CN103217502A - 一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法，所述胶囊剂是将羊胎盘用酶水解后加淀粉制成胶囊剂，本发明在现有检测基础上增加了对赖氨酸含量测定，改进了对甘氨酸和缬氨酸的鉴别方法；可以对胶囊的主要药物成分进行更有效控制，使得胶囊的质量监控水平有了很大的提高。既有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。

Description

一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种胶囊剂的检测方法，特别是一种用于补肾温阳的胶囊剂（通用名称或药品名称胚宝胶囊）的检测方法，属于制药技术领域。

背景技术

胚宝胶囊是一种比较受市场欢迎的产品，具有补肾温阳，养血填精的功效，用于肾阳不足、精血亏虚、面色萎黄、食欲不振、畏寒肢冷、腰膝冷痛、气短自汗的症状。现有的胚宝胶囊的检测方法过于简单，现有的检测方法中针对主要成份甘氨酸和缬氨酸的检测不够完善，而且并不具备对胚宝胶囊中主要成份赖氨酸的检测，使得现有的胚宝胶囊的检测结果不够准确，影响药物的疗效。为了更进一步保证该产品的质量及更有利于对该产品质量的监督、管理，应对该产品中的检测方法进行改进，从而更进一步保证该产品的质量和疗效。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法。它在现有检测方法上增加了对赖氨酸的含量测定，改进了对甘氨酸和缬氨酸的鉴别方法；可以对胶囊剂的主要药物成分进行更有效控制。 

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法，该检测方法包括以下步骤： 

甘氨酸和缬氨酸的鉴别：取本品内容物0.5g，加水5ml，溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘氨酸对照品、缬氨酸对照品适量，加水分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以4：1：1的正丁醇—冰醋酸—水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。 

上述的检测方法中，还包括以下步骤， 

盐酸赖氨酸的测定： 

A.色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；用40:60的乙腈—0.04mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按盐酸赖氨酸峰计算应不低于4000； 

B.对照品溶液的制备，精密称取用五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的盐酸赖氨酸对照品适量，加体积百分比为10%甲醇溶液制成每1ml中含0.12mg的溶液，精密量取1ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和体积百分比为1％的2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间以每5分钟振摇5秒的频率振摇，取出，立即冷却至室温，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得； 

C.供试品溶液的制备，取本品内容物，研细，精密称定0.5g，置三角烧瓶中，精密加入10%甲醇溶液25ml，称重，超声处理30分钟，冷却，称重，用10%甲醇溶液补足减失的重量，离心，精密量取上清液1.0ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间不时振摇，取出，立即冷却至室温，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得； 

D.测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每粒含盐酸赖氨酸不得少于1.5mg。 

前述的检测方法中，所述的超声为56kHz，300W的超声。 

前述的检测方法中，所述的用于补肾温阳的胶囊剂由羊胎盘1000g、动物蛋白水解酶6g和淀粉适量制成1000粒胶囊剂。 

前述的检测方法中，该用于补肾温阳的胶囊剂的制备方法是取羊的胎盘1000g，洗净，沥干，绞碎，加动物蛋白水解酶水解4小时，水解液滤过，减压浓缩成稠膏状，加适量淀粉，混匀，制粒，烘干，粉碎，整粒，过筛，制成1000粒胶囊剂，即得。 

本发明在现有检测基础上增加了对赖氨酸含量测定，改进了对甘氨酸和缬氨酸的鉴别方法；可以对胶囊的主要药物成分进行更有效控制，使得胶囊的质量监控水平有了很大的提高。既有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。 

为了验证本发明检测方法的合理性，申请人对该方法进行了试验研究和筛选。

以下是甘氨酸和缬氨酸的检测方法的试验和筛选过程：

1. 取本品内容物3.0g，加70%乙醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘氨酸对照品、缬氨酸对照品适量，加70%乙醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B），吸取供试品溶液5μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇—冰醋酸—水（8：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

试验结果表明，斑点分离效果较差，呈现带状色谱，拖尾严重。

根据试验1结果，降低供试品溶液浓度，改变溶剂及处理方法，方法如下：

取本品内容物0.5g，加水5ml，溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘氨酸对照品、缬氨酸对照品适量，加水分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B），吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇—冰醋酸—水（8：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

试验结果表明，斑点分离效果优于试验1，但仍不够理想，存在拖尾现象。

在上述试验基础上，进一步改进展开系统及显色剂，方法如下：

取本品内容物0.5g，加水5ml，溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取甘氨酸对照品、缬氨酸对照品适量，加水分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B），吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇—冰醋酸—乙醇—水（4：1：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

试验结果表明，斑点分离效果有明显改善，供试品色谱中甘氨酸的斑点不够清晰。

、根据试验3结果，改变展开系统，采用正丁醇—冰醋酸—水（4：1：1）为展开剂，其余试验方法同试验（3），结果表明，斑点清晰，分离效果较好，无拖尾现象，空白无干扰。

以下是赖氨酸的测定方法试验和筛选过程：

1、仪器与试药

    Waters 2695高效液相色谱仪，W2487双通道紫外可见检测器，Empower色谱工作站。

甲醇、磷酸二氢钾、碳酸钠、2,4-二硝基氟苯、磷酸氢二钾为分析纯，乙腈为色谱纯，重蒸馏水。

盐酸赖氨酸对照品（L-lysinehydrochloride,批号： 140673-200405）由中国药品生物制品检定所提供。胶囊样品3批（批号为：051201、060301、060701）,缺味样品1批，由浙江大德药业集团有限公司提供。 

2、色谱条件

    色谱柱：agilent Zorbax SB-C18柱（250×4.6mm，5um）；流动相：乙腈—0.04mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60）为流动相；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：360nm。在此条件下供试品中经用2,4-二硝基氟苯衍生化后的赖氨酸成分能与其他成分达到较好分离，如图1、图2和图3。

实验测得经用2,4-二硝基氟苯衍生化后赖氨酸对照品溶液用HPLC-DAD测定光谱图，结果表明在360nm波长处有最大吸收峰，如图4，选择360nm为测定波长。

3、衍生化条件的优化：由于氨基酸本身紫外吸收较弱，因此采用较简单的2,4-二硝基氟苯柱前衍生的方法测定，可以明显改善氨基酸分析的灵敏度，对2,4-二硝基氟苯柱前衍生方法进行了优化

衍生化试剂量的考察　

精密量取盐酸赖氨酸对照品溶液（0.1206mg/ml）1.0ml，分别置于25ml量瓶中，共三份，分别加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热40分钟，期间应不时振摇，取出，立即冷却，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得，测定。结果表明：加入衍生化试剂0.5ml，衍生化尚未完全，当加入衍生化试剂1.0ml、2.0ml，均可以衍生化完全。最终选择加入衍生化试剂的量为1.0ml。结果见表1。

表1、衍生化试剂量考察结果

衍生化温度的考察　

精密量取盐酸赖氨酸对照品溶液（0.1206mg/ml）1.0ml，分别置于25ml量瓶中，共三份，分别加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于40℃、60℃、80℃水浴中加热40分钟，期间应不时振摇，取出，立即冷却，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得，测定。结果表明：40℃、60℃、80℃水浴中衍生化40分钟，赖氨酸均可以衍生化完全。最终选择衍生化温度为60℃。结果见表2。

表2、衍生化温度考察结果

衍生化时间的考察　　

精密量取盐酸赖氨酸对照品溶液（0.1206mg/ml）1.0ml,分别置于25ml量瓶中，各4份，分别加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热时间分别为：20分钟、30分钟、40分钟、60分钟，期间应不时振摇，按上述规定的衍生后，取出，立即冷却，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得，测定。结果表明：在60℃水浴中衍生化20～60分钟内，对照品溶液中的赖氨酸均可以被充分衍生化。最终选择衍生化时间为30分钟。结果见表3。

表3、衍生化时间的考察结果

4、对照品溶液的配制：

精密称取用五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的盐酸赖氨酸对照品适量，加10%甲醇制成每1ml中含0.1434mg的对照品溶液，作为对照品溶液，精密量取1ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间应不时振摇，取出，立即冷却，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

5、供试品溶液的制备优化：

供试品溶液提取方法：对提取溶剂、取样量和超声时间对含量测定结果的影响进行了考察。

提取溶剂的比较：样品（批号：051201）选择不同的提取溶媒，其余同正文中提取方法，各自制得供试品溶液，衍生化后进样测定。由表4可知，以 10%甲醇溶液作提取溶剂时测定的含量最高,故选择采用10%甲醇作提取溶媒。

表4     提取溶媒比较

提取方式的比较：样品（批号：051201）选择不同的提取方式，其余同正文中提取方法各自制得供试品溶液，衍生化后进样测定。由表5可知，超声提取30分钟所得含量比回流30分钟所得含量高，选择提取方式为超声30分钟。

表5     提取方式比较

超声提取时间的比较：样品（批号：051201）选择不同的超声提取时间，其余同正文中提取方法各自制得供试品溶液，衍生化后进样测定。由表6可知，超声提取20、30、40分钟所得含量结果均在误差范围内，相对而言，超声30分钟时测定的含量最高，选择超声提取时间为30分钟。

表6、超声时间的比较

取样量对含测的影响：称取不同重量的样品（批号：051201），按正文中测定条件测定含量，结果表明：称样量在0.25～0.75g范围内，含测数据在误差范围内，选择称样量为0.5g。结果见表7。

表7、取样量对含测结果的影响

结果：

取本品内容物（批号：051201），研细，取约0.5g，精密称定，置三角烧瓶中，精密加入10%甲醇溶液25ml，称重，超声处理30分钟(56kHZ,300W)，冷却，称重，用10%甲醇溶液补足损失的溶媒，离心，精密量取上清液1.0ml，置于25ml量瓶中，自“加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml”起同对照品溶液制备方法制备供试品溶液。

6、空白对照试验：

取缺味样品按供试品溶液制备方法同样制得空白对照液，进样测定。结果表明，缺味空白对照对赖氨酸峰无干扰，证明按本方法测定的赖氨酸成分有专属性。色谱分离图见图3。

7、线性关系考察：

 精密吸取盐酸赖氨酸对照品溶液0.01195mg/ml、0.0239mg/ml、0.0717mg/ml、0.1434mg/ml、0.2868mg/ml、0.4589mg/ml、0.5736mg/ml各1ml，分别置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间应不时振摇，取出，立即冷却，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得，分别注入液相色谱仪，按上述条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y），盐酸赖氨酸浓度为横坐标（X，mg/ml）作回归方程，得：Y=4217558X-7755.45，r=0.9999

表明盐酸赖氨酸浓度在0. 01195～0.5736mg/ml范围内有良好的线性关系，如图5。

8、精密度试验：

8.1仪器精密度

精密吸取上述对照品溶液,重复进样6次(10μl)，测定峰面积，结果积分值的相对标准偏差（RSD）为0.29%(n=6)，见表8。

表8   精密度试验结果

 　8．2 重复性

   取本品7份（批号：051201），分别按正文条件测定含量，结果7次测定的平均含量为6.31mg/g，相对标准偏差（RSD）为：2.09%（n=7）。结果见表9。

表9 重复性

       99、准确性：

采用加样回收法，取已知含量的样品7份（批号：051201），精密加入盐酸赖氨酸对照品适量，按正文方法测得峰面积并以下式计算回收率，结果见表10，结果：平均回收率为99.55%，RSD为0.48%（n=7），本法具有良好的回收率。     

表10   回收率试验结果

10、耐用性试验

10.1色谱柱的选择

样品选择以上优化的提取方法各自制得供试品溶液，衍生化后进样测定。色谱柱分别选择zorbax SB－C18（250mm×4.6mm,5um）、大连依利特hypersil ODS2（250mm×4.6mm,5um）、Extend－C18（250mm×4.6mm,5um）色谱柱，流动相均为乙腈—0.04mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），检测波长为360nm。由表11可知，三种色谱柱所得含量结果均在误差范围内，最后选择zorbax SB－C18色谱柱。

表11 色谱柱对含测结果的影响

10.2稳定性试验：

   取对照品溶液和供试品溶液(批号:051201 )，按正文条件进行衍生化后，每隔一定时间进样1次，测定峰面积，结果显示经过衍生化处理后的样品和对照品溶液至少在72小时内稳定。见表12。

表12稳定性研究结果 

11、样品测定： 

按正文方法测定十批胶囊，结果见表13。建议暂定含测限度为：“本品每粒含盐酸赖氨酸（C₆H₁₄O₂N₂.HCl）不得少于1.5mg”。 

表13胶囊样品测定结果 

图1是本发明对照品赖氨酸的HPLC分离图谱； 

图2是胶囊供试品的HPLC分离图谱； 

图3是缺味供试品的HPLC分离图谱； 

图4是经用2,4-二硝基氟苯衍生化后赖氨酸对照品溶液光谱图； 

图5是经2,4-二硝基氟苯衍生化后赖氨酸线性关系图谱。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例： 

一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法，该检测方法包括步骤： 

甘氨酸和缬氨酸的鉴别：取本品内容物0.5g，加水5ml，溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘氨酸对照品、缬氨酸对照品适量，加水分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以4：1：1的正丁醇—冰醋酸—水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。 

该用于补肾温阳的胶囊剂胶囊的检测方法，还包括步骤： 

盐酸赖氨酸的测定： 

A.色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；用40:60的乙腈—0.04mol/L磷酸二氢钾溶液（即以体积比 40份乙腈：60份0.04mol/L磷酸二氢钾溶液的比例混合的混合溶液）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按盐酸赖氨酸峰计算应不低于4000； 

B.对照品溶液的制备，精密称取用五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的盐酸赖氨酸对照品适量，加体积百分比为10%甲醇溶液制成每1ml中含0.12mg的溶液，精密量取1ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和体积百分比为1％的2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间以每5分钟振摇5秒的频率振摇，取出，立即冷却至室温，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得； 

C.供试品溶液的制备，取本品内容物，研细，精密称定0.5g，置三角烧瓶中，精密加入10%甲醇溶液25ml，称重，超声处理30分钟(56kHZ,300W)，冷却，称重，用10%甲醇溶液补足减失的重量，离心，精密量取上清液1.0ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间不时振摇，取出，立即冷却至室温，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度（即25ml处），摇匀，即得； 

D.测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每粒含盐酸赖氨酸不得少于1.5mg。 

前述的检测方法中，所述的用于补肾温阳的胶囊剂采用羊胎盘1000g、动物蛋白水解酶6g和淀粉适量制成1000粒胶囊。 

前述的检测方法中，所述的用于补肾温阳的胶囊剂的制备方法是取羊的胎盘1000g，洗净，沥干，绞碎，加动物蛋白水解酶水解4小时，水解液滤过，减压浓缩成稠膏状，加适量淀粉，混匀，制粒，烘干，粉碎，整粒，过筛，制成1000粒胶囊剂，即得。 

具体地，所述的用于补肾温阳的胶囊剂的制备方法具体包括以下步骤： 

a、清洗、破碎、酶解： 

取冷冻的羊胎盘，解冻后，洗净并除去异物、血块等杂质。羊胎盘洗净、沥干后称重，置绞碎机中绞碎。绞碎后羊胎盘置配料罐中，加3倍量的饮用水，升温至50～60℃，用NaOH调节pH至7.0～9.0，加入动物蛋白水解酶，50～60℃水解4小时，水解后加热升温到100℃灭酶活力30～40分钟，水解液过200目筛。 

b、浓缩：

水解液吸入双效节能浓缩器中，减压浓缩温度控制在50～80℃，将水解液浓缩至相对密度为1.08～1.14（45℃），吸入球形浓缩罐中，常压升温至沸并保温30分钟后，50～80℃减压浓缩至相对密度1.30～1.35（60±5℃），放冷，清膏中间体检验。

c、配料、混合：

可利用物料80目粉碎后与淀粉置湿法混合颗粒机中混10分钟，切刀转速:1000转/分钟；搅拌转速:100转/分钟。再将检验合格的清膏倒入湿法混合颗粒机中混5分钟，切刀转速:750转/分钟；搅拌转速:75转/分钟。可利用物料的加入量一般控制在生产批量的20%以内。

d、烘干：

软材置真空干燥机控制温度在60～80℃、真空度不低于0.08MPa，烘干5小时后取出软材，捏散后，继续烘干8小时。

e、制粒、整粒：

烘干完成后，将烘干后软材用摇摆式制粒机30目筛制成1000粒胶囊剂（如质地较硬，可用30目筛粉碎）。

Claims (5)

1.一种用于补肾温阳的胶囊剂的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤： 

甘氨酸和缬氨酸的鉴别：取本品内容物0.5g，加水5ml，溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取甘氨酸对照品、缬氨酸对照品适量，加水分别制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以4：1：1的正丁醇—冰醋酸—水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。 

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，还包括以下步骤， 

盐酸赖氨酸的测定： 

A.色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；用40:60的乙腈—0.04mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为360nm；理论板数按盐酸赖氨酸峰计算应不低于4000； 

B.对照品溶液的制备，精密称取用五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的盐酸赖氨酸对照品适量，加体积百分比为10%甲醇溶液制成每1ml中含0.12mg的溶液，精密量取1ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和体积百分比为1％的2,4-二硝基 氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间以每5分钟振摇5秒的频率振摇，取出，立即冷却至室温，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得； 

C.供试品溶液的制备，取本品内容物，研细，精密称定0.5g，置三角烧瓶中，精密加入10%甲醇溶液25ml，称重，超声处理30分钟，冷却，称重，用10%甲醇溶液补足减失的重量，离心，精密量取上清液1.0ml，置于25ml量瓶中，加入0.05mol/L碳酸钠溶液1.0ml和1％2,4-二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml，摇匀，置于60℃水浴中加热30分钟，期间不时振摇，取出，立即冷却至室温，加0.01mol/L磷酸氢二钾溶液至刻度，摇匀，即得； 

D.测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每粒含盐酸赖氨酸不得少于1.5mg。 

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的超声为56kHz，300W的超声。 

4.根据权利要求1至3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述的用于补肾温阳的胶囊剂由羊胎盘1000g、动物蛋白水解酶6g和淀粉适量制成1000粒胶囊剂。 

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，该用于补肾温阳的胶囊剂的制备方法是取羊的胎盘1000g，洗净，沥干，绞碎，加动物蛋白水解酶水解4小时，水解液滤过，减压浓缩成稠膏状，加适量淀粉，混匀，制粒，烘干，粉碎，整粒，过筛，制成1000粒胶 囊剂，即得。 

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