CN103223167A - 降低嗜酸性粒细胞水平的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种减少人对象的嗜酸性粒细胞数量的方法，所述方法包括给予该对象IL-5R结合分子。该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。在一个具体的实施方式中，本发明方法能减少血液、骨髓、胃肠道(例如食道、胃、小肠和结肠)、或肺中的嗜酸性粒细胞数量。

Description

降低嗜酸性粒细胞水平的方法
本申请是国际申请PCT/US2008/006156，国际申请日2008年5月14日，中国国家阶段申请号200880023367.8，名称“降低嗜酸性粒细胞水平的方法”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及降低人对象的嗜酸性粒细胞水平的方法。
背景技术
嗜酸性粒细胞与多种疾病有关，包括变应性疾病，认为这种细胞在变应性疾病，如慢性支气管哮喘和特应性皮炎的发病中起到重要作用[Adv.Immunol.，39，177(1986)，Immunol.Today，13，501(1992)]。除上述疾病外，嗜酸性粒细胞也涉及通常称为嗜酸性粒细胞过多综合征(HES)的疾病，如嗜酸粒细胞增多、嗜酸性粒细胞性肠胃炎、嗜酸性粒细胞性白血病、嗜酸性粒细胞性肉芽肿和基穆拉病[Ann.Intern.Med.，97，78(1982)]。
嗜酸性粒细胞性肉芽肿是非成瘤性隐原型病变，它是溶骨性病灶，已知与显著的组织嗜酸粒细胞增多相关联[U.S.Armed Forces Med.J.，2，1085(1951)]。按照日本的骨肿瘤患者记录(1972-1984)，404位骨肿瘤患者中379位(93.8%)出现嗜酸性细胞性肉芽肿。嗜酸性粒细胞性肉芽肿早期主要包括嗜酸性粒细胞和组织细胞，晚期的肉芽肿包括纤维化，或者可发展成纤维性肺。因此，除炎性疾病如变态反应外，嗜酸性粒细胞可引起其它各种疾病。
白介素-5(下文称为IL-5)、白介素-3(下文称为IL-3)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(下文称为GM-CSF)是细胞因子家族成员，它们参与调节嗜酸性粒细胞的分化、增殖和活化。在这些细胞因子中，已知IL-5特异性作用于嗜酸性粒细胞，并特异性诱导终末分化[Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，85，2288(1988)]。
体外，IL-3和/或GM-CSF可激活嗜酸性粒细胞或延长其存活期[J.Clin.Invest.，81，1986(1988)]。而且，IL-3和/或GM-CSF的主要作用还有从髓细胞样干细胞诱导不成熟的嗜酸性粒细胞[Blood，76，1956(1990)]。而且，趋化因子如嗜酸性粒细胞趋化蛋白和RANTES(受激活调节正常T细胞表达和分泌因子)诱导嗜酸性粒细胞向发炎部位的趋化性[Clin.Exp.Allergy，26，1005(1996)]。在变应性支气管炎中，干细胞因子(下文称为SCF)参与嗜酸性粒细胞的累积。除IL-5外，有许多因子影响嗜酸性粒细胞功能。
嗜酸性粒细胞分为以下亚组，即正常密度嗜酸性粒细胞和低密度嗜酸性粒细胞。嗜酸性粒细胞活化后是低密度嗜酸性粒细胞[Immunology，47，531(1982)]。低密度嗜酸性粒细胞也称为活化的嗜酸性粒细胞。已报道，在HES患者外周血中嗜酸性粒细胞除发生数量改变外，也发生性质改变[Clin.Exp.Immunol.，24，423(1976)]。活化的嗜酸性粒细胞与HES症状的严重性有关[Am.J.Cardiol.，52，321(1983)]。除HES患者外，也在支气管哮喘患者的外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中发现活化的嗜酸性粒细胞[Am.Rev.Respir.Dis，132，981(1985)]。活化的嗜酸性粒细胞(低密度嗜酸性粒细胞)上表达各种受体，如细胞因子受体[J.Immunol.，142，4416(1989)]。与正常密度嗜酸性粒细胞相比，这些低密度嗜酸性粒细胞对IL-5的敏感性升高[Clin.Exp.Immunol.，85，312(1991)；J.Exp.Med.，172，1347(1990)]。
也知道上述活化的嗜酸性粒细胞在没有诱导嗜酸性粒细胞分化和增殖的细胞因子的体外条件下能够存活[J.Exp.Med.，170，343(1989)]。因此，活化嗜酸性粒细胞的性质类似于浸润组织，例如肺泡的那些嗜酸性粒细胞[Int.Arch.Allergy Immunol.，120，91(1999)]。尚不了解活化的嗜酸性粒细胞变成细胞因子依赖性的原因的详细解释，然而，其脱粒和存活期延长可能是由除IL-5以外的各种重要功能分子诱导的。
对参与嗜酸性粒细胞分化或增殖的细胞因子或趋化因子有抑制活性的物质被认为是抑制嗜酸性粒细胞功能的物质。然而，在大多数情况下，这些物质对被激活并浸润到发炎区域的细胞因子依赖性嗜酸性粒细胞不起作用。因此，嗜酸性粒细胞特异性抑制和诱导活化嗜酸性粒细胞的细胞死亡是抑制任何嗜酸性粒细胞功能的必需步骤。然而，迄今为止没有任何消炎剂能诱导活化的嗜酸性粒细胞凋亡。
目前，嗜酸性粒细胞疾病患者的治疗包括给予类固醇。然而，给予类固醇常常伴有副作用。具体说，这种治疗产生一些其它问题，例如类固醇给药停止后患者的病理状况可能回复到初始状态，和长期给予类固醇可诱导类固醇抗性。因此，需要针对嗜酸性粒细胞介导的疾病和失调的安全有效的治疗。
发明概述
本发明提供一种减少人对象中嗜酸性粒细胞数量的方法，包括给予所述患者IL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。
附图简述
出于阐述本发明的目的，附图中描述了本发明的某些实施方式。然而，本发明不仅限于附图中描述的实施方式的精确安排和手段。
图1.血清嗜酸性粒细胞阳离子性蛋白质(ECP)减少：ECP是嗜酸性粒细胞产生的标记物。在患者组1中，这种ECP水平降低表明嗜酸性粒细胞的减少，如图1所示。y-轴表示ECP水平(ng/ml)，x-轴表示时间(天)。
图2.可逆的外周嗜碱性粒细胞消耗：测定患者组1中的循环嗜碱性粒细胞。y-轴表示嗜碱性粒细胞计数(嗜碱性粒细胞/毫米3)，x-轴表示时间(天)。给药后24小时观察到外周血中嗜碱性粒细胞快速减少。
图3.患有嗜酸粒细胞增多的对象中hsCRP(高敏感型c反应性蛋白)基线水平升高(可逆)。在患者组1中测定这种标记物表明，如期发生对IL-5R表达细胞的免疫介导反应。y-轴表示hsCRP水平(mg/dl)，x-轴表示时间(天)。
图4.血清IL-6的最小增加值。小结了在患者组1中测定的IL-6细胞因子。y-轴表示IL-6水平(pg/ml)，x-轴表示时间(小时)。
图5.循环嗜中性粒细胞发生可变的降低。测定患者组1中的嗜中性粒细胞水平，小结于两幅图中。
图6.循环淋巴细胞发生可变的降低。测定患者组1中的淋巴细胞水平，小结于两幅图中。
图7.在第一天%NK一致地发生适度降低。在治疗前、给药后第1天和给药后第28天检测患者组1中的NK细胞水平。
图8.基线较高的对象中FENO降低。在患者组1中测定呼出一氧化氮的比例。此实验是非侵入性肺炎测定方法，数据表示炎症减轻的趋势。
图9.体外细胞毒实验：在体外细胞毒实验中，与不结合IL-5R的对照抗体(A)和岩藻糖基化MEDI-563的额外对照(B)相比，测定MEDI-563。KC1333效应细胞以5:1的比例用于对抗CTLL2靶细胞。4小时时测定细胞毒性。Y轴表示细胞毒百分数，X轴表示抗体浓度。
图10.MEDI-563与rhuIL-5Rα的结合：通过表面等离振子共振，在三个单独实验中测定MEDI-563与重组人IL-5Rα的结合亲和力，小结于该图中。
图11.MEDI-563与rhuFcγRs的结合：测定MEDI-563与几个不同批次的重组人FcγR的结合亲和力，并与同种型匹配的岩藻糖基化对照抗体作比较，小结于该图中。需要注意，MEDI-56与huFcyRIIIa和muFcyRIV的结合亲和力是(对照的)5-10倍。
图12.通过免疫组化分析IL-9tg小鼠肺部的IL-5Rα表达，并绘制成该图。
图13.通过免疫组化，用MEDI-563分析鼻息肉中的IL-5Rα表达，并绘制成该图。MEDI-563能够对鼻息肉中的所有嗜酸性粒细胞染色。
图14.对象中的最小瞬时嗜中性白血球减少症：对第一组的对象进行绝对嗜中性粒细胞计数，并小结于该图中。Y-轴代表嗜中性粒细胞计数(嗜中性粒细胞/毫米3)和X-轴代表时间天数。
图15.MEDI-563与健康捐献者全血中的嗜酸性粒细胞结合：如本文实施例6所述，对全血样品进行流式细胞术分析。这三组FACS数据，特别是第三组题为“MEDI-563结合嗜酸性粒细胞”的数据表明MEDI-563与嗜酸性粒细胞结合。
图16.来自IL-5转基因小鼠的白细胞的FACS分析：如实施例7所述，对来自IL-5转基因小鼠的白细胞进行流式细胞术分析。图16A小结了SiglecF+CCR3+嗜酸性粒细胞的FACS分析。图16B用抗-IL-5RαmAb H7证明，骨髓、脾、血液和肺中的所有嗜酸性粒细胞(SiglecF+CCR3+)均表达IL-5Rα+。
图17.在体外ADCC实验中MEDI-563消耗来自骨髓的IL-5Ra阳性单核细胞。在CFSE染色的效应细胞存在下使分离的非贴壁骨髓单核细胞接触MEDI-563，或同种型对照抗体(R347)。通过KM1257抗体/PE偶联的山羊抗-μIgG观察IL-5Ra阳性细胞。利用1A7同种型对照抗体/PE偶联的山羊抗-μIgG对样品进行对照染色。进行MEDI-563或R347介导的消耗后，样品细胞群的染色概况显示为KM1257/PE与CFSE或1A7/PE与CFSE散点图。比较由MEDI-563和R347处理样品获得的KM1257/PE与CFSE散点图揭示出，MEDI-563介导的ADCC基本耗尽样品中的所有IL-5Ra阳性细胞。
图18.MEDI-563可逆地消耗轻微哮喘患者的外周血嗜酸性粒细胞。患有轻微特应性哮喘的六位志愿者接受单次IV给予的(A)0.03mg/kg或(B)0.1mg/kg MEDI-563。在筛选时、给药前第0天和以规则间隔到第84天以及随访期间通过流式细胞术对外周血嗜酸性粒细胞计数。y-轴表示嗜酸性粒细胞计数(嗜酸性粒细胞/毫米3)，x-轴表示时间(天)。给药后24小时观察到外周血中嗜酸性粒细胞快速减少。MEDI-563诱导的嗜酸性细胞减少是可逆的。
图19.用MEDI-563进行免疫组化分析时发现正常人肺中的所有嗜酸性粒细胞上均表达IL-5Rα，绘制该图。
图20.用MEDI-563进行免疫组化分析时发现哮喘患者的肺活检样品中所有嗜酸性粒细胞上均表达IL-5Rα，绘制该图。
图21.通过流式细胞术分析分离自健康捐献者的原代嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞的IL-5Rα表达。显示利用MEDI563抗-IL5Rα抗体和无关特异性的同种型对照抗体获得的染色概况，CTLLh5r细胞(IL-5Rα/β转染的肿瘤细胞)用作阳性对照。
图22.体外抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)实验：在体外ADCC实验中比较非岩藻糖基化和岩藻糖基化MEDI-563的活性。分离的原代NK细胞和嗜酸性粒细胞分别用作效应细胞和靶细胞，比例为5:1。在1ng/ml人IL-2存在下进行该实验。根据膜联蛋白V染色，通过流式细胞术评估细胞死亡。Y和X轴分别表示最大细胞毒性百分数和抗体浓度。非岩藻糖基化MEDI-563抗体的EC50为0.965pM。
图23.体外抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)实验：在体外ADCC实验中分析非岩藻糖基化MEDI-563的活性。分离的原代NK细胞和嗜碱性粒细胞分别用作效应细胞和靶细胞。Y和X轴分别表示最大细胞毒性百分数和抗体浓度。在该实验中非岩藻糖基化MEDI-563抗体的EC50为0.561pM。
图24.在体外抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)实验中嗜酸性粒细胞的脱粒：使用不同水平的岩藻糖基化(MEDI-563F)和非岩藻糖基化(MEDI-563)抗-IL5Rα抗体进行体外ADCC实验，以分析嗜酸性粒细胞释放的EDN(嗜酸性粒细胞衍生的神经毒素)。该实验使用新鲜分离的嗜酸性粒细胞和NK或PBMC细胞，分别用作靶细胞和效应细胞。显示用1%曲通X-100处理时检测到的嗜酸性粒细胞脱粒最大值以便比较。
图25.MEDI-563特异性结合人IL-5Rα胞外区D1结构域中的表位。通过流式细胞术确认抗体与瞬时表达嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞的结合。显示了荧光染色概况。“多克隆”和“MEDI-563”指分别利用多克隆抗-人IL-5Rα和MEDI-563抗体观察到的染色概况。“双染”指“多克隆”(x轴)和MEDI-563(y轴)抗体的荧光染色概况。(A)瞬时表达一系列人-小鼠嵌合IL-5Rα转基因。“敲除”转基因是在人背景中包含单个小鼠胞外结构域的嵌合IL-5Rα构建物。“敲入”转基因是在小鼠背景中包含单个人胞外结构域的嵌合IL-5Rα构建物。(B)MEDI-563特异性结合表达人IL-5Rα的转基因细胞。MEDI-563不结合表达小鼠IL-5Rα的转基因细胞。(C)MEDI-563不结合表达包含小鼠D1和人D2-D3胞外结构域(“敲除D1”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。MEDI-563特异性结合表达在人背景中包含小鼠D2或D3胞外结构域(“敲除D2或D3”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。(D)MEDI-563特异性结合表达包含人D1和小鼠D2-D3胞外结构域(“敲入D1”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。MEDI-563不结合表达包含人D2或D3胞外结构域(“敲入D2或D3”)的小鼠IL-5Rα基嵌合转基因的转基因细胞。
图26.MEDI-563特异性结合人IL-5Rα胞外区D1的区段B中的表位。通过流式细胞术确认抗体与表达嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞的结合。显示了荧光染色概况。“多克隆”和“MEDI-563”指分别利用多克隆抗-人IL-5Rα和MEDI-563抗体观察到的染色概况。“双染”指多克隆(x轴)和MEDI-563(y轴)抗体的荧光染色概况。(A)小鼠IL-5Rα胞外区D1的氨基酸序列与人IL-5Rα蛋白75%相同。IL-5Rα胞外区D1分成区段A、B和C。所示的人和小鼠IL-5Rα氨基酸序列分别是SEQ ID NO：5和6的残基1-102。(B)瞬时表达一系列人-小鼠嵌合IL-5Rα转基因。“敲除”转基因是在人背景中包含单个小鼠胞外结构域D1的区段的嵌合IL-5Rα构建物。“敲入”转基因是在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含单个人胞外结构域D1的区段的嵌合IL-5Rα构建物。(C)MEDI-563特异性识别表达(i)人IL-5Rα转基因或(ii)包含人胞外区D1的小鼠IL-5Rα嵌合转基因(“敲入D1”)的转基因细胞。MEDI-563不结合表达(i)小鼠IL-5Rα受体转基因或(ii)包含小鼠胞外区D1的人嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。(D)MEDI-563不结合表达在人背景中包含小鼠胞外结构域D1的区段B(“敲除B”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。MEDI-563特异性结合表达在人背景中包含小鼠胞外结构域D1的区段A或C(“敲除A或C”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。(E)MEDI-563特异性结合表达在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含人胞外结构域D1的区段B(“敲入B”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。MEDI-563不结合表达在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含人区段A或C(“敲入A或C”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。
图27.MEDI-563特异性结合包含胞外区D1的氨基酸残基Ile61的人IL-5Rα的表位。通过流式细胞术确认抗体与表达变异IL-5Rα蛋白的转基因细胞的结合。显示了荧光染色概况。“多克隆”和“MEDI-563”指分别利用多克隆抗-人IL-5Rα和MEDI-563抗体观察到的染色概况。“双染”指多克隆(x轴)和MEDI-563(y轴)抗体的荧光染色概况。(A)人IL-5Rα胞外区D1的残基50-61(SEQ ID NO：5的残基40-61)。斜体表示的残基在小鼠IL-5Rα蛋白的相应区域不同。在转基因细胞中表达包含至少一个突变氨基酸残基的一系列IL-5Rα受体变体。“敲除”IL-5Rα变体是包含将人残基替换成相应小鼠残基的至少一个取代的突变的人蛋白。例如，“敲除DE”变体是包含D56E和E58D氨基酸取代的人IL-5Rα蛋白。“敲入”IL-5Rα变体是包含小鼠D1、人D2、小鼠D3和小鼠TM结构域的嵌合蛋白，其中小鼠D1结构域包含突变的区段B，其具有将小鼠残基替换成相应人残基的至少一个取代。例如，“敲入DE”变体是包含突变的小鼠区段B的嵌合IL-5Rα蛋白，其中突变的小鼠区段B包含E56D和D58E氨基酸取代。(B)MEDI-563不结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含K53Q、D56E、E58D、I61K氨基酸取代(“敲除-KDEI”)。MEDI-563特异性结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含N40H、N42D、Q46H(“敲除-NNQ”)或D56E、E58D(“敲除-DE”)或N40H、N42D、D56E、E58D(“敲除-NNDE”)氨基酸取代。(C)MEDI-563特异性结合表达包含突变的小鼠区段B的嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞，其中所述突变的小鼠区段B包含Q53K、E56D、D58E、K61I氨基酸取代(“敲入-KDEI”)。(D)MEDI-563不结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含I61K氨基酸取代(“敲除-I61”)。MEDI-563特异性结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含K53Q(“敲除-K53”)氨基酸取代。(E)MEDI-563特异性结合表达包含突变的小鼠区段B的嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞，其中所述突变的小鼠区段B包含K61I氨基酸取代(“敲入-I61”)。MEDI-563不结合表达包含突变的小鼠区段B的嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞，其中所述突变的小鼠区段B包含Q53K氨基酸取代(“敲入-K53”)。
图28.嵌合抗-小鼠IL-5Rα(H7)与鼠FcγR结合：测定嵌合抗-小鼠IL-5Rα(H7)与重组鼠FcγR的结合亲和力并与同种型匹配的岩藻糖基化对照抗体作比较，小结于该图中。显示解离常数(nM)。通过表面等离振子共振技术进行测定。
图29.(A)通过流式细胞术分析鉴定嗜酸性粒细胞，具有侧散射特征的细胞为CCR3和Siglec-F染色阳性。(B)IL-5Tg小鼠骨髓、血液、脾和肺组织中的嗜酸性粒细胞选择性表达IL-5R。
图30.非岩藻糖基化和岩藻糖基化的H7能消耗IL-5Tg小鼠脾(A)、肺组织(A)和血液(B)中的嗜酸性粒细胞。在骨髓(B)中未检测到消耗。与岩藻糖基化H7相比，非岩藻糖基化的H7在去除嗜酸性粒细胞方面更有效，特别是在较低的抗体剂量下。数据表示为平均值±SEM，n=6-8只小鼠/组，抗体治疗组与对照IgG治疗组相比p<0.05，Mann-Whitney U检验。
图31.在变应原刺激模型中非岩藻糖基化H7也消耗嗜酸性粒细胞。在气道内腔、肺组织、血液和骨髓中，非岩藻糖基化H7消耗嗜酸性粒细胞。最后一次刺激后72小时(抗体递送后96小时)，所有区室中的消耗水平最高。数据表示为平均值±SEM，n=6只小鼠/组，*抗体治疗组与对照IgG治疗组相比p<0.05，Mann-Whitney U检验。
发明详述
如上所述并且不受任何特定假设或理论限制，嗜酸性粒细胞与多种疾病和失调的发病有关。许多这类疾病或失调的特征是嗜酸性粒细胞过多(嗜酸粒细胞增多)，称为嗜酸性粒细胞过多综合征。
嗜酸性粒细胞起作用的疾病和失调的非限制性例子是：哮喘、免疫球蛋白(IgE)-介导的食物变态反应、嗜酸性粒细胞性食道炎(食道的炎症)、炎性肠病、COPD、变应性结肠炎、胃-食管反流、嗜酸性粒细胞性胃肠疾病(EGID)、嗜酸性粒细胞性胃肠炎、心内膜纤维化、吕弗勒心内膜炎、戴维病(Davies disease)、与嗜酸粒细胞增多有关的发作性血管性水肿、嗜酸粒细胞增多-肌痛综合征/西班牙毒油综合征、肝硬化、疱疹样皮炎、大疱性类天疱疮、丘-施二氏综合征、急性骨髓性嗜酸性细胞白血病、急性淋巴细胞性嗜酸性细胞白血病、并发嗜酸粒细胞增多的系统性肥大细胞病、过敏性鼻炎、湿疹、韦格纳肉芽肿病、结节性多动脉炎、嗜酸性粒细胞性筋膜炎和类风湿性关节炎。
因此，本发明提供一种减少人对象中嗜酸性粒细胞数量的方法，包括给予所述患者IL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。
在一个实施方式中，本发明提供减少人对象中嗜酸性粒细胞数量的方法，包括给予所述患者IL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。在一个具体实施方式中，本发明方法减少血液、骨髓、胃肠道(如食道、胃、小肠和结肠)或肺中嗜酸性粒细胞的数量。在另一具体实施方式中，本发明方法减少血液嗜酸性粒细胞的数量。在另一具体实施方式中，本发明方法减少肺嗜酸性粒细胞的数量。在一个具体实施方式中，本发明方法减少嗜酸性粒细胞前体细胞的数量。
在另一实施方式中，本发明方法使嗜酸性粒细胞数量减少至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%。在一个具体实施方式中，本发明方法使嗜酸性粒细胞数量降低到检测限以下。
在另一实施方式中，本发明方法使嗜酸性粒细胞前体数量减少至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%。在一个具体实施方式中，本发明方法使嗜酸性粒细胞前体数量降低到检测限以下。
在另一实施方式中，本发明方法在单次给予IL-5R结合分子后消除所有可检测的嗜酸性粒细胞。在一个具体实施方式中，单次给予IL-5R结合分子消除所有可检测的嗜酸性粒细胞至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约20周或至少约25周。
在另一实施方式中，本发明方法在单次给予IL-5R结合分子后消除所有可检测的嗜酸性粒细胞前体。在一个具体实施方式中，单次给予IL-5R结合分子消除所有可检测的嗜酸性粒细胞前体至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约20周或至少约25周。
在一个具体实施方式中，本发明方法包括给予对象一个剂量的0.03mg/kgIL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区，其中给予该IL-5R结合分子导致消耗该对象循环中至少约99%嗜酸性粒细胞，给药后24小时完成消耗，该消耗作用在给药后持续至少约28天。
在一个具体实施方式中，本发明方法包括给予对象一个剂量的0.1mg/kg IL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区，其中给予该IL-5R结合分子导致消耗该对象循环中至少约99%嗜酸性粒细胞，给药后24小时完成消耗，该消耗作用在给药后持续至少约84天。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子包括融合蛋白。在某些实施方式中，该融合蛋白包含特异性结合IL-5R的多肽区，还包含免疫球蛋白Fc区。特异性结合IL-5R的多肽区的非限制性例子可参见美国专利7,109,299和5,677,280，美国专利申请公开号2006/0014680A1。在其它实施方式中，特异性结合IL-5R的多肽区的是人IL-5(参见例如，Tanabi等，Journal of Biological Chemistry，1987，第262卷，第34期，第16580-16584页)，或者其片段、衍生物或变体(参见例如，美国专利号6,465,616)。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子包括抗体。本发明抗体包括但不限于：单克隆抗体、合成抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)(包括双特异性scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab’)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)和它们的表位结合片段。具体说，本发明抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有能特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明免疫球蛋白分子可以是任何类型(如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或小类的免疫球蛋白分子。
本发明的有用抗体可来自任何动物，包括鸟类和哺乳动物(例如但不限于，人、鼠、驴、绵羊、兔，山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡)。在特定实施方式中，所述抗体是人或人源化单克隆抗体。
本发明所用抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性或更多特异性的抗体。多特异性抗体可以特异性结合于多肽的不同表位，或者可以特异性结合于多肽和异源表位，如异源多肽或固体支持物材料。参见例如，国际公开号WO93/17715、WO92/08802、WO91/00360和WO92/05793；Tutt，等，1991，J.Immunol.147:60-69；美国专利号4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920和5,601,819；和Kostelny等，1992，J.Immunol.148:1547-1553。
本发明所用抗体可以是单链抗体。单链抗体的设计和构建参见Marasco等，1993，Proc Natl Acad Sci90:7889-7893。
本发明抗体的非限制性例子可参见美国专利7,179,464、6,538,111、6,018,032和美国专利申请公开号2004/0136996A1、2005/0226867A1。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子包括抗体。在另一实施方式中，本发明IL-5R结合分子是包含SEQ ID NO：1-4中任何一个氨基酸序列的抗体。在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是包含氨基酸序列SEQ ID NO：1和3的抗体。在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是包含氨基酸序列SEQ ID NO：2和4的抗体。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合表位与MEDI-563相同的抗体。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一具体实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合表位与MEDI-563相同的抗体，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ IDNO：5残基1-102的表位的抗体。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ ID NO：5残基1-102的表位的抗体，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ IDNO：5残基40-67的表位的抗体。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ ID NO：5残基40-67的表位的抗体，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ IDNO：5残基52-67的表位的抗体。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ ID NO：5残基52-67的表位的抗体，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ IDNO：5残基61的表位的抗体。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合包含SEQ ID NO：5残基61的表位的抗体，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合第一抗原但不特异性结合第二抗原的抗体，所述第一抗原包含SEQ ID NO：5残基1-102，所述第二抗原包含SEQ ID NO：5残基1-102的变体，其中所述变体包含I61K取代。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一具体实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合第一抗原但不特异性结合第二抗原的抗体，所述第一抗原包含SEQ ID NO：5残基1-102，所述第二抗原包含SEQ ID NO：5残基1-102的变体，其中所述变体包含I61K取代，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合第一抗原但不特异性结合第二抗原的抗体，所述第一抗原包含SEQ ID NO：5残基40-67，所述第二抗原包含SEQ ID NO：5残基40-67的变体，其中所述变体包含I61K取代。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一具体实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合第一抗原但不特异性结合第二抗原的抗体，所述第一抗原包含SEQ ID NO：5残基40-67，所述第二抗原包含SEQ ID NO：5残基40-67的变体，其中所述变体包含I61K取代，但该抗体不是MEDI-563。
在一个实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合人IL-5Rα(SEQ ID NO:5)但不特异性结合包含I61K取代的人IL-5Rα突变体(SEQ IDNO:5)的抗体。在一个具体实施方式中，所述抗体是MEDI-563。在另一实施方式中，本发明IL-5R结合分子是特异性结合人IL-5Rα(SEQ ID NO:5)但不特异性结合包含I61K取代的人IL-5Rα突变体(SEQ ID NO:5)的抗体，但该抗体不是MEDI-563。
本发明提供效应功能增强的IL-5R结合分子。提高效应功能的方法的非限制性例子可参见美国专利5,624,821、6,602,684、7,029,872；美国专利申请公开号2006/0067930A1、2005/0272128A1、2005/0079605A1、2005/0123546A1、2004/0072290A1、2006/0257399A1、2004/0261148A1、2007/0092521、2006/0040325A1、和2006/0039904A1；和国际专利申请公开号WO04/029207、WO03011878、WO05044859、WO06071856、和WO06071280。
本领域了解工程改造抗体Fc区以改变效应功能的方法(例如，Koenig等的美国专利公开号20040185045和PCT公开号WO2004/016750，它们描述了改变Fc区以便与FCγRIIA结合亲和力相比，提高与FcγRIIB的结合亲和力；也参见Armour等的PCT公开号WO99/58572、Idusogie等的WO99/51642和Deo等的美国6,395,272；通过引用将其全文纳入本文)。本领域也了解修饰Fc区以降低与FcγRIIB的结合亲和力的方法(例如，Ravetch等的美国专利公开号20010036459和PCT公开号WO01/79299，通过引用将其全文纳入本文)。也记载过具有与野生型Fc区相比，与FcγRIIIA和/或FcγRIIA结合亲和力提高的变异Fc区的修饰抗体(如，Stavenhagen等的PCT公开号WO2004/063351，通过引用将其全文纳入本文)。
也可通过产生糖基化模式改变的抗体来调节抗体的效应功能。例如，可制备糖基化类型改变的抗体，例如岩藻糖残基减少的非岩藻糖基化/低岩藻糖基化抗体或截开型GlcNAc结构增加的抗体。已证明，这类改变的糖基化模式能提高抗体的ADCC能力。可通过例如在糖基化机器改变的宿主细胞中表达该抗体来实现这类糖修饰。本领域已经描述过糖基化机器改变的细胞，它们可用作表达本发明重组抗体，从而产生糖基化改变的抗体的宿主细胞。例如，Hanai等的EP1,176,195记载了具有功能破坏的FUT8基因(编码岩藻糖基转移酶)的细胞系，以使该细胞系表达的抗体具有低岩藻糖基化水平。Presta的PCT公开WO03/035835记载了将岩藻糖连接于Asn(297)连接糖的能力降低的变异CHO细胞系、Lec13细胞，这也导致该宿主细胞表达的抗体的低岩藻糖基化水平(也参见Shields，R.L.等(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740)。Umana等的PCT公开WO99/54342记载了经工程改造表达糖蛋白修饰性糖基转移酶(如β(1,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII))的细胞系，使该工程改造细胞系表达的抗体的截开型GlcNAc结构增加，导致该抗体的ADCC活性提高(也参见Umana等(1999)Nat.Biotech.17:176-180)。
本领域已知产生糖形改变的抗体的方法，包括但不限于Umana等，1999，Nat.Biotechnol17:176-180；Davies等，20017Biotechnol Bioeng74:288-294；Shields等，2002，J Biol Chem277:26733-26740；Shinkawa等，2003，J Biol Chem278:3466-3473；美国专利号6,602,684；美国序列号10/277,370；美国序列号10/113,929；PCT WO00/61739A1；PCT WO01/292246A1；PCT WO02/311140A1；PCT WO02/30954A1所述的方法；PotillegentTM技术(新泽西州普林斯顿的波娃公司(Biowa，Inc.Princeton，N.J.))；GlycoMAbTM糖基化工程技术(瑞士苏黎世的GLYCART生物技术公司(GLYCART biotechnology AG，Zurich，Switzerland))。参见例如WO00061739；EA01229125；US20030115614；Okazaki等，2004,JMB,336:1239-49。也可通过翻译后去除岩藻糖(例如，用岩藻糖苷酶)制备岩藻糖基化模式改变的抗体。
本发明提供体内半衰期延长的特异性结合IL-5R的抗体和抗体片段。具体说，本发明提供的抗体和抗体片段在哺乳动物(例如但不限于人)体内的半衰期大于3天、大于7天、大于10天、大于15天、大于25天、大于30天、大于35天、大于40天、大于45天、大于2个月，大于3个月，大于4个月或大于5个月。
为了延长抗体(例如但不限于，单克隆抗体和单链抗体)或抗体片段(例如但不限于Fab片段)的体内血清循环时间，例如，可利用或不利用多功能接头通过抗体的N或C末端位点特异性与PEG结合或通过赖氨酸残基上的ε-氨基将惰性多聚物分子如高分子量聚乙二醇(PEG)与抗体(包括其抗体片段)连接。可利用导致生物活性损失最小的线型或分支聚合物衍生化。通过SDS-PAGE和质谱密切监测偶联程度，以确保PEG分子适当地偶联于所述抗体。可通过大小排阻或离子交换层析将未反应的PEG与抗体-PEG偶联物分离开。可利用本领域技术人员已知的方法，例如本文所述的免疫实验检测PEG-衍生抗体(包括其抗体片段)的结合活性及体内功效。
也可通过在IgG恒定区或其FcRn结合片段(例如Fc或铰链-Fc区片段)中引入一个或多个氨基酸修饰(即取代、插入或缺失)，产生体内半衰期延长的抗体。参见例如，国际公开号WO98/23289；国际公开号WO97/34631；和美国专利号6,277,375，通过引用将其全文纳入本文。
另外，可将抗体(包括其抗体片段)偶联于清蛋白，以制备体内更稳定或体内半衰期更长的抗体(包括其抗体片段)。本领域熟知这些技术，参见例如国际公开号WO93/15199、WO93/15200和WO01/77137；和欧洲专利号EP413,622，通过引用将所有这些文献纳入本文。
本发明提供特异性结合IL-5R的IL-5R结合分子，其中该结合分子重组融合或化学偶联(包括共价和非共价偶联)于异源蛋白质或多肽(或至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90或至少100个氨基酸的多肽片段)，以产生融合蛋白。具体说，本发明提供含有本文所述抗体的抗原结合片段(例如但不限于Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab)2片段、VH区、VH CDR、VL区或VL CDR)和异源蛋白质、多肽或肽的融合蛋白的制剂。本领域已知将蛋白质、多肽、肽与抗体(包括其抗体片段)融合或偶联的方法。参见例如，美国专利号5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851和5,112,946；欧洲专利号EP307,434和EP367,166；国际公开号WO96/04388和WO91/06570；Ashkenazi等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA88：10535-10539；Zheng等，1995，J.Immunol.154:5590-5600；和Vil等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:11337-11341(所述参考文献通过引用全文纳入本文)。
可通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(总称为“DNA改组”)的技术产生其它融合蛋白。可使用DNA改组改变本发明抗体或其片段(例如但不限于，更高亲合力、更低解离率的抗体或其片段)。通常参见美国专利5,605,793；5,811,238；5,830,721；5,834,252；和5,837,458；Patten等，1997，Curr.Opinion Biotechnol.，8:724-33；Harayama，1998，TrendsBiotechnol.16(2):76-82；Hansson等，1999，J.Mol.Biol.，287:265-76；和Lorenzo和Blasco，1998，Biotechniques24(2):308-313(这些专利和发表物各自通过引用纳入本文)。可通过易错PCR、随机核苷酸插入或其它方法随机诱变，然后进行重组，从而改变抗体(包括其抗体片段)或编码抗体或其片段。编码抗体(包括其抗体片段)的多核苷酸可与一种或多种异源分子的一个或多个组件、基序、区段、部分、结构域、片段等重组。
而且，可将抗体(包括其抗体片段)与标记序列如肽融合，以便纯化。标记氨基酸序列可以是六组氨酸肽，例如pQE载体(凯杰公司(QIAGEN,Inc.)，伊顿大街(Eton Avenue)9259号，查茨沃斯(Chatsworth)，CA，91311)提供的标签等，其中许多标记可购得。如Gentz等，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:821-824所述，六组氨酸提供了方便的融合蛋白的纯化方法。用于纯化的其它肽标签包括但不限于：血凝素(“HA”)标签，它对应于源自流感血凝素蛋白的表位(Wilson等，1984，Cell37:767)以及“flag”标签。
在其它实施方式中，本发明抗体或其片段偶联于诊断或检测试剂。此类抗体可作为如测定特定疗法的效果的临床测试步骤的一部分，用于监视或预测疾病或失调(例如但不限于，自身免疫病)的发作、发展、进展和/或严重性。可通过将该抗体偶联于可检测物质进行这类诊断和检测：所述可检测物质包括但不限于：各种酶，例如但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，例如但不限于链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；荧光物质，例如但不限于伞形酮、荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹酰氯或藻红蛋白；发光物质，例如但不限于，鲁米诺；生物发光物质，例如但不限于荧光素酶、萤光素和发光蛋白；放射性物质，例如但不限于碘(131I、125I、123I和121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115In、113In、112In和111In)和锝(99Tc)、铊(201Ti)、镓(68Ga、67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn和117Sn；采用各种正电子发射层析成像的正电子发射金属以及无放射性(noradioactive)顺磁金属离子。
或者，抗体可偶联于第二抗体，形成异源抗体偶联物，如Segal在美国专利号4,676,980中所述，通过引用将其全文纳入本文。
选择与感兴趣的抗原(如IL-5R)或其片段偶联的治疗部分或药物以达到对特定疾病或失调所需的预防或治疗效果，所述特定疾病或失调是(例如)对象中与干扰素α多肽表达和/或活性异常相关或以其为特征的疾病或失调、与干扰素α受体或其一个或多个亚基表达和/或活性异常相关或以其为特征的疾病或失调、自身免疫病、自身免疫病、移植物排斥、移植物抗宿主病或其一种或多种症状。当临床医生或其它医学专业人员决定将何种物质偶联于感兴趣抗体，如特异性结合干扰素α多肽或其片段的抗体时，应考虑如下因素：疾病的特性、疾病的严重程度和对象的总体状况。
可通过本领域已知任何合成抗体的方法，具体是化学合成或重组表达技术产生特异性结合抗原的抗体(包括其抗体片段)(参见美国专利公开号2007/0014724A1)。
可通过本领域熟知的各种方法产生某抗原的特异性多克隆抗体。例如，可将人抗原给予各种宿主动物，包括但不限于兔、小鼠、大鼠等，以诱导产生含有该人抗原特异性多克隆抗体的血清。可根据宿主的种类采用各种佐剂提高免疫应答，这些佐剂包括但不限于：弗氏佐剂(完全或不完全)、矿物质凝胶，如氢氧化铝，表面活性剂，如溶血卵磷脂、普流罗尼多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、匙孔
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血蓝蛋白、二硝基酚和可能有用的人佐剂，如BCG(卡介苗)和短小棒状杆菌(corynebacterium parvum)。这些佐剂也是本领域熟知的。
可采用本领域已知的各种技术制备单克隆抗体，这些技术包括使用杂交瘤、重组技术和噬菌体展示技术，或它们的组合。例如，可采用杂交瘤技术产生单克隆抗体，该技术是本领域已知的，参见例如Harlow等，《抗体：实验室手册》(Antibodies：A Laboratory Manual)，(冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，第2版，1988)；Hammerling等，刊于：《单克隆抗体和T细胞杂交瘤》(Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas)563-681(艾思威尔出版社(Elsevier)，纽约，1981以及Harlow等，《使用抗体：实验室手册》(Using Antibodies:A laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(1999)，其全文通过引用纳入本文。本文所用术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”指衍生自单个克隆，包括真核、原核或噬菌体克隆的抗体，并不限定其产生方法。
用杂交瘤技术产生和筛选特定抗体的方法是常规方法，并且为本领域所熟知。简要说，可用非鼠抗原免疫小鼠，一旦检测到免疫应答后，例如在小鼠血清中检测到该抗原的特异性抗体后，就收获小鼠脾，分离脾细胞。然后，通过熟知技术将脾细胞融合于任何合适的杂交瘤细胞，例如购自ATCC的细胞系SP20的细胞。选择杂交瘤，通过有限稀释克隆。此外，可利用RIMMS(多位点重复免疫)技术免疫动物(Kilpatrack等,1997,Hybridoma16:381—9，通过引用全文纳入本文)。然后，用本领域已知方法测定杂交瘤克隆中分泌能够结合本发明多肽的抗体的细胞。可通过用阳性杂交瘤克隆免疫小鼠产生通常含有大量抗体的腹水。
本发明提供产生单克隆抗体的方法以及该方法产生的抗体，所述方法包括培养分泌本发明抗体的杂交瘤细胞，其中通过将非鼠抗原免疫小鼠中分离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤，然后筛选融合得到的杂交瘤选择分泌能够结合该抗原的抗体的杂交瘤克隆。
可通过本领域技术人员已知的任何技术产生特异性识别特定表位的抗体片段。例如，可利用诸如木瓜蛋白酶(产生Fab片段)或胃蛋白酶(产生F(ab’)2片段)等酶对免疫球蛋白分子进行蛋白酶水解切割，产生本发明Fab和F(ab’)2片段。F(ab’)2片段含有可变区、轻链恒定区和重链的CH1结构域。另外，也可通过本领域已知的各种噬菌体展示法产生本发明抗体。
在噬菌体展示法中，功能性抗体结构域展示在携带编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒表面上。具体说，由动物cDNA文库(如人或鼠患病组织的cDNA文库)扩增编码VH和VL区的DNA序列。通过PCR将编码VH和VL区的DNA与scFv接头重组在一起，克隆到噬菌粒载体中。将该载体电穿孔到大肠杆菌中，用辅助噬菌体感染该大肠杆菌。用于这些方法的噬菌体一般是丝状噬菌体，包括fd和M13，通常将VH和VL区重组融合于噬菌体基因III或基因VIII。可以利用抗原，如标记抗原或者结合或捕获在固体表面或珠上的抗原来选择或鉴定表达能够结合特定抗原的抗原结合域的噬菌体。可用于制备本发明抗体的噬菌体展示法的例子包括Brinkman等，1995，J.Immunol.Methods182:41-50；Ames等，1995，J.Immunol.Methods184:177-186；Kettleborough等，1994，Eur.J.Immunol.24:952-958；Persic等，1997，Gene187:9-18；Burton等，1994，Advances in Immunology57:191-280；国际申请号PCT/GB91/01134；国际公开号WO90/02809、WO91/10737、WO92/01047、WO92/18619、WO93/11236、WO95/15982、WO95/20401和WO97/13844；以及美国专利号5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743、5,969,108、6,33,187、5,824,520和5,702,892所述的方法，上述文献全文通过引用纳入本文。
如上述参考文献所述，噬菌体选择后，可分离噬菌体的抗体编码区，并用于产生完整抗体，包括人抗体或任何其它所需的抗原结合片段，并在任何所需宿主，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌中表达，如下所述。也可采用通过本领域已知方法，例如PCT公开号WO92/22324；Mullinax等，1992，BioTechniques12(6)：864-869；Sawai等，1995，AJRI34:26-34；和Better等，1988，Science240:1041-1043所公开的方法，采用重组产生Fab、Fab’和F(ab’)2片段的技术(所述文献通过引用以全文纳入本文)。
为了产生完整抗体，可采用PCR引物，包括VH或VL核苷酸序列、限制性位点和用来保护限制性位点的侧接序列，来扩增scFv克隆中的VH或VL序列。可利用本领域技术人员已知的克隆技术将PCR扩增的VH区克隆到表达VH恒定区，如人γ4恒定区的载体中，可将PCR扩增的VL区克隆到表达VL恒定区，如人κ或λ恒定区的载体中。用于表达VH或VL区的载体可包含EF-1α启动子、分泌信号、可变区、恒定区的克隆位点和选择性标记如新霉素。也可将VH和VL区克隆到一个表达所需恒定区的载体中。然后，用本领域技术人员已知的技术将重链转化载体和轻链转化载体共转染到细胞系中，产生表达全长抗体，例如但不限于IgG的稳定或瞬时细胞系。
在一些应用，包括抗体在人体的体内应用和体外检测实验中，可能适合使用人源化抗体或嵌合抗体。人体治疗应用中特别优选完全人抗体和人源化抗体。可通过本领域已知的各种方法制备人抗体，这些方法包括利用人免疫球蛋白序列产生的抗体文库的上述噬菌体展示法。也参见美国专利4,444,887和4,716,111；和国际公开号WO98/46645、WO98/50433、WO98/24893、WO98/16654、WO96/34096、WO96/33735和WO91/10741；各自通过引用全文纳入本文。
也可用不能表达功能性内源免疫球蛋白、但可表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠产生人抗体。例如，可通过随机法或同源重组将人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物引入小鼠胚胎干细胞中。或者，除人重链和轻链基因外，可将人可变区、恒定区和多变区引入小鼠胚胎干细胞中。可以通过同源重组引入人免疫球蛋白基因座，分别或同时使小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因无功能。具体说，JH区的纯合缺失防止了内源性抗体的产生。扩增修饰的胚胎干细胞，并显微注射到胚泡中产生嵌合小鼠。然后，使嵌合小鼠交配产生表达人抗体的纯合子后代。以正常方式用所选抗原，例如本发明多肽的全部或一部分免疫转基因小鼠。可以通过常规杂交瘤技术由免疫的转基因小鼠获得该抗原的单克隆抗体。转基因小鼠携带的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，随后发生类型转换和体细胞突变。因此，可能利用这种技术产生治疗上有用的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。这种产生人抗体的技术的概述参见Lonberg和Huszar(1995，Int.Rev.Immunol.13:65-93)。这种产生人抗体和人单克隆抗体的技术的详细讨论和产生这类抗体的实验方案参见例如国际公开号WO98/24893、WO96/34096和WO96/33735；以及美国专利号5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318和5,939,598，通过引用全文纳入本文。此外，诸如阿布吉尼公司(加州福利孟德(Freemont，CA))、基法公司(Genpharm)(加州圣何塞(San Jose，CA))等公司能够利用类似于上述技术的技术提供针对所选抗原的人抗体。
嵌合抗体是抗体的不同部分来源于不同免疫球蛋白分子的分子。制备嵌合抗体的方法是本领域已知的。参见例如，Morrison，1985，Science229:1202；Oi等，1986，BioTechniques4:214；Gillies等，1989，J.Immunol.Methods125:191-202；和美国专利号5,807,715、4,816,567、4,816,397和6,311,415，通过引用全文纳入本文。
人源化抗体是能够结合预定抗原并包含基本具有人免疫球蛋白氨基酸序列的构架区和基本具有非人免疫球蛋白氨基酸序列的CDR的抗体或其变体或片段。人源化抗体基本包含至少一个、一般是两个可变区(Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv)的全部序列，其中全部或基本上全部CDR区对应于非人免疫球蛋白(即供体抗体)，全部或基本上全部构架区是人免疫球蛋白共有序列的构架区。在一个实施方式中，人源化抗体也包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，一般是人免疫球蛋白的恒定区。通常，抗体含有轻链并至少含有重链的可变区。抗体还可包含重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。人源化抗体可选自包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE在内的任何免疫球蛋白类型和包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4在内的任何同种型。通常，需要人源化抗体具有细胞毒活性时，恒定区是补体固定恒定区，类型一般是IgG1。不需要这种细胞毒活性时，恒定区可以是IgG2类型。人源化抗体可包含一种以上类型或同种型的序列，选择特定恒定区以优化所需效应功能在本领域普通技术人员的能力范围内。人源化抗体的构架区和CDR区不需要精确对应于母体序列，例如，可通过取代、插入或缺失至少一个残基来诱变供体CDR或共有构架区，以使该位点上的CDR或构架区残基不对应于共有或输入抗体。然而，不应广泛发生这类变异。通常，至少75%的人源化抗体残基将对应于母体构架区和CDR序列，更经常是90%和95%以上。可利用本领域已知的各种技术产生人源化抗体，这些技术包括但不限于：CDR移植(参见例如，欧洲专利EP239,400；国际公开WO91/09967；和美国专利5,225,539、5,530,101和5,585,089)，镶面(veneering)或表面再造(resurfacing)(欧洲专利EP592,106和EP519,596；Padlan，1991，MolecularImmunology28(4/5):489-498；Studnicka等，1994，Protein Engineering，7(6):805-814；和Roguska等，1994，PNAS，91:969-973)，链改组(美国专利5,565,332)以及以下文献所述的技术：美国专利6,407,213，美国专利5,766,886，国际公开WO9317105，Tan等，J.Immunol.，169:1119-25(2002)，Caldas等，Protein Eng.，13(5):353-60(2000)，Morea等，Methods，20(3):267-79(2000)，Baca等，J.Biol.Chem.，272(16):10678-84(1997)，Roguska等，ProteinEng.，9(10):895-904(1996)，Couto等，Cancer Res.，55(23增刊):5973s-5977s(1995)，Couto等，Cancer Res.，55(8):1717-22(1995)，Sandhu JS，Gene，150(2):409-10(1994)和Pedersen等，J.Mol.Biol.，235(3):959-73(1994)。构架区中的构架残基常常被CDR供体抗体的相应残基取代，以改变、优选改进抗原结合。通过本领域熟知的方法鉴定这些构架区取代，例如但不限于，通过建立CDR和构架区残基相互作用的模型鉴定对抗原结合非常重要的构架区残基，通过序列比较鉴定特定位置上的不寻常构架残基(参见例如，Queen等，美国专利号5,585,089；和Riechmann等，1988，Nature332:323，通过引用全文纳入本文)。
可通过本领域熟知方法产生单结构域抗体，例如，缺少轻链的抗体。参见Riechmann等，1999，J.Immuno.231:25-38；Nuttall等，2000，Curr.Pharm.Biotechnol.1(3):253-263；Muylderman，2001，J.Biotechnol.74(4):277302；美国专利号6,005,079；和国际公开号WO94/04678、WO94/25591和WO01/44301，通过引用将其全文纳入本文。
另外，进而可通过本领域技术人员熟知的技术，利用特异性结合抗原(如IL-5R)的抗体产生“模拟”抗原的抗独特型抗体(参见例如，Greenspan和Bona，1989，FASEB J.7(5)：437-444；和Nissinoff，1991，J.Immunol.147(8)：2429-2438)。
本发明抗体(如本发明抗体的重链或轻链或其片段，或者本发明单链抗体)的重组表达可能需要构建含有编码该抗体的多核苷酸的表达载体。一旦获得了编码抗体分子、抗体的重链或轻链或其片段的多核苷酸，就可利用本领域熟知的技术，通过重组DNA技术产生用于生产该抗体分子的载体。因此，本文描述了通过表达含有编码抗体的核苷酸序列的多核苷酸制备蛋白质的方法。可利用本领域技术人员熟知的方法构建含有抗体编码序列和合适的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括例如，体外重组DNA技术、合成技术和体内遗传重组。因此，本发明提供包含操作性连接于启动子的编码本发明抗体分子、抗体的重链或轻链、抗体(包括其抗体片段)的重链或轻链可变区、或重链或轻链CDR的核苷酸序列的可复制载体。这种载体可包含编码抗体分子恒定区的核苷酸序列(参见例如，国际公开号WO86/05807和国际公开号WO89/01036；和美国专利号5,122,464)，可将抗体可变区克隆到这种载体中，以表达整个重链、整个轻链或整个重链和轻链。
通过常规技术将该表达载体转移到宿主细胞中，然后通过常规技术培养该转染细胞，产生本发明抗体。因此，本发明包括含有编码本发明抗体或其片段、或其重链或轻链、或某片段、或本发明单链抗体的多核苷酸的宿主细胞，所述多核苷酸操作性连接于异源启动子。在具体实施方式中，为了表达双链抗体，可以在宿主细胞中共同表达编码重链和轻链的载体，以表达整个免疫球蛋白分子，如下所详述。
可利用各种宿主表达载体系统表达本发明抗体分子(参见例如，美国专利号5,807,715)。这类宿主表达系统代表可产生并随后纯化感兴趣编码序列的载体，但也代表用合适的核苷酸编码序列转化或转染时，可原位表达本发明抗体分子的细胞。它们包括但不限于微生物，例如用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如但不限于大肠杆菌(E.coli)和枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如但不限于毕赤酵母(SaccharomycesPichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如但不限于杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如但不限于花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染的或用含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如但不限于Ti质粒)转化的植物细胞系统；或者哺乳动物细胞系统(例如但不限于COS、CHO、BHK、293、NS0和3T3细胞)，其携带含有衍生自哺乳动物细胞基因组(例如但不限于金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒(例如但不限于腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)的启动子的重组表达构建物。利用细菌细胞如大肠杆菌(Escherichia coli)和真核细胞(特别是表达完整重组抗体分子时)表达重组抗体分子。例如，哺乳动物细胞如中华仓鼠卵巢细胞(CHO)与某载体如来自人巨细胞病毒的主要中间体早期基因启动子元件联用，是抗体的有效表达系统(Foecking等，1986，基因45:101；和Cockett等，1990，Bio/Technology8:2)。在一个具体实施方式中，通过组成型启动子、诱导型启动子或组织特异性启动子调节编码本发明抗体，其衍生物、类似物或片段的核苷酸序列的表达。
在细菌系统中，可根据所表达抗体分子的指定应用对许多表达载体进行有利地选择。例如，准备产生大量这类抗体时，为了产生抗体分子的药物组合物，可能需要能够介导易于纯化的融合蛋白产物高水平表达的载体。这类载体包括但不限于：大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等，1983，EMBO，12:1791))，其中抗体编码序列可单独连接到载体内，与lacZ编码区位于同一读框内，以产生融合蛋白；pIN载体(Inouye和Inouye，1985，Nucleic Acids Res.13:3101-3109；Van Heeke和Schuster，1989，J.Biol.Chem.，24:5503-5509)；等等。也可采用pGEX载体表达外来多肽与谷胱甘肽5-转移酶(GST)的融合蛋白。通常，这类融合蛋白可溶，并可通过以下方法容易地由裂解细胞纯化：吸附和结合于基质谷胱甘肽琼脂糖珠，然后在游离谷胱甘肽的存在下洗脱。设计pGEX载体，使其包含凝血酶或因子Xa蛋白酶切割位点，以便由GST部分释放克隆的靶基因产物。
在昆虫系统中，苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)核多面体病病毒(AcNPV)用作表达外来基因的载体。该病毒在草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)细胞中生长。可将抗体编码序列单独克隆到病毒的非必需区(如多角体蛋白基因)中，并置于AcNPV启动子(如多角体蛋白启动子)的控制下。
在哺乳动物宿主细胞中，可利用许多基于病毒的表达系统。在腺病毒用作表达载体的情况下，可将感兴趣的抗体编码序列连接于腺病毒转录/翻译控制复合物，例如晚期启动子和三联前导序列。然后，可通过体外或体内重组将该嵌合基因插入腺病毒基因组中。插入病毒基因组的非必需区(如E1或E3区)会产生活的且能够在感染宿主中表达抗体分子的重组病毒(参见例如Logan和Shenk,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:355-359)。为使插入的抗体编码序列能够有效翻译，可能还需要特定的起始信号。这些信号包括ATG启动密码子和相邻序列。另外，该启动密码子必须与所需编码序列的阅读框同相，以保证完整插入物的翻译。这些外源性翻译控制信号和启动密码子可以是各种天然和合成来源。可通过包含合适的转录增强子元件、转录终止子等提高表达效率(参见例如Bittner等，1987,Methods inEnzymol.153:51-544)。
此外，可选择调节插入序列表达、或以所需的特定方式修饰和加工该基因产物的宿主细胞系。此类蛋白质产物的修饰(例如但不限于，糖基化)和加工(例如但不限于，切割)可能对蛋白质功能具有重要作用。不同宿主细胞具有对蛋白质和基因产物进行翻译后加工和修饰的特征性和特定机制。可选择合适的细胞系或宿主系统，以保证对所表达的外来蛋白进行正确的修饰和加工。为此，可采用包含能适当地加工初始转录物、对基因产物进行糖基化和磷酸化的细胞机器的真核宿主细胞。这类哺乳动物宿主细胞包括但不限于：CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、WI38、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0(不会内源性产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。
为了长期高产量生产重组蛋白，可使用稳定表达。例如，可工程改造稳定表达抗体分子的细胞系。与其使用含有病毒复制起点的表达载体，不如用合适表达控制元件(如启动子、增强子、序列、转录终止子、聚腺苷酸化位点等)控制的DNA和选择性标记来转化宿主细胞。引入外来DNA后，使工程改造细胞在富营养培养基中生长1-2天，然后换到选择性培养基中。重组质粒中的选择性标记对选择压产生抗性，使得细胞能够将该质粒稳定整合到其染色体中，生长形成细胞灶，进而可克隆并扩增成细胞系。可有益地利用这种方法工程改造表达该抗体分子的细胞系。这种工程改造细胞系在筛选和评价与抗体分子直接或间接相互作用的组合物时特别有用。
在一个实施方式中，用于表达IL-5R结合分子的细胞系是不岩藻糖基化IL-5R结合分子Fc区的细胞。这些细胞类型的非限制性例子参见美国专利6,946,292和美国专利申请公开号2006/0078991A1、2004/0110282A1、2006/0024800A1、2005/0216958A1、2004/0132140和2004/0259150。在一个具体实施方式中，IL-5R结合分子是人源化、岩藻糖基化IgG1抗-IL-5Rα链单克隆抗体。在另一具体实施方式中，该抗体是MEDI-563(也称为BIW-8405)。在另一具体实施方式中，该抗体不是MEDI-563。
可采用许多选择系统，包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等，1977,Cell11:223)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Szybalska和Szybalski,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA48:202)和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等,1980,Cell22:8-17)基因，它们分别可用于tk-、hgprt-或aprt-细胞。另外，抗代谢剂抗性可用作选择以下基因的基础：dhfr，产生甲氨蝶呤抗性(Wigler等，1980，Natl.Acad.Sci.USA，77:357；O’Hare等，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78:1527)；gpt，产生霉酚酸抗性(Mulligan和Berg，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78:2072)；neo，产生氨基糖苷G-418抗性(Wu和Wu，1991，Biotherapy3:87-95；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596；Mulligan，1993，Science260:926-932；和Morgan和Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.62:191-217；May，1993，
TIB TECH11(5):155-215)；和hygro，产生潮霉素抗性(Santerre等，1984，Gene，30:147)。通常应用重组DNA技术领域公知的方法以选择所需的重组克隆，这些方法参见例如：Ausubel等(编)，《新编分子生物学实验指南》(Current Protocols in Molecular Biology)，约翰韦利森公司(John Wiley &Sons)，NY(1993)；Kriegler，《基因转移和表达，实验室手册》(Gene Transferand Expression，A Laboratory Manual)，斯托克顿出版社(Stockton Press)，NY(1990)；和Dracopoli等(编)，《新编人类基因组实验指南》(CurrentProtocols in Human Genetics)的第12和13章，约翰韦利森公司，NY(1994)；Colberre-Garapin等，1981，J.Mol.Biol.，150:1，通过引用将其全文纳入本文。
可通过载体扩增提高抗体分子的表达水平(综述参见Bebbington和Hentschel,The use of vectors based on gene amplification for the expression ofcloned genes in mammalian cells in DNA cloning(在DNA克隆中基于基因扩增使用载体表达哺乳动物细胞中克隆的基因)，第3卷(学术出版社(Academic Press)，纽约，1987))。当表达抗体的载体系统中的标记可扩增时，宿主细胞培养物中存在的抑制剂水平提高会增加标记基因的拷贝数。由于扩增区域与抗体基因相连，所以也会提高抗体的产量(Crouse等，1983，Mol.Cell.Biol.3:257)。
可利用本发明的两个表达载体共同转染宿主细胞，第一个载体编码重链衍生的多肽，第二个载体编码轻链衍生的多肽。这两种载体可含有相同的选择性标记，使得能够等同地表达重链和轻链多肽。或者，可使用编码且能够同时表达重链和轻链多肽的单一载体。在这种情况下，轻链应位于重链之前，以避免产生过多有毒的游离重链(Proudfoot，1986，Nature322:52；和Kohler，1980，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77:2197)。重链与轻链的编码序列可包括cDNA或基因组DNA。
一旦通过重组表达产生本发明抗体分子后，可通过本领域已知的任何免疫球蛋白分子纯化方法进行纯化，这些方法包括例如层析(如离子交换层析，亲和力层析，特别是在蛋白A之后对特定抗原的亲和力层析，以及大小筛分柱层析)、离心、差异溶解度或任何其它蛋白质纯化标准技术。另外，本发明抗体或其片段可与本文所述或本领域已知的异源多肽序列融合，以利于纯化。
对本发明所包括的IL-5R结合分子(如抗体、蛋白质、多肽、肽和融合蛋白)而言，给予患者的剂量一般是0.0001至100mg/kg患者体重。给予患者的剂量优选为0.0001mg/kg－20mg/kg、0.0001mg/kg－10mg/kg、0.0001mg/kg－5mg/kg、0.0001－2mg/kg、0.0001－1mg/kg、0.0001mg/kg－0.75mg/kg、0.0001mg/kg－0.5mg/kg、0.0001mg/kg－0.25mg/kg、0.0001－0.15mg/kg、0.0001－0.10mg/kg、0.001－0.5mg/kg、0.01－0.25mg/kg或0.01－0.10mg/kg患者体重。通常，因为对外来多肽的免疫应答，人抗体在人体内的半衰期比其它来源的抗体长。因此，人抗体的给药剂量和给药频率常常较低。另外，可通过修饰，如脂化提高抗体的摄取和组织渗透性，从而降低给予本发明抗体或其片段的剂量和频率。
在一个具体实施方式中，预防、治疗、控制和/或改善患者的疾病或其一种或多种症状的IL-5R结合分子的给药剂量是150μg/kg以下，优选125μg/kg以下、100μg/kg以下、95μg/kg以下、90μg/kg以下、85μg/kg以下、80μg/kg以下、75μg/kg以下、70μg/kg以下、65μg/kg以下、60μg/kg以下、55μg/kg以下、50μg/kg以下、45μg/kg以下、40μg/kg以下、35μg/kg以下、30μg/kg以下、25μg/kg以下、20μg/kg以下、15μg/kg以下、10μg/kg以下、5μg/kg以下、2.5μg/kg以下、2μg/kg以下、1.5μg/kg以下、1μg/kg以下、0.5μg/kg以下或0.5μg/kg患者体重以下。在另一实施方式中，预防、治疗、控制和/或改善患者的过度增殖性疾病或其一种或多种症状的本发明IL-5R结合分子的给药剂量是0.1mg－20mg、0.1mg－15mg、0.1mg－12mg、0.1mg－10mg、0.1mg－8mg、0.1mg－7mg、0.1mg－5mg、0.1－2.5mg、0.25mg－20mg、0.25－15mg、0.25－12mg、0.25－10mg、0.25－8mg、0.25mg－7mg、0.25mg－5mg、0.5mg－2.5mg、1mg－20mg、1mg－15mg、1mg－12mg、1mg－10mg、1mg－8mg、1mg－7mg、1mg－5mg或1mg－2.5mg单位剂量。
在其它实施方式中，给予对象一个或多个剂量的有效量的一种或多种本发明治疗，其中本发明治疗有效量的剂量达到的血清滴度为至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml。在其它实施方式中，给予对象一剂有效量的一种本发明IL-5R结合分子，使IL-5R结合分子的血清滴度达到至少0.1μg/ml、至少0.5μg/ml、至少1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml，然后给予一剂有效量的一种或多种本发明IL-5R结合分子，将血清滴度维持在至少0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少6μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少50μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少175μg/ml、至少200μg/ml、至少225μg/ml、至少250μg/ml、至少275μg/ml、至少300μg/ml、至少325μg/ml、至少350μg/ml、至少375μg/ml或至少400μg/ml。按照这些实施方式，可给予对象1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个后续剂量。
在一个具体实施方式中，本发明提供预防、治疗、控制或改善嗜酸性粒细胞介导疾病或其一种或多种症状的方法，所述方法包括给予需要的对象一剂至少10μg，优选至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg、至少100μg、至少105μg、至少110μg、至少115μg或至少120μg的一种或多种本发明治疗(如治疗剂或预防剂)、联合治疗或组合物。在另一实施方式中，本发明提供预防、治疗、控制和/或改善嗜酸性粒细胞介导的疾病或失调，或者其一种或多种症状的方法，所述方法包括给予需要的对象一剂至少10μg，优选至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg、至少100μg、至少105μg、至少110μg、至少115μg或至少120μg的一种或多种本发明IL-5R结合分子、联合治疗或组合物，每3天一次、优选每4天一次、每5天一次、每6天一次、每7天一次、每8天一次、每10天一次、每两周一次、每三周一次或每月一次。
本发明提供预防、治疗、控制或防止嗜酸性粒细胞介导的失调或疾病，或者其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象一个或多个剂量预防或治疗有效量的一种或多种本发明IL-5R结合分子、联合治疗或组合物；和(b)给予一定数量的所述治疗(如治疗剂或预防剂)的剂量后，监测所述给予的IL-5R结合分子在所述对象中的血浆水平/浓度。而且，优选地，所述一定数量的剂量是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个剂量的预防或治疗有效量的一种或多种本发明IL-5R结合分子、组合物或联合治疗。
在一个具体实施方式中，本发明提供一种预防、治疗、控制和/或改善嗜酸性粒细胞介导的失调或疾病，或者其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象一剂至少10μg(优选至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg或至少100μg)的一种或多种本发明治疗(如治疗剂或预防剂)；和(b)当给予所述对象的IL-5R结合分子的血浆水平低于0.1μg/ml，优选低于0.25μg/ml，低于0.5μg/ml，低于0.75μg/ml或低于1μg/ml时，给予所述对象一个或多个后续剂量。在另一具体实施方式中，本发明提供一种预防、治疗、控制和/或改善嗜酸性粒细胞介导的失调或疾病，或者其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象一个或多个剂量至少10μg(优选至少15μg、至少20μg、至少25μg、至少30μg、至少35μg、至少40μg、至少45μg、至少50μg、至少55μg、至少60μg、至少65μg、至少70μg、至少75μg、至少80μg、至少85μg、至少90μg、至少95μg或至少100μg)的一种或多种本发明IL-5R结合分子；(b)在给予一定数量的剂量后，监测所给IL-5R结合分子在所述对象中的血浆水平；和(c)当给予所述对象的IL-5R结合分子的血浆水平低于0.1μg/ml、优选低于0.25μg/ml、低于0.5μg/ml、低于0.75μg/ml或低于1μg/ml时，给予后续剂量的本发明IL-5R结合分子。在某些实施方式中，所述一定数量的剂量是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个剂量的有效量的一种或多种本发明IL-5R结合分子。
已用于或目前正用于预防、治疗、控制和/或改善过度增殖性疾病或其一种或多种症状的除本发明IL-5R结合分子以外的治疗(如预防剂或治疗剂)可与本发明方法的一种或多种IL-5R结合分子联合使用，以治疗、控制、预防和/或改善嗜酸性粒细胞介导的失调或疾病，或者其一种或多种症状。优选地，用于本发明联合治疗的预防剂或治疗剂的剂量低于已用于或正用于预防、治疗、控制和/或改善嗜酸性粒细胞介导的失调或疾病，或者其一种或多种症状的剂量。目前用于预防、治疗、控制和/或改善过度增殖性疾病或其一种或多种症状的药剂的推荐剂量可获自本领域已知的任何参考文献，包括但不限于：Hardman等编，2001，Goodman和Gilman的《治疗的药理学基础》(The Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics)，第10版，Mc-Graw-Hill，纽约；《医师案头参考》(Physician’s Desk Reference，PDR)第58版，2004，新泽西州蒙特威尔的医疗经济公司(MedicalEconomics Co.，Inc.，Montvale，NJ)，通过引用将其全文纳入本文。
在各种实施方式中，给予治疗(如预防剂或治疗剂)的间隔小于5分钟、小于30分钟、间隔1小时、间隔约1小时、间隔约1－2小时、间隔约2小时－3小时、间隔约3小时－4小时、间隔约4小时－5小时、间隔约5小时－6小时、间隔约6小时－7小时、间隔约7小时－8小时、间隔约8小时－9小时、间隔约9小时－10小时、间隔约10小时－11小时、间隔约11小时－12小时、间隔约12小时－18小时、间隔18小时－24小时、间隔24小时－36小时、间隔36小时－48小时、间隔48小时－52小时、间隔52小时－60小时、间隔60小时－72小时、间隔72小时－84小时、间隔84小时－96小时或96小时－120小时。在其它实施方式中，在同一次患者就诊期间给予两个或更多个治疗。
在某些实施方式中，周期性地给予一种或多种本发明IL-5R结合分子和一种或多种其它治疗(如预防剂或治疗剂)。周期性治疗包括给予第一治疗(如，第一种预防剂或治疗剂)一段时间，然后给予第二治疗(如，第二种预防剂或治疗剂)一段时间，任选地，之后给予第三治疗(如，预防剂或治疗剂)一段时间等等，并重复这种顺次给药即该周期，以降低对一种治疗产生耐受的概率、避免或减轻一种治疗的副作用和/或提高这些治疗的功效。
在某些实施方式中，可重复给予相同的本发明IL-5R结合分子，给药可间隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月，75天、3个月或至少6个月。在其它实施方式中，可重复给予除本发明IL-5R结合分子以外的相同治疗(如，预防剂或治疗剂)，所述给药可间隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月，75天、3个月或至少6个月。
在一个具体实施方式中，IL-5R结合分子以0.03mg/kg的单个静脉内剂量给予。
本发明提供预防、治疗、控制或防止嗜酸性粒细胞介导的失调或疾病，或者其一种或多种症状的方法，所述方法包括：(a)给予需要的对象一个或多个剂量预防或治疗有效量的一种或多种本发明IL-5R结合分子、联合治疗或组合物；和(b)在给予一个或多个剂量的所述治疗(如治疗剂或预防剂)之前或之后，监测所述对象的至少一种疾病指标或症状。
在一个实施方式中，所述对象患有COPD。
在一个实施方式中，所述对象患有2002年NAEPP专家组报告确定的轻度持续性或轻度间歇性哮喘。
在一个实施方式中，在给予单个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前和之后监测所述对象的疾病指标或症状。在另一实施方式中，在给予多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前和之后监测所述对象的疾病指标或症状。
在一个实施方式中，疾病指标或症状是自身评价的哮喘症状评分。哮喘症状评分的非限制性例子是对象在家每天记录的自身评价的评分。该评分根据早晨、夜间和白天症状的严重程度，将过去24小时的哮喘症状分级。症状和制定的评分见表1。每天最大评分为9，最小评分为0。对象连续进行自身评价和记录。
表1.哮喘症状评分。夜间从上床开始，到早晨睡醒为止。早晨从睡醒持续到睡醒后1小时。白天从睡醒后1小时开始，到上床时间为止。
Figure BDA00003165927700331
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为X，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后哮喘症状评分为X-Y，其中X是1、2、3、4、5、6、7、8或9，Y是1、2、3、4、5、6、7、8或9，给药后评分决不会低于0。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为0－9。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为0－3、1－4、2－5、3－5、4－7、5－8或6－9。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为1、2、3、4、5、6、7、8或9。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为1。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为2。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为3。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为4。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为5。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为6。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为7。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为8。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的哮喘症状评分为9。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为0－9。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为0－3、1－4、2－5、3－5、4－7、5－8或6－9。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为1、2、3、4、5、6、7、8或9。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为1。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为2。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为3。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为4。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为5。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为6。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为7。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为8。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分为9。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的哮喘症状评分低于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前，其中给药后评分决不会低于0。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低1分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低9分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低2分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低3分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低4分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低5分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低6分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低7分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低8分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少1分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少9分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少2分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少3分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少4分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少5分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少6分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少7分。在一个具体实施方式中，所述哮喘症状评分降低至少8分。
在一个实施方式中，所述疾病指标或症状是呼出一氧化氮分数(FENO)。可按照欧洲呼吸科协会(European Respiratory Society)和美国胸科协会(American Thoracic Society)的联合推荐测定FENO(美国胸科协会，欧洲呼吸科协会(2005)ATS/ERS推荐的呼出的下呼吸道一氧化氮和鼻一氧化氮的在线和离线测定标准化步骤(ATS/ERS Recommendations forStandardized Procedures for the Online and Offline Measurements of ExhaledLower Respiratory Nitric Oxide and Nasal Nitric Oxide)，2005.Am J RespirCrit Care Med.171：912-930)。用NIOX以50ml/s流速进行FENO测定(ATS标准)。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为20－500ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为20－500ppb、20－400ppb、20－300ppb、20－200ppb、50－500ppb、100－500ppb、150－500ppb、200－500ppb、20－50ppb、50－100ppb、100－200ppb、200－300ppb、300－500ppb。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为至少50ppb、至少100ppb、至少150ppb、至少200ppb、至少250ppb、至少300ppb、至少350ppb、至少400ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为50ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为100ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为150ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为200ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为250ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为300ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为350ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的FENO为400ppb。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为20－500ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为20－500ppb、20－400ppb、20－300ppb、20－200ppb、50－500ppb、100－500ppb、150－500ppb、200－500ppb、20－50ppb、50－100ppb、100－200ppb、200－300ppb、300－500ppb。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多50ppb、至多100ppb、至多150ppb、至多200ppb、至多250ppb、至多300ppb、至多350ppb、至多400ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多20ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多50ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多100ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多150ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多200ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多250ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多300ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多350ppb。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO为至多400ppb。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的FENO低于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前，其中FENO决不会低于0ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少50ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少100ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少150ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少200ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少250ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少300ppb。在一个具体实施方式中，FENO降低至少10%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少20%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少30%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少40%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少50%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少60%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少70%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少80%。在一个具体实施方式中，FENO降低至少90%。在一个具体实施方式中，FENO降低10%。在一个具体实施方式中，FENO降低20%。在一个具体实施方式中，FENO降低30%。在一个具体实施方式中，FENO降低40%。在一个具体实施方式中，FENO降低50%。在一个具体实施方式中，FENO降低60%。在一个具体实施方式中，FENO降低70%。在一个具体实施方式中，FENO降低80%。在一个具体实施方式中，FENO降低90%。
在一个实施方式中，所述疾病指标或症状是嗜酸性粒细胞阳离子性蛋白质(ECP)。可利用本领域技术人员已知的任何方法评估血清ECP水平，例如但不限于ELISA试验、放射性免疫试验。可通过任何一种市售试验测定血清ECP水平。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为20－500ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为20－200ng/ml、20－150ng/ml、20－100ng/ml、20－50ng/ml、30－200ng/ml、40－200ng/ml、50－200ng/ml、30－100ng/ml、30－80ng/ml、30－70ng/ml、20－80ng/ml、20－70ng/ml、20－60ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为至少20ng/ml、至少30ng/ml、至少40ng/ml、至少50ng/ml、至少60ng/ml、至少100ng/ml、至少150ng/ml、至少200ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为25ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为30ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为35ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为40ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为50ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为60ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为70ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为80ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为100ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为150ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清ECP为200ng/ml。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP检测不到。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为1－500ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为1－200ng/ml、1－150ng/ml、1－100ng/ml、1－50ng/ml、1－20ng/ml、10－200ng/ml、10－100ng/ml、10－50ng/ml、20－100ng/ml、20－50ng/ml。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多1ng/ml、至多5ng/ml、至多10ng/ml、至多20ng/ml、至多30ng/ml、至多50ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多1ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多5ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多10ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多15ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多20ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多25ng/ml。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP为至多30ng/ml。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP低于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前，其中血清ECP决不会低于0ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少50ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少100ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少150ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少200ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少250ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少300ng/ml。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少10%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少20%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少30%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少40%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少50%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少60%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少70%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少80%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少90%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低至少95%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低10%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低20%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低30%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低40%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低50%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低60%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低70%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低80%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低90%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低95%。在一个具体实施方式中，血清ECP降低99%。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的血清ECP检测不到。在一个具体实施方式中，血清ECP水平在无法检测到的状态保持至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约20周或至少约25周。
在一个实施方式中，所述疾病指标或症状是乙酰甲胆碱刺激检测(MCT)。可按照美国胸科协会(ATS)指南(乙酰甲胆碱和运动试验指南-1999(Guidelines for Methacholine and Exercise Testing–1999).(2000)Am JRespir Crit Care Med.161:309-329)，在有控制支气管痉挛经验的医生参与和可立即获得合适的治疗药物的条件下进行MCT。简要说，按照ATS指南校准所用的肺量计。所用喷雾器必须产生质量中值空气动力直径(MMAD)为1-4微米的粒度和0.13±10%毫升/分钟的流速。使用FDA批准来源的乙酰甲胆碱，用无菌生理盐水稀释。可以用2分钟潮式呼吸或五次呼吸剂量计法进行吸入刺激，如参考公开文献所述。按照研究人员已经建立的实践给予乙酰甲胆碱的浓度，但范围在0.06mg/dL至25.0mg/dL。每个剂量完成后30和90秒测定FEV1，记录这两个数值中较高的数值。提高给药浓度，直到观察到FEV1比基线值降低至少20%。PC20是导致FEV1比基线降低至少20%的乙酰甲胆碱浓度。完成最后一个剂量后，可根据研究负责人的判断，通过计量吸入器或喷雾器给予对象沙丁胺醇。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的PC20为0.06－25mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的PC20为0.06－25mg/dL、0.1－10mg/dL、0.06－3mg/dL、0.06－2mg/dL、0.06－1mg/dL、0.1－3mg/dL、0.1－2mg/dL、0.1－1mg/dL、0.2－10mg/dL、0.5－10mg/dL、1－10mg/dL、0.1－5mg/dL、0.2－5mg/dL、0.5－5mg/dL、0.1－2mg/dL、0.2－2mg/dL、0.5－2mg/dL、0.06－0.1mg/dL、0.1－0.2mg/dL、0.2－0.5mg/dL、0.5－1mg/dL、1－2mg/dL、2－5mg/dL、5－10mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的PC20为至多0.1mg/dL、至多0.2mg/dL、至多0.4mg/dL、至多0.5mg/dL、至多1mg/dL、至多2mg/dL、至多5mg/dL、至多10mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为10mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为5mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为2mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为1mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为0.5mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为0.2mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的血清PC20为0.1mg/dL。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为0.5－25mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为1－25mg/dL、2－25mg/dL、5－25mg/dL、10－25mg/dL、1－10mg/dL、2－10mg/dL、2－10mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少1mg/dL、至少2mg/dL、至少5mg/dL、至少10mg/dL、至少20mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少0.2mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少0.3mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少0.4mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少0.5mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少0.7mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少1mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少2mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少5mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少10mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少20mg/dL。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20为至少25mg/dL。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的PC20高于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前。在一个具体实施方式中，PC20提高至少0.3mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少0.5mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少0.7mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少1mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少3mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少5mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少10mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少15mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少20mg/dL。在一个具体实施方式中，PC20提高至少2倍。在一个具体实施方式中，PC20提高至少4倍。在一个具体实施方式中，PC20提高至少8倍。在一个具体实施方式中，PC20提高至少10倍。在一个具体实施方式中，PC20提高至少12倍。在一个具体实施方式中，PC20提高至少15倍。在一个具体实施方式中，PC20提高至少20倍。在一个具体实施方式中，PC20提高2倍。在一个具体实施方式中，PC20提高4倍。在一个具体实施方式中，PC20提高8倍。在一个具体实施方式中，PC20提高10倍。在一个具体实施方式中，PC20提高15倍。在一个具体实施方式中，PC20提高60%。在一个具体实施方式中，PC20提高20倍。
在一个实施方式中，所述疾病指标或症状是循环嗜酸性粒细胞计数。可利用本领域技术人员已知的任何方法评估循环嗜酸性粒细胞计数，例如但不限于组织学测定、流式细胞术。可通过任何一种市售试剂盒测定循环嗜酸性粒细胞计数。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为50－1000个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为50－1000个细胞/微升、100－1000个细胞/微升、150－1000个细胞/微升、200－1000个细胞/微升、250－1000个细胞/微升、300－1000个细胞/微升、400－1000个细胞/微升、500－1000个细胞/微升、50－500个细胞/微升、100－500个细胞/微升、100－400个细胞/微升、150－500个细胞/微升、200－500个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至少50个细胞/微升、至少100个细胞/微升、至少150个细胞/微升、至少200个细胞/微升、至少250个细胞/微升、至少300个细胞/微升、至少400个细胞/微升、至少500个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为50个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为100个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为150个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为200个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为250个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为300个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为350个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为400个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜酸性粒细胞计数为500个细胞/微升。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为1－400个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为1－200个细胞/微升、1－100个细胞/微升、1－50个细胞/微升、1－40个细胞/微升、10－200个细胞/微升、10－100个细胞/微升、10－40个细胞/微升、20－200个细胞/微升、20－100个细胞/微升、20－50个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多1个细胞/微升、至多5个细胞/微升、至多10个细胞/微升、至多20个细胞/微升、至多30个细胞/微升、至多40个细胞/微升、至多50个细胞/微升、至多60个细胞/微升、至多80个细胞/微升、至多100个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多1个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多5个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多10个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多20个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多30个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多40个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多50个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多60个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数为至多80个细胞/微升。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜酸性粒细胞计数低于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前，其中循环嗜酸性粒细胞计数决不会低于0个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少50个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少100个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少150个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少200个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少250个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少300个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少10%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少20%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少30%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少40%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少50%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少60%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少70%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少80%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少90%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少95%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低至少99%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低10%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低20%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低30%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低40%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低50%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低60%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低70%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低80%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低90%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低95%。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数降低99%。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子后对象的循环嗜酸性粒细胞计数检测不到。在一个具体实施方式中，循环嗜酸性粒细胞计数在无法检测到的状态保持至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约20周或至少约25周。
在一个实施方式中，所述疾病指标或症状是诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞。可利用本领域技术人员已知的任何方法评估诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞，例如但不限于Belda等所述的方法。(2000)Am J Respir Crit CareMed161:475-478。可通过任何一种市售试剂盒测定诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为0.1%－10%。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为0.1%－2%、0.1%－5%、0.5%－2%、0.5%－5%、0.5%－10%、1%－2%、1%－5%、1%－10%、2%－5%、2%－10%、3%－5%、3%－10%、1.5%－5%、2.5%－5%。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至少0.1%、至少0.5%、至少1%、至少1.5%、至少2%、至少2.5%、至少3%、至少4%、至少5%、至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为0.5%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为1%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为1.5%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为2%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为2.5%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为3%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为4%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为5%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为6%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为7%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为8%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为9%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为10%。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为0.1%－5%。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为0.1%－3%、0.1%－2%、0.1%－1.5%、0.5%－5%、0.5%－3%、0.5%－1%、1%－5%、1%－3%、2%－5%、3%－5%、2.5%－5%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多1%、至多2%、至多3%、至多4%、至多5%、至多6%、至多7%、至多8%、至多9%、至多10%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多1%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多2%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多3%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多4%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多5%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多6%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多7%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多8%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多9%。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞为至多10%。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞低于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前，其中诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞决不会低于0%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少10%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少9%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少8%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少6%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少5%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少4%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少3%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少2%。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的%嗜酸性粒细胞降低至少1%。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子后在对象诱生痰液中检测不到嗜酸性粒细胞。在一个具体实施方式中，诱生痰液中的嗜酸性粒细胞在无法检测到的状态保持至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约20周或至少约25周。
在一个实施方式中，所述疾病指标或症状是循环嗜碱性粒细胞计数。可利用本领域技术人员已知的任何方法评估循环嗜碱性粒细胞计数，例如但不限于组织学测定、流式细胞术。可通过任何一种市售试剂盒测定循环嗜碱性粒细胞计数。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为5－500个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为50－500个细胞/微升、10－500个细胞/微升、20－500个细胞/微升、30－500个细胞/微升、40－500个细胞/微升、50－500个细胞/微升、10－400个细胞/微升、10－300个细胞/微升、10－200个细胞/微升、10－100个细胞/微升、20－100个细胞/微升、30－100个细胞/微升、10－75个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至少5个细胞/微升、至少10个细胞/微升、至少15个细胞/微升、至少20个细胞/微升、至少30个细胞/微升、至少50个细胞/微升、至少60个细胞/微升、至少100个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为5个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为10个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为15个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为20个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为30个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为50个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为60个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前对象的循环嗜碱性粒细胞计数为100个细胞/微升。
在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为1－100个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为1－100个细胞/微升、1－50个细胞/微升、1－30个细胞/微升、1－20个细胞/微升、1－10个细胞/微升、5－100个细胞/微升、5－50个细胞/微升、5－20个细胞/微升、5－10个细胞/微升、10－30个细胞/微升。在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多1个细胞/微升、至多5个细胞/微升、至多10个细胞/微升、至多20个细胞/微升、至多30个细胞/微升、至多50个细胞/微升、至多100个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多1个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多5个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多10个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多20个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多30个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多40个细胞/微升。在一个实施方式中，在给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数为至多50个细胞/微升。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之后对象的循环嗜碱性粒细胞计数低于给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子之前，其中循环嗜碱性粒细胞计数绝不会低于0个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少10个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少20个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少30个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少50个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少75个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少100个细胞/微升。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少10%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少20%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少30%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少40%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少50%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少60%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少70%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少80%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少90%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少95%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低至少99%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低10%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低20%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低30%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低40%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低50%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低60%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低70%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低80%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低90%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低95%。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数降低99%。
在一个实施方式中，给予一个或多个剂量的一种或多种IL-5R结合分子后对象的循环嗜碱性粒细胞计数检测不到。在一个具体实施方式中，循环嗜碱性粒细胞计数在无法检测到的状态保持至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约12周、至少约14周、至少约16周、至少约20周或至少约25周。
具体实施方式
1.一种减少人对象中嗜酸性粒细胞数量的方法，包括给予所述对象IL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。
2.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子是抗体。
3.如实施方式2所述的方法，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体。
4.如实施方式3所述的方法，其特征在于，所述抗体是嵌合抗体。
5.如实施方式3所述的方法，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。
6.如实施方式3所述的方法，其特征在于，所述抗体是人抗体。
7.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述特异性结合IL-5R的区域包含IL-5或其片段、取代形式或衍生物的氨基酸序列。
8.如实施方式7所述的方法，其特征在于，所述特异性结合IL-5R的区域包含IL-5的非功能性变体。
9.如实施方式1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子特异性结合IL-5R？链。
10.如实施方式1所述的方法，其特征在于，以提高效应功能的方式改变所述免疫球蛋白Fc区。
11.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区包含的岩藻糖水平降低。
12.如实施方式11所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区不包含岩藻糖。
13.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区包含导致效应功能增强的氨基酸取代。
14.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸取代包括在所述Fc区中包含以下氨基酸序列：332E、239D和330L，它们是按照Kabat所列的EU索引编号的。
15.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少发生在外周血循环中。
16.如实施方式1所述的方法，其特征在于，将嗜酸性粒细胞减少至低于50个嗜酸性粒细胞/毫米3的水平。
17.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞的减少发生在给药后头48小时内。
18.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞的减少发生在给药后头24小时内。
19.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少是可逆的。
20.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约25个嗜酸性粒细胞/毫米3。
21.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约50个嗜酸性粒细胞/毫米3。
22.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约75个嗜酸性粒细胞/毫米3。
23.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约100个嗜酸性粒细胞/毫米3。
24.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约125个嗜酸性粒细胞/毫米3。
25.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约150个嗜酸性粒细胞/毫米3。
26.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约175个嗜酸性粒细胞/毫米3。
27.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
28.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约225个嗜酸性粒细胞/毫米3。
29.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
30.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约275个嗜酸性粒细胞/毫米3。
31.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约300个嗜酸性粒细胞/毫米3。
32.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约325个嗜酸性粒细胞/毫米3。
33.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约350个嗜酸性粒细胞/毫米3。
34.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约375个嗜酸性粒细胞/毫米3。
35.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约400个嗜酸性粒细胞/毫米3。
36.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约425个嗜酸性粒细胞/毫米3。
37.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约450个嗜酸性粒细胞/毫米3。
38.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约475个嗜酸性粒细胞/毫米3。
39.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
40.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
41.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约75至250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
42.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约100至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
43.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
44.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
45.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至150个嗜酸性粒细胞/毫米3。
46.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约100个嗜酸性粒细胞/毫米3。
47.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约75个嗜酸性粒细胞/毫米3。
48.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约50个嗜酸性粒细胞/毫米3。
49.如实施方式1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约25个嗜酸性粒细胞/毫米3。
50.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约50至500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
51.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约75至475个嗜酸性粒细胞/毫米3。
52.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约75至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
53.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约100至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
54.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约25个嗜酸性粒细胞/毫米3。
55.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约50个嗜酸性粒细胞/毫米3。
56.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约75个嗜酸性粒细胞/毫米3。
57.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约100个嗜酸性粒细胞/毫米3。
58.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约125个嗜酸性粒细胞/毫米3。
59.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约150个嗜酸性粒细胞/毫米3。
60.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约175个嗜酸性粒细胞/毫米3。
61.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
62.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约225个嗜酸性粒细胞/毫米3。
63.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
64.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约275个嗜酸性粒细胞/毫米3。
65.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约300个嗜酸性粒细胞/毫米3。
66.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约325个嗜酸性粒细胞/毫米3。
67.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约350个嗜酸性粒细胞/毫米3。
68.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约375个嗜酸性粒细胞/毫米3。
69.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约400个嗜酸性粒细胞/毫米3。
70.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约425个嗜酸性粒细胞/毫米3。
71.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约450个嗜酸性粒细胞/毫米3。
72.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约475个嗜酸性粒细胞/毫米3。
73.如实施方式1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
74.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约5个嗜碱性粒细胞/毫米3。
75.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约10个嗜碱性粒细胞/毫米3。
76.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约15个嗜碱性粒细胞/毫米3。
77.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约20个嗜碱性粒细胞/毫米3。
78.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约25个嗜碱性粒细胞/毫米3。
79.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约30个嗜碱性粒细胞/毫米3。
80.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约35个嗜碱性粒细胞/毫米3。
81.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约40个嗜碱性粒细胞/毫米3。
82.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约45个嗜碱性粒细胞/毫米3。
83.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约50个嗜碱性粒细胞/毫米3。
84.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约55个嗜碱性粒细胞/毫米3。
85.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约60个嗜碱性粒细胞/毫米3。
86.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约65个嗜碱性粒细胞/毫米3。
87.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约70个嗜碱性粒细胞/毫米3。
88.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为0－约10个嗜碱性粒细胞/毫米3。
89.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约2个嗜碱性粒细胞/毫米3。
90.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约5个嗜碱性粒细胞/毫米3。
91.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约7个嗜碱性粒细胞/毫米3。
92.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约9个嗜碱性粒细胞/毫米3。
93.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜碱性粒细胞减少发生在给药后48小时内。
94.如实施方式1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜碱性粒细胞减少发生在给药后24小时内。
95.如实施方式1-94中任一项所述的方法，其特征在于，给予所述对象的所述IL-5R结合分子的剂量范围是约0.001至100mg/kg。
96.如实施方式95所述的方法，其特征在于，所述剂量为约0.03mg/kg。
97.如实施方式95所述的方法，其特征在于，所述剂量为0.03mg/kg。
98.如实施方式1-97中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子经胃肠外途径给予。
99.如实施方式98所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子经静脉内途径给予。
100.如实施方式1-99中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子不是MEDI-563。
101.如实施方式1-100中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少导致哮喘症状减轻。
102.如实施方式1-100中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少导致COPD症状减轻。
实施例
下面开始参照以下实施例描述本发明。提供这些实施例的目的只是说明，不应认为本发明仅限于这些实施例，而应认为本发明包括通过本文所述内容可明显看出的任何和所有变化形式。
实施例1
在轻度哮喘I期试验中抗-白介素5-受体抗体MEDI-563良好耐受并诱导可逆的血液嗜酸性粒细胞减少
背景：据信，嗜酸性粒细胞在哮喘发病中起到关键作用。白介素-5(IL-5)是嗜酸性粒细胞生物学中的主要细胞因子，其受体(IL-5R)的表达主要限于嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞。IL-5靶向治疗在哮喘中不很理想的功效可归因于不能完全消耗肺组织中的嗜酸性粒细胞。完全消耗肺中的嗜酸性粒细胞应能提供额外视角来观察这些细胞在哮喘中的作用，并可代表新的治疗方案。
目的：为了评价MEDI-563(以前称为BIW-8405)的安全性和生物学活性，(使用)人源化非岩藻糖基化IgG1抗-IL-5Rα链单克隆抗体。MEDI-563由BW公司(BioWa，Inc.)通过Potelligent
Figure BDA00003165927700591
专利技术开发，它能显著提高抗体依赖性细胞毒性。在临床前模型中，MEDI-563能中和IL-5活性并消耗组织嗜酸性粒细胞，具有可接受的毒性概况。
方法：患有轻度哮喘且未用皮质类固醇治疗的六位对象被编入第一研究组BIW-8405-001(用MEDI-563进行开放标记的第一次人体研究)。患者接受一次静脉内剂量0.03mg/kg MEDI-563，随访84天。
结果：MEDI-563良好耐受，没有报道严重不良事件。所有不良事件(AE)均为轻度不良事件，最常报道的AE是给药后的给药当天感觉疲劳(3/6位患者)。在所有六位患者中，给药后24-48小时内，循环嗜酸性粒细胞降低到检测限下(包括给药前平均值)。该作用持续8-12周，在给药后第58天，在某些对象中可检测到嗜酸性粒细胞，并且在所分析的所有患者中，给药后第84天达到基线水平的≥70%。循环嗜碱性粒细胞遵循类似的趋势。可能与MEDI-563的预期作用机制相关联，2/6位对象中嗜中性粒细胞水平在给药后72小时内发生略微和瞬时的降低，达到轻度嗜中性粒细胞减少症水平，但在3天内恢复。MEDI-563给药与血清C反应性蛋白(2/6位对象)和IL-6(2/3)的立即(6小时内)、适度(<10x基线)和瞬时(持续<1周)增加相关联。
结论：单个0.03mg/kg IV剂量的MEDI-563能强效诱导血液嗜酸性细胞减少，迄今为止安全性概况可接受。
实施例2
抗体依赖性细胞介导的细胞毒性
在MEDI-563或对照抗体存在下，将KC1333效应细胞(过度表达人FcgRIIIa和FceRIg的人NK细胞)与CTLL-2靶细胞系(经遗传修饰过度表达人IL-5Ra的小鼠淋巴瘤)共同培育4小时，效应细胞与靶细胞的比例为5:1。用钙黄绿素AM细胞活力试验评估抗体介导的细胞毒性。结果小结于图9A。使用类似方法分析另一对照(岩藻糖基化MEDI-563)。结果小结于图9B。
实施例3
MEDI-563与IL-5R平衡结合的表面等离振子共振评估
无载体的可溶性人IL-5Ra胞外区获自市售来源(安迪生物公司(R+DSystems))。通过胺连接，用标准方法将重组huIL-5Ra直接固定在传感器芯片上。通过折射率的改变，随时间评估MEDI-563与固定huIL-5Ra的相互作用，用标准方法由其计算k结合、k解离和KD值。结果小结于图10。
实施例4
MEDI-563与FcγR平衡结合的表面等离振子共振评估
通过胺连接，用标准方法将MEDI-563直接固定在传感器芯片上。通过折射率的改变，随时间评估可溶性人FcγR(米迪缪尼公司)与固定MEDI-563的相互作用，用标准方法由其计算k结合、k解离和KD值。结果小结于图11。
实施例5
IL-5Rα免疫组化
用甲醛固定切除的鼻息肉组织24小时，包埋在石蜡中。用市售的IL-5R多克隆抗体(R+D系统公司，圣克鲁斯生物科技公司(Santa CruzBiotechnology))，以标准技术对连续切片的人IL-5Ra、IL-9R、CCR3和c-kit进行染色。用甲醛固定来自IL-9转基因小鼠或野生型品系匹配的FVB对照小鼠的肺组织24小时，并包埋在石蜡中。用标准免疫组化技术分析切片中的IL-9R(pAb，圣克鲁斯生物科技公司)和IL-5R(pAb，R+D系统公司)表达。结果小结于图12和13。
实施例6
Medi-563与健康捐献者全血中的嗜酸性粒细胞结合
通过密度梯度离心，从正常捐献者的人全血中分离粒细胞。利用直接标记的第一抗体试剂分析CD16(FITC荧光染料)和MEDI-563F(Ab)′2(Alexa-647荧光染料)表达。将CD16-FITC加MEDI-563-Alexa647或CD16-FITC加Alexa647-标记的同种型对照抗体的混合物加入粒细胞制剂中，每106个细胞加入1微克。冰上孵育45分钟后，用冰冷盐水洗涤细胞三次，通过流式细胞术评价细胞表面抗体结合。分析呈CD16阴性的嗜酸性粒细胞。在CD16阴性粒细胞群中，表示MEDI-563与同种型对照抗体的结合。结果小结于图15。
实施例7
通过流式细胞术进行小鼠白细胞IL-5Rα染色
从IL-5转基因小鼠的血液、骨髓、肺和脾中分离白细胞。用含有1%FCS的PBS对细胞悬液进行染色。为了减少非特异性结合，在染色前细胞与Fc封闭液(BD生物科学公司(BD Biosciences))一起培育15分钟。所用抗体是抗-小鼠CCR3(R&D系统公司)、抗-小鼠Siglec F(BD生物科学公司)和抗-小鼠IL-5R(H7)。细胞在冰上染色30分钟，洗涤两次，用细胞固定(cytofix)缓冲液(BD生物科学公司)固定。用LSRII(BD公司(Becton Dickinson))和FACS Diva软件(BD公司)进行流式细胞术分析。用FlowJo软件(TS公司(TreeStar Inc.))分析结果。结果小结于图16A和16B。
实施例8
Medi-563消耗来自骨髓的IL-5Ra阳性单核细胞
融化冻存的骨髓单核细胞(BM MNC；龙泽公司(Lonza))，洗涤，接种，37℃培育2小时。培育后，由平板收集非贴壁骨髓单核细胞(NA BM MNC)。在96孔TC培养板的每个孔中，用200ul含10ug/ml Medi-563抗体的10%FBS/RPMI1640共同培育100,000NA BM MNC和50,000KC1333效应细胞18小时，以进行ADCC试验。用具有无关特异性的R347aFuc同种型对照抗体进行阴性对照反应。用于ADCC试验的KC1333效应细胞用CFDA SE染色。孵育18小时后，用温热的培养基洗涤各反应的细胞三次并进行免疫染色，以便进行流式细胞术分析。通过KM1257第一抗体/PE偶联的山羊抗-μIgG Fcg特异性第二抗体染色来检测IL-5Ra阳性细胞。用1A7同种型匹配的对照第一抗体以及PE偶联的山羊抗-Mu IgG Fcg特异性第二抗体对样品进行对照染色。用标准方案进行免疫染色和流式细胞术。通过淋巴细胞门中KM1257阳性细胞的计数，确认ADCC后样品中剩余的IL-5Ra阳性细胞的数量。用表达人IL-5Ra转基因的CTLL-2细胞系校正免疫染色和流式细胞术步骤。MEDI-563介导的ADCC基本消耗了NA BM MNC样品中的所有IL-5Ra阳性细胞。结果小结于图17A和17B。
实施例9
MEDI-563介导的外周血嗜酸性粒细胞消耗
将两组各六位轻度哮喘患者编入MEDI-563的开放标记研究中。第1组和第2组的对象分别接受一次静脉内剂量0.03mg/kg和0.1mg/kg的MEDI-563，在筛选时、给药前第0天和以规则间隔到第84天以及随访期间对其外周血嗜酸性粒细胞水平进行计数。通过流式细胞术检测循环嗜酸性粒细胞。在两组中的所有6位对象中，给药后24小时内循环嗜酸性粒细胞全都降低到检测限以下。MEDI-563诱导的嗜酸性细胞减少持续8-12周。在第1组中，给予一个剂量0.03mg/kg MEDI-563后，五位对象完成84天研究，其中1位对象的嗜酸性粒细胞在第58天回复到可检测水平，3位患者在第84天；第5位患者在第84天仍检测不到循环嗜酸性粒细胞。在第2组中，给予单个剂量0.1mg/kg MEDI-563后，第84天所有对象的循环嗜酸性粒细胞都检测不到。然而，在后期随访检查中，第2组的所有六位患者中都可检测到外周血嗜酸性粒细胞。第1组和第2组在给予单个剂量MEDI-563后不同时间间隔检测的外周血嗜酸性粒细胞水平见图18A和18B。
实施例10
IL-5Rα免疫组化
通过标准组织化学技术用MEDI-563对来自健康人对象的肺切片进行染色。结果小结于图19。IL-5Rα表达细胞在该图片中呈现黑色。
通过标准组织化学技术用MEDI-563对获自哮喘患者的支气管或经支气管活检样品的肺组织样品进行染色。结果小结于图20。IL-5Rα表达细胞在该图片中呈现深灰色/黑色。
实施例11
在体外ADCC试验中MEDI-563有效地靶向分离的嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞
用市售试剂盒(RoboSep NK/嗜酸性粒细胞/嗜碱性粒细胞负选择试剂盒，加拿大温哥华的干细胞技术公司(Stem Cell Technologies,Vancouver,Canada))由健康捐献者分离嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。通过流式细胞术确定分离细胞的IL-5Rα表达。按照标准方法，用MEDI-563抗体或具有无关特异性的同种型对照抗体进行细胞染色。用流式细胞仪分析免疫染色的细胞。染色情况见图21。分离的嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞的MEDI-563染色水平均高于同种型对照抗体的染色水平。将表达人IL-5Rα/β转基因的细胞系的染色模式作为阳性对照。
在体外ADCC试验中，利用分离的嗜酸性粒细胞和自体NK细胞确定岩藻糖基化和非岩藻糖基化MEDI-563的活性。用市售试剂盒(RoboSep NK/嗜酸性粒细胞/嗜碱性粒细胞负选择试剂盒，加拿大温哥华的干细胞技术公司(Stem Cell Technologies,Vancouver,Canada))由健康捐献者分离嗜酸性粒细胞和NK细胞。用分离的NK细胞和嗜酸性粒细胞进行ADCC试验，效应细胞和靶细胞的比例为5:1。测定的抗体浓度范围是10-15至10-7M。孵育24小时后，用基于流式细胞术的膜联蛋白V试验测定细胞毒性。非岩藻糖基化MEDI-563的ADCC活性比岩藻糖基化MEDI-563抗体高几个数量级。在本试验中非岩藻糖基化MEDI-563的EC50值为0.965pM。代表性实验的结果见图22。
在体外ADCC试验中，利用分离的嗜碱性粒细胞和自体NK细胞确定非岩藻糖基化MEDI-563的活性。
用市售试剂盒(RoboSep NK/嗜酸性粒细胞/嗜碱性粒细胞负选择试剂盒，加拿大温哥华的干细胞技术公司(Stem Cell Technologies,Vancouver,Canada))由健康捐献者分离嗜碱性粒细胞和NK细胞。用分离的NK细胞和嗜酸性粒细胞进行ADCC试验，效应细胞和靶细胞的比例为5:1。测定的抗体浓度范围是10-15至10-11M。在培育24小时后通过流式细胞术测定膜联蛋白V阳性细胞，以确定细胞毒性。在本试验中非岩藻糖基化MEDI-563的EC50值为0.561pM。代表性实验的结果见图23。
实施例12
在Medi-563介导的ADCC实验中嗜酸性粒细胞不释放细胞毒性颗粒
通过测定释放到上清液中的EDN(嗜酸性粒细胞衍生的细胞毒素)，确定接触MEDI-563靶向的ADCC的嗜酸性粒细胞的脱粒。所用的体外ADCC条件类似于实施例11所述。分离自健康捐献者的嗜酸性粒细胞和NK或PBMC细胞分别用作靶细胞和效应细胞。用岩藻糖基化MEDI-563、非岩藻糖基化MEDI-563或非岩藻糖基化R347同种型对照抗体进行实验。使嗜酸性粒细胞接触1%曲通X-100以获得最大脱粒；细胞发生最大脱粒后检测到的EDN浓度>220ng/ml。代表性实验的结果见图24。发生MEDI-563介导的ADCC后，EDN水平保持在25ng/ml(基线)以下。MEDI-563浓度(33或100μg/ml)或抗体的岩藻糖基化状态不会显著影响脱粒水平。
实施例13
MEDI-563表位作图
MEDI-563特异性结合表达人IL-5Rα蛋白的转基因细胞。MEDI-563不结合表达小鼠IL-5Rα蛋白的细胞。参见图25B和26C。小鼠和人IL5-Rα蛋白的氨基酸序列高度相似。通过分析MEDI-563与多种小鼠-人嵌合IL-5Rα蛋白的结合特征，确定MEDI-563的表位特异性(图25-27)。该实验利用细胞表面上表达嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞。用标准分子方法产生和表达转基因构建物。通过流式细胞术确认抗体与转基因细胞表面上表达的嵌合IL-5Rα蛋白的结合。荧光染色情况见图25-27。“多克隆”和“MEDI-563”指分别利用多克隆抗-人IL-5Rα和MEDI-563抗体观察到的染色概况。虽然MEDI-563对人IL-5Rα蛋白的单个表位特异，但多克隆抗体可识别人IL-5Rα的多个表位(图25B和26C)。“双染”指多克隆(x轴)和MEDI-563(y轴)抗体的荧光染色概况。
首先，将MEDI-563表位定位到IL-5Rα胞外结构域的D1区。IL-5Rα包含3个胞外区(D1、D2和D3)、跨膜区和胞内区(图25A)。因为MEDI-563识别完整细胞上的IL-5Rα，所以它的表位必须位于胞外区之一。为了将MEDI-563表位定位于这三个胞外域之一，用标准分子克隆方法产生表达包含小鼠和人胞外区的嵌合IL-5Rα蛋白的转基因细胞。测试的嵌合蛋白的示意性图谱见图25A。“敲除”变体是在人背景中包含一个小鼠胞外区的嵌合IL-5Rα蛋白。“敲入”变体是在小鼠背景中包含一个人胞外区的嵌合IL-5Rα蛋白。
图25B-C显示了一个代表性实验的结果。MEDI-563和多克隆抗体能够对表达人IL-5Rα蛋白的转基因细胞染色；这两种抗体均不能对表达小鼠IL-5Rα的转基因细胞染色(图25B)。MEDI-563不结合表达包含小鼠D1和人D2-D3胞外区的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞(图25C；“敲除D1”)。MEDI-563特异性结合表达在人背景中包含小鼠D2或D3胞外区的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞(图25C；“敲除D2或D3”)。MEDI-563特异性结合表达包含人D1和小鼠D2-D3胞外区的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞(图25D；“敲入D1”)。MEDI-563不结合表达包含人D2或D3胞外区的基于小鼠IL-5Rα的嵌合转基因的转基因细胞(图25D；“敲入D2或D3”)。表达包含至少一个人蛋白胞外区的嵌合IL-5Rα蛋白的所有细胞均能被多克隆抗-人IL-5Rα抗体染色，这表明MEDI-563染色模式在转基因细胞之间的差异并非嵌合蛋白表达水平所致。
其次，将MEDI-563表位定位于人IL-5Rα胞外区D1的区段B(图26)。将IL-5Rα的胞外区D1分成三个区段(图26A；区段A、B和C)。产生包含人和小鼠D1胞外区的区段的各种组合的一系列人-小鼠嵌合IL-5Rα转基因；此时所用的嵌合蛋白在胞外区D1以外都是人序列。“敲除”转基因是在人背景中包含一个小鼠胞外区D1的区段的嵌合IL-5Rα构建物。“敲入”转基因是在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含一个人胞外区D1的区段的嵌合IL-5Rα构建物(图26B)。图26C显示对照实验的结果。MEDI-563特异性识别表达(i)人IL-5Rα转基因或(ii)包含人D1胞外区的小鼠IL-5Rα嵌合转基因(“人IL-5Ra”和“敲入D1”)的转基因细胞。MEDI-563不结合表达(i)小鼠IL-5Rα受体转基因或(ii)包含小鼠D1胞外区的人嵌合IL-5Rα转基因(“小鼠IL-5Ra”、“敲除-D1”)的转基因细胞。图26D和E显示代表性作图实验的结果。MEDI-563不结合表达在人背景中包含小鼠胞外结构域D1的区段B(“敲除B”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。MEDI-563特异性结合表达在人背景中包含小鼠胞外结构域D1的区段A或C(“敲除A”、“敲除C”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。图26E显示用敲入构建物获得的结果的例子。MEDI-563特异性结合表达在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含人胞外结构域D1的区段B(“敲入B”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。MEDI-563不结合表达在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含人胞外区D1的区段A或C(“敲入A或C”)的嵌合IL-5Rα转基因的转基因细胞。表达嵌合IL-5Rα蛋白的所有细胞均能被多克隆抗-人IL-5Rα抗体染色，这表明MEDI-563染色模式在转基因细胞之间的差异并非嵌合蛋白表达水平所致。
第三，将MEDI-563表位定位于人IL-5Rα胞外区D1的区段B1内的特定氨基酸残基。在转基因细胞中表达在胞外区D1的区段B1内包含至少一个突变氨基酸残基的一系列IL-5Rα受体变体。通过比较小鼠和人氨基酸序列，选择突变残基的位置。所检测的变异蛋白的示意图见图27A。“敲除”IL-5Rα变体是包含将人残基替换成相应小鼠残基的至少一个取代的突变的人蛋白。例如，“敲除DE”变体是包含D56E和E58D氨基酸取代的人IL-5Rα蛋白。“敲入”IL-5Rα变体是包含小鼠D1、人D2、小鼠D3和小鼠TM的嵌合蛋白，其中小鼠D1结构域包含突变的小鼠区段B，其具有将小鼠残基替换成相应人残基的至少一个取代。例如，“敲入DE”变体是在小鼠D1-人D2-小鼠D3-小鼠TM背景中包含突变的小鼠区段B的嵌合IL-5Rα蛋白，其中所述突变的小鼠区段B包含E56D和D58E氨基酸取代。图27B显示用敲除构建物获得的结果的例子。MEDI-563不结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含K53Q、D56E、E58D、I61K氨基酸取代(“敲除-KDEI”)。MEDI-563特异性结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含N40H、N42D、Q46H(“敲除-NNQ”)或D56E、E58D(“敲除-DE”)或N40H、N42D、D56E、E58D(“敲除-NNDE”)氨基酸取代。图27C显示用敲入构建物获得的结果的例子。MEDI-563特异性结合表达包含突变的小鼠(胞外区)D1区段B的变异IL-5Rα蛋白的转基因细胞，其中所述突变的区段B包含Q53K、E56D、D58E、K61I氨基酸取代(“敲入-KDEI”)。图27D显示用敲除构建物获得的结果的例子。MEDI-563不结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含I61K氨基酸取代(“敲除-I61”)。MEDI-563特异性结合表达突变的人IL-5Rα蛋白的转基因细胞，所述突变的人IL-5Rα蛋白包含K53Q(“敲除-K53”)氨基酸取代。(E)图27E显示用敲入构建物获得的结果的例子。MEDI-563特异性结合表达包含突变的小鼠(胞外区)D1区段B的变异IL-5Rα蛋白的转基因细胞，其中所述突变的区段B包含K61I氨基酸取代(“敲入-I61”)。MEDI-563不结合表达包含突变的小鼠(胞外区)D1区段B的变异IL-5Rα蛋白的转基因细胞，其中所述突变的区段B包含Q53K氨基酸取代(“敲入-K53”)。表达嵌合IL-5Rα蛋白的所有细胞均能被多克隆抗-人IL-5Rα抗体染色，这表明MEDI-563染色模式在转基因细胞之间的差异并非嵌合蛋白表达水平所致。
实施例14
各种组织内嗜酸性粒细胞的体内消耗
我们评估与岩藻糖基化H7(fuc H7)相比，非岩藻糖基化抗-小鼠IL-5Ra抗体(afuc H7)在体内选择性消耗各种组织内嗜酸性粒细胞的效果。
方法：单克隆抗体H7：将H7可变区嫁接到hIgG1Fc上。在野生型CHO细胞中表达Fuc H7，在FUT8缺陷细胞中表达afuc H7。
抗体亲和力(KD)：用表面等离振子共振技术测定亲和力。
小鼠：使用6-8周龄的IL-5转基因小鼠和BALB/c小鼠。
消耗IL-5Tg小鼠中的嗜酸性粒细胞：i.p.给予小鼠0.01-10mg/kg afuc和fuc H7，48小时后分析嗜酸性粒细胞数量。
诱导变应性气道炎症：用OVA+明矾使BALB/c小鼠致敏，并在第17-22天用OVA刺激。在第22天i.p.给予小鼠0.1mg/kg afuc H7，最后一次刺激后1小时、24小时和72小时进行分析。这对应于抗体处理后25、48和96小时。
分离白细胞：i)血液通过心脏穿刺采集血液，并保存在含有肝素的试管中。用塞思美(Sysmex)血液分析仪(塞思美公司(Sysmex Corp.))或流式细胞术对血液白细胞进行表型分析。
ii)气道内腔用3X0.6ml PBS灌洗气道。以1200rpm离心BAL样品，除去上清液，将细胞重悬于RPMI。用库仑特(Coulter)Z2计数器(贝克曼库仑特公司(Beckman-Coulter))进行细胞计数，用流式细胞术进行表型分析。
iii)肺组织用RPMI/10%FCS配制的消化试剂(18μg/ml释放酶(Liberase)[布兰酶(Blenzyme)2；罗氏公司(Roche)]，25μg/ml DNA酶[1型；罗氏公司])在37℃培育一叶肺1小时。回收的细胞通过70-μm尼龙筛(Falcon)过滤，洗涤两次，计数，如BAL进行表型分析。
iv)骨髓分离供体小鼠的股骨，用连有25号针头的含有PBS(不含钙/镁)的注射器冲出骨髓。在连有22号针头的注射器中上下温和吹打冲洗骨髓，以制备单细胞悬液。1200rpm离心骨髓细胞5分钟，用不含添加剂的PBS洗涤两次，重悬于RPMI，计数，通过流式细胞术进行表型分析。
v)脾取出脾，用70-μm尼龙筛制备单细胞悬液。将白细胞重悬于RPMI，计数，如BAL进行表型分析。
流式细胞术用流式细胞术分析对细胞进行表型分析。所用抗体是抗-小鼠CD4、CD19、CD11b、Siglec-F、Gr-1、IL-5R、c-kit(BD生物科学公司(BD Biosciences))、FcεR1(电子生物科学公司(eBioscience))和CCR-3(安迪生物公司(R and D Systems))和其相关同种型对照。用LSRII流式细胞仪和FACS DIVA软件(BD生物科学公司)分析样品。进一步用FlowJo软件(TS公司(TreeStar Inc.))分析结果。
嗜酸性粒细胞的鉴定：通过流式细胞术分析鉴定嗜酸性粒细胞，具有侧面散射特征的细胞为CCR3和Siglec-F染色阳性。
结果：IL-5Tg小鼠骨髓、血液、脾和肺组织中的嗜酸性粒细胞选择性表达IL-5R。IL-5R表达仅限于嗜酸性粒细胞，在任何其它细胞类型，包括肥大细胞或嗜碱性粒细胞上检测不到。抗-IL-5R抗体选择性消耗IL-5Tg小鼠脾、肺组织和血液中的嗜酸性粒细胞。非岩藻糖基化和岩藻糖基化抗-IL-5R均不消耗：嗜中性粒细胞(Gr-1hi)；巨噬细胞/单核细胞(CD11b+)；T细胞(CD3+)；B细胞(CD19+)。非岩藻糖基化和岩藻糖基化的H7能消耗IL-5Tg小鼠脾、肺组织和血液中的嗜酸性粒细胞。在骨髓中未检测到消耗。与岩藻糖基化H7相比，非岩藻糖基化的H7在去除嗜酸性粒细胞方面更有效，特别是在较低的抗体剂量下。
在变应原刺激模型中非岩藻糖基化H7也选择性消耗嗜酸性粒细胞。在气道内腔、肺组织、血液和骨髓中，非岩藻糖基化H7消耗嗜酸性粒细胞。最后一次刺激后72小时(抗体递送后96小时)，所有区室中的消耗水平最高。
然而，出于描述目的，上文已经描述了本发明的具体实施方式，本领域技术人员应理解，可以在不背离所附权利要求书所述的本发明的情况下对细节作出许多改变。
将本说明书中提及的所有发表物、专利和专利申请纳入本说明书作参考，就好像特别和单独将各篇发表物、专利或专利申请纳入本文作参考的那样。此外，2007年5月14日提交的美国临时申请号60/924,422、2007年6月1日提交的60/924,832、2007年7月20日提交的60/935,005和2008年3月14日提交的61/064,612通过引用全文纳入本文用于所有目的。
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Claims (102)

1.一种减少人对象中嗜酸性粒细胞数量的方法，包括给予所述对象IL-5R结合分子，该结合分子包含(a)特异性结合IL-5R的区域和(b)免疫球蛋白Fc区。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子是抗体。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗体是嵌合抗体。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗体是人抗体。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性结合IL-5R的区域包含IL-5或其片段、取代形式或衍生物的氨基酸序列。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述特异性结合IL-5R的区域包含IL-5的非功能性变体。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子特异性结合IL-5Rα链。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以提高效应功能的方式改变所述免疫球蛋白Fc区。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区包含的岩藻糖水平降低。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区不包含岩藻糖。
13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区包含导致效应功能增强的氨基酸取代。
14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸取代包括在所述Fc区中包含以下氨基酸序列：332E、239D和330L，它们是按照Kabat所列的EU索引编号的。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少发生在外周血循环中。
16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将嗜酸性粒细胞减少至低于50个嗜酸性粒细胞/毫米3的水平。
17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞的减少发生在给药后头48小时内。
18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞的减少发生在给药后头24小时内。
19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少是可逆的。
20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约25个嗜酸性粒细胞/毫米3。
21.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约50个嗜酸性粒细胞/毫米3。
22.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约75个嗜酸性粒细胞/毫米3。
23.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约100个嗜酸性粒细胞/毫米3。
24.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约125个嗜酸性粒细胞/毫米3。
25.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约150个嗜酸性粒细胞/毫米3。
26.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约175个嗜酸性粒细胞/毫米3。
27.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
28.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约225个嗜酸性粒细胞/毫米3。
29.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
30.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约275个嗜酸性粒细胞/毫米3。
31.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约300个嗜酸性粒细胞/毫米3。
32.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约325个嗜酸性粒细胞/毫米3。
33.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约350个嗜酸性粒细胞/毫米3。
34.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约375个嗜酸性粒细胞/毫米3。
35.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约400个嗜酸性粒细胞/毫米3。
36.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约425个嗜酸性粒细胞/毫米3。
37.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约450个嗜酸性粒细胞/毫米3。
38.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约475个嗜酸性粒细胞/毫米3。
39.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低至少约500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
40.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
41.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约75至250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
42.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约100至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
43.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
44.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
45.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数降低约50至150个嗜酸性粒细胞/毫米3。
46.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约100个嗜酸性粒细胞/毫米3。
47.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约75个嗜酸性粒细胞/毫米3。
48.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约50个嗜酸性粒细胞/毫米3。
49.如权利要求1所述的方法，其特征在于，给药后绝对嗜酸性粒细胞计数小于约25个嗜酸性粒细胞/毫米3。
50.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约50至500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
51.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约75至475个嗜酸性粒细胞/毫米3。
52.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约75至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
53.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约100至200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
54.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约25个嗜酸性粒细胞/毫米3。
55.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约50个嗜酸性粒细胞/毫米3。
56.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约75个嗜酸性粒细胞/毫米3。
57.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约100个嗜酸性粒细胞/毫米3。
58.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约125个嗜酸性粒细胞/毫米3。
59.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约150个嗜酸性粒细胞/毫米3。
60.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约175个嗜酸性粒细胞/毫米3。
61.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约200个嗜酸性粒细胞/毫米3。
62.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约225个嗜酸性粒细胞/毫米3。
63.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约250个嗜酸性粒细胞/毫米3。
64.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约275个嗜酸性粒细胞/毫米3。
65.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约300个嗜酸性粒细胞/毫米3。
66.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约325个嗜酸性粒细胞/毫米3。
67.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约350个嗜酸性粒细胞/毫米3。
68.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约375个嗜酸性粒细胞/毫米3。
69.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约400个嗜酸性粒细胞/毫米3。
70.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约425个嗜酸性粒细胞/毫米3。
71.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约450个嗜酸性粒细胞/毫米3。
72.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约475个嗜酸性粒细胞/毫米3。
73.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对象的给药前绝对嗜酸性粒细胞计数为约500个嗜酸性粒细胞/毫米3。
74.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约5个嗜碱性粒细胞/毫米3。
75.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约10个嗜碱性粒细胞/毫米3。
76.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约15个嗜碱性粒细胞/毫米3。
77.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约20个嗜碱性粒细胞/毫米3。
78.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约25个嗜碱性粒细胞/毫米3。
79.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约30个嗜碱性粒细胞/毫米3。
80.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约35个嗜碱性粒细胞/毫米3。
81.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约40个嗜碱性粒细胞/毫米3。
82.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约45个嗜碱性粒细胞/毫米3。
83.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约50个嗜碱性粒细胞/毫米3。
84.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约55个嗜碱性粒细胞/毫米3。
85.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约60个嗜碱性粒细胞/毫米3。
86.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约65个嗜碱性粒细胞/毫米3。
87.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数降低至少约70个嗜碱性粒细胞/毫米3。
88.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为0－约10个嗜碱性粒细胞/毫米3。
89.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约2个嗜碱性粒细胞/毫米3。
90.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约5个嗜碱性粒细胞/毫米3。
91.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约7个嗜碱性粒细胞/毫米3。
92.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述对象的给药后绝对嗜碱性粒细胞计数为约9个嗜碱性粒细胞/毫米3。
93.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜碱性粒细胞减少发生在给药后48小时内。
94.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜碱性粒细胞减少发生在给药后24小时内。
95.如权利要求1-94中任一项所述的方法，其特征在于，给予所述对象的所述IL-5R结合分子的剂量范围是约0.001至100mg/kg。
96.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述剂量为约0.03mg/kg。
97.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述剂量为0.03mg/kg。
98.如权利要求1-97中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子经胃肠外途径给予。
99.如权利要求98所述的方法，其特征在于，所述IL-5R结合分子经静脉内途径给予。
100.如权利要求1-99中任一项所述的方法，前提是所述IL-5R结合分子不是MEDI-563。
101.如权利要求1-100中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少导致哮喘症状减轻。
102.如权利要求1-100中任一项所述的方法，其特征在于，所述嗜酸性粒细胞减少导致COPD症状减轻。
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