，室温反应过夜，反应结束后，多糖的羧基或多糖经衍生化形成的羧基和叶酸经衍生化形成的氨基连接，得到所述多糖-叶酸偶联物溶液，分离纯化后，将所述多糖-叶酸偶联物溶液冷冻干燥，得到多糖-叶酸偶联物；所述多糖或经衍生化的多糖和所述经衍生化的叶酸的质量比为1:0.1～1:0.8，所述多糖或经衍生化的多糖和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐以及N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:0.05:0.01～1:0.5:0.2；
取所述多糖-叶酸偶联物加入所述溶剂中，得到浓度为2mg/mL～6mg/mL的多糖-叶酸偶联物溶液；
S2、将所述光敏药物溶于二甲基亚砜中，得到浓度为0.5mg/mL～10mg/mL的光敏药物溶液；
S3、将所述光敏药物溶液缓慢加入所述多糖-叶酸偶联物溶液中，75W～100W超声20min～30min，分离纯化后得到所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物；所述多糖-叶酸偶联物和所述光敏药物的质量比为1:0.01～1:0.2，所述以两亲性多糖-叶酸偶联物为载体的纳米光敏药物包括活性成分颗粒和溶剂，所述活性成分颗粒为核壳结构，所述内核为光敏药物，所述外壳为两亲性多糖-叶酸偶联物。
8.如权利要求7所述的纳米光敏药物的制备方法，其特征在于，所述多糖为肝素钠、海藻酸钠或透明质酸时，所述多糖的衍生化方法为：
a、将所述多糖溶于超纯水中形成浓度为0.05g/mL～10g/mL的多糖溶液，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的多糖溶液，加入三正丁胺，调所述过柱后的多糖溶液pH为中性，冷冻干燥，得到多糖-三正丁胺配合物；
b、将所述多糖-三正丁胺配合物、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶溶于无水N’N-二甲基甲酰胺中形成混合溶液，室温反应12h～48h，将所述混合溶液透析3天，然后过阳离子交换柱，收集过柱后的混合溶液，加入四丁基氢氧化胺调混合溶液pH为中性，冷冻干燥，所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团；得到所述经衍生化的多糖；所述多糖-三正丁胺配合物和丁二酸酐的质量比为1:0.1～1:10，所述4-二甲氨基吡啶和多糖-三正丁胺配合物的质量比为0.1:1～0.5:1。
9.如权利要求7所述的纳米光敏药物的制备方法，其特征在于，所述多糖为葡聚糖时，所述多糖的衍生化方法为：
将所述多糖、丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶溶于无水二甲基亚砜中形成混合溶液，室温反应12h～48h，将所述混合溶液透析3天，取透析袋中的溶液冷冻干燥，所述多糖结构中至少有一个羟基和丁二酸酐反应形成-OCOC2H4COOH基团;得到所述经衍生化的多糖；所述多糖和丁二酸酐的质量比为1:0.1～1:10，所述4-二甲氨基吡啶和多糖的质量比为0.1:1～0.5:1。
10.如权利要求7所述的纳米光敏药物的制备方法，其特征在于，所述叶酸的衍生化方法为：
取所述叶酸和N,N'-羰基二咪唑溶于无水二甲基亚砜中反应1h～4h，然后加入乙二胺，反应过夜后，所述叶酸结构中的γ位羧基和乙二胺反应形成-CONHC2H4NH2基团，得到所述经衍生化的叶酸溶液，然后将所述经衍生化的叶酸溶液加入乙酸乙酯中，离心收集沉淀，真空干燥，得到所述经衍生化的叶酸，所述叶酸和所述乙二胺的摩尔比为1:5～1:50，所述叶酸和所述N,N'-羰基二咪唑的摩尔比为1:1。
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|---|---|
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Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104530256A (zh) * | 2014-12-18 | 2015-04-22 | 北京中医药大学 | 透明质酸维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备和用途 |
| CN105596294A (zh) * | 2015-12-21 | 2016-05-25 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种纳米靶向载药胶束及其制备方法和一种抗癌药物及其制备方法 |
| CN106727314A (zh) * | 2017-01-13 | 2017-05-31 | 中国药科大学 | 一种基于透明质酸的光敏剂／抗肿瘤药物自组装纳米递药系统的制备与表征 |
| CN107303388A (zh) * | 2016-04-14 | 2017-10-31 | 北京大学 | 一种基于近红外染料‑透明质酸复合物的诊断治疗制剂 |
| CN110003888A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-12 | 苏州大学 | 一种荧光纳米探针及其制备方法 |
| CN110496102A (zh) * | 2019-07-29 | 2019-11-26 | 中国药科大学 | 新型的ha-sp偶联物及其应用 |
| CN111635464A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-09-08 | 上海易全化学有限公司 | 一种5-氨基酮戊酸葡聚糖酯的制备方法 |
| CN111714640A (zh) * | 2019-03-14 | 2020-09-29 | 北京和益源生物技术有限公司 | 一种糖修饰的叶酸衍生物制备的纳米运载颗粒及其应用 |
| CN111748002A (zh) * | 2019-03-14 | 2020-10-09 | 北京和益源生物技术有限公司 | 一种脱氧葡萄糖修饰的叶酸衍生物及其合成与应用 |
| US20220241283A1 (en) * | 2021-02-02 | 2022-08-04 | Seoul National University R&Db Foundation | Method for producing alginic acid-folic acid conjugate, alginic acid-folic acid conjugate produced thereby and pharmaceutical composition containing the same |
| CN115698094A (zh) * | 2020-03-05 | 2023-02-03 | 加拿大商新科生医股份有限公司 | 两亲性海藻酸-油酸大分子及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101791411A (zh) * | 2010-01-25 | 2010-08-04 | 中国药科大学 | 两亲性多糖偶联物及其药物组合物的制备和应用 |
-
2013
- 2013-06-29 CN CN201310270873.XA patent/CN103349783B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101791411A (zh) * | 2010-01-25 | 2010-08-04 | 中国药科大学 | 两亲性多糖偶联物及其药物组合物的制备和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王丹等: "两亲性多糖衍生物纳米胶束负载光敏剂的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 * |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104530256A (zh) * | 2014-12-18 | 2015-04-22 | 北京中医药大学 | 透明质酸维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备和用途 |
| CN105596294A (zh) * | 2015-12-21 | 2016-05-25 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种纳米靶向载药胶束及其制备方法和一种抗癌药物及其制备方法 |
| CN107303388A (zh) * | 2016-04-14 | 2017-10-31 | 北京大学 | 一种基于近红外染料‑透明质酸复合物的诊断治疗制剂 |
| CN106727314B (zh) * | 2017-01-13 | 2021-01-01 | 中国药科大学 | 一种基于透明质酸的光敏剂／抗肿瘤药物自组装纳米递药系统的制备与表征 |
| CN106727314A (zh) * | 2017-01-13 | 2017-05-31 | 中国药科大学 | 一种基于透明质酸的光敏剂／抗肿瘤药物自组装纳米递药系统的制备与表征 |
| CN111748002B (zh) * | 2019-03-14 | 2022-03-29 | 北京和益源生物技术有限公司 | 一种脱氧葡萄糖修饰的叶酸衍生物及其合成与应用 |
| CN111714640A (zh) * | 2019-03-14 | 2020-09-29 | 北京和益源生物技术有限公司 | 一种糖修饰的叶酸衍生物制备的纳米运载颗粒及其应用 |
| CN111748002A (zh) * | 2019-03-14 | 2020-10-09 | 北京和益源生物技术有限公司 | 一种脱氧葡萄糖修饰的叶酸衍生物及其合成与应用 |
| CN111714640B (zh) * | 2019-03-14 | 2023-02-14 | 北京和益源生物技术有限公司 | 一种糖修饰的叶酸衍生物制备的纳米运载颗粒及其应用 |
| CN110003888B (zh) * | 2019-04-11 | 2022-03-22 | 苏州大学 | 一种荧光纳米探针及其制备方法 |
| CN110003888A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-12 | 苏州大学 | 一种荧光纳米探针及其制备方法 |
| CN110496102A (zh) * | 2019-07-29 | 2019-11-26 | 中国药科大学 | 新型的ha-sp偶联物及其应用 |
| CN115698094A (zh) * | 2020-03-05 | 2023-02-03 | 加拿大商新科生医股份有限公司 | 两亲性海藻酸-油酸大分子及其制备方法 |
| CN111635464A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-09-08 | 上海易全化学有限公司 | 一种5-氨基酮戊酸葡聚糖酯的制备方法 |
| CN111635464B (zh) * | 2020-05-12 | 2022-03-25 | 上海易全化学有限公司 | 一种5-氨基酮戊酸葡聚糖酯的制备方法 |
| US20220241283A1 (en) * | 2021-02-02 | 2022-08-04 | Seoul National University R&Db Foundation | Method for producing alginic acid-folic acid conjugate, alginic acid-folic acid conjugate produced thereby and pharmaceutical composition containing the same |
| US11883406B2 (en) * | 2021-02-02 | 2024-01-30 | Seoul National University R&Db Foundation | Method for producing alginic acid-folic acid conjugate, alginic acid-folic acid conjugate produced thereby and pharmaceutical composition containing the same |
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