CN103245621A - 一种依达拉奉注射液的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种依达拉奉注射液的质量检测方法，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠（NaHSO₃计）为0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括：盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。本发明采用紫外-可见分光光度法进行盐酸半胱氨酸、亚硫酸氢钠的定量检测，具操作简单、准确度高、重现性好等优点，能够保证目前市场上的依达拉奉注射液的质量。

Description

一种依达拉奉注射液的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药物制剂及其分析领域，特别涉及一种依达拉奉注射液的质量检测方法。

背景技术

市场上的依达拉奉注射液（商品名：百依达，英文名：Edaravone Injection，汉语拼音：Yidalafeng Zhusheye），主要成分为依达拉奉，化学名称为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，分子式：C₁₀H₁₀N₂₀，分子量：174.2，依达拉奉的结构式为：

                                                   

                           

依达拉奉是一种自由基清除剂，可以抑制脑缺血、缺氧后再灌注引起的大量自由基和脂质过氧化物的产生，从而减轻脑细胞损害，促进神经功能恢复。

依达拉奉是一种脑保护剂，临床研究提示N-乙酰门冬氨酸（NAA）是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初期含量急剧减少。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。临床前研究提示，大鼠在缺血/缺血再灌注后静脉给予依达拉奉，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟发性神经元死亡。机理研究提示，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。

依达拉奉注射液是一种理想的脑保护剂药物制剂，具有良好的市场前景；所以，需要建立专门质量检测方法以保证其质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种依达拉奉注射液的质量检测方法，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠（NaHSO ₃计）为0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括：盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。

本发明的目的是通过以下的技术方案实现的：

一种依达拉奉注射液的质量检测方法，该注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750：500：250：500000；所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠      （NaHSO ₃计）为0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依达拉奉注射液的质量检测方法所检测项目包括：盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。

所述的盐酸半胱氨酸含量检测的方法为：

A、依达拉奉注射液供试品制备：

a.将所述的依达拉奉注射液加水稀释至原体积的5倍，得到依达拉奉注射液的稀释液； 

b.将所述的依达拉奉注射液的稀释液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依达拉奉混合液A；所述的依达拉奉注射液的稀释液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1；

c.将所述的依达拉奉混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21；

d. 将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560 nm波长处测定吸收度。

B、盐酸半胱氨酸对照品制备：

a. 精密配制100μg/mL的盐酸半胱氨酸水溶液；

b.将所述的盐酸半胱氨酸水溶液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到盐酸半胱氨酸混合液A；所述的盐酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1；

c.将所述的盐酸半胱氨酸混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的盐酸半胱氨酸对照品；所述的盐酸半胱氨酸混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21；

d. 将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560 nm波长处测定吸收度；

经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml。

所述的亚硫酸氢钠含量检测的方法为：

A、依达拉奉注射液供试品制备：

a、取所述的依达拉奉注射液，用0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至原体积的250倍，得到依达拉奉注射液的稀释液；

b、将所述的依达拉奉注射液的稀释液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依达拉奉混合液A，将所述的依达拉奉混合液A室温下放置45 分钟，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉注射液的稀释液、碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1；

c、将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；

B、亚硫酸氢钠对照品制备：

a.用0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液作为溶剂精密配制2μg/mL的亚硫酸氢钠溶液；

b、将所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亚硫酸氢钠混合液A，将所述的亚硫酸氢钠混合液A室温下放置45 分钟，得到所述的亚硫酸氢钠对照品；所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1；

c、将所述的亚硫酸氢钠对照品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；

经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有亚硫酸氢钠（NaHSO ₃计），为0.06mg/ml～0.6mg/ml。

本发明的有益效果为：

本发明采用紫外-可见分光光度法进行盐酸半胱氨酸、亚硫酸氢钠的定量检测，具操作简单、准确度高、重现性好等优点，能够保证目前市场上的依达拉奉注射液的质量。 

 

具体实施方式

实施例1：

一种依达拉奉注射液的质量检测方法，该注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750：500：250：500000；所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠      （NaHSO ₃计）为0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括：盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。

所述的盐酸半胱氨酸含量检测的方法为：

A、依达拉奉注射液供试品制备：

a.将所述的依达拉奉注射液加水稀释至原体积的5倍，得到依达拉奉注射液的稀释液； 

具体的操作为：

精密量取所述的依达拉奉注射液10ml, 置50ml量瓶中,加水稀释至刻度，摇匀，得到依达拉奉注射液的稀释液；

b.将所述的依达拉奉注射液的稀释液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依达拉奉混合液A；所述的依达拉奉注射液的稀释液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1；

所述的酸性茚三酮溶液的配制方法为：取茚三酮0.25g，加冰醋酸6mL与盐酸4mL超声使溶解，即得；所述的酸性茚三酮溶液需临用新制；

具体的操作为：

精密量取所述的依达拉奉注射液的稀释液2mL，置25mL量瓶中，加入冰醋酸与酸性茚三酮溶液各1mL，轻轻摇匀，密塞；

c.将所述的依达拉奉混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21；

具体的操作为：

将装有所述的依达拉奉混合液A的25ml量瓶水浴加热10分钟，立即冷却，加入乙醇至刻度，摇匀，得到所述依达拉奉注射液供试品；

d. 将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560 nm波长处测定吸收度。

所述的紫外-可见分光光度法按照中国药典2005年版二部附录IV A中的记载进行；

B、盐酸半胱氨酸对照品制备：

a. 精密配制100μg/mL的盐酸半胱氨酸水溶液；

b.将所述的盐酸半胱氨酸水溶液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到盐酸半胱氨酸混合液A；所述的盐酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1；

所述的酸性茚三酮溶液的配制方法为：取茚三酮0.25g，加冰醋酸6mL与盐酸4mL超声使溶解，即得；所述的酸性茚三酮溶液需临用新制；

具体的操作为：

精密量取所述的盐酸半胱氨酸水溶液2mL，置25mL量瓶中，加入冰醋酸与酸性茚三酮溶液各1mL，轻轻摇匀，密塞；

c.将所述的盐酸半胱氨酸混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的盐酸半胱氨酸对照品；所述的盐酸半胱氨酸混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21；

具体的操作为：

将装有所述的盐酸半胱氨酸混合液A的25ml量瓶水浴加热10分钟，立即冷却，加入乙醇至刻度，摇匀，得到所述盐酸半胱氨酸对照品；

d. 将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560 nm波长处测定吸收度；

经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml。

所述的亚硫酸氢钠含量检测的方法为：

A、依达拉奉注射液供试品制备：

a、取所述的依达拉奉注射液，用0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至原体积的250倍，得到依达拉奉注射液的稀释液；

具体的操作为：

精密量取所述的依达拉奉注射液1ml，置250ml量瓶中, 加0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀，得到依达拉奉注射液的稀释液；

b、将所述的依达拉奉注射液的稀释液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依达拉奉混合液A，将所述的依达拉奉混合液A室温下放置45 分钟，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉注射液的稀释液、碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1；

所述的碱性品红溶液的配制方法为：取碱性品红0.05g 置100ml量瓶中,加盐酸5ml溶解,加水至刻度,摇匀即得。

具体的操作为：

精密量取所述的依达拉奉注射液的稀释液10ml，加入0.05% 碱性品红溶液1ml与0.2%甲醛溶液1ml，摇匀，室温下放置45 分钟，

c、将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；

所述的紫外-可见分光光度法按照中国药典2005年版二部附录IV A中的记载进行；

B、亚硫酸氢钠对照品制备：

a.用0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液作为溶剂精密配制2μg/mL的亚硫酸氢钠溶液；

b、将所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亚硫酸氢钠混合液A，将所述的亚硫酸氢钠混合液A室温下放置45 分钟，得到所述的亚硫酸氢钠对照品；所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1；

所述的碱性品红溶液的配制方法为：取碱性品红0.05g 置100ml量瓶中,加盐酸5ml溶解,加水至刻度,摇匀即得。

具体的操作为：

精密量取所述的亚硫酸氢钠溶液10ml，加入0.05% 碱性品红溶液1ml与0.2%甲醛溶液1ml，摇匀，室温下放置45 分钟，

c、将所述的亚硫酸氢钠对照品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；

经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有亚硫酸氢钠（NaHSO ₃计），为0.06mg/ml～0.6mg/ml。

所述的检测方法中，还包括以下检测内容：

1、性状检测：所述的依达拉奉注射液为无色澄明液体；

2、鉴别检测：

 (1)、取所述的依达拉奉注射液适量，滴加碘化铋钾试液，即生成橙黄色沉淀。

 (2)、在含量测定项下的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致。

2、pH值检测：应为3.0～4.5（中国药典2005年版二部附录 VI H）。

3、有关物质检测：精密量取所述的依达拉奉注射液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的20%；再取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/2（0.5%） ,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。

4、细菌内毒素检测： 取所述的依达拉奉注射液，用细菌内毒素检查用水稀释至2倍体积，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅺ E），每1ml中含内毒素的量应小于0.5EU。

5、依达拉奉检测：照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录Ⅴ D)测定。

    6、色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L 磷酸二氢钾(三乙胺调节pH值至7.0±0.5)-甲醇（70∶30）为流动相；检测波长为240nm。理论板数按依达拉奉峰计算应不低于1000，依达拉奉峰与其它峰的分离度应符合规定。

7、测定法:精密量取所述的依达拉奉注射液适量，加水稀释制成每1ml含15μg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取依达拉奉对照品37mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀, 精密量取2ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

所述的依达拉奉注射液为脑保护剂。

所述的依达拉奉注射液的规格为10ml: 15mg。

所述的依达拉奉注射液贮藏方式为密闭,置凉暗处保存。

所述的依达拉奉注射液的有效期暂定18个月。

本实施例所述的依达拉奉注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750：500：250：500000；

所述的依达拉奉注射液的制备方法为：

A、配制：按照上述配比取的依达拉奉，加入上述配比的90～100℃的注射用水，搅拌使主药完全溶解，加入处方量的亚硫酸氢钠500g和盐酸半胱氨酸250g，搅拌均匀，加注射用水至上述配比的80%，使溶液凉至80℃，加上药用活性炭150g搅拌15分钟，趁热过滤，脱炭，滤液加注射用水至全量，用稀盐酸或氢氧化钠试液调节PH值为4.0～4.5，用0.45μm微孔滤膜过滤，得到半成品；

B、灌封：半成品检验合格后，用0.22μm微孔滤膜过滤，灌封于10ml曲颈玻璃安瓿中，装量按10.5ml（增加量0.5ml），灌封。

C、灭菌、检漏：将灌封合格的半成品置灭菌柜内，用饱和蒸汽115℃灭菌30分钟。用胭脂红使用色素配制的红色色水，真空度-80kpa以上条件下检漏，纯化水清洗，50℃以下烘干后检出漏支即可。

D、灯检：按收灭菌检漏后的半成品，检出瓶身有裂纹、漏气、破损、装量不合格药等废品。

E、印字、包装：按规定进行印字包装。

F、成品检验：对药品质量进行质检，并由质检部门对本批药品生产过程按规定进行评估，合格后入库。所述的依达拉奉注射液的成品率为80%～95%。

Claims (3)

1.一种依达拉奉注射液的质量检测方法，其特征在于：该注射液的原料中包括依达拉奉、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、注射用水，其重量份数比为750：500：250：500000；所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亚硫酸氢钠 （NaHSO ₃计）为0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依达拉奉注射液的质量检测方法的检测项目包括：盐酸半胱氨酸含量检测、亚硫酸氢钠含量检测。

2.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液的质量检测方法，其特征在于：所述的盐酸半胱氨酸含量检测的方法为：

A、依达拉奉注射液供试品制备：

a.将所述的依达拉奉注射液加水稀释至原体积的5倍，得到依达拉奉注射液的稀释液； 

b.将所述的依达拉奉注射液的稀释液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依达拉奉混合液A；所述的依达拉奉注射液的稀释液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1；

c.将所述的依达拉奉混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21；

d. 将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560 nm波长处测定吸收度；

B、盐酸半胱氨酸对照品制备：

a. 配制100μg/mL的盐酸半胱氨酸水溶液；

b.将所述的盐酸半胱氨酸水溶液与冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到盐酸半胱氨酸混合液A；所述的盐酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的体积比为2:1:1；

c.将所述的盐酸半胱氨酸混合液A加热10分钟后，冷却至室温，加入乙醇，混匀，得到所述的盐酸半胱氨酸对照品；所述的盐酸半胱氨酸混合液A与所述的乙醇的体积比为4:21；

d. 将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在560 nm波长处测定吸收度；

经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有盐酸半胱氨酸（C₃H₇NO₂S·HCl·H₂O计），为0.2mg/ml～0.5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的依达拉奉注射液的质量检测方法，其特征在于：所述的亚硫酸氢钠含量检测的方法为：

A、依达拉奉注射液供试品制备：

a、取所述的依达拉奉注射液，用0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液稀释至原体积的250倍，得到依达拉奉注射液的稀释液；

b、将所述的依达拉奉注射液的稀释液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依达拉奉混合液A，将所述的依达拉奉混合液A室温下放置45 分钟，得到所述的依达拉奉注射液供试品；所述的依达拉奉注射液的稀释液、碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1；

c、将所述的依达拉奉注射液供试品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；

B、亚硫酸氢钠对照品制备：

a.用0.01% 乙二胺四乙酸二钠溶液作为溶剂配制2μg/mL的亚硫酸氢钠溶液；

b、将所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亚硫酸氢钠混合液A，将所述的亚硫酸氢钠混合液A室温下放置45 分钟，得到所述的亚硫酸氢钠对照品；所述的亚硫酸氢钠溶液、0.05%碱性品红溶液、0.2%甲醛溶液的体积比为10:1:1；

c、将所述的亚硫酸氢钠对照品通过照紫外-可见分光光度法，在557 nm波长处测定吸收度；

经计算，所述的依达拉奉注射液中，含有亚硫酸氢钠（NaHSO ₃计），为0.06mg/ml～0.6mg/ml。