CN103320363B - 一种用于分离筛选乳酸菌的培养基、配制方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于分离筛选乳酸菌的培养基，所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂用量为1000ml的量，还含有胰蛋白胨5.0～15.0g、牛肉膏5.0～15.0g、酵母提取物2.0～10.0g、柠檬酸二铵1.0～3.0g、葡萄糖15.0～25.0g、吐温-800.2～2.0mL、乙酸钠2.0～8.0g，琼脂15.0～20.0g、碳酸钙2.0～30.0g、含有0.01～0.5g甲基红和0.01～0.7g溴百里酚蓝的复合酸碱指示剂、抗坏血酸0.5～5.0g、L-半胱氨酸-HCl0.1～0.5g、由多粘菌素B250000～500000IU和萘啶酮酸0.01～0.05g组成的选择性抗生素，培养基的pH为6.8，所述溶剂由主溶剂和副溶剂组成，其中，主溶剂为蒸馏水或陈海水，副溶剂为盐溶液。这种培养基在分离筛选乳酸菌时具有准确度高、鉴定现象明显等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物筛选用培养基，特别涉及一种用于分离筛选乳酸菌的培养基。
背景技术
乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，生长于厌氧或者兼性厌氧环境中。乳酸菌只是一种习惯叫法，并不是微生物分类学上的名称。这是一群相当庞杂的细菌，分类有数百个属，很难把是否产生乳酸作为细菌的分类标准。乳酸菌细胞形态有球状、类球状、杆状或短杆状等。目前研究表明，乳酸菌除个别属对人、畜致病，绝大多数对人畜无害，而革兰氏阳性乳酸菌占据了绝大多数，如目前大量应用的乳杆菌属、片球菌属、明串珠菌属、乳球菌属、双歧杆菌属、肠球菌属等都为革兰氏阳性。大量的研究表明，这类乳酸菌在动物体内可以降低pH值，降解氨、吲哚、粪臭素等有害物质，增强机体的免疫功能，产生抑菌代谢产物，如乳酸菌肽、细菌素、乳酸、过氧化氢、乙酸等，从而阻止和抑制致病菌的侵入和定植，维持肠道中正常的微生态平衡，提高机体的抗病能力，对许多革兰氏阳性菌(G+)及革兰氏阴性菌(G-)有强烈的抑制作用，可抑制肠道内腐败菌的生长繁殖和腐败产物的产生。因此，这类乳酸菌被作为饲料添加剂而广泛应用于禽畜养殖中，防治腹泻、下痢、肠炎等肠道功能紊乱的许多疾病。在农业部105号公告中所允许使用的12种饲料级微生物中，7种为乳酸菌，乳酸菌在养殖、环境保护和人体保健方面起到积极重要的作用。
现阶段，乳酸菌的分离筛选培养基为MRS培养基、番茄汁琼脂培养基(TJA)等，但这些培养基都存在乳酸菌生长后鉴别现象不明显，杂菌生长过多，分离纯化所得到乳酸菌概率低等问题，这使得从自然中分离纯化得到乳酸菌的劳动量大大增加，降低了分离筛选效率。
发明内容
为弥补现有技术的不足，本发明提供了一种可有效提高乳酸菌的筛选效率的培养基，这种培养基在分离筛选乳酸菌时具有准确度高、鉴定现象明显等特点。
本发明解决其技术问题，采用的技术方案如下：
一种用于分离筛选乳酸菌的培养基，所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂用量为1000ml的量，还含有胰蛋白胨5.0～15.0g、牛肉膏5.0～15.0g、酵母提取物2.0～10.0g、柠檬酸二铵1.0～3.0g、葡萄糖15.0～25.0g、吐温-800.2～2.0mL、乙酸钠2.0～8.0g，琼脂15.0～20.0g、碳酸钙2.0～30.0g、含有0.01～0.5g甲基红和0.01～0.7g溴百里酚蓝的复合酸碱指示剂、抗坏血酸0.5～5.0g、L-半胱氨酸-HCl0.1～0.5g、由多粘菌素B250000～500000IU和萘啶酮酸0.01～0.05g组成的选择性抗生素，培养基的pH为6.8，所述溶剂由主溶剂和副溶剂组成，其中，主溶剂为蒸馏水或陈海水，副溶剂为盐溶液。
本发明配方中所用的复合酸碱指示剂在不同pH条件下其颜色变化为：pH在4.0及低于4.0时呈红色，随着pH值逐渐增大到5.3时，颜色逐渐由红色变化为黄色，而随着pH值的继续增大，当pH值由5.3逐渐增大到6.8时，颜色逐渐由黄色变化为绿色（可参见附图1）。
优选的，培养基配方中，相对于溶剂为1000ml的量，所含有的选择性抗生素由多粘菌素B250000IU和萘啶酮酸0.02g组成。
优选的，培养基配方中，相对于溶剂为1000ml的量，所含的复合酸碱指示剂中含有甲基红0.05～0.5g、溴百里酚蓝0.05～0.7g。更为优选的，培养基配方中，相对于溶剂为1000ml的量，所含的复合酸碱指示剂中含有甲基红0.05g、溴百里酚蓝0.07g。
作为一种优选方案，培养基配方中，相对于溶剂为1000ml的量，所含的复合酸碱指示剂中含有甲基红0.05g、溴百里酚蓝0.07g，所含有的选择性抗生素由多粘菌素B250000IU和萘啶酮酸0.02g组成，抗坏血酸为1.0g、L-半胱氨酸-HCl0.2g。
所述盐溶液用陈海水或蒸馏水配制，按如下配方配制：基于每1000ml陈海水或蒸馏水，溶有磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g。
所述陈海水可为取自离陆地较远的污染较少的海水，并放置于黑暗处数周；或者用蒸馏水配制而成，按照如下配方配制：基于每1L蒸馏水，溶有NaCl24g，MgCl25.1g，Na2SO44g，CaCl21.1g，KCl0.7g，NaHCO30.2g，KBr0.1g，H3BO30.027g，SrCl20.024g，NaF0.003g。
优选的，相对于溶剂为1000ml的量中，副溶剂为20～200ml。
作为一种优选方案，所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂为1000ml的量，含有胰蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、柠檬酸二铵2.0g、葡萄糖20.0g、吐温-801.0mL、乙酸钠5.0g、琼脂18.0g、碳酸钙10.0g、含有0.05g甲基红和0.07g溴百里酚蓝的复合酸碱指示剂、由多粘菌素B250000IU和萘啶酮酸0.02g组成的选择性抗生素、抗坏血酸1.0g，L-半胱氨酸-HCl0.2g，副溶剂与主溶剂的体积比为1：9，培养基的pH为6.8。
所述主溶剂为陈海水，采用陈海水作为主溶剂，有利于海水鱼类肠道乳酸菌的分离筛选。
本发明第二方面还提供一种配制上文所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基的方法，包括如下步骤：
（1）按照配方称取各组分，将胰蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、葡萄糖、柠檬酸二铵、吐温、乙酸钠、琼脂、碳酸钙放入容器中，加入主溶剂、副溶剂，调节pH至6.8，121℃灭菌15分钟；
（2）将多粘菌素、萘啶酮酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸-HCl溶于水中，过滤灭菌；
（3）将步骤（1）灭菌后的混合物冷却至50℃，同步骤（2）得到的溶液及复合酸碱指示剂混合在一起混匀。
上文所述的培养基在分离筛选海水鱼类肠道中的乳酸菌的应用。
本发明提供的技术方案具有如下有益效果：
本发明提供了一种在乳酸菌的分离筛选中具有准确度高、鉴定现象明显等特点的培养基。该培养基中添加了由多粘菌素B和奈啶酮酸按特定比例构成的选择性抗生素，可有效的抑制杂菌的生长；同时培养基中还加入由甲基红和溴百里酚蓝按一定量复配构成的复配酸碱指示剂，在筛选培养过程中由于乳酸菌产酸，在乳酸菌的菌落周围会由于PH值的降低而不再显示绿色，产酸能力不强的乳酸菌周边显黄色，产酸能力强的菌株周边显红色。因此本培养基可以依据颜色改变的程度，分辨出不同产酸能力的乳酸菌菌株，鉴定现象明显，提高了准确度；所加入的抗坏血酸和L-半胱氨酸-HCl能够降低培养基中氧气的含量，促进乳酸菌的生长。
本发明的乳酸菌筛选培养基相对于常规的分离乳酸菌的培养基，更有利于区分乳酸菌目标菌，加强了对杂菌生长的抑制，提高了乳酸菌的筛选效率，能够快速便捷从海水鱼肠道中分离筛选到革兰氏阳性乳酸菌。
附图说明
图1为复合酸碱指示剂在不同pH条件下的颜色。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1：
本实施例用于分离筛选乳酸菌的培养基配方如下：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，柠檬酸二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，乙酸钠5.0g，琼脂18.0g、碳酸钙10.0g、含有甲基红0.05g和溴百里酚蓝0.07g的复合酸碱指示剂、多粘菌素B250000IU、萘啶酮酸0.02g、抗坏血酸1.0g、L-半胱氨酸-HCl0.2g，盐溶液100mL、陈海水900mL，pH6.8。
本实施例的培养基配方中，盐溶液的配方为：磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g，陈海水1000mL。
复合酸碱指示剂可用适量乙醇溶解甲基红和溴百里酚蓝进行配制，例如用100ml乙醇溶解甲基红5.0g和溴百里酚蓝7.0g（这种配制方法也可适用于其他实施例中）。这样配制的复合酸碱指示剂，在实施例1配制培养基时添加1ml复合酸碱指示剂即可。
本实施例的培养基配方中陈海水为取自离陆地较远的污染较少的海水，并放置于黑暗处数周。
培养基按如下步骤配制：
（1）按照配方称取各组分，将胰蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、葡萄糖、柠檬酸二铵、吐温、乙酸钠、琼脂、碳酸钙放入容器中，加入陈海水、盐溶液，调节pH至6.8，121℃灭菌15分钟；
（2）将多粘菌素、萘啶酮酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸-HCl溶于水中，过滤灭菌；
（3）将步骤1灭菌后的混合物冷却至50℃，同步骤（2）得到的溶液及预先配好的复合酸碱指示剂混合在一起混匀，即配得本发明的培养基。
分离筛选：
从深圳近海采集的鲮鱼、鲻鱼、塘鳢各一只，解剖取肠道，刮取肠道内层，研磨后，按照10、100、1000倍稀释涂板，37℃培养24小时，挑取发黄或发红、有明显溶钙圈的菌落，划线本实施例配制的培养基，经4次纯化后，进行革兰氏染色、触酶试验、硝酸盐还原试验和16S rDNA测序，结果发现分离到乳酸菌9株，分别为：乳酸乳球菌乳酸亚种7株，屎肠球菌1株，韦氏肠球菌1株。16S rDNA测序比对分析结果见下表1。
表1
实施例2：
本实施例用于分离筛选乳酸菌的培养基配方如下：胰蛋白胨5.0g，牛肉膏15.0g，酵母提取物2.0g，柠檬酸二铵1.0g，葡萄糖25.0g，吐温-802.0mL，乙酸钠5.0g，琼脂18.0g、碳酸钙10.0g、含有甲基红0.01g和溴百里酚蓝0.01g的复合酸碱指示剂、多粘菌素B500000IU、萘啶酮酸0.02g、抗坏血酸5.0g、L-半胱氨酸-HCl0.5g，盐溶液100mL、陈海水900mL，pH6.8。
本实施例的培养基配方中，盐溶液的配方为：磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g，陈海水1000mL。
本实施例的培养基配方中陈海水为取自离陆地较远的污染较少的海水，并放置于黑暗处数周。
培养基按如下步骤配制：与实施例1相同，不再赘述。
分离筛选：
从深圳近海采集的跳跳鱼、泥孟鱼各一只，解剖取肠道，刮取肠道内层，研磨后，按照10、100、1000倍稀释涂板，37℃培养24小时，挑取发黄或发红、有明显溶钙圈的菌落，划线本实施例配制的培养基，经4次纯化后，进行革兰氏染色、触酶试验、硝酸盐还原试验和16S rDNA测序，结果发现分离到乳酸菌5株，分别为：格氏乳球菌1株，乳酸乳球菌乳酸亚种1株，屎肠球菌1株，粪肠球菌2株。16S rDNA测序比对分析结果见下表2。
表2
实施例3：
本实施例用于分离筛选乳酸菌的培养基配方如下：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，柠檬酸二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，乙酸钠5.0g，琼脂18.0g、碳酸钙4.0g、含有甲基红0.5g和溴百里酚蓝0.7g的复合酸碱指示剂、多粘菌素B500000IU、萘啶酮酸0.05g、抗坏血酸1.0g、L-半胱氨酸-HCl0.1g、盐溶液50mL、蒸馏水950mL，pH6.8。
本实施例的培养基配方中盐溶液的配方为：磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g，蒸馏水1000mL。
培养基按如下步骤配制：与实施例1相同，不再赘述。
分离筛选：从陆地养殖场采集贝壳、河豚、罗氏沼虾、牛蛙、草鱼各一只，解剖取肠道，刮取肠道内层，研磨后，按照10、100、1000倍稀释涂板，37℃培养24小时，挑取发黄或发红、有明显溶钙圈的菌落，划线本实施例配制的培养基。经4次纯化后，进行革兰氏染色、触酶试验、硝酸盐还原试验和16S rDNA测序，结果发现分离到乳酸菌15株，分别为：植物乳杆菌植物亚种2株，乳酸乳球菌乳酸亚种5株，戊糖乳杆菌1株，粪肠球菌3株，格氏乳球菌4株。16S rDNA测序比对分析结果见下表3。
表3
实施例4：
本实施例用于分离筛选乳酸菌的培养基配方如下：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，柠檬酸二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，乙酸钠5.0g，琼脂18.0g、碳酸钙10.0g、含有甲基红0.05g和溴百里酚蓝0.07g的复合酸碱指示剂、多粘菌素B250000IU、萘啶酮酸0.02g、抗坏血酸1.0g、L-半胱氨酸-HCL0.2g，盐溶液100mL、陈海水900mL，pH6.8。
本实施例的培养基配方中盐溶液的配方为：磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g，陈海水1000mL。
本发明的培养基配方中陈海水为采用人工配置的方法，人工配制陈海水的配方为：NaCl24g，MgCl25.1g，Na2SO44g，CaCl21.1g，KCl0.7g，NaHCO30.2g，KBr0.1g，H3BO30.027g，SrCl20.024g，NaF0.003g，蒸馏水1000mL。
培养基按如下步骤配制：与实施例1相同，不再赘述。
分离筛选：取新鲜近海海水，吸取200μL，分别涂布于本实施例配制的培养基及常规的MRS培养基、MC培养基、改良TJA培养基上，37℃培养24小时。上述三种常规培养基均为市售的适合乳酸菌生长的培养基，其中MRS培养基配方为：蛋白陈10.0g，牛肉粉5.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，琼脂粉15.0g，蒸馏水1000mL。MC培养基配方为：大豆蛋白胨5g，牛肉粉3g，酵母粉3g，葡萄糖20g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂15g，中性红0.05g，蒸馏水1000mL。改良TJA培养基的配方为：番茄汁50ml，酵母膏粉5g，牛肉膏粉10g，乳糖20g，葡萄糖2g，磷酸氢二钾2g，吐温-801g，乙酸钠5g，琼脂，15g，蒸馏水950mL。
结果显示（参见表4），本实施例配制的培养基平板长出1个菌落，且菌落表现出明显的橙黄色，对其进行菌落纯化后，经生理生化指标测试，16S rDNA测序分析证实，生长出的细菌为乳酸乳球菌。而常规的MRS培养基、MC培养基、改良TJA培养基上菌落数都较多，革兰氏染色结果为阴性、触酶试验为阳性即排除其为乳酸菌。结果表明本实施例配制的培养基可以明显抑制杂菌的生长，从而利于发现乳酸菌目标菌。分析结果见下表4。
表4
| 菌落数量 | 乳酸菌数量 | |
| 本实施例培养基 | 1 | 1 |
| 改良TJA培养基 | 27 | 0 |
| MC培养基 | 81 | 0 |
| MRS培养基 | 178 | 0 |
实施例5：
本实施例的用于分离筛选乳酸菌的培养基配方如下：胰蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，柠檬酸二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，乙酸钠5.0g，琼脂18.0g、碳酸钙10.0g、含有甲基红0.05g和溴百里酚蓝0.07g的复合酸碱指示剂、多粘菌素B250000IU、萘啶酮酸0.02g、抗坏血酸1.0g、L-半胱氨酸-HCl0.2g，盐溶液100mL、蒸馏水900mL，pH6.8。
本实施例的培养基配方中盐溶液的配方为：磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g，蒸馏水1000mL。
本实施例的培养基配方中陈海水为采用人工配置的方法，人工配制陈海水的配方为：NaCl24g，MgCl25.1g，Na2SO44g，CaCl21.1g，KCl0.7g，NaHCO30.2g，KBr0.1g，H3BO30.027g，SrCl20.024g，NaF0.003g，蒸馏水1000mL。
分离筛选：
从水产品市场购买鲫鱼一只，解剖取肠道，刮取肠道内层，研磨后，按照100倍稀释后，吸取100μL，分别涂布于本实施例配置培养基及常规的MRS培养基、MC培养基、改良TJA培养基上，37℃培养24小时。其中MRS培养基配方为：蛋白陈10.0g，牛肉粉5.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，琼脂粉15.0g，蒸馏水1000mL。MC培养基配方为：大豆蛋白胨5g，牛肉粉3g，酵母粉3g，葡萄糖20g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂15g，中性红0.05g，蒸馏水1000mL。改良TJA培养基的配方为：番茄汁50ml，酵母膏粉5g，牛肉膏粉10g，乳糖20g，葡萄糖2g，磷酸氢二钾2g，吐温-801g，乙酸钠5g，琼脂，15g，蒸馏水950mL。
结果显示（参见表5），本实施例配制的培养基平板上菌落相对较少，而常规的MRS培养基、MC培养基、改良TJA培养基上菌落数都较多。通过革兰氏染色、触酶试验和16S rDNA测序，对平板上的菌落进行了鉴定，结果在下表（参见表5）。结果表明，常规的MRS培养基、MC培养基、改良TJA培养基上菌落数较多，从而影响了乳酸菌菌落的正常的分离筛选。由于本发明培养基可以明显抑制杂菌的生长，且菌落现象明显，从而利于发现乳酸菌目标菌，大大减少筛选的工作量，提高了筛选效率。
表5
| 菌落数量 | 乳酸菌数量 | |
| 本实施例培养基 | 43 | 24 |
| 改良TJA培养基 | 284 | 0 |
| MC培养基 | 422 | 10 |
| MRS培养基 | 311 | 22 |
Claims (8)
1.一种用于分离筛选乳酸菌的培养基，其特征在于，所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂用量为1000ml的量，还含有胰蛋白胨5.0～15.0g、牛肉膏5.0～15.0g、酵母提取物2.0～10.0g、柠檬酸二铵1.0～3.0g、葡萄糖15.0～25.0g、吐温-80 0.2～2.0mL、乙酸钠2.0～8.0g，琼脂15.0～20.0g、碳酸钙2.0～30.0g、含有0.01～0.5g甲基红和0.01～0.7g溴百里酚蓝的复合酸碱指示剂、抗坏血酸0.5～5.0g、L-半胱氨酸-HCl 0.1～0.5g、由多粘菌素B250000～500000IU和萘啶酮酸0.01～0.05g组成的选择性抗生素，培养基的pH为6.8，所述溶剂由主溶剂和副溶剂组成，其中，主溶剂为蒸馏水或陈海水，副溶剂为盐溶液；
所述陈海水为取自离陆地较远的污染较少的海水，并放置于黑暗处数周；或者，所述陈海水为用蒸馏水配制而成，按照如下配方配制：基于每1L蒸馏水，溶有NaCl 24g，MgCl2 5.1g，Na2SO4 4g，CaCl2 1.1g，KCl 0.7g，NaHCO3 0.2g，KBr 0.1g，H3BO3 0.027g，SrCl2 0.024g，NaF 0.003g；
所述盐溶液为用陈海水或蒸馏水配制，按如下配方配制：基于每1000ml陈海水或蒸馏水，溶有磷酸氢二钾10.0g，磷酸二氢钾10.0g，七水硫酸镁2.0g，硫酸锰0.5g，氯化钙2g。
2.根据权利要求1所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基，其特征在于，培养基配方中，相对于溶剂为1000ml的量，所含有的选择性抗生素由多粘菌素B 250000IU和萘啶酮酸0.02g组成。
3.根据权利要求1或2所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基，其特征在于，培养基配方中，相对于溶剂为1000ml的量，所含的复合酸碱指示剂中含有甲基红0.05～0.5g、溴百里酚蓝0.05～0.7g。
4.根据权利要求1所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基，其特征在于，相对于溶剂为1000ml的量中，副溶剂为20～200ml。
5.根据权利要求1所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基，其特征在于，所述培养基的配方包括如下组分：相对于溶剂为1000ml的量，含有胰蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、柠檬酸二铵2.0g、葡萄糖20.0g、吐温-80 1.0mL、乙酸钠5.0g、琼脂18.0g、碳酸钙10.0g、含有0.05g甲基红和0.07g溴百里酚蓝的复合酸碱指示剂、由多粘菌素B 250000IU和萘啶酮酸0.02g组成的选择性抗生素、抗坏血酸1.0g、L-半胱氨酸-HCl 0.2g，副溶剂与主溶剂的体积比为1：9，培养基的pH为6.8。
6.根据权利要求1所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基，其特征在于，所述主溶剂为陈海水。
7.一种配制权利要求1～6任一项所述的用于分离筛选乳酸菌的培养基的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按照配方称取各组分，将胰蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、葡萄糖、柠檬酸二铵、吐温-80、乙酸钠、琼脂、碳酸钙放入容器中，加入主溶剂、副溶剂，调节pH至6.8，121℃灭菌15分钟；
(2)将多粘菌素B、萘啶酮酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸-HCl溶于水中，过滤灭菌；
(3)将步骤(1)灭菌后的混合物冷却至50℃，同步骤(2)得到的溶液及复合酸碱指示剂混合在一起混匀。
8.权利要求1～6任一项所述的培养基在分离筛选海水鱼类肠道中的乳酸菌的应用。
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|---|---|---|---|
| CN201310277525.5A CN103320363B (zh) | 2013-07-03 | 2013-07-03 | 一种用于分离筛选乳酸菌的培养基、配制方法及应用 |
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