CN107827803A - 一种从发酵液中提取l‑羟脯氨酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从发酵液中提取L‑羟脯氨酸的方法，该方法将发酵液固液分离后得到滤液，滤液经纳滤得到纳滤清液，纳滤清液调节PH至4，再经离子交换树脂吸附洗脱得到洗脱液，洗脱液调节PH至4经大孔吸附树脂脱色后一次浓缩结晶即得产品。本发明改变了传统的用活性炭处理，且需要两次结晶的工艺。一次结晶即可获得产品，能够极大提高产品的纯度、含量、收率和分离效率，减少溶剂使用量，减少废水量和固废的产生。
Description
技术领域
本发明涉及一种氨基酸的提取工艺技术领域，尤其涉及一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法。
背景技术
L-羟脯氨酸为亚氨基酸，是胶原蛋白的主要组成部分，不属于20种常见的氨基酸，它是脯氨酸羟基化后的产物。近些年来，L-羟脯氨酸的研究和开发已经引起医药、生化、食品及美容等产业的广泛关注。它可以作为化妆品添加剂，具有抗氧化、抗辐射的作用；它具有减肥作用，可望成为比较理想的减肥药物；它具有多种生理功能与独特的生物活性，既可以作为各种软组织疾病的药物，如结蹄组织受损、风湿性关节炎等，又可以加快伤口愈合，以及治疗各种皮肤病；它可以作为氨基酸注射液的重要成分，它对急慢性肝病所导致的低蛋白血症有一定的疗效；它参与脂肪的乳化及红细胞血红素和球蛋白的形成，具有调节脂肪乳化等作用；它还是多种药物，如第三代抗生素、抗肿瘤、抗高血压及新型胃药等的合成原料。
目前，从发酵液中分离提取L-羟脯氨酸，通常采用离子交换法，将固液分离后的发酵液在特定PH条件下，过离子交换树脂，随后大量的去离子水洗涤柱子，将杂质洗去，再用洗脱液将L-羟脯氨酸洗下来，得到羟脯氨酸溶液，在经过两次结晶和干燥得到产品。该方法存在以下缺陷：①经过两次结晶后收率损失不少且不稳定。②洗脱后的羟脯氨酸溶液色泽深，杂质多，影响产品质量。可见，开发高收率、质量稳定的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法势在必行。
发明内容
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，该方法能高效的分离出成品并提高纯度和收率。
本发明为实现以上目的，采用以下技术方案：一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800Da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液；
步骤二：将纳滤清液调节PH至4然后用强酸阳离子交换树脂吸附，用水顶洗之后用氨水洗脱，得到洗脱液；
步骤三：将收集的洗脱液调节PH至4（说明书得不到权利要求的支持），然后用大孔吸附树脂进行色素吸附，得到脱色液；
步骤四：将脱色液过0.22um微孔滤膜后，60-80℃浓缩至L-羟脯氨酸浓度30-50%，降温至室温之后加,加入倍浓缩液体积1-3的工业乙醇进行搅拌结晶2-6h，过滤烘干后得到L-羟脯氨酸的成品。
优选的，所述步骤二中强酸阳离子交换树脂为苯乙烯系大孔阳离子树脂。
优选的，所述苯乙烯系大孔阳离子树脂为HD-86型强酸阳离子树脂。
优选的，所述步骤二中调节发酵滤液PH至4。
通过上述技术方案，所述步骤二中调节发酵滤液PH至4，使发酵液呈酸性，在这一条件下强酸阳离子交换树脂对L-羟脯氨酸吸附能力较强。对大部分色素不吸附，可以去除L-羟脯氨酸外的大部分杂质和色素。
优选的，所述步骤三中的大孔吸附树脂为大孔型阳离子树脂。
优选的，所述大孔型阳离子树脂为HD-1型大孔吸附树脂。
通过上述技术方案，所述步骤三中调节洗脱液PH至4，使洗脱液液呈酸性，在这一条件下大孔吸附树脂对L-羟脯氨酸不吸附，对色素和杂质吸附能力较强。可以去除L-羟脯氨酸外的杂质和色素。
优选的，所述步骤二和步骤三中树脂的上柱流速为1-1.5BV/h。
优选的，所述步骤四中浓缩温度为70℃，浓缩浓度为40%，工业乙醇加量为2倍浓缩液体积，搅拌时间为4h。
本发明的有益效果是：本发明在传统工艺离子交换树脂吸附L-羟脯氨酸后直接浓缩结晶的基础上添加了一步脱色树脂，且只需一步结晶，有效提高了产品的纯度、收率以及减少了溶媒的使用量，具体有益效果如下：
①针对传统工艺收率低的问题，本发明通过添加一步脱色树脂后只需一步结晶，大大减少了两次浓缩结晶带来的收率损失，且工业乙醇的用来减少了一半，L-羟脯氨酸的收率大于85%。
②本发明与传统工艺相比，离子交换后加了一步脱色树脂，有效减少了色素和杂质对后续浓缩结晶的影响。提高了产品的质量和稳定性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：（注意实施例中未出现L-羟脯氨酸浓度）
实施例一：
一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800Da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液。
步骤二：将纳滤清液调节PH至4，以10ml/min的速度过600ml的HD86型强酸离子交换树脂，用水顶洗2BV之后用用2.5L氨水洗脱，得到洗脱液1.5L。
步骤三：将收集的洗脱液调节PH至4，再以5ml/min的速度过300ml的过HD-1大孔吸附树脂进行脱色，得到脱色液。
步骤四：得到脱色液过0.22um微孔滤膜后在70℃真空浓缩至L-羟脯氨酸浓度40%，降温至室温，加入浓缩液两倍体积的工业乙醇进行搅拌结晶4h，过滤得到湿品58.1g，将羟脯氨酸湿品于50℃烘干，得到干品51.2g，色谱纯度100.1%，透光率98%，总收率85.3%。
实施例二：
一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800Da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液。
步骤二：将纳滤清液调节PH至4，以12ml/min的速度过600ml的HD86型强酸离子交换树脂，用水顶洗2BV之后用用2.5L氨水洗脱，得到洗脱液1.5L。
步骤三：将收集的洗脱液调节PH至4，再以6ml/min的速度过300ml的过HD-1大孔吸附树脂进行脱色，得到脱色液。
步骤四：得到脱色液过0.22um微孔滤膜后在60℃真空浓缩至L-羟脯氨酸浓度30%，降温至室温，加入浓缩液一倍体积的工业乙醇进行搅拌结晶2h，过滤得到湿品52.3g，将羟脯氨酸湿品于50℃烘干，得到干品46.3g，色谱纯度99.8%，透光率98.5%，总收率77.2%。
实施例三：
一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800Da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液。
步骤二：将纳滤清液调节PH至4，以15ml/min的速度过600ml的HD86型强酸离子交换树脂，用水顶洗2BV之后用用2.5L氨水洗脱，得到洗脱液1.5L。
步骤三：将收集的洗脱液调节PH至4，再以7.5ml/min的速度过300ml的过HD-1大孔吸附树脂进行脱色，得到脱色液。
步骤四：得到脱色液过0.22um微孔滤膜后在80℃真空浓缩至L-羟脯氨酸浓度50%，降温至室温，加入浓缩液1.5倍体积的工业乙醇进行搅拌结晶6h，过滤得到湿品60.1g，将羟脯氨酸湿品于50℃烘干，得到干品53.8g，色谱纯度98.9%，透光率96.5%，总收率88.7%。
产品收率与纯度的对比试验
利用传统工艺提取：取来源和体积相同的发酵液，调PH至3后经HD86强酸型阳离子交换树脂，氨水洗脱，洗脱液脱色后经两次浓缩结晶，最后收率60.1%，色谱纯度97.8%。
实施例四：
一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将20L发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800Da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液。
步骤二：将纳滤清液调节PH至4，以250ml/min的速度过15L的HD86型强酸离子交换树脂，用水顶洗2BV之后用用37L氨水洗脱，得到洗脱液22.5L。
步骤三：将收集的洗脱液调节PH至4，再以50ml/min的速度过3L的过HD-1大孔吸附树脂进行脱色，得到脱色液。
步骤四：得到脱色液过0.22um微孔滤膜后在70℃真空浓缩至L-羟脯氨酸浓度40%，降温至室温，加入浓缩液两倍体积的工业乙醇进行搅拌结晶4h，过滤得到湿品1188.2g，将羟脯氨酸湿品于50℃烘干，得到干品1044.3g，色谱纯度99.9%，透光率98%，总收率87.0%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
步骤一：将发酵液预处理后，固液分离得到滤液，将滤液过分子量600-800Da的纳滤膜得到纳滤清液和纳滤截留液；
步骤二：将纳滤清液调节PH至4，然后用强酸阳离子交换树脂吸附，用水顶洗2BV之后用氨水洗脱，得到洗脱液；
步骤三：将收集的洗脱液调节PH至4，然后用大孔吸附树脂进行色素吸附，得到脱色液；
步骤四：将脱色液过0.22um微孔滤膜后，60-80℃浓缩至L-羟脯氨酸浓度30-50%，降温至室温之后,加入浓缩液1-3倍体积的工业乙醇进行搅拌结晶2-6h，50℃过滤烘干后得到L-羟脯氨酸的成品。
2.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，所述步骤二中强酸阳离子交换树脂为苯乙烯系大孔阳离子树脂。
3.根据权利要求2所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于， 所述苯乙烯系大孔阳离子树脂为HD-86型强酸阳离子树脂。
4.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，所述步骤二中调节发酵滤液PH至4。
5.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，所述步骤三中的大孔吸附树脂为大孔阳离子树脂。
6.根据权利要求5所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，所述大孔阳离子树脂为HD-1型大孔吸附树脂。
7.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，所述步骤二和步骤三中树脂的上柱流速为1-1.5BV/h。
8.根据权利要求1所述的一种从发酵液中提取L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，所述步骤四中浓缩温度为70℃，浓缩浓度为40%，工业乙醇加量为2倍浓缩液体积，搅拌时间为4h。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN106977442A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-07-25 | 天津科技大学 | 一种羟脯氨酸的提取工艺 |
| CN114105849A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-03-01 | 保定九孚生化有限公司 | 一种l-羟基脯氨酸的提取方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996015131A1 (en) * | 1994-11-10 | 1996-05-23 | Pfizer Pharmaceuticals Inc. | Macrocyclic lactone compounds and their production process |
| CN105777603A (zh) * | 2016-04-01 | 2016-07-20 | 天津市敬业精细化工有限公司 | 一种从l-羟脯氨酸发酵液中提取l-羟脯氨酸的方法 |
| CN106966946A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-21 | 沁浩膜技术(厦门)有限公司 | 一种l‑脯氨酸发酵液的全膜法提取方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996015131A1 (en) * | 1994-11-10 | 1996-05-23 | Pfizer Pharmaceuticals Inc. | Macrocyclic lactone compounds and their production process |
| CN105777603A (zh) * | 2016-04-01 | 2016-07-20 | 天津市敬业精细化工有限公司 | 一种从l-羟脯氨酸发酵液中提取l-羟脯氨酸的方法 |
| CN106966946A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-21 | 沁浩膜技术(厦门)有限公司 | 一种l‑脯氨酸发酵液的全膜法提取方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106977442A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-07-25 | 天津科技大学 | 一种羟脯氨酸的提取工艺 |
| CN114105849A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-03-01 | 保定九孚生化有限公司 | 一种l-羟基脯氨酸的提取方法 |
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