CN104940945A

CN104940945A - 一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN104940945A
Application number: CN201510432041.2A
Authority: CN
Inventors: 冯倩华; 侯琳; 张振中; 张媛媛; 单晓宁
Original assignee: Zhengzhou University
Current assignee: Zhengzhou University
Priority date: 2015-07-22
Filing date: 2015-07-22
Publication date: 2015-09-30
Anticipated expiration: 2035-07-22
Also published as: CN104940945B

Abstract

本发明涉及透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用，可有效解决硫化铜水溶性弱，靶向性差，生物相容性低的问题，方法是，中空介孔硫化铜纳米颗粒键合在硫化铜纳米粒的表面，连接上巯基乙胺，通过酰胺键反应修饰上透明质酸，成透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物，粒径为50-250nm，透明质酸和中空介孔硫化铜的质量比为1-3︰3，所述透明质酸分子量为40-400 kDa，本发明合成工艺简单，克服了传统光热疗、化疗技术的非靶向性难题，降低治疗过程中对正常组织的损伤，具有高效、可控的优势，药物负载特性强，具有生物相容性高、靶向性好、成本低廉等特点，经济和社会效益巨大。

Description

一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用。

背景技术

目前，纳米材料作为一种安全、高效的药用载体，在肿瘤的治疗中表现出广阔的发展空间，作为载体材料，应具有粒径小，毒性低，生物相容性好，性能稳定等特点。中空介孔硫化铜具有独特的笼状结构，载药能力突出，且粒径小，物化性质稳定，对生物体毒性小，通过对其修饰一些基团来增强其水溶性及靶向性，有利于载体在生物体内随着血液流动，到达肿瘤部位，减小对正常组织的损害，提高治疗效果。

硫化铜纳米粒作为一种新的光热转换材料，具有很强的近红外吸收，这是由于Cu²⁺间的d‐d能级之间的跃迁和铜硫族纳米颗粒的SPR效应共同作用的结果，其吸收峰不会随着离子的形状和大小改变，具有良好的光热稳定性和较高的光热转换效率，在肿瘤治疗方面具有很大的潜能。并且硫化铜纳米粒子有较低的生物毒性，能够被生物体所降解，因此作为光热转换材料在肿瘤治疗方面获得了广泛的关注。硫化铜纳米粒在近红外光下可以产生活性氧进行光动力学治疗，硫化铜纳米粒子在近红外的照射下，其内部会发生振动，可以用于光声成像，对肿瘤部位进行诊断治疗。通过将热疗、化疗、光声成像结合起来可有效降低副作用，并增强肿瘤治疗效果。

尽管硫化铜是一种极具潜力的光热化疗载体材料，但要实现其在制备肿瘤治疗药物中的应用，仍面临诸多挑战，如：水分散性性差，肿瘤细胞靶向性低等，难以实现药物的靶向转运及高效、低毒的光热联合化疗。因此，如何制备一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物，以实现在制备治疗肿瘤药物中的应用，是需要认真解决的技术问题。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用，可有效解决硫化铜水溶性弱，靶向性差，生物相容性低的问题。

本发明解决的技术方案是，中空介孔硫化铜纳米颗粒键合在硫化铜纳米粒的表面，连接上巯基乙胺，通过酰胺键反应修饰上透明质酸，成透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物，粒径为50-250nm，透明质酸和中空介孔硫化铜的质量比为1-3︰3，所述透明质酸分子量为40-400kDa。由以下步骤实现：

(1)、将0.7-0.8g的CuSO₄·5H₂O溶解于180-220ml水中，搅拌，加入5.5-6.5g聚乙烯吡咯烷酮，室温反应10～20min，加入1.1-1.3g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加10-14ml水合肼，搅拌5～10min，再加入1.2-1.4ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥46-50h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；

(2)、将中空介孔硫化铜纳米粒180-220mg加入180-220ml超纯水，超声分散10～30min，再在搅拌下加入360-440mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2～3遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH₂)；

(3)、将750-850mg透明质酸加入pH7～9的磷酸盐缓冲液46-54ml中，搅拌溶解，加入2-2.1g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1.2-1.3g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；

(4)、在冰浴下，将步骤(2)制备的氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH₂)用pH＝7～9的磷酸盐缓冲液分散，得分散液，将活化的透明质酸缓慢加入分散液中，升至室温，反应3h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷冻干燥，即得透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物(HA-CuS)。

本发明选择具有良好生物相容性、肿瘤细胞靶向性的天然多糖——透明质酸(hyaluronicacid,HA)，对硫化铜纳米粒进行修饰，构建了一种新型光热治疗联合化疗的纳米载体。该载体的合成工艺简单，并将硫化铜显著的光热敏感性、强大的药物负载特性，透明质酸独特的肿瘤细胞靶向性、辅助的抗肿瘤活性、良好的生物相容性有机的整合于一体，加之可以物理负载具有抗肿瘤活性的化疗药物，既可克服传统光热疗、化疗技术的非靶向性难题，降低治疗过程中对正常组织的损伤，与传统光热疗法相比具有高效、可控的优势，并且，其光热治疗与化疗技术的结合更体现癌症综合治疗，具有强大的药物负载特性，在透明质酸酶存在下具有敏感释药和近红外敏感释药的特性，构建热疗-化疗-肿瘤诊断综合治疗一体化转运系统，同时具有生物相容性高、靶向性好、成本低廉等特点，经济和社会效益巨大。

具体实施方式

以下结合实施例和具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中可由以下实施例给出

实施例1

本发明透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在具体实施中，由以下方法实现：

(1)、将0.75g的CuSO₄·5H₂O溶解于200ml水中，搅拌，加入6.0g聚乙烯吡咯烷酮，室温反应10～20min，加入1.2g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加12ml水合肼，搅拌5～10min，再加入1.29ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥48h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；

(2)、将中空介孔硫化铜纳米粒200mg加入200ml超纯水，超声分散10～30min，再在搅拌下加入400mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2～3遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH₂)；

(3)、将800mg透明质酸加入pH7～9的磷酸盐缓冲液50ml中，搅拌溶解，加入2.072g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1.24g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；

实施例2

本发明透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在具体实施中，由以下步骤实现：

(1)、将0.7g的CuSO₄·5H₂O溶解于180ml水中，搅拌，加入5.5g聚乙烯吡咯烷酮，室温反应10～20min，加入1.1g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加10ml水合肼，搅拌5～10min，再加入1.2ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥46-50h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；

(2)、将中空介孔硫化铜纳米粒180mg加入180ml超纯水，超声分散10～30min，再在搅拌下加入360mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2～3遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH₂)；

(3)、将750mg透明质酸加入pH7～9的磷酸盐缓冲液46ml中，搅拌溶解，加入2g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1.2g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；

实施例3

本发明透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物还可由以下方法实现：

(1)、将0.8g的CuSO₄·5H₂O溶解于220ml水中，搅拌，加入6.5g聚乙烯吡咯烷酮，室温反应10～20min，加入1.3g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加14ml水合肼，搅拌5～10min，再加入1.4ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥46-50h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；

(2)、将中空介孔硫化铜纳米粒220mg加入220ml超纯水，超声分散10～30min，再在搅拌下加入440mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2～3遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH₂)；

(3)、将850mg透明质酸加入pH7～9的磷酸盐缓冲液54ml中，搅拌溶解，加入2.1g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1.3g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；

所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物与药学活性或药理活性分子相结合在制备纳米载药系统中的应用，所述药学活性或药理活性分子为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、羟基喜树碱、米托蒽醌。

所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在制备抗肿瘤药物(组合物)中的应用。

所述的抗肿瘤药物在制备抗肿瘤的注射剂、口服剂或植入给药剂中的应用。

所述的抗肿瘤药物在制备光热治疗、光声成像、实现热疗-化疗-肿瘤诊断综合治疗一体化药物中的应用。

透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在制备抗肿瘤药物(组合物)中的应用，方法是，透明质酸修饰的中空介孔硫化铜于磷酸盐缓冲液中探头超声溶解，与经适当溶剂溶解的抗肿瘤药物混合，经超声或高压均质处理，室温搅拌24小时后采用离心法、透析法或超滤法除去有机溶剂及游离药物，冻干制得粒径为10～1000nm的抗肿瘤药物组合物，所述适当溶剂，指药学上使用的能溶解该药物的溶剂，如乙醇、超纯水或水。

所述的抗肿瘤药物组合物，包含本发明所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜和药学活性或药理活性分子，其中该药学活性或药理活性分子，优选自阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、羟基喜树碱、米托蒽醌等抗肿瘤药物。

所述的抗肿瘤药物组合物，可以用于注射、口服或植入给药。其中注射给药优选注射剂、冻干粉针，口服给药优选自片剂、胶囊剂、丸剂、糖浆剂、颗粒剂，植入给药优选自凝胶剂，溶液剂。

经科学试验，本发明所制得的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物具有制备方法简单，并将硫化铜显著的光热敏感性、强大的药物负载特性，透明质酸独特的肿瘤细胞靶向性、辅助的抗肿瘤活性、良好的生物相容性有机的整合于一体，加之可以物理负载具有抗肿瘤活性的化疗药物，既可克服传统光热疗、化疗技术的非靶向性难题，降低治疗过程中对正常组织的损伤，与传统光热疗法相比具有高效、可控的优势，并且，其光热治疗与化疗技术的结合更体现癌症综合治疗的问题。有关资料如下：

一、负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的表征

1、透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物中阿霉素含量的测定

采用紫外分光光度法，于482nm波长处测定阿霉素的含量。以公式(1)计算样品的载药量。载药量达到73％左右。

2、负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物粒径和电位的测定

取适量负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜分散于水中，用Nano-ZS90型激光纳米粒度分析仪测得其粒径和电位分别为135nm和18.4±2.8mV。

二、负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的药物释放实验

分别取4份HA-CuS/DOX纳米复合物，分别分散于50ml pH7.4磷酸盐缓冲盐，pH5.5磷酸盐缓冲液，含透明质酸酶的pH7.4磷酸盐缓冲液，含透明质酸酶的pH5.5磷酸盐缓冲液分散介质中，放置于摇床中(37℃，100rpm)，每隔2h取样0.5ml，之后再加入0.5ml的释放介质，激光组在每个时间点用808nm激光(2W/cm²)照射10min。用高效液相检测样品，释药14h后，在无透明质酸酶存在时，HA-CuS/DOX纳米复合物在pH 5.5磷酸盐缓冲液中较pH7.4磷酸盐缓冲盐的释药率仅高4.4％，激光组较非激光组释药率高11.1％；而在有透明质酸酶存在时，HA-CuS/DOX纳米复合物在pH 5.5磷酸盐缓冲液中较pH7.4磷酸盐缓冲盐的释药率高26.6％，激光组较非激光组释药率高33.2％。该结果说明，仅有透明质酸酶将透明质酸降解后，负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物才得以有pH响应性释药。

三、负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的细胞增殖抑制实验

采用SRB法，选择对数生长期的MCF-7人乳腺癌细胞，调整细胞数为5×10⁴/ml接种于96孔培养板，每孔100μ1(边缘孔用无菌PBS填充)，细胞贴壁生长24h后加药，依次为空白组、CuS组、HA-CuS组、DOX组、CuS/DOX组、HA-CuS/DOX组，药物终浓度设为4μg/ml，并分设激光组(2W/cm²，3min)和非激光组。每组设6个复孔。24h后，每孔加入50μl 4℃预冷的50％三氯乙酸(TCA)固定细胞，固定10min后移入4℃冰箱固定1h，取出弃去固定液，用去离子水洗5遍，甩干，室温自然干燥。室温晾干后，每孔加入SRB染液50μ1，室温避光放置15～30min染色，弃染液，用1％的冰醋酸洗5遍，室温干燥。之后，用150μl非缓冲Tris碱液(10mM，pH＝10.5)溶解与细胞蛋白结合的染料，摇床微振荡(37℃，100rpm，10min),于酶标仪515nm波长处测每个小孔的OD值，计算肿瘤细胞生长抑制率(％)＝(1-实验组OD值/对照组OD值)×100％，计算得到CuS组、CuS-laser组、HA-CuS组、HA-CuS-laser组、DOX组、DOX-laser组、CuS/DOX组、CuS/DOX-laser组、HA-CuS/DOX组、HA-CuS/DOX-laser组各组的细胞生长抑制率分别为：3.7％，22.4％，6.2％，28.8％，50.3％，54.2％，48.3％，71.5％，50.8％，81.6％。结果表明，载体CuS及HA-CuS在实验剂量下对细胞无明显毒性，但在近红外光(808nm)照射下有明显的光热效应；在无近红外光照射时制剂组与原料药组的细胞毒性差别不大，而在近红外光照射时HA-CuS/DOX对细胞杀伤效果最强，则是化疗与热疗协同治疗的结果。

四、负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的细胞摄取实验

选择对数生长期的MCF-7人乳腺癌细胞，以3×10⁵个/孔接种于6孔板，每孔2ml，贴壁生长24h后加药，依次为DOX组、CuS/DOX组、HA-CuS/DOX组，药物终浓度设为4μg/ml，孵育时间设为0.5h，1h，2h。加药后在37℃，5％CO₂条件下培养后，将孔内含药培养基弃去，每孔用1ml PBS洗2～3遍，加入500μl不含EDTA的胰酶消化细胞，加1ml培养基终止消化，吹打，直至细胞与壁分离，将细胞悬液移入10ml离心管中，离心弃去上清，加PBS重悬，用流式细胞仪测定，发现MCF-7人乳腺癌细胞0.5h对DOX、CuS/DOX和HA-CuS/DOX的摄取量分别为：41.3％、21.5％和22.8％；1h时的摄取量分别为：88.6％、43.4％和72.9％；2h时的摄取量分别为：99.8％、74.3％和99.2％。结果表明，水溶性小分子原料药DOX细胞摄取最快，1h时细胞对其摄取量几近饱和；而CuS/DOX和HA-CuS/DOX纳米制剂的分子量较大，细胞摄取较慢，其中HA-CuS/DOX的靶头透明质酸(HA)可被癌细胞表面的CD44受体识别，经受体介导内吞入细胞内部，2h时MCF-7人乳腺癌细胞对DOX和HA-CuS/DOX摄取量基本相同。

五、负载阿霉素的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的药效学实验

购买昆明小鼠(雌性，3～4周龄)，在小鼠的右上肢背部皮下接种S-180腹水瘤细胞，7天后测量肿瘤体积，取60只肿瘤体积≥100mm³且肿瘤体积和体重相似的小鼠，将其随机分为10组，每组6只。具体分组如下：生理盐水组、生理盐水-laser组、HA-CuS组、HA-CuS-laser组、DOX组、DOX-laser组、CuS/DOX组、CuS/DOX-laser组、HA-CuS/DOX组、HA-CuS/DOX-laser组，激光组使用的光源为808nm近红外激光，功率为2W/cm²，给药3h后激光照射肿瘤部位，一次照射时间为1min，10组小鼠的给药方式均采用尾静脉注射，没两天给药一次，共给药7次。整个实验过程中保证小鼠每日正常饮食，每两天对小鼠进行称重，并使用数显游标卡尺测量荷瘤小鼠肉瘤的长径(A)与短径(B)，按公式肿瘤体积V＝A×B²/2计算肿瘤体积。记录的数据显示，HA-CuS组、HA-CuS-laser组、DOX组、DOX-laser组、CuS/DOX组、CuS/DOX-laser组、HA-CuS/DOX组、HA-CuS/DOX-laser组各组的抑瘤率分别为3.35％，25.41％，43.96％，45.58％，53.21％，72.64％，66.75％，80.87％。结果表明，HA-CuS/DOX-laser组的药效显著，说明HA-CuS/DOX肿瘤靶向给药系统的化疗和808nm激光热疗联合可以显著增强肿瘤的治疗效果。

实验表明，本发明与现有技术相比，具有以下突出的有益技术效果：

(1)本发明选择的中空介孔硫化铜本身具有良好的光热稳定性和较高的光热转换效率，在近红外光下可以产生活性氧进行光动力学治疗，并且硫化铜可以作为成像造影剂用于光声成像，对肿瘤进行诊断治疗。

(2)本发明提供的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜结构较为简单，具有优良的生物相容性、水分散性和稳定性，还能够实现肿瘤特异性靶向，并保留了中空介孔硫化铜的光热治疗活性；

(3)本发明提供的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜，能够物理负载抗肿瘤药物，其中透明质酸对于中空介孔硫化铜具有盖帽作用，可以防止药物的泄漏，提高了药物负载量。

(4)本发明提供的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜载药系统，在透明质酸酶存在下具有pH敏感释药和近红外敏感释药的特性。

总之，本发明具有强大的药物负载特性，在透明质酸酶存在下具有pH敏感释药和近红外敏感释药的特性，构建热疗-化疗-肿瘤诊断综合治疗一体化转运系统，同时具有生物相容性高、靶向性好、成本低廉等特点，经济和社会效益巨大。

Claims

1.一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物，其特征在于，中空介孔硫化铜纳米颗粒键合在硫化铜纳米粒的表面，连接上巯基乙胺，通过酰胺键反应修饰上透明质酸，成透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物，粒径为50-250nm，透明质酸和中空介孔硫化铜的质量比为1-3︰3，所述透明质酸分子量为40-400 kDa。

2.权利要求1所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

（1）、将0.7-0.8g的CuSO₄·5H₂O溶解于180-220ml水中，搅拌，加入5.5-6.5g聚乙烯吡咯烷酮，室温反应10~20min，加入1.1-1.3g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加10-14ml水合肼，搅拌5~10min，再加入1.2-1.4ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥46-50h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；

（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒180-220mg加入180-220ml超纯水，超声分散10~30min，再在搅拌下加入360-440mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物；

（3）、将750-850mg透明质酸加入pH7~9的磷酸盐缓冲液46-54ml中，搅拌溶解，加入2-2.1g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺、1.2-1.3g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；

（4）、在冰浴下，将步骤（2）制备的氨基化中空介孔硫化铜复合物用pH=7~9的磷酸盐缓冲液分散，得分散液，将活化的透明质酸缓慢加入分散液中，升至室温，反应3h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷冻干燥，即得透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物。

3.根据权利要求2所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：

（1）、将0.75g的CuSO₄·5H₂O溶解于200ml水中，搅拌，加入6.0g聚乙烯吡咯烷酮，室温反应10~20min，加入1.2g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加12ml水合肼，搅拌5~10min，再加入1.29ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥48h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；

（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒200mg加入200ml超纯水，超声分散10~30min，再在搅拌下加入400mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物；

（3）、将800mg透明质酸加入pH7~9的磷酸盐缓冲液50ml中，搅拌溶解，加入2.072g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺、1.24g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；

4.权利要求1所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物与药学活性或药理活性分子相结合在制备纳米载药系统中的应用，所述药学活性或药理活性分子为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、羟基喜树碱、米托蒽醌。

5.权利要求1所述的透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

6.权利要求5所述的抗肿瘤药物在制备抗肿瘤的注射剂、口服剂或植入给药剂中的应用。

7.权利要求5所述的抗肿瘤药物在制备光热治疗、光声成像、实现热疗-化疗-肿瘤诊断综合治疗一体化药物中的应用。