CN103301164B - 一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法 - Google Patents
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Abstract
一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，它涉及高分子杂质去除工艺的评价方法，本发明是为解决现有中药注射剂生产工艺过程中，高分子杂质去除工艺的方法不明确的问题，或已知高分子杂质去除方法，但缺乏有效地评价方法进行验证或者证明的问题，对中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物以及中药注射剂浓配药液的超滤工序过程中浓配药液进行高分子杂质的检测，明晰在整个工艺流程中高分子杂质的消除轨迹，通过上述方法评价相应工序去除高分子效果，并评价工艺的合理性与科学性，该方法也可以对工业化生产线进行评价，并对超滤技术在中药注射剂制剂领域的应用提供一种评价方法。
Description
技术领域
本发明涉及中药注射剂高分子杂质去除工艺的评价方法。
背景技术
中药注射剂是由一种或多种植物药材或者动物药材提取精制而成，在提取过程中存在部分高分子物质，如蛋白质、多糖、鞣质等。此类物质一旦大量引入中药注射剂成品，将引起中药注射剂的一系列不良反应或者不良事件。因此国家食品药品监督管理局在《中药注射剂安全性再评价生产工艺评价技术原则(试行)》指出“生产工艺过程中应对高分子杂质进行控制。如采用超滤等方法去除注射剂中高分子杂质(包括聚合物等)的，应不影响药品的有效成份。应明确相关方法和条件。”因此建立一种生产工艺过程中的高分子杂质去除程度评价方法，该方法的建立对中药注射剂现有工艺的合理性与科学性提供了一种评价方法，同时也为超滤技术在中药注射剂制剂领域的应用提供一种评价方法。
现有有关中药注射剂的高分子杂质的文献或专利公开的检测方法与本发明的检测方法近似，均采用葡聚糖凝胶色谱柱HPLC法分析，采用已知分子量的标准物质(如右旋糖酐、胰岛素)定位，判断高分子是否存在或者用于标定分子量的分布区间，该方法在生物化学领域是常规方法，在中药领域较少采用，且该方法由于采用高效液相法，进样量相对较少而导致的检测灵敏度相对较低。
现在公布的方法一般均应用于中药注射剂成品的高分子杂质限量检测，注射液中所含固体物的质量浓度不超过10％，且高分子去除工艺后还添加大量的辅料如等渗调节剂氯化钠，增溶剂吐温-80等，真正来源于植物的提取物很少。如中国专利201210003896.X公布的冠脉宁注射液中大分子物质的检测方法，专利201210003899.3公布的红花注射液中大分子物质的检测方法，均采用注射液原液(不稀释)进样，检测限度也不会高于固体注射剂，其检测限度一般不足万分之一，即使加大进样量也只是万分之一左右的检测限，但均没检出高分子物质，即使作为增溶剂的大分子物质吐温-80(一般大于万分之五)也未检出，因此上述检测方法应用于成品的限度检测意义不大；中国专利201010506094.1公布了一固体注射剂注射用益气复脉(冻干)中大分子物质的检测方法，其供检测样品(注射剂)浓度仅为1.0mg/mL，它由于检测样品浓度过小，导致限度小于1％的高分子杂质基本上不能被检出；杨立伟等公布的《凝胶色谱法测定参芪扶正注射液中的高分子物质》(中国药房，2011.15，1400-1401)，采用超滤离心管对成品中的高分子物质进行富集，进样能较正常提高20倍，但采用紫外检测器检测，使得部分紫外没有吸收的聚合物如多糖、吐温-80等不能检出，且中药注射剂如果在制备工艺中采用超滤技术处理药液后，成品中采用超滤离心管富集其实意义不大。因此现有方法不能科学地评价制剂工艺过程中去除高分子杂质的效果。
发明内容
本发明是为解决现有中药注射剂生产工艺过程中，高分子杂质去除工艺的方法不明确的问题，或已知高分子杂质去除方法，但缺乏有效地评价方法进行验证或者证明的问题。而提供一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法。
本发明的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法按以下步骤进行：
将中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物配制成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，然后通过对待测药液进行高分子杂质的检测，来评价最终产物是否达标；
其中，所述的高分子杂质的检测方法为：对中药材提取纯化工艺中各工序处理前后的提取物进行高分子杂质的逐一检测，若每道工序处理前后的高分子杂质的检测结果显示高分子杂质有减少，则进行一下道工序，直至检测最终产物达标；
最终产物达标的标准为：对最终产物进行高分子杂质的检测，若无高分子杂质检出即为达标；在评价过程中明晰高分子杂质消除轨迹，明确制剂工艺过程中高分子杂质的去除方法。
所述的中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物为采用水醇处理技术、树脂分离技术、膜分离技术、沉淀剂或澄清剂技术得到的提取物。
本发明的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法按以下步骤进行：
将中药注射剂中浓配药液超滤过程中各工序的产物配制成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，然后通过对待测药液进行高分子杂质的检测，来评价最终产物是否达标；
最终产物达标的标准为：对最终产物进行高分子杂质的检测，若无高分子杂质检出即为达标；并评价超滤应用于高分子杂质去除的合理性。
所述的超滤过程中各工序的产物为超滤前药液、超滤后药液以及超滤膜截留的残留液。
本发明针对中药注射剂成品高分子杂质含量相对较低的现象，将高分子检测手段应用于中药注射剂的生产过程控制，并针对提取物中的高分子杂质的消除轨迹建立一套评价方法，检测对象是中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物(浸膏或干浸膏粉)或者是中药注射剂超滤技术应用过程中的浓配药液，检测方法采用高效液相色谱法，采用葡聚糖凝胶色谱柱，采用通用型检测器蒸发光散射检测器，当然也可以采用质谱检测器直接读出杂质的分子量，但采用质谱检测器的方法仅适合研究应用，常规检验成本较高。采用胰岛素(分子量5800)与细胞色素C(分子量13800)为标准分子量物质，按照中药注射剂的制备工艺制备各种中药材提取物(浸膏或干浸膏粉)，每一步浸膏(或干浸膏粉)均取样检测，每个检测样品的浓度均不小于检测样品中干浸膏含量为100mg/mL，此时的检测限度约1/7000，且本发明超滤工艺处理的药液仅加入少量的辅料是酸碱调节剂氢氧化钠，其余固形物均来自植物提取。从中描绘出每种中药材提取物中的高分子杂质的消除轨迹，评价现有制剂制备工艺的合理性与科学性，实现各种注射剂制备工艺和超滤过程中高分子杂质的去除效果的评价，同时为超滤技术在中药注射剂制剂领域的应用提供一种评价手段，本发明通过对配制成成品注射液前的浓配药液折成干固体物进行其中高分子杂质的含量的检测，检测样品的的浓度提高到100mg/ml，相比于对成品注射液的稀溶液进行其中高分子杂质的检测更具准确性，大大提高了高分子杂质的检出限度，本发明的评价方法明确了制备工艺过程中高分子杂质的去除轨迹，明确制备工艺中去除高分子杂质的方法和条件，并评价制剂工艺的科学性和合理性，评价方法具有合理性和科学性，可应用于生物医药领域注射剂的研发、生产中工艺科学性与合理性的评价。
附图说明
图1为细胞色素C色谱图；图2为胰岛素色谱图；图3为注射用丹参(冻干)色谱图；图4为注射用双黄连(冻干)色谱图；图5为双黄连粉针剂色谱图；
图6为胰岛素+注射用丹参(冻干)色谱图；图7为胰岛素+注射用双黄连(冻干)色谱图；图8为胰岛素+双黄连粉针剂色谱图；
图9为丹参一次浓缩膏的色谱图；图10为丹参一次回收膏的色谱图；图11为丹参二次浓缩膏的色谱图；图12为丹参二次回收膏的色谱图；图13为注射用丹参超滤前药液的色谱图；图14为注射用丹参超滤后药液的色谱图；图15为注射用丹参超滤截留药液的色谱图；
图16为连翘一次浓缩膏的色谱图；图17为连翘一次回收膏的色谱图；图18为连翘二次浓缩膏的色谱图；图19为连翘二次回收膏的色谱图；图20为金银花一次浓缩膏的色谱图；图21为金银花一次回收膏的色谱图；图22为金银花二次浓缩膏的色谱图；图23为金银花二次回收膏的色谱图；图24为双黄连粉针剂超滤前药液的色谱图；图25为双黄连粉针剂超滤后药液的色谱图；图26为双黄连粉针剂超滤截留药液的色谱图。
具体实施方式
本发明的技术方案不局限于以下具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法按以下步骤进行：
将中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物配制成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，然后通过对待测药液进行高分子杂质的检测，来评价最终产物是否达标；
其中，所述的高分子杂质的检测方法为：对中药材提取纯化工艺中各工序处理前后的提取物进行高分子杂质的逐一检测，若每道工序处理前后的高分子杂质的检测结果显示高分子杂质有减少，则进行一下道工序，直至检测最终产物达标；
最终产物达标的标准为：对最终产物进行高分子杂质的检测，若无高分子杂质检出即为达标；
所述的中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物为采用水醇处理技术、树脂分离技术、膜分离技术或澄清剂技术得到的提取物。
本发明的评价方法明晰了高分子杂质消除轨迹，明确高分子杂质去除方法和条件。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的采用水醇处理技术得到的各工序的提取物为药材煎煮液浓缩浸膏、一次醇沉上清液中回收乙醇后的提取物、一次水洗上清液得到的提取物、二次醇沉上清液中回收乙醇后的提取物和最终得到的浸膏或干浸膏粉。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：采用高效液相色谱法联合蒸发光散射检测器，通过葡聚糖凝胶色谱柱对中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物进行高分子杂质的检测。其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：所述的高分子杂质的检测采用胰岛素或细胞色素C作为标准分子量物质。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：所述的高分子杂质为分子量大于10000的高分子物质。其它步骤及参数与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：配制成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，对待测药液进行高分子杂质的检测时的检测限度为1/7000。其它步骤及参数与具体实施方式一至五之一相同。
具体实施方式七：本实施方式的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法按以下步骤进行：
将中药注射剂中浓配药液超滤过程中各工序的产物配置成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，然后通过对待测药液进行高分子杂质的检测，来评价最终产物是否达标；
最终产物达标的标准为：对最终产物进行高分子杂质的检测，若无高分子杂质检出即为达标；在评价中提供超滤技术去除高分子杂质的科学依据。
所述的超滤过程中各工序的产物为超滤前药液、超滤后药液以及超滤膜截留的残留液。
本发明评价了超滤应用于高分子杂质去除的合理性。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七不同的是：所述的浓配药液为其中干固体物质的质量分数为10％的药液。其它步骤及参数与具体实施方式七相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式七或八不同的是：采用高效液相色谱法联合蒸发光散射检测器，通过葡聚糖凝胶色谱柱对中药注射剂中浓配药液超滤过程中各工序的产物进行高分子杂质的检测。其它步骤及参数与具体实施方式七或八相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式七至九之一不同的是：所述的高分子杂质的检测采用胰岛素或细胞色素C作为标准分子量物质。其它步骤及参数与具体实施方式七至九之一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式七至十之一不同的是：所述的高分子杂质为分子量大于10000的高分子物质。其它步骤及参数与具体实施方式七至十之一相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式七至十一之一不同的是：配制成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，对待测药液进行高分子杂质的检测时的检测限度为1/7000。其它步骤及参数与具体实施方式七至十一之一相同。
通过以下实例验证本发明的有益效果：
试验一、对照品和检测限的确定试验，过程如下：
仪器与材料
高效液相色谱仪：Agilent1200series
蒸发光检测器：SEDEX LT-85(法国)
色谱柱：TSK-G2000SWxl(日本)，5μm，7.8mm×300mm
对照品：重组人胰岛素 批号：140633-200703 中国药品生物制品检定所
细胞色素C 批号：140670-200501 中国药品生物制品检定所
试剂：乙腈 色谱纯(DIMA)
三氟醋酸 色谱纯(DIMA)
供试品：注射用丹参(冻干)批号：090520、090521、090522
注射用双黄连(冻干)批号：0902004、0902005、0902006
双黄连粉针剂批号：0903237、0903238、0903239
测试标准：参照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性用凝胶色谱柱(TSK-G2000SWxl，5μm，7.8mm×300mm)；以三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶20∶80)为流动相；蒸发光检测器，检测参数：温度40℃，压缩空气压力1.5bar；柱温为30℃；流速为每1分钟0.7mL。理论板数按胰岛素峰计算应不低于3000。
(一)、对照品的确定
一、对照品溶液的制备：取上述胰岛素对照品(分子量5800)和细胞色素C(分子量13800)对照品，分别用流动相溶解并制成每1mL溶液中含1mg固体物的溶液，过滤后保留溶液，即得胰岛素溶液和细胞色素C溶液；
二、供试品溶液的制备：取上述供试品用流动相溶解并制成每1mL溶液中含100mg固体物的溶液，即得注射用丹参(冻干)溶液、注射用双黄连(冻干)溶液和双黄连粉针剂溶液；
三、测定方法：分别吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：得到如图1所示的胰岛素色谱图，如图2所示的细胞色素C色谱图，如图3所示的注射用丹参(冻干)色谱图，如图4所示的注射用双黄连(冻干)色谱图，如图5所示的双黄连粉针剂色谱图，从图1～5可以看出，胰岛素对照品和细胞色素C对照品与供试品成分色谱峰分离度均较好，胰岛素色谱峰与供试品成分色谱峰能够达到有效分离，无干扰现象。表明采用该方法可有效检出本品中分子量高于胰岛素(5800)的高分子量物质，因此确定采用胰岛素作为供试品中高分子量物质检测的对照品。
验证确定对照品为胰岛素的试验
一、混合溶液的制备：取(一)中步骤一得到的胰岛素溶液分别和(一)中步骤二得到的注射用丹参(冻干)溶液、注射用双黄连(冻干)溶液和双黄连粉针剂溶液混合均匀，得到混合溶液，其中混合溶液按对照品溶液和供试品溶液等体积混合；
二、测定方法：取上述混合溶液各5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：得到如图6所示的胰岛素+注射用丹参(冻干)色谱图，如图7所示的胰岛素+注射用双黄连(冻干)色谱图，如图8所示的胰岛素+双黄连粉针剂色谱图，从图6～8可以看出胰岛素色谱峰与供试品成分色谱峰能够达到有效分离，无干扰现象，因此进一步验证了采用胰岛素作为供试品中高分子量物质检测的对照品是合理的。
(二)、检测限的确定
一、对照品溶液的制备：取胰岛素对照品(分子量5800)用流动相溶解并制成每1mL溶液中含1mg固体物的溶液，过滤后保留溶液，即得浓度为0.928mg/mL胰岛素溶液。
二、测试溶液的制备：取上述对照品溶液，用流动相按稀释比例为1/100稀释浓度为9.28μg/mL的测试溶液。
三、测定方法：分别吸取上述测试溶液2.5μL、5.0μL、7.5μL、10.0μL，分别注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，结果见表1。
表1 检测限测定结果
从表中可看出，进样量为7.5μL时，对照品色谱峰的峰高约为噪音峰高的2.5倍。因此，确定该方法的检测限为69.6ng。其中供试品进样5μL，浓度为100mg/mL；检出限为69.6ng/(5μL*100mg/mL)≈1/7180，该检测限说明本试验的方法检测灵敏度高。
实例1、一种注射用丹参(冻干)中高分子杂质去除工艺的评价方法：
根据注射用丹参(冻干)制备工艺，针对生产过程中的一次醇沉、一次水洗、二次醇沉、二次水洗以及超滤七个关键工艺步骤的提取物进行了高分子杂质去除效果的研究。在粉针制剂车间生产现场直接取样，取样名称为：一次浓缩膏、一次回收膏、二次浓缩膏、二次回收膏、超滤前药液、超滤后药液、超滤截留液，检测高分子物质的残留情况，并对工艺工序的高分子杂质去除情况进行评价。
仪器与材料
高效液相色谱仪：Agilent1200series；
蒸发光检测器：SEDEX LT-85(法国)；
色谱柱：TSK-G2000SWxl(日本)，5μm，7.8mm×300mm；
对照品：重组人胰岛素 批号：140633-200703 中国药品生物制品检定所；
试剂：乙腈 色谱纯(DIMA)；
三氟醋酸 色谱纯(DIMA)；
供试品：丹参一次浓缩膏 批号：090920、090921、090922；
丹参一次回收膏 批号：090920、090921、090922；
丹参二次浓缩膏 批号：090920、090921、090922；
丹参二次回收膏 批号：090920、090921、090922；
注射用丹参超滤前药液(批号：091025、091101、091102)；
注射用丹参超滤后药液(批号：091025、091101、091102)；
注射用丹参超滤截留药液(批号：091025、091101、091102)；
上述供试品由哈药集团中药二厂粉针制剂车间提供
检测条件
用凝胶色谱柱(TSK-G2000SWxl，5μm，7.8mm×300mm)；以三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶20∶80)为流动相；蒸发光检测器，检测参数：温度40℃，压缩空气压力1.5bar；柱温为30℃；流速为每1分钟0.7mL。理论板数按胰岛素峰计算应不低于3000。
检测方法
一、对照品溶液的制备：取胰岛素对照品(分子量5800)用流动相溶解并制成每1mL溶液中含1mg固体物的溶液，过滤后保留溶液，即得胰岛素溶液。
二、供试品溶液的制备：取供试品用流动相溶解并制成每1mL溶液中含固体物100mg的溶液，即得一次浓缩膏溶液、一次回收膏溶液、二次浓缩膏溶液、二次回收膏溶液、超滤前药液溶液、超滤后药液溶液和超滤截留液溶液。
三、测定方法：分别吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
上述测定过程重复3次。
采用胰岛素(分子量5800)为对照品，在该色谱条件下其保留时间为11.973min。
在供试品色谱图中，根据葡聚糖凝胶分子筛的作用，分子量大于胰岛素的高分子量物质的保留时间均应小于胰岛素的保留时间。
结果：得到如图9～15所示的色谱图，其中图9为丹参一次浓缩膏的色谱图，图10为丹参一次回收膏的色谱图，图11为丹参二次浓缩膏的色谱图，图12为丹参二次回收膏的色谱图，图13为注射用丹参超滤前药液的色谱图，图14为注射用丹参超滤后药液的色谱图，图15为注射用丹参超滤截留药液的色谱图；
(1)、从图9～12所示的色谱图中可看出，丹参药材的水提取液中存在大量的分子量高于胰岛素(分子量5800)的高分子量杂质，在第一次乙醇处理后，75％的高分子物质得到了有效去除，同时随着后续工序的操作，分子量高于胰岛素(分子量5800)的高分子量物质呈逐步趋于彻底去除的效果。
(2)、从图13～15所示的色谱图中可看出测定注射用丹参超滤前、超滤后以及截留溶液各三批，结果超滤前、后溶液的分子量分布均无明显变化，均未检出分子量高于胰岛素(5800)的高分子量物质，而在截留溶液中检测到微量的分子量高于胰岛素的高分子物质。表明超滤处理可截留药液中残留的高分子量物质，从而进一步保障了高分子量杂质的有效去除。同时该方法证明超滤技术在丹参制剂工艺中使用，具有去除高分子杂质的作用，也为超滤技术在中药注射剂制剂领域的应用，提供了一种评价方法。
实例2、一种双黄连粉针剂中高分子杂质去除工艺的评价方法：
本品为中药金银花、连翘和黄芩经提取、纯化而制成的无菌粉针剂。根据其制备工艺我们针对生产过程中金银花、连翘的提取、一次醇沉、一次水洗、二次醇沉、二次水洗以及配剂后的超滤处理七个关键工艺步骤进行了高分子杂质去除效果的研究。在粉针制剂车间生产现场直接取样，取样名称为：连翘一次浓缩膏、连翘一次回收膏、连翘二次浓缩膏、连翘二次回收膏、金银花一次浓缩膏、金银花一次回收膏、金银花二次浓缩膏、金银花二次回收膏、双黄连粉针剂超滤前溶液、双黄连粉针剂超滤后溶液、双黄连粉针剂超滤截留液，检测高分子物质的残留情况，并对工艺工序的高分子杂质去除情况进行评价。
仪器与材料
高效液相色谱仪：Agilent1200series
蒸发光检测器：SEDEX LT-85(法国)
色谱柱：TSK-G2000SWxl(日本)，5μm，7.8mm×300mm
对照品：重组人胰岛素 批号：140633-200703 中国药品生物制品检定所
试剂：乙腈 色谱纯(DIMA)
三氟醋酸 色谱纯(DIMA)
供试品：连翘一次浓缩膏 批号：090911、090914、090915
连翘一次回收膏 批号：090911、090914、090915
连翘二次浓缩膏 批号：090911、090914、090915
连翘二次回收膏 批号：090911、090914、090915
金银花一次浓缩膏 批号：090911、090914、090915
金银花一次回收膏 批号：090911、090914、090915
金银花二次浓缩膏 批号：090911、090914、090915
金银花二次回收膏 批号：090911、090914、090915
双黄连粉针剂超滤前溶液(批号：091025、091101、091104)
双黄连粉针剂超滤后溶液(批号：091025、091101、091104)
双黄连粉针剂超滤截留液(批号：091025、091101、091104)
上述供试品由由哈药集团中药二厂粉针制剂车间提供
检测条件
用凝胶色谱柱(TSK-G2000SWxl，5μm，7.8mm×300mm)；以三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶20∶80)为流动相；蒸发光检测器，检测参数：温度40℃，压缩空气压力1.5bar；柱温为30℃；流速为每1分钟0.7mL。理论板数按胰岛素峰计算应不低于3000。
检测方法：
一、对照品溶液的制备：取胰岛素对照品(分子量5800)用流动相溶解并制成每1mL溶液中含1mg固体物的溶液，过滤后保留溶液，即得胰岛素溶液。
二、供试品溶液的制备：取供试品用流动相溶解并制成每1mL溶液中含固体物100mg的溶液，即得连翘一次浓缩膏溶液、连翘一次回收膏溶液、连翘二次浓缩膏溶液、连翘二次回收膏溶液、金银花一次浓缩膏溶液、金银花一次回收膏溶液、金银花二次浓缩膏溶液、金银花二次回收膏溶液、双黄连粉针剂超滤前溶液、双黄连粉针剂超滤后溶液、双黄连粉针剂超滤截留液。
三、测定方法：分别吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
上述测定过程重复3次。
结果：得到如图16～26所示的色谱图，其中图16为连翘一次浓缩膏的色谱图，图17为连翘一次回收膏的色谱图，图18为连翘二次浓缩膏的色谱图，图19为连翘二次回收膏的色谱图，图20为金银花一次浓缩膏的色谱图，图21为金银花一次回收膏的色谱图，图22为金银花二次浓缩膏的色谱图，图23为金银花二次回收膏的色谱图，图24为双黄连粉针剂超滤前药液的色谱图，图25为双黄连粉针剂超滤后药液的色谱图，图26为双黄连粉针剂超滤截留药液的色谱图；
从图16～26可以得出结论：原药材提取液中存在大量的高分子量物质，在经过第一次乙醇处理后，75％高分子杂质得到了有效去除，随着后续的水洗及二次醇沉工艺处理，特别是超滤工艺处理，药液中残留的的高分子杂质得到了进一步去除。因此，从试验结果可看出本品的生产工艺较合理，可有效去除原料中带来的高分子量物质，进而有效避免了高分子量物质带来的安全性隐患。该方法同时评价了超滤技术在双黄连注射剂制剂领域的应用效果之一，能够较大限度的去除高分子杂质。
Claims (8)
1.一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法按以下步骤进行：
将中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物配制成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，然后通过对待测药液进行高分子杂质的检测，来评价最终产物是否达标；
其中，所述的高分子杂质的检测方法为：对中药材提取纯化工艺中各工序处理前后的提取物进行高分子杂质的逐一检测，若每道工序处理前后的高分子杂质的检测结果显示高分子杂质有减少，则进行一下道工序，直至检测最终产物达标；
最终产物达标的标准为：对最终产物进行高分子杂质的检测，若无高分子杂质检出即为达标；
所述的中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物为采用醇沉技术、树脂分离技术、膜分离技术或澄清剂技术得到的提取物；
所述的中药注射剂为注射用丹参冻干或双黄连粉针剂；
采用高效液相色谱法联合蒸发光散射检测器，通过葡聚糖凝胶色谱柱对中药注射剂中中药材提取纯化工艺各工序的提取物进行高分子杂质的检测。
2.根据权利要求1所述的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于所述的采用醇沉技术得到的各工序的提取物为药材煎煮液浓缩浸膏、一次醇沉上清液中回收乙醇后的提取物、一次水洗上清液得到的提取物、二次醇沉上清液中回收乙醇后的提取物和最终得到的浸膏或干浸膏粉。
3.根据权利要求1或2所述的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于所述的高分子杂质的检测采用胰岛素或细胞色素C作为标准分子量物质。
4.根据权利要求3所述的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于所述的高分子杂质为分子量大于10000的高分子物质。
5.一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法按以下步骤进行：
将中药注射剂中浓配药液超滤过程中各工序的产物配置成其中干固体物的浓度大于等于100mg/mL的待测药液，然后通过对待测药液进行高分子杂质的检测，来评价最终产物是否达标；
其中，所述的高分子杂质的检测方法为：对中药注射剂中浓配药液超滤过程中各工序的产物进行高分子杂质的逐一检测，若每道工序处理前后的高分子杂质的检测结果显示高分子杂质有减少，则进行一下道工序，直至检测最终产物达标；
最终产物达标的标准为：对最终产物进行高分子杂质的检测，若无高分子杂质检出即为达标；
所述的超滤过程中各工序的产物为超滤前药液、超滤后药液以及超滤膜截留的残留液；
所述的中药注射剂为注射用丹参冻干或双黄连粉针剂；
采用高效液相色谱法联合蒸发光散射检测器，通过葡聚糖凝胶色谱柱对中药注射剂中浓配药液超滤过程中各工序的产物进行高分子杂质的检测。
6.根据权利要求5所述的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于所述的浓配药液为其中干固体物质的质量分数为10％的药液。
7.根据权利要求5或6所述的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于所述的高分子杂质的检测采用胰岛素或细胞色素C作为标准分子量物质。
8.根据权利要求7所述的一种中药注射剂中高分子杂质去除工艺的评价方法，其特征在于所述的高分子杂质为分子量大于10000的高分子物质。
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