CN102178829B - 一种用于痔疮的中药复方栓剂的成分检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药复方制剂的成分检测方法，特别是一种用于各种类型痔疮的中药复方栓剂的成分检测方法。本发明所述用于各种类型痔疮的中药复方栓剂的原料药组成如下：大黄50-150重量份，浙贝母50-150重量份，炒侧柏叶200-600重量份，厚朴200-600重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份。取上述原料药，按常规工艺，加入水溶性基质制备成临床上可以接受的任一种栓剂。所述水溶性基质可以是聚乙二醇类的一种或几种。本发明的检测方法可提高用药安全。
Description
技术领域
本发明涉及中药复方制剂的成分检测方法，特别是一种用于各种类型痔疮的中药复方栓剂的成分检测方法。
背景技术
以大黄、浙贝母、炒侧柏叶、厚朴、白及、冰片和紫草为原料药制备的中药复方栓剂，具有消肿化瘀、生肌止血、清热止痛及行气提肛的功效，用于各种类型、各种程度的痔疮，显示了显著的治疗效果。所述中药复方制剂的制备工艺中，既有既经过溶剂提取的，如大黄、浙贝母、炒侧柏叶、厚朴、白及和紫草，也有以原料直接入药的，如冰片，因此其成分检测应当对这两部分原料药都有所反映。但是现有技术中还没有有关该复方栓剂的成分检测方法的报道。在实际中，还有可能处方组成与上述复方栓剂相同的其它复方栓剂上市，因此，有必要建立所述处方组成的中药复方栓剂的成分检测方法，从而保证用药安全。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于各种类型痔疮的中药复方栓剂的成分检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
本发明所述用于各种类型痔疮的中药复方栓剂的原料药组成如下：
大黄50-150重量份，浙贝母50-150重量份，炒侧柏叶200-600重量份，厚朴200-600重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份。
取上述原料药，按常规工艺，加入水溶性基质制备成临床上可以接受的任一种栓剂。所述水溶性基质可以是聚乙二醇类的一种或几种。
本发明优选一种的所述中药复方栓剂，其原料药组成为：
大黄117重量份，浙贝母117重量份，炒侧柏叶333重量份，厚朴333重量份，白及167重量份，冰片10重量份，紫草333重量份；
优选的水溶性基质的组成为1450重量份的聚乙二醇6000和900重量份的聚乙二醇4000。
所述优选的中药复方栓剂通过如下方法制备：
取除冰片外的所述重量份的原料药，以70%乙醇加热回流提取3次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩药液，备用；取所述重量份的聚乙二醇6000和聚乙二醇4000，加热融化，充分混匀，加入所述浓缩药液中，搅匀，冷却至50-55℃，加入所述重量份的冰片，制栓1000粒，即得。每1g所述中药复方栓剂折算成原料药量，相当于1.41g。
对含量测定所用的高效液相法而言，在一定含量范围内，所检测成分含量与峰面积才能保持良好的线性关系。而本发明所述中药复方栓剂的原料药组成在一定范围内变化，加之制剂工艺的不同，因此每一种处方制备的所述中药复方栓剂，其每一粒中所含检测成分，如大黄素、大黄酚、厚朴酚、和厚朴酚的量也有一个变动范围。所以不适宜用制剂单位为单位来量取所述中药复方栓剂。但是对于每一种栓剂而言，每克栓剂折算成的原料药的量是确定，故在含量测定时，以折算成原料药的量来称取检测所述栓剂。
本发明所述中药复方栓剂的检测方法包括如下I和II的高效液相色谱法含量测定中的一种或两种：
I. 大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸为流动相，检测波长为440nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含60μg大黄素和80μg大黄酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取相当于原料药7.05g的所述中药复方栓剂，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷。置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液10ml置蒸发皿中，挥干乙醇，用2.5mol/L硫酸溶液20ml分次洗涤残渣，合并移入鸡心瓶中，加热回流水解2小时，放冷至室温后，加入氯仿20ml继续回流两次，每次1小时，回流结束，分出氯仿液，挥去氯仿，残渣用少量氯仿溶解并移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液15μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
II. 厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为7：3的甲醇-水为流动相，检测波长为294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3800；
对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含20μg厚朴酚和20μg和厚朴酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取相当于原料药7.05g的所述中药复方栓剂，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷。置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液2ml置10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明所述中药复方栓剂的成分检测方法还可以包括如下A和B的薄层鉴别方法：
A. 取所述中药复方栓剂1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材粉末0.1g，加氯仿20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品2mg，加氯仿制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述供试品溶液10μl，所述对照药材溶液10μl，所述对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；
B. 取所述中药复方栓剂2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分钟，滤过，合并滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液，取厚朴对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；另取厚朴酚、和厚朴酚对照品各2mg，分别加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光萃灭斑点。
本发明所述中药复方栓剂的成分检测方法还可以包括如下的鉴别方法：
取所述中药复方制剂1粒，研碎，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制备的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，渐显紫红色。
因此，本发明所述中药复方栓剂的质量检测方法可以有如下几种方案：
1）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定；
2）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，以及薄层鉴别方法A和 B；
3）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，以及冰片的鉴别方法；
4）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，薄层鉴别方法A和 B，以及冰片的鉴别方法；
5）厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定；
6）厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定，以及薄层鉴别方法A和 B；
7）厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定，以及冰片的鉴别方法；
8）厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定，薄层鉴别方法A和 B，以及冰片的鉴别方法；
9）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，以及厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定；
10）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定，以及薄层鉴别方法A和 B；
11）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定，以及冰片的鉴别方法；
12）大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定，厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定，薄层鉴别方法A和 B，以及冰片的鉴别方法。
上述各种成分检测方法都可以一定程度上反应所述中药复方制剂的原料药组成，当然以所述方案12为优选。
对于本发明所述优选的中药复方栓剂，上述检测方法中的取样量和检测结果为：
大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定：取5粒所述栓剂，照说明书记载的方法进行测定，每粒栓剂含大黄以大黄素计不少于20μg，按大黄酚计不少于30μg。
厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定：取5粒所述栓剂，照说明书记载的方法进行测定，每粒栓剂含厚朴按厚朴酚计不少于0.60mg，按和厚朴酚计不少于0.20mg。
下面以本发明优选的中药复方栓剂为例，通过实验说明本发明所述成分检测方法的建立。
实验例1 大黄所含成分大黄素、大黄酚的含量测定
大黄为君药，其主要成分为大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等蒽醌类化合物。大黄具有多种药理作用，如泻下、抗炎、止血等，其中大黄素为抗炎的主要成分，大黄酚则止血作用较强且含量较高，故测定大黄所含大黄素和大黄酚的含量以从一定程度上反映本发明所述中药复方栓剂的质量。
1.1 仪器与试药
高效液相色谱仪：HP1100；数据处理机：HP-3500积分仪。
试药：色谱纯甲醇，重蒸水，分析纯磷酸。
对照品：大黄素（批号：0756-9707），大黄酚（批号：0766-9707），中国药品生物制品检定所提供。
1.2 色谱条件
色谱柱：YWG-C18 10μm(4.6mm×250mm)；流动相为体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸；流速：1ml/min；柱温：20℃。
1.3 系统适应性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸为流动相，检测波长为440nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500。
1.4 波长选择
一般大黄蒽醌类化合物在254nm和440nm处有最大吸收。考虑到本制剂为复方制剂，成分较复杂，为了避免其它物质的干扰，选择蒽醌另一吸收波长440nm为测定波长。
1.5 供试品溶液的制备
本发明所述中药复方栓剂含有水溶性基质——聚乙二醇，对含量测定有影响，必须除去。利用聚乙二醇在热无水乙醇中溶解，冷却后则沉淀析出的性质，可以有效去除聚乙二醇。为了大黄素和大黄酚提取完全，考察了不同提取方法，如索氏提取器提取、石油醚脱脂后索氏提取器提取和超声提取等方法。大黄素和大黄酚的含量测定显示，加热回提取的效果好于超声提取，索氏提取器提取和石油醚脱脂后索氏提取器提取的效果相当，且操作简便，故选择索氏提取器提取。针对索氏提取器提取的加热回流时间，考察了不同的加热回流提取时间，如10、30、60、90和120min；其中加热回流60min，大黄素、大黄酚的含量最高。故供试品的制备方法为：无水乙醇加热回流60min，冷却除去基质。
1.6 空白试验
取处方中不含大黄的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，再按照说明书中记载的供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，依说明书记载的含量测定方法试验，结果阴性无干扰。
1.7 线性关系考察
精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含62.6μg大黄素，80μg大黄酚的溶液，精密吸取上述溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl，注入高效液相色谱仪中，按照说明书记载的色谱分析条件，测定峰面积，结果见表1和2。
表1 大黄素线性关系考察结果
| 进样量(μg) | 一次 | 二次 | 三次 | 平均值 |
| 0.0626 | 1131998 | 1139951 | 1126024 | 1132658 |
| 0.1252 | 2247766 | 2332229 | 2321374 | 2300456 |
| 0.2504 | 4577459 | 4652560 | 4626426 | 4618815 |
| 0.3756 | 6970595 | 7094042 | 7047168 | 7037268 |
| 0.5008 | 9506470 | 9546963 | 9391718 | 9481717 |
| 0.6260 | 11799704 | 11757104 | 11713824 | 11756877 |
以峰面积积分值为纵坐标，大黄素进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y=1.8949×107X-7.4141×104，r=0.9999
表明大黄素进样量在0.0626μg-0.626μg范围内具有良好线性关系。
表2 大黄酚线性关系考察结果
| 进样量(μg) | 一次 | 二次 | 三次 | 平均值 |
| 0.08 | 1519718 | 1490927 | 1500151 | 1503599 |
| 0.16 | 2945400 | 3039045 | 3037901 | 3007449 |
| 0.32 | 5829203 | 5922816 | 5895491 | 5882503 |
| 0.48 | 8926637 | 9118963 | 9016032 | 9020544 |
| 0.64 | 12200160 | 12248784 | 12059816 | 12169587 |
| 0.80 | 15178952 | 15097032 | 15093824 | 15123269 |
以峰面积积分值为纵坐标，大黄酚进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y=1.8995×107X-6.6739×104，r=0.9999
表明大黄酚进样量在0.08μg-0.8μg范围内具有良好线性关系。
1.8 精密度试验
精密吸取大黄素、大黄酚对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积（见表3），大黄素的RSD=1.36%，大黄酚的RSD=1.44%，表明本法精密度良好。
1.9 稳定性试验
取所述所述中药复方栓剂5粒，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，分别于配置后0,2,4,6,8小时，精密吸取所述供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，大黄素和大黄酚的峰面积基本保持一致。表明大黄素和大黄酚在所述流动相溶液中8小时内稳定，结果见表4。
表4 稳定性试验结果
1.10 重现性试验
分别取同一批所述中药复方栓剂5份，精密称定，按照说明书记载的方法制成5份供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定大黄素和大黄酚的含量，RSD（大黄素）=0.65%，RSD（大黄酚）=0.20%，表明本法重现性良好，结果见表5。
表5 重现性试验结果
1.11 加样回收率试验
取同一批已知含量的所述中药复方栓剂6份，每份约1g，精密称定，其中3份加入大黄素对照品23.21μg，大黄酚对照品29.01μg，另三份加入大黄素对照品29.41μg，大黄酚对照品36.77μg。按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定大黄素和大黄酚的含量，计算回收率。大黄素平均回收率为97.2%，RSD=2.2%，大黄酚平均回收率为100.9%，RSD=1.5%，表明本法回收率良好，结果见表6。
1.12 样品测定结果
取六批所述中药复方栓剂，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定大黄素和大黄酚的含量，结果见表7。
表7 样品测定结果
| 批号 | 大黄素含量(μg/g) | 大黄酚含量(μg/g) |
| 20100423 | 21.45 | 31.56 |
| 20100507 | 30.75 | 44.91 |
| 20100508 | 22.75 | 37.98 |
| 20101025 | 47.26 | 91.17 |
| 20101030 | 40.32 | 74.25 |
| 20101031 | 55.33 | 104.66 |
根据上述测定结果，本发明所述优选的中药复方栓剂含大黄按大黄素计不少于20μg，按大黄酚计不少于30μg。
实验例2 厚朴所含成分厚朴酚、和厚朴酚的含量测定
厚朴在本发明所述中药复方栓剂的原料药中用量较大，其主要成分为厚朴酚、和厚朴酚，它们是厚朴发挥松弛肌肉、抗菌、消炎的主要有效成分。因此，建立一种灵敏、专属性强、可靠的高效液相色谱法测定本发明所述中法复方制剂中厚朴酚、和厚朴酚的含量，是有意义和必要的。
2.1 仪器与试药
高效液相色谱仪：HP1100；数据处理机：HP-3500积分仪。
试药：色谱纯甲醇，重蒸水，分析纯无水乙醇。
对照品：厚朴酚（批号：0756-9707），和厚朴酚（批号：0766-9707），中国药品生物制品检定所提供。
2.2 色谱条件
色谱柱：YWG-C18 10μm(4.6mm×250mm)；流动相为体积比为7：3的甲醇-水；流速：1ml/min；柱温：30℃。在此条件下，厚朴酚、和厚朴酚达到基线分离。
2.3 系统适应性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为7：3的甲醇-水为流动相，检测波长为294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。
2.4 供试品溶液的制备
本发明所述中药复方栓剂含有水溶性基质——聚乙二醇，对含量测定有影响，必须除去。利用聚乙二醇在热无水乙醇中溶解，冷却后则沉淀析出的性质，通过抽滤可以有效地去除基质。故采用与实验例1相同的方法去除基质，即无水乙醇加热回流60min，冷却除去基质。
2.5 空白试验
取处方中不含厚朴的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，再按照说明书中记载的供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，依说明书记载的含量测定方法试验，结果阴性无干扰。
2.6 线性关系考察
精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含20.04μg厚朴酚，20.44μg和厚朴酚的溶液，精密吸取上述溶液2μl、5μl、10μl、12μl、15μl，注入高效液相色谱仪中，按照说明书记载的色谱分析条件，测定峰面积，结果见表8和9。
表8 厚朴酚线性关系考察结果
| 进样量(μg) | 一次 | 二次 | 三次 | 平均值 |
| 0.0401 | 501162 | 506982 | 512349 | 506831 |
| 0.1002 | 1249749 | 1275528 | 1241506 | 1255594 |
| 0.2004 | 2516454 | 2562782 | 2545589 | 2541608 |
| 0.2405 | 3064278 | 3047757 | 3037493 | 3049843 |
| 0.3006 | 3835170 | 3847117 | 3773978 | 3818755 |
以峰面积积分值为纵坐标，厚朴酚进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y=1.3970×107X+1.8047×103，r=0.9999
表明厚朴酚进样量在0.0401μg-0.3006μg范围内具有良好线性关系。
表9 和厚朴酚线性关系考察结果
| 进样量(μg) | 一次 | 二次 | 三次 | 平均值 |
| 0.0409 | 577977 | 582707 | 582058 | 580914 |
| 0.1022 | 1404561 | 1430204 | 1389512 | 1408092 |
| 0.2044 | 2896829 | 2875034 | 1389512 | 2877381 |
| 0.2453 | 3437645 | 3425450 | 3428390 | 3431548 |
| 0.3066 | 4301328 | 4314496 | 4209475 | 4275100 |
以峰面积积分值为纵坐标，和厚朴酚进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y=1.2731×107X-1.0586×104，r=0.9999
表明和厚朴酚进样量在0.04μg-0.30μg范围内具有良好线性关系。
2.7 精密度试验
精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积（见表3），厚朴酚的RSD=0.66%，和厚朴酚的RSD=0.92%，表明本法精密度良好。
。
2.8 稳定性试验
取所述所述中药复方栓剂5粒，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，分别于配置后0,3,4,6,8小时，精密吸取所述供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，厚朴酚和和厚朴酚的峰面积基本保持一致。表明厚朴酚和和厚朴酚在所述流动相溶液中8小时内稳定，结果见表11。
。
2.9 重现性试验
分别取同一批所述中药复方栓剂5份，精密称定，按照说明书记载的方法制成5份供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定厚朴酚和和厚朴酚的含量，RSD（厚朴酚）=0.74%，RSD（和厚朴酚）=0.95%，表明本法重现性良好，结果见表12。
。
2.10 加样回收率试验
取同一批已知含量的所述中药复方栓剂6份，每份约1g，精密称定，其中3份加入厚朴酚对照品100.20μg，和厚朴酚对照品40.88μg，另三份加入厚朴酚对照品150.3μg，和厚朴酚对照品61.32μg。按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定厚朴酚和和厚朴酚的含量，计算回收率。厚朴酚平均回收率为97.26%，RSD=2.0%，和厚朴酚平均回收率为95.64%，RSD=1.8%，表明本法回收率良好，结果见表13。
2.11 样品测定结果
取六批所述中药复方栓剂，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定厚朴酚和和厚朴酚的含量，结果见表14。
表14 样品测定结果
| 批号 | 厚朴酚含量(mg/g) | 和厚朴酚含量(mg/g) |
| 20100416 | 0.93 | 0.24 |
| 20100507 | 1.02 | 0.22 |
| 20100508 | 0.97 | 0.57 |
| 20101025 | 0.79 | 0.32 |
| 20101030 | 0.80 | 0.33 |
| 20101031 | 1.25 | 0.49 |
根据上述测定结果，本发明所述优选的中药复方栓剂含大黄按厚朴酚计不少于0.60mg，按和厚朴酚计不少于0.20mg。
附图说明
图1是大黄素和大黄酚对照品溶液HPLC图谱。
图2是所述中药复方栓剂供试品溶液在440nm下的HPLC图谱。
图3是阴性样品溶液在440nm下HPLC图谱。
图4是大黄素标准品溶液标准曲线图。
图5是大黄酚标准品溶液标准曲线图。
图6是厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液HPLC图谱。
图7是所述中药复方栓剂供试品溶液在294nm下的HPLC图谱。
图8是阴性样品溶液在294nm下HPLC图谱。
图9是厚朴酚标准品溶液标准曲线图。
图10是和厚朴酚标准品溶液标准曲线图。
具体实施方式
下述实施例均能实现上述实验例的效果，但本发明并不限于所述实施例。
实施例1 本发明中药复方栓剂1
原料药：大黄117g，浙贝母117g，炒侧柏叶333g，厚朴333g，白及167g，冰片10g，紫草333g；
基质：聚乙二醇6000 1450g, 聚乙二醇4000 900g
取除冰片外的所述原料药，以70%乙醇加热回流提取3次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩药液，备用；取所述聚乙二醇6000和聚乙二醇4000，加热融化，充分混匀，加入所述浓缩药液中，搅匀，冷却至50-55℃，加入所述重量份的冰片，制栓1000粒，即得。
每1粒所述中药复方栓剂1折算成原料药量，相当于1.41g原料药。
实施例2 本发明中药复方栓剂2
原料药：大黄50g，浙贝母70g，炒侧柏叶200g，厚朴250g，白及100g，冰片5g，紫草210g；
基质：聚乙二醇6000 700g, 聚乙二醇4000 400g
按照实施例1所述的制备方法，制栓1000粒，即得。
每1粒所述中药复方栓剂2折算成原料药量，相当于0.90g原料药。
大黄50-150重量份，浙贝母50-150重量份，炒侧柏叶200-600重量份，厚朴200-600重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份。
实施例3 本发明中药复方栓剂3
原料药：大黄150g，浙贝母140g，炒侧柏叶600g，厚朴550g，白及300g，冰片15g，紫草600g；
基质：聚乙二醇6000 2100g, 聚乙二醇4000 1350g。
按照实施例1所述的制备方法，制栓1000粒，即得。
每1粒所述中药复方栓剂3折算成原料药量，相当于2.36g原料药。
实施例4 实施例1制备的本发明中药复方栓剂1成分检测方法
【含量测定】
大黄素和大黄酚
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸为流动相，检测波长为440nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含60μg大黄素和80μg大黄酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方栓剂5粒，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷。置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液10ml置蒸发皿中，挥干乙醇，用2.5mol/L硫酸溶液20ml分次洗涤残渣，合并移入鸡心瓶中，加热回流水解2小时，放冷至室温后，加入氯仿20ml继续回流两次，每次1小时，回流结束，分出氯仿液，挥去氯仿，残渣用少量氯仿溶解并移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液15μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
所述中药复方栓剂含大黄按大黄素计不少于20μg，按大黄酚计不少于30μg。
厚朴酚、和厚朴酚
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为7：3的甲醇-水为流动相，检测波长为294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3800；
对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含20μg厚朴酚和20μg和厚朴酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方栓剂5粒，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷。置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液2ml置10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
所述中药复方栓剂含厚朴按厚朴酚计不少于0.60mg，按和厚朴酚计不少于0.20mg。
【鉴别】
（1）取所述中药复方栓剂1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材粉末0.1g，加氯仿20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品2mg，加氯仿制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述供试品溶液10μl，所述对照药材溶液10μl，所述对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；
（2） 取所述中药复方栓剂2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分钟，滤过，合并滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液，取厚朴对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；另取厚朴酚、和厚朴酚对照品各2mg，分别加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光萃灭斑点；
（3）取所述中药复方栓剂1粒，研碎，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制备的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，渐显紫红色。
实施例5 实施例2制备的中药复方栓剂2的成分检测方法
【含量测定】
大黄素和大黄酚
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸为流动相，检测波长为440nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含60μg大黄素和80μg大黄酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方栓剂8粒，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇150ml，加热回流提取60分钟，放冷。置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液10ml置蒸发皿中，挥干乙醇，用2.5mol/L硫酸溶液20ml分次洗涤残渣，合并移入鸡心瓶中，加热回流水解2小时，放冷至室温后，加入氯仿20ml继续回流两次，每次1小时，回流结束，分出氯仿液，挥去氯仿，残渣用少量氯仿溶解并移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液15μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
【鉴别】
（1）取所述中药复方栓剂1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材粉末0.1g，加氯仿20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品2mg，加氯仿制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述供试品溶液10μl，所述对照药材溶液10μl，所述对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；
（2） 取所述中药复方栓剂2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分钟，滤过，合并滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液，取厚朴对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；另取厚朴酚、和厚朴酚对照品各2mg，分别加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光萃灭斑点。
实施例6 实施例3制备的中药复方栓剂3的成分检测方法
【含量测定】
厚朴酚、和厚朴酚
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为7：3的甲醇-水为流动相，检测波长为294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3800；
对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含20μg厚朴酚和20μg和厚朴酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方栓剂3粒，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇150ml，加热回流提取60分钟，放冷。置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液2ml置10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
【鉴别】
（1）取所述中药复方栓剂1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材粉末0.1g，加氯仿20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品2mg，加氯仿制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述供试品溶液10μl，所述对照药材溶液10μl，所述对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；
（2） 取所述中药复方栓剂2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分钟，滤过，合并滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液，取厚朴对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；另取厚朴酚、和厚朴酚对照品各2mg，分别加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光萃灭斑点；
（3）取所述中药复方栓剂1粒，研碎，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制备的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，渐显紫红色。
Claims (5)
1.一种用于各种类型痔疮的中药复方栓剂的成分检测方法，所述中药复方栓剂的原料药组成如下：大黄50-150重量份，浙贝母50-150重量份，炒侧柏叶200-600重量份，厚朴200-600重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份；
所述中药复方栓剂是指：按常规工艺，加入水溶性基质制备成临床上可以接受的任一种栓剂；其特征在于所述成分检测方法包括如下I和II的高效液相色谱法含量测定方法，以及A和B的薄层鉴别方法：
I. 大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸为流动相，检测波长为440nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含60μg大黄素和80μg大黄酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取相当于原料药7.05g的所述中药复方栓剂，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷；置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液10ml置蒸发皿中，挥干乙醇，用2.5mol/L硫酸溶液20ml分次洗涤残渣，合并移入鸡心瓶中，加热回流水解2小时，放冷至室温后，加入氯仿20ml继续回流两次，每次1小时，回流结束，分出氯仿液，挥去氯仿，残渣用少量氯仿溶解并移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液15μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
II. 厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为7：3的甲醇-水为流动相，检测波长为294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3800；
对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含20μg厚朴酚和20μg和厚朴酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取相当于原料药7.05g的所述中药复方栓剂，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷；置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液2ml置10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
A. 取所述中药复方栓剂1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材粉末0.1g，加氯仿20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品2mg，加氯仿制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述供试品溶液10μl，所述对照药材溶液10μl，所述对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；
B. 取所述中药复方栓剂2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分钟，滤过，合并滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液，取厚朴对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；另取厚朴酚、和厚朴酚对照品各2mg，分别加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光萃灭斑点。
2.根据权利要求1所述的中药复方栓剂的成分检测方法，其特征在于所述的成分检测方法还包括如下的鉴别方法：
取所述中药复方栓剂1粒，研碎，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制备的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，渐显紫红色。
3.根据权利要求1所述的中药复方栓剂的成分检测方法，其特征在于所述的中药复方栓剂的原料药优选组成如下：
大黄117g，浙贝母117g，炒侧柏叶333g，厚朴333g，白及167g，冰片10g，紫草333g；
所述中药复方栓剂的水溶性基质的组成为1450g聚乙二醇6000和900g聚乙二醇4000；
所述中药复方栓剂通过如下方法制备：
取除冰片外的所述原料药，以70%乙醇加热回流提取3次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，得到浓缩药液，备用；取所述聚乙二醇6000和聚乙二醇4000，加热融化，充分混匀，加入所述浓缩药液中，搅匀，冷却至50-55℃，加入所述冰片，制栓1000粒，即得。
4.根据权利要求3所述的中药复方栓剂的成分检测方法，其特征在于所述中药复方栓剂的成分检测方法包括如下I和II的高效液相色谱法含量测定方法，以及A和B的薄层鉴别方法：
I. 大黄素和大黄酚的高效液相色谱法含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9：1的甲醇-0.1%磷酸为流动相，检测波长为440nm，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于1500；
对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含60μg大黄素和80μg大黄酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方栓剂5粒，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷；置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液10ml置蒸发皿中，挥干乙醇，用2.5mol/L硫酸溶液20ml分次洗涤残渣，合并移入鸡心瓶中，加热回流水解2小时，放冷至室温后，加入氯仿20ml继续回流两次，每次1小时，回流结束，分出氯仿液，挥去氯仿，残渣用少量氯仿溶解并移至5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液15μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
所述中药复方栓剂含大黄按大黄素计不少于20μg，按大黄酚计不少于30μg；
II. 厚朴酚、和厚朴酚的高效液相色谱法含量测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为7：3的甲醇-水为流动相，检测波长为294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3800；
对照品溶液的制备：精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，置同一容量瓶中，加流动相制成每1ml含20μg厚朴酚和20μg和厚朴酚的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述中药复方栓剂5粒，精密称定，置鸡心瓶中，加无水乙醇100ml，加热回流提取60分钟，放冷；
置冰浴中，使基质完全沉淀出，用布氏漏斗抽滤，用无水乙醇洗涤2次，合并滤液、洗涤液置蒸发皿中，挥去乙醇，用无水乙醇溶解残渣，移入50ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密吸取该溶液2ml置10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；
所述中药复方栓剂含厚朴按厚朴酚计不少于0.60mg，按和厚朴酚计不少于0.20mg；
A. 取所述中药复方栓剂1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材粉末0.1g，加氯仿20ml冷浸1小时，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，滴加盐酸1ml，置水浴上加热30分钟，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取大黄酚对照品2mg，加氯仿制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述供试品溶液10μl，所述对照药材溶液10μl，所述对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个黄色斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的一个斑点；
B. 取所述中药复方栓剂2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分钟，滤过，合并滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液，取厚朴对照药材粉末1.0g，同法制成对照药材溶液；另取厚朴酚、和厚朴酚对照品各2mg，分别加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取所述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12：2：1的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光萃灭斑点。
5.根据权利要求4所述的中药复方栓剂的成分检测方法，其特征在于所述的中药复方栓剂的成分检测方法还包括如下的鉴别方法：
取所述中药复方栓剂1粒，研碎，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制备的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，渐显紫红色。
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