CN103214597B

CN103214597B - 依诺肝素钠中间体脱色方法

Info

Publication number: CN103214597B
Application number: CN201310175201.0A
Authority: CN
Inventors: 郑会武; 石滨; 丛义国; 刘清凉
Original assignee: ZAOZHUANG SAINUOKANG BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: WANBANG SINOCK BIOPHARMACEUTICAL CO., LTD.
Priority date: 2013-05-14
Filing date: 2013-05-14
Publication date: 2015-11-11
Anticipated expiration: 2033-05-14
Also published as: CN103214597A

Abstract

一种依诺肝素钠中间体脱色方法，包括如下操作步骤：（1）将依诺肝素钠中间体用氯化钠溶液溶解，使成溶解液；（2）将步骤（1）所得溶解液加入过氧化氢溶液，过滤，使成过滤液；（3）将步骤（2）所得过滤液用大孔阴离子交换树脂吸附，吸附完全后依次用纯化水冲洗、用低浓度氯化钠溶液冲洗、用高浓度氯化钠溶液洗脱，使成洗脱液；（4）将步骤（3）所得洗脱液用乙醇沉淀、脱水，真空干燥后得依诺肝素钠成品。

Description

依诺肝素钠中间体脱色方法

技术领域

本发明涉及一种脱色方法，尤其涉及一种依诺肝素钠中间体脱色方法。

背景技术

依诺肝素钠是一种低分子肝素钠盐，主要用于预防静脉血栓栓塞性疾病（预防静脉内血栓形成），特别是预防与骨科或普外手术有关的血栓形成；治疗已形成的深静脉栓塞，伴或不伴有肺栓塞；与阿司匹林同用，治疗不稳定性心绞痛及非Q波心梗；用于血液透析体外循环中，防止血栓形成等。

依诺肝素钠通过对猪肠黏膜肝素的苄基酯衍生物进行碱解聚而获得，其基本步骤为：以猪黏膜肝素为起始原料，经肝素季铵盐制备、肝素苄酯制备、对肝素苄酯进行碱解聚，以酸中和、醇沉淀，精制、脱色，脱水干燥，得到依诺肝素钠成品，其中，在以酸中和、醇沉淀后得到的是依诺肝素钠中间体，该中间体带有一定的颜色，如果不加以精致、脱色，就达不到标准要求《欧洲药典》7.0版规定，其溶液的颜色不得比最接近色调的6号比色液更深。

中国专利文献CN1850865A公开了一种依诺肝素钠的纯化方法，其中公开了对依诺肝素钠粗品的脱色方法，方法为将大孔树脂脱色与活性炭脱色结合起来，即先将依诺肝素钠粗品加水溶解后，经活性炭脱色，再上树脂柱，冻干得依诺肝素钠成品；或者将依诺肝素钠粗品先上树脂柱，再对收集组分进行活性炭脱色，经沉淀冻干后得到依诺肝素钠成品。

该文献公开的脱色方法存在以下不足：（1）、采用活性炭脱色会吸附掉一些依诺肝素钠，从而使收率降低；（2）、也容易产生无法过滤掉的超微细的微粒，使成品存在安全风险。

目前，也有一些使用过氧化氢氧化脱色的工艺，这些工艺往往要进行多次的氧化过程才能使颜色达到要求，但多次氧化会造成对依诺肝素钠结构的破坏，同时，多次氧化也会使得依诺肝素钠的效价降低。同时也会在依诺肝素钠中残留过氧化氢，对依诺肝素钠的稳定性造成影响。

另外，还有单纯使用大孔阴离子交换树脂进行依诺肝素钠中间体脱色的方法，使用该方法时，由于其中的有色物质与依诺肝素钠的电负性差别不大，在梯度洗脱掉色素的同时，也使一部分的依诺肝素钠被洗脱掉，从而影响收率。

发明内容

本发明的目的是提供一种脱色效果好、收率高、安全性高的依诺肝素钠中间体脱色方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，包括如下操作步骤：

（1）、将依诺肝素钠中间体用氯化钠溶液溶解，使成溶解液；

（2）、将步骤（1）所得溶解液加入过氧化氢溶液，过滤，使成过滤液；

（3）、将步骤（2）所得过滤液用大孔阴离子交换树脂吸附，吸附完全后依次用纯化水冲洗、用低浓度氯化钠溶液冲洗、用高浓度氯化钠溶液洗脱，使成洗脱液；

（4）、将步骤（3）所得洗脱液用乙醇沉淀、脱水，真空干燥后得依诺肝素钠成品。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（1）中氯化钠溶液的浓度为1%∼6%（w/v），所得溶解液中依诺肝素钠中间体的浓度为5%∼15%（w/v）。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液加入过氧化氢溶液的量为整体溶液体积的0.5%∼2%，过氧化氢用前稀释为10%。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液保持温度在30∼60℃之间时加入过氧化氢溶液。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液在Ph值为8∼11的范围内加入过氧化氢溶液。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液加入过氧化氢溶液并保持3∼12小时后再进行过滤。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（3）中所得过滤液在Ph值为7.5∼12的范围内用大孔阴离子交换树脂吸附；所用低浓度氯化钠溶液的浓度为1%∼5%（w/v），所用高浓度氯化钠溶液的浓度为8%∼15%（w/v）。

根据所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（3）中所用的大孔阴离子交换树脂为AMBERLITE FPA98 CL、Lewatit ®VP OC 1074、国产D254、D204或D208。

在本发明所述方法中，过氧化氢的氧化脱色条件温和，只进行一次氧化，对依诺肝素钠的结构破坏小，因此收率高。本发明把过氧化氢氧化与大孔阴离子交换树脂吸附脱色相结合，其脱色效果更佳。本发明先经过过氧化氢氧化脱色，再经过大孔阴离子交换树脂吸附、纯化水洗涤、低盐冲洗、高盐洗脱的过程后，使得依诺肝素钠成品中无过氧化氢残留、安全性高，因此本发明比单一的使用化学脱色法或者单一的树脂脱色法的使用效果优越的多。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述：

实施例一：

一种依诺肝素钠中间体脱色方法，包括如下操作步骤：

（1）、称取100g依诺肝素钠中间体，用事先配制好的4%的氯化钠溶液1000ml溶解，使成10%（w/v）的依诺肝素钠中间体溶液；

（2）、用40%的氢氧化钠溶液调节上述依诺肝素钠溶液的pH值为10.5±0.5，调节温度为55℃，向料液中加入1%（v/v）过氧化氢（原浓度为30%，加入前先按1:3比例将稀浓度释为10%），分三次加入(每隔30min加入1次，每次加入三分之一量)，1小时加完，间歇搅拌，从第一次加入过氧化氢开始，共在此温度下氧化2小时，然后降温至室温，在此pH值下放置10小时，氧化后过滤至澄清。

（3）、将澄清溶液的pH值调节为8.5±0.5后，料液温度控制在30∼45℃，然后经过大孔阴离子交换树脂吸附（树脂为lewatit 1074，事先预处理成氯型，并用4%（w/v）氯化钠溶液平衡）。

（4）、大孔阴离子离子交换树脂吸附完成后用纯化水洗涤，水温为30±5℃，洗涤液排掉，直至洗涤到洗涤液无颜色为止。

（5）、再用4%（w/v）氯化钠溶液洗涤，温度为30±5℃，用40%的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5±0.5，开始洗涤大孔阴离子离子交换树脂柱，直至洗涤液无色为止。

（6）、配制12%（w/v）氯化钠溶液，温度为30±5℃，用40%的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5±0.5，开始洗脱大孔阴离子离子交换树脂柱，控制流速为0.6BV/h，洗脱液用量为4倍柱床体积。

（7）将上述步骤（6）收集的洗脱液在搅拌下加入1.5倍体积量乙醇沉淀6小时，然后用乙醇脱水、真空干燥得依诺肝素钠成品。

实施例二：

一种依诺肝素钠中间体脱色方法，包括如下操作步骤：

（1）、称取100g依诺肝素钠中间体，用事先配制好的4%的氯化钠溶液1000ml溶解，使成15%（w/v）的依诺肝素钠中间体溶液；

（2）、用40%的氢氧化钠溶液调节上述依诺肝素钠溶液的pH值为11±0.5，调节温度为40℃，向料液中加入1.5%（v/v）过氧化氢（原浓度为30%，加入前先按1:3比例将稀浓度释为10%），分三次加入(每隔30min加入1次，每次加入三分之一量)，1小时加完，间歇搅拌，从第一次加入过氧化氢开始，共在此温度下氧化2小时，然后降温至室温，在此pH值下放置10小时，氧化后过滤至澄清。

（3）、将澄清溶液的pH值调节为8.5±0.5后，料液温度控制在30∼45℃，然后经过大孔阴离子交换树脂吸附（树脂为AMBERLITE FPA98 CL，事先预处理成氯型，并用4.5%（w/v）氯化钠溶液平衡）。

（6）、配制14%（w/v）氯化钠溶液，温度为30±5℃，用40%的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5±0.5，开始洗脱大孔阴离子离子交换树脂柱，控制流速为0.6BV/h，洗脱液用量为4倍柱床体积。

实施例三：

一种依诺肝素钠中间体脱色方法，包括如下操作步骤：

（1）、称取100g依诺肝素钠中间体，用事先配制好的4%的氯化钠溶液1000ml溶解，使成8%（w/v）的依诺肝素钠中间体溶液；

（2）、用40%的氢氧化钠溶液调节上述依诺肝素钠溶液的pH值为10±0.5，调节温度为60℃，向料液中加入0.8%（v/v）过氧化氢（原浓度为30%，加入前先按1:3比例将稀浓度释为10%），分三次加入(每隔30min加入1次，每次加入三分之一量)，1小时加完，间歇搅拌，从第一次加入过氧化氢开始，共在此温度下氧化2小时，然后降温至室温，在此pH值下放置10小时，氧化后过滤至澄清。

（3）、将澄清溶液的pH值调节为8.5±0.5后，料液温度控制在30∼45℃，然后经过大孔阴离子交换树脂吸附（树脂为D254，事先预处理成氯型，并用4%（w/v）氯化钠溶液平衡）。

（5）、再用3.8%（w/v）氯化钠溶液洗涤，温度为30±5℃，用40%的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5±0.5，开始洗涤大孔阴离子离子交换树脂柱，直至洗涤液无色为止。

（6）、配制10%（w/v）氯化钠溶液，温度为30±5℃，用40%的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5±0.5，开始洗脱大孔阴离子离子交换树脂柱，控制流速为0.6BV/h，洗脱液用量为4倍柱床体积。

实施例四：

一种依诺肝素钠中间体脱色方法，包括如下操作步骤：

（2）、用40%的氢氧化钠溶液调节上述依诺肝素钠溶液的pH值为9.5±0.5，调节温度为50℃，向料液中加入2%（v/v）过氧化氢（原浓度为30%，加入前先按1:3比例将稀浓度释为10%），分三次加入(每隔30min加入1次，每次加入三分之一量)，1小时加完，间歇搅拌，从第一次加入过氧化氢开始，共在此温度下氧化2小时，然后降温至室温，在此pH值下放置10小时，氧化后过滤至澄清。

（3）、将澄清溶液的pH值调节为8.5±0.5后，料液温度控制在30∼45℃，然后经过大孔阴离子交换树脂吸附（树脂为D204，事先预处理成氯型，并用4%（w/v）氯化钠溶液平衡）。

（5）、再用3%（w/v）氯化钠溶液洗涤，温度为30±5℃，用40%的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5±0.5，开始洗涤大孔阴离子离子交换树脂柱，直至洗涤液无色为止。

上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域中普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。

以上实施例所得依诺肝素钠中间体的水溶液颜色为黄色10号，而经过本实施例最终得到的依诺肝素钠成品的颜色浅于《欧洲药典7.0》规定的BY6号比色液，用过氧化氢试纸检测（限量为2ppm）后，过氧化氢的残留显示为阴性，符合标准要求。

本发明公开了一种依诺肝素钠中间体的脱色方法，其操作步骤包括：1、将依诺肝素钠中间体用氯化钠溶液溶解成溶解液；2、将溶解液在一定的温度下用过氧化氢氧化后、过滤使成过滤液；3、过滤液用大孔阴离子交换树脂吸附后再用纯化水冲洗，然后依次用低浓度氯化钠溶液冲洗、高浓度氯化钠溶液洗脱，使成洗脱液；4、洗脱液经乙醇沉淀、脱水、真空干燥，得依诺肝素钠成品。

Claims

1.一种依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，包括如下操作步骤：

（4）、将步骤（3）所得洗脱液用乙醇沉淀、脱水，真空干燥后得依诺肝素钠成品；

步骤（1）中氯化钠溶液的w/v浓度为1%∼6%，所得溶解液中依诺肝素钠中间体的w/v浓度为5%∼15%；

步骤（2）中所得溶解液加入过氧化氢溶液的量为整体溶液体积的0.5%∼2%，过氧化氢用前稀释为10%。

2.根据权利要求1所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液保持温度在30∼60℃之间时加入过氧化氢溶液。

3.根据权利要求2所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液在pH值为10∼11的范围内加入过氧化氢溶液。

4.根据权利要求3所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（2）中所得溶解液加入过氧化氢溶液并保持3∼12小时后再进行过滤。

5.根据权利要求4所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（3）中所得过滤液在pH值为7.5∼12的范围内用大孔阴离子交换树脂吸附；所用低浓度氯化钠溶液的w/v浓度为1%∼5%，所用高浓度氯化钠溶液的w/v浓度为8%∼15%。

6.根据权利要求5所述的依诺肝素钠中间体脱色方法，其特征是，所述步骤（3）中所用的大孔阴离子交换树脂为AMBERLITE FPA98 CL、Lewatit ®VP OC 1074、国产D254、D204或D208。