发明内容
本发明提供新颖喹啉化合物。这些化合物用作S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(“GSNOR”)抑制剂。本发明涵盖所述化合物的药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物和N-氧化物。本发明也涵盖包含至少一种本发明化合物和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。
可将本发明组合物制成任何适宜的药学上可接受的剂型。
本发明提供一种抑制需要治疗的受试者中GSNOR的方法。该方法包括施用治疗有效量的包含至少一种GSNOR抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物以及至少一种药学上可接受的载体组合的药物组合物。GSNOR抑制剂可为一种根据本发明的新颖化合物,或其可为一种已知化合物,其先前并不认为是GSNOR抑制剂。
本发明也提供了一种治疗需要治疗的受试者的由NO供体治疗所改善的疾病的方法。该方法包括施用治疗有效量的包含至少一种GSNOR抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物与至少一种药学上可接受的载体组合的药物组合物。GSNOR抑制剂可为一种根据本发明的新颖化合物,或可为一种已知化合物,其先前并不认为是GSNOR抑制剂。
本发明也提供了一种治疗需要治疗的受试者的细胞增生性疾病的方法。该方法包括施用治疗有效量的包含至少一种GSNOR抑制剂或其药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物与至少一种药学上可接受的载体组合的药物组合物。GSNOR抑制剂可为一种根据本发明的新颖化合物,或可为一种已知化合物,其先前并不认为是GSNOR抑制剂。
本发明方法涵盖与一种或多种辅助性活性剂一起施用。此施用可依序进行或以组合组合物的形式。
虽然类似或等效于本文中所述的方法和材料可用于实施或测试本发明,但以下阐述了适宜方法和材料。本文中提及的所有公开有效公布、专利申请、专利和其它参考文献的全文是以引用的方式并入。出现冲突时,以本发明(包括定义)为准。
以上概要和以下详述具有实例性和阐述性,意在进一步提供所要求组合物和方法的细节。从以下详述中,本领域技术人员将轻易了解其它目的、优势和新颖特征。
发明详述
A.本发明概述
到目前为止,已知S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)氧化甲醛谷胱甘肽加合物S-羟甲基谷胱甘肽。迄今,GSNOR已在多种细菌、酵母、植物和动物中得到确认并且明确保守。来自大肠杆菌(E.coli)、酿酒酵母(S.cerevisiae)和小鼠巨噬细胞的蛋白共享60%以上的氨基酸序列一致性。GSNOR活性(即,当NADH作为所需辅助因子存在时,GSNO分解)已在大肠杆菌、小鼠巨噬细胞、小鼠内皮细胞、小鼠平滑肌细胞、酵母和人海拉(HeLa)、上皮和单核细胞中检测到。人GSNOR核苷酸和氨基酸序列信息可以登录号M29872,NM_000671获自国家生物技术信息中心(NCBI)数据库。小鼠GSNOR核苷酸和氨基酸序列信息可以登录号NM_007410获自NCBI数据库。在核苷酸序列中,下划线标出起始部位和终止部位。CDS指出编码序列。SNP指出单核苷酸多态性。其它相关GSNOR核苷酸和氨基酸序列(包括其它物种的那些序列)可在美国专利申请2005/0014697中找到。
根据本发明,GSNOR显示出体内和体外代谢S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)和蛋白S-亚硝基硫醇(SNO)以通过控制分子内低质量NO供体化合物的含量并防止蛋白亚硝基化达到毒性水平来调节NO生物活性。
因此,此酶受到抑制可能使生物活性下降,NO供体疗法有此表现,抑制病理性增生细胞增生,并增加有利于疾病的NO生物活性。
本发明提供GSNOR有效抑制剂的药剂。尤其,提供具有如下所示结构(式I)的被取代的喹啉类似物,或其药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物。
其中
m选自由0、1、2或3组成的组;
R1独立地选自由氯、氟、溴、氰基和甲氧基组成的组;
R2b和R2c独立地选自由氢、卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和N(CH3)2组成的组;
X选自由以下组成的组:
n选自由0、1和2组成的组;
R3独立地选自由卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、羟基、C1-C3烷氧基和NR4R4’组成的组,其中R4和R4’独立地选自由C1-C3烷基组成的组,或R4当与R4’一起时形成具有3至6个成员的环;以及
A选自由以下组成的组:
如本文中所用,术语“类似物”指具有类似于保留喹啉环的式I化合物的化学结构和功能的化合物。
一些本发明喹啉类似物也可以多种异构体形式存在,包括构型异构体、几何异构体和构象异构体,并以多种互变异构形式存在,尤其氢原子接合点不同的那些形式。如本文中所用,术语“异构体”指涵盖化合物的所有异构体形式,包括化合物的互变异构形式。
具有不对称中心的示例性化合物可以不同对映体和非对映体形式存在。化合物可以光学异构体或非对映体形式存在。因此,本发明涵盖以它们的光学异构体、非对映体和其混合物(包括外消旋混合物)形式的化合物。
应注意,如果所述结构与结构名称存在不符,则以所述结构为准。此外,如果结构或结构的一部分的立体化学未用例如加粗、楔形或虚线表示,则将所述结构或结构的一部分理解为涵盖所述化合物的所有立体异构体。
B.S-亚硝基谷胱甘肽还原酶抑制剂
1.本发明化合物
在一个方面中,本发明提供具有式I所示结构的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物:
其中
m选自由0、1、2或3组成的组;
R1独立地选自由氯、氟、溴、氰基和甲氧基组成的组;
R2b和R2c独立地选自由氢、卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和N(CH3)2组成的组;
X选自由以下组成的组:
n选自由0、1和2组成的组;
R3独立地选自由卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、羟基、C1-C3烷氧基和NR4R4’组成的组,其中R4和R4’独立地选自由C1-C3烷基组成的组,或R4当与R4’一起时形成具有3至6个成员的环;以及
A选自由以下组成的组:
在本发明的另一个方面中,R1独立地选自由氯、氟和溴组成的组;R3独立地选自由卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和NR4R4’组成的组,其中R4和R4’独立地选自由C1-C3烷基组成的组,或R4当与R4’一起时形成具有3至6个成员的环;以及
X选自由以下组成的组:
在本发明的另一个方面中,R3独立地选自由卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和NR4R4’组成的组,其中R4和R4’是甲基,或与所述N一起形成环氮丙啶-1-基或吗啉基。
在本发明的另一个方面中,m选自由0和1组成的组;R2b和R2c独立地选自由氢、氯、氟、甲基、三氟甲基、氰基、甲氧基和N(CH3)2组成的组;n选自由0和1组成的组;而R3独立地选自由氟、氯、溴、甲基、三氟甲基、氰基、羟基、甲氧基和N(CH3)2组成的组。
在本发明的另一个方面中,A是COOH。
在本发明的另一个方面中,适宜的式I化合物包括,但不限于:
4-(6-羟基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)-3-甲基喹啉-6-醇;
4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇;
1-(6-羟基喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸;
(1r,4r)-4-(6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
(1s,4s)-4-(6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-(2H-四唑-5-基)苯基)-4-氯喹啉-6-醇;
3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(2H)-酮;
3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸;
5-(6-羟基喹啉-2-基)噻吩-2-羧酸;
4-(6-羟基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸;
4-(3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-氯-3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
3-(2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮;
3-(3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮;
4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(2-氯-4-(2H-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噁二唑-2(3H)-酮;
3-(二甲氨基)-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲基苯甲酸;
4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)-3-氟苯甲酸;
3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-5(2H)-酮;
4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸;
4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-羧基苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噻二唑-2(3H)-酮;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-3(2H)-酮;
(1r,4r)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
(1s,4s)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
3-氯-4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(5-(2H-四唑-5-基)噻吩-2-基)喹啉-6-醇;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-3(2H)-酮;
3-氟-4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
1-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸;
4-(5-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
(1r,4r)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸;
(1s,4s)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸;
4-(5-溴-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
3-溴-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-(二甲氨基)-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸;
3-氰基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-羧基-2-氯苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物;
4-(4-氨基-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(3-氰基-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(5-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
3-羟基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;和
3-氟-4-(5-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸。
当显示与取代基的键穿过连接环中两个原子的键时,该取代基则可结合环中任意原子。当列示出取代基,但未表示出该取代基连接到给定式化合物的其余部分所通过的原子,则该取代基可通过该取代基中任何原子连接。只要该组合可得到稳定化合物,取代基和/或变量可组合。
本文中所述化合物可具有不对称中心。包括不对称取代原子的本发明化合物可以光学活性或消旋形式分离。本领域中已知如何制备光学活性形式,例如,通过消旋形式的拆分,或通过由光学活性起始物合成。许多烯烃几何异构体、C=N双键等也可存在于本文中所述化合物中,本发明期望所有这些稳定异构体。阐述了本发明化合物的顺式和反式几何异构体并可以异构体混合物或单独的异构体形式分离。预期一种结构的所有手性、非对映体、消旋和几何异构体形式,除非特定地指出特定的立体化学或异构体形式。也将所示或所述化合物的所有互变体视为本发明的一部分。
应明白,来自该不对称(例如,所有对映体和非对映体)的异构体包括在本发明范围内,除非另外指出。这些异构体可通过传统分离技术利用立体化学控制合成以基本纯的形式获得。而且,本申请中结构式和其它化合物以及部分也包括其所有互变体。烯烃可在适当时包括E-或Z-几何形状。
2.代表性化合物
实施例1-56列示式I的代表性新颖喹啉类似物。可用于制备每一个化合物的合成方法在实施例1-56中详述,参照实施例1前所述的合成方案,并参照实施例57中所述的中间体。每一个化合物的支持性质谱数据和/或质子NMR数据也包括在实施例1-56中。GSNOR抑制剂活性是通过实施例58中所述的测定确定并得到IC50值。实施例1-56中GSNOR抑制剂化合物具有约<10μM的IC50。实施例1-4、6、8、10-14、16-35、37-43、45-50和52-56中的GSNOR抑制剂化合物具有约<0.5μM的IC50。实施例1-4、8、10-14、17-28、30、31、37、40-41、43、46、48-49和52-56中的GSNOR抑制剂化合物具有约<0.1μM的IC50。
C.定义
如本文中所用,“约”会被本领域技术人员所理解并在所用情况下存在一定程度的变化。如果在使用的情况下,本领域技术人员对术语的使用不清楚,则“约”意指特定值的±10%。
术语“酰基”包括含有直链或支链低级烷基残基所连接的乙酰基(CH3CO-)或羰基的化合物和部分。
如本文中所用,术语“烷基”指具有所示碳原子数目的直链或支链饱和烃。例如,(C1-C6)烷基意包括,但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基和新己基。烷基可未被取代或任选被本文中所述的一个或多个取代基取代。
如本文中所述,术语“烯基”指具有所示碳原子数目和至少一个双键的直链或支链不饱和烃。(C2-C8)烯基实例包括,但不限于,乙烯、丙烯、1-丁烯、2-丁烯、异丁烯、仲丁烯、1-戊烯、2-戊烯、异戊烯、1-己烯、2-己烯、3-己烯、异己烯、1-庚烯、2-庚烯、3-庚烯、异庚烯、1-辛烯、2-辛烯、3-辛烯、4-辛烯和异辛烯。烯基可未被取代或任选被本文中所述的一个或多个取代基取代。
如本文中所用,术语“炔基”指具有所示碳原子数目和至少一个三键的直链或支链不饱和烃。(C2-C8)炔基的实例包括,但不限于,乙炔、丙炔、1-丁炔、2-丁炔、1-戊炔、2-戊炔、1-己炔、2-己炔、3-己炔、1-庚炔、2-庚炔、3-庚炔、1-辛炔、2-辛炔、3-辛炔和4-辛炔。炔基可未被取代或任选被本文中所述的一个或多个取代基取代。
如本文中所用,术语“烷氧基”指具有所示碳原子数目的-O-烷基。例如,(C1-C6)烷氧基包括-O-甲基、-O-乙基、-O-丙基、-O-异丙基、-O-丁基、-O-仲丁基、-O-叔丁基、-O-戊基、-O-异戊基、-O-新戊基、-O-己基、-O-异己基和-O-新己基。
如本文中所用,术语“氨烷基”指其中C1-C6烷基的氢原子中的一个或多个被式-N(RC)2胺替代的烷基(一般一个至六个碳原子),其中,每次出现的RC独立地是H或(C1-C6)烷基。氨烷基实例包括,但不限于,-CH2NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2N(CH3)2、叔丁基氨甲基、异丙基氨甲基等。
如本文中所用,术语“芳基”指5-至14-员单环、双环或三环芳香族环系统。芳基实例包括苯基和萘基。芳基可未被取代或任选被本文中所述的一个或多个取代基取代。芳基实例包括苯基或芳基杂环,例如,吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、噁唑、异噁唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。
如本文中所用,术语“生物活性”表示对一种或多种细胞或细胞外过程的作用(例如,通过连接、信号传导等),所述作用可影响生理或病理生理学过程。
术语“羰基”包括含有以双键连接至氧原子的碳的化合物和部分。含有羰基的部分的实例包括,但不限于,醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酸酐等。
术语“羧基(carboxy,carboxyl)”意指-COOH基团或羧酸。
如本文中所用,“酸性部分”定义是羧酸或羧酸生物电子等排体。生物电子等排体是大体上产生类似于化合物的生物性质的具有类似物理或化学性质的取代基或基团。关于生物电子等排体的概述,参见J.Med.Chem,2011,54,2529-2591。“酸性部分”的实例包括,但不限于
“药效团”定义是分子中一组结构特征体,被认为在受体部位并负责分子的生物活性(Gund,Prog.Mol.Subcell.Biol.,5:pp117-143(1977))。
术语“Cm-Cn”意指“m”个碳原子数目至“n”个碳原子数目。例如,术语“C1-C6”意指一个至六个碳原子(C1、C2、C3、C4、C5或C6)。术语“C2-C6”包括二个至六个碳原子(C2、C3、C4、C5或C6)。术语“C3-C6”包括三个至六个碳原子(C3、C4、C5或C6)。
如本文中所用,术语“环烷基”指3-至14-员饱和或不饱和非芳香族单环、双环或三环烃环系统。此种类包括与苯环稠合的环烷基。代表性环烷基包括,但不限于,环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、1,3-环己二烯基、环庚基、环庚烯基、1,3-环庚二烯基、1,4-环庚二烯基、-1,3,5-环庚三烯基、环辛基、环辛烯基、1,3-环辛二烯基、1,4-环辛二烯基、-1,3,5-环辛三烯基、十氢萘、八氢萘、六氢萘、八氢茚、六氢茚、四氢茚、十氢苯并环庚烯、八氢苯并环庚烯、六氢苯并环庚烯、四氢苯并环庚烯、十二氢庚搭烯、十氢庚搭烯、八氢庚搭烯、六氢庚搭烯、四氢庚搭烯、(1s,3s)-二环[1.1.0]丁烷、二环[1.1.1]戊烷、二环[2.1.l]己烷、二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷、二环[3.1.l]庚烷、二环[3.2.1]辛烷、二环[3.3.1]壬烷、二环[3.3.2]癸烷、二环[3.3.]十一烷、二环[4.2.2]癸烷和二环[4.3.1]癸烷。环烷基可未被取代或任选被一个或多个以下所述的取代基取代。
术语“卤素”包括氟、溴、氯、碘等。
如本文中所用,术语“卤代烷基”指C1-C6烷基,其中C1-C6烷基的氢原子中的一个或多个被相同或不同的卤素原子替代。卤代烷基的实例包括,但不限于,三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、五氯乙基和1,1,1-三氟-2-溴-2-氯乙基。
除非另外指出,术语“杂烷基”自身或与另一个术语的组合意指稳定的直链或支链烷基或其组合,其由碳原子和一个至三个选自由O、N和S组成的组的杂原子组成,且其中氮原子和硫原子可任选被氧化而氮杂原子可任选被季铵化。杂原子O、N和S可置于杂烷基的任意位置。实例包括-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3和-CH2-CH=N-OCH3。最多两个杂原子可为连续的,例如,-CH2-NH-OCH3。当前缀(例如,(C2-C8))用于指杂烷基时,则碳数目(在这个实例中,2至8个)也包括杂原子。例如,C2-杂烷基意包括,例如,-CH2OH(一个碳原子和一个替代碳原子的杂原子)和-CH2SH。
为进一步阐述杂烷基定义,其中杂原子是氧,杂烷基可为氧烷基。例如,(C2-C5)氧烷基意包括,例如,-CH2-O-CH3(C3-氧烷基,具有两个碳原子和一个替代碳原子的氧)、-CH2CH2CH2CH2OH、-OCH2CH2OCH2CH2OH、-OCH2CH(OH)CH2OH等。
如本文中所用,术语“杂芳基”指具有5至14个成员的芳香族杂环,并具有至少一个选自氮、氧和硫的杂原子,并含有至少1个碳原子,包括单环、二环和三环系统。代表性杂芳基是三唑基、四唑基、噁二唑基、吡啶基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、噁唑基、苯并噁唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噁唑基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、嘧啶基、氮杂环庚烯基、氧杂环庚烯基、喹喔啉基和噁唑基。杂芳基可未被取代或任选被一个或多个下文所述的取代基取代。
如本文中所用,术语“杂原子”意指包括氧(O)、氮(N)和硫(S)。
如本文中所用,术语“杂环”指饱和、不饱和或芳香族的3-至14-员环系统,其含有1至4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子,其中氮和硫杂原子可任选被氧化,且氮杂原子可任选被季铵化,包括单环、双环和三环环系统。双环和三环环系统可涵盖稠合至苯环的杂环或杂芳基。在化学可接受的情况下,杂环可通过任何杂原子或碳原子连接。杂环包括以上所定义的杂芳基。杂环的代表性实例包括,但不限于,氮丙啶基、环氧乙烷基、噻喃基、三唑基、四唑基、吖丙啶基、二氮丙啶基、二吖丙啶基、氧杂氮丙啶基、氮杂环丁基、吖丁啶酮基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡咯基、噁嗪基、噻嗪基、二嗪基、二氧杂环己基、三嗪基、四嗪基、咪唑基、四唑基、吡咯烷基、异噁唑基、呋喃基、呋吖基、吡啶基、噁唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、噻唑基、苯并噻唑基、噻吩基、吡唑基、三唑基、嘧啶基、苯并咪唑基、异吲哚基、吲唑基、苯并二唑基、苯并三唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、嘌呤基、吲哚基、异喹啉基、喹啉基和喹唑啉基。杂环基可未被取代或任选被一个或多个下文所述的取代基取代。
除非另外指出,否则术语“杂环烷基”自身或与其它术语的组合表示“杂烷基”的环状形式。另外,杂原子可占据杂环连接到分子其余部分的那个位置。杂环烷基的实例包括l-(l,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等。
如本文中所用,术语“羟烷基”指具有所示碳原子数目的烷基,其中烷基中一个或多个氢原子被-OH基团替代。羟烷基实例包括,但不限于,-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2OH以及其支链形式。
术语“羟基”(hydroxy,hydroxyl)包括具有-OH或-O-的基团。
如本文中所用,N-氧化物或氧化胺指通过将一个氧原子连接到氮原子由叔胺衍生的化合物,R3N+-O-。广义来说,该术语包括伯胺和仲胺的类似衍生物。
如本文中所用,除非另外指出,否则术语“立体异构体”意指基本上不含化合物的其它立体异构体的那个化合物的一种立体异构体。例如,具有一个手性中心的纯立体结构化合物基本上不含该化合物的相反对映体。具有两个手性中心的纯立体结构化合物基本上不含该化合物的其它非对映体。在一些实施方案中,纯立体结构化合物包含约80重量%以上的该化合物的一种立体异构体和约20重量%以下的该化合物的其它立体异构体,例如,约90重量%以上的该化合物的一种立体异构体和约10重量%以下的该化合物的其它立体异构体,或约95重量%以上的该化合物的一种立体异构体和约5重量%以下的该化合物的其它立体异构体,或约97重量%以上的该化合物的一种立体异构体和约3重量%以下的该化合物的其它立体异构体。
如本文中所用,“蛋白”与“肽”、“多肽”或“肽片段”同义。“纯”多肽、蛋白、肽或肽片段基本上不含来自得到氨基酸序列的细胞、组织或无细胞来源的细胞物质或其它污染蛋白,或基本上不含化学合成时的化学前体或其他化学物质。
如本文中所用,“调节”意指肽或多肽含量增加或降低、肽或多肽稳定性或活性增加或降低。术语“抑制”意指肽或多肽含量降低或肽或多肽的稳定性或活性降低。在优选实施方案中,所调节或抑制的肽是S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)或蛋白S-亚硝基硫醇(SNO)。
如本文中所用,术语“一氧化氮”和“NO”涵盖不带电的一氧化氮和带电的一氧化氮物种,尤其包括亚硝离子(NO+)和硝酰基离子(NO-)。一氧化氮的活性形式可由气态一氧化氮提供。具有结构X-NOy的化合物,其中X是一氧化氮释放、递送或传输部分,包括将一氧化氮提供给其所需反应部位的以针对所需目的呈活性形式的任意和所有这些化合物,而Y是1或2。
“修复”意指结构完整性和正常生理功能的恢复。举例来说,口腔和上气道呼吸上皮可修复热损伤或病毒感染所造成的损害。
“再生”意指器官进入非恶性细胞、血管和基质生长以恢复功能性器官组织的能力。举例来说,伤口愈合涉及组织和器官(例如,皮肤、胃肠黏膜)的再生,如骨折后,和局部切除并暴露于传染性或毒性刺激后肝脏的再生。
如本文中所用,术语“药学上可接受的”意指被联邦或州政府的管理机构批准或用于动物(尤其,人类)的美国药典或其它普遍认可的药典中所列示。术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或介质,包括但不限于如水和油的无菌液体。
本发明化合物的“药学上可接受的盐”或“盐”是含有离子键的本发明化合物的产物,通常通过使本发明化合物与适于施用给受试者的酸或碱反应制得。药学上可接受的盐可包括,但不限于,酸加成盐,包括盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、芳烷基磺酸盐、醋酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐和酒石酸盐;碱金属阳离子,例如,Li、Na和K,碱土金属盐,例如,Mg或Ca,或有机胺盐。
“药物组合物”是一种包含以适于施用给受试者的形式的本发明化合物的制剂。优选地将本发明药物组合物配制成适合其所需施用路径。施用路径实例包括,但不限于,口服和肠胃外,例如,静脉内、皮内、皮下、吸入、局部、经皮、经粘膜和直肠施用。
如本文中所用,术语“取代”意指指示原子上的任一个或多个氢被选自指定组的一个选项替代,只要不超出指示原子常价,并且取代得到稳定化合物。当取代基是酮(即,=O)时,则替代原子上的2个氢。如本文中所用,环双键是两个相邻环原子之间所形成的双键(例如,C=C、C=N或N=N)。
称为烷基、杂烷基、亚烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的基团的取代基可选自多个基团,包括-ORd’、=O、=NRd’、=N-ORd’、-NRd'Rd''、-SRd'、-卤代、-SiRd'Rd''Rd'''、-OC(O)Rd'、-C(O)Rd'、-CO2Rd'、-CONRd'Rd''、-OC(O)NRd'Rd''、-NRd''C(O)Rd'、-NRd'''C(O)NRd'Rd''、-NRd'''SO2NRd'Rd''、-NRd''CO2Rd'、-NHC(NH2)=NH、-NRa'C(NH2)=NH、-NHC(NH2)=NRd'、-S(O)Rd'、-SO2Rd'、-SO2NRd'Rd''、-NRd''SO2Rd'、-CN和-NO2,数目从零到三,那些基团具有零个、一个或两个实例性取代基。
Rd'、Rd''和Rd'''每一个独立地指氢、未取代的(C1-C8)烷基、未取代的杂(C1-C8)烷基、未取代芳基和被一个至三个选自以下的取代基取代的芳基:-卤代、未取代烷基、未取代烷氧基、未取代硫代烷氧基和未取代芳基(C1-C4)烷基。当Rd'和Rd''连接到同一个氮原子时,它们可与氮原子组合形成5-、6-或7-员环。例如,-NRd'Rd''可表示1-吡咯烷基或4-吗啉基。
通常,烷基或杂烷基会具有零个至三个取代基,具有两个或更少个取代基的那些基团是本发明的示例。烷基或杂烷基可未被取代或单取代。在一些实施方案中,烷基或杂烷基未被取代。
烷基和杂烷基的取代基实例包括,但不限于,-ORd’、=O、=NRd’、=N-ORd’、-NRd'Rd''、-SRd'、-卤代、-SiRd'Rd''Rd'''、-OC(O)Rd'、-C(O)Rd'、-CO2Rd'、-CONRd'Rd''、-OC(O)NRd'Rd''、-NRd''C(O)Rd'、-NRd'''C(O)NRd'Rd''、-NRd'''SO2NRd'Rd''、-NRd''CO2Rd'、-NHC(NH2)=NH、-NRa'C(NH2)=NH、-NHC(NH2)=NRd'、-S(O)Rd'、-SO2Rd'、-SO2NRd'Rd''、-NRd''SO2Rd'、-CN和-NO2,其中Rd'、Rd''和Rd'''如上定义。典型取代基可选自:-ORd’、=O、-NRd'Rd''、-卤代、-OC(O)Rd'、-CO2Rd'、-C(O)NRd'Rd''、-OC(O)NRd'Rd''、-NRd''C(O)Rd'、-NRd''CO2Rd'、-NRd'''SO2NRd'Rd''、-SO2Rd'、-SO2NRd'Rd''、-NRd''SO2Rd'、-CN和-NO2。
同样,芳基和杂芳基的取代基不同并选自:-卤代、-ORe'、-OC(O)Re'、-NRe'Re''、-SRe'、-Re'、-CN、-NO2、-CO2Re'、-C(O)NRe'Re''、-C(O)Re'、-OC(O)NRe'Re''、-NRe''C(O)Re'、-NRe''CO2Re'、-NRe'''C(O)NRe'Re''、-NRe'''SO2NRe'Re''、-NHC(NH2)=NH、-NRe'C(NH2)=NH、-NH-C(NH2)=NRe'、-S(O)Re'、-SO2Re'、-SO2NRe'Re''、-NRe''SO2Re'、-N3、-CH(Ph)2、全氟烷氧基和全氟(C1-C4)烷基,数目从零到芳香族环系统上的开放价的总数。
Re'、Re''和Re'''独立地选自氢、未取代的(C1-C8)烷基、未取代的杂(C1-C8)烷基、未取代的芳基、未取代的杂芳基、未取代的芳基(C1-C4)烷基和未取代的芳氧基(C1-C4)烷基。通常,芳基或杂芳基会具有零个至三个取代基,具有两个或更少个取代基的那些基团是本发明示例。在本发明的一个实施方案中,芳基或杂芳基可未被取代或单取代。在另一个实施方案中,芳基或杂芳基未被取代。
本文中所述的芳基或杂芳基的芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选被式-T-C(O)-(CH2)q-U-取代基替代,其中T和U独立地是-NH-、-O-、-CH2-或单键,q是0至2的整数。另外,芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选被式-J-(CH2)r-K-取代基替代,其中J和K独立地是-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NRf'-或单键,r是1至3的整数。所形成新环的一个单键可任选被双键替代。或者,芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可任选被式-(CH2)s-X-(CH2)t-取代基替代,其中s和t独立地是0至3的整数,X是-O-、-NRf'-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NRa'-。-NRf'-和-S(O)2NRf'-中取代基Rf'选自氢或未被取代的(C1-C6)烷基。
“稳定化合物”和“稳定结构”意指足够坚固以从反应混合物中分离出有效纯度,并配制成有效治疗剂的化合物。
如本文中所用,术语“治疗有效量”通常意指改善疾病的至少一种症状以如本文中所述般预防、减缓或治愈所需的量。短语“治疗有效量”当与本发明GSNOR抑制剂相关时意指将GSNOR抑制剂在需要此治疗的大多数受试者中施用,提供特定医药反应的GSNOR抑制剂剂量。需强调,在一个特别情况下,投给特别受试者的GSNOR抑制剂的治疗有效量对治疗本文中所述症状/疾病一直无效,即使该剂量被本领域技术人员视为治疗有效量。
术语“生物样品”包括,但不限于,血液(例如,血清、血浆或全血)、尿、唾液、汗液、母乳、阴道分泌物、精液、毛囊、皮肤、牙齿、骨头、指甲或其它分泌物、体液、组织或细胞。根据本发明,生物样品中GSNOR含量是通过美国专利申请公开2005/0014697中所述的方法确定。
D,药物组合物
本发明涵盖包含至少一种本发明化合物和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。适宜载体在Lippincott Williams&Wilkins出版的“Remington:The Science and Practice,Twentieth Edition,”中有所阐述,其以引用的方式并入本文中。本发明药物组合物也可包含一种或多种非本发明化合物活性剂。
本发明的药物组合物可包含本文中所述的新颖化合物,药物组合物可包含先前不知具有GSNOR抑制剂活性的已知化合物,或其组合。
本发明化合物可以任何药学上可接受的剂型使用,包括但不限于,可注射剂型、液体分散液、凝胶、气溶胶、软膏、乳霜、冻干制剂、干粉、药片、胶囊、控释制剂、速溶制剂、缓释制剂、延释制剂、脉冲释放制剂、混合的即释和控释制剂等。特定地讲,可将本发明化合物配制:(a)用于选自以下的施用:口服、肺部施用、静脉内施用、动脉内施用、鞘内施用、关节内施用、直肠施用、眼部施用、结肠施用、肠胃外施用、耳部施用、脑池内施用、阴道内施用、腹膜内施用、局部施用、颊施用、鼻腔施用和外用;(b)配制成选自以下的剂型:液体分散液、凝胶、气溶胶、软膏、乳霜、药片、小袋和胶囊;(c)配制成选自以下的剂型:冻干制剂、干粉、速溶制剂、控释制剂、缓释制剂、延释制剂、脉冲释放制剂和混合的即释和控释制剂;或(d)其任意组合。
对于呼吸道感染,吸入式制剂可达到高局部浓度。适于吸入的制剂包括可通过吸入器或喷雾器分散到感染患者支气管内或鼻腔中以治疗上下呼吸道细菌感染的干粉或雾化或汽化溶液、分散液或悬浮液。
用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或悬浮液可包括以下组分中一种或多种:(1)无菌稀释剂,例如,注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂;(2)抗菌剂,例如,苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯;(3)抗氧化剂,例如,抗坏血酸或亚硫酸氢钠;(4)螯合剂,例如,乙二胺四乙酸;(5)缓冲液,例如,乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐;和(5)用于调节紧张性的制剂,例如,氯化钠或葡萄糖。pH可通过酸或碱调节,例如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂可包封在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制得的多剂量瓶中。
适于可注射应用的药物组合物可包括无菌水性溶液(水可溶)或分散液和无菌粉末以临时制备无菌可注射溶液或分散液。对于静脉内施用,适宜载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况中,组合物需无菌并且流动程度应可轻易注射。药物组合物在制造和储存条件下稳定且耐微生物污染,例如细菌和真菌。
载体可为溶剂或分散介质,包括,例如,水、乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)、以及其适宜混合物。恰当的流动性可通过使用涂料(例如卵磷脂),在分散情况下,通过维持所需粒径,以及通过使用表面活性剂来进行保持。微生物作用可通过多种抗细菌和抗真菌剂,例如,对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫汞撒等进行抑制。在许多情况中,组合物中优选包括等渗剂(例如,糖)、多元醇(例如,甘露醇或山梨醇)、以及无机盐(例如,氯化钠)。可通过组合物中包括延缓吸收的制剂(例如,单硬脂酸铝和明胶)来使可注射组合物的吸收延长。
无菌可注射溶液可通过将适宜溶剂中所需量的活性试剂与一种上述成分或组合合并,如需要,然后过滤杀菌来制得。一般来讲,分散液是通过将至少一种本发明化合物并入含有碱性分散介质和任何其它所需成分的无菌媒介中制得。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末情况中,制法实例包括真空干燥和冻干,两种制法得到本发明化合物粉末和来自于其先前无菌过滤溶液的任何其它所需成分。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可包封在(例如)明胶胶囊中或压缩成药片。为了口服治疗施用,可将本发明化合物与赋形剂合并在一起并以药片、片剂或胶囊形式使用。口服组合物也可利用液态载体制备以用作漱口药,其中,将含化合物的液态载体口服,口中滚动,吐出或吞咽。医药相容性结合剂和/或辅助物质可作为组合物的一部分。
对于吸入式施用,化合物是从含有来自适宜装置的适宜推进剂的压力容器或分散器中以气溶胶喷雾形式递送,所述推进剂例如,气体(例如,二氧化碳)、雾化液体或干粉末。对于经粘膜或经皮施用,适于渗透障壁的渗入剂用于制剂中。该渗入剂在本领域中普遍知晓,包括,例如,对经粘膜施用而言,洗涤剂、胆盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜施用可通过使用鼻喷雾或栓剂进行。对于经皮施用,如技术中所了解,将活性试剂配制成软膏、药膏、凝胶或乳霜。试剂也可制成栓剂形式(例如,利用常规的栓剂基质,例如可可脂和其它甘油酯)或保留灌肠形式以直肠递送。
在一个实施方案中,将本发明化合物与载体一起配制,所述载体将防止从身体中快速消除。例如,可使用控释制剂,包括植入物和微胶囊化递送系统。可使用生物可降解、生物相容的聚合物,例如,乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。制备此制剂的方法对本领域技术人员而言显而易见。
脂质体悬浮液(包括利用病毒抗原的单克隆抗体针对于感染细胞的脂质体)也可用作药学上可接受的载体。可根据本领域技术人员所了解的方法制备,例如,美国专利4,522,811中所述。
另外,可将本发明化合物的悬浮液制成适宜的油状注射悬浮液。适宜亲脂性溶剂或媒介包括脂肪油(例如,芝麻油)或合成脂肪酸酯(例如,油酸乙酯)、甘油三酯或脂质体。非脂质聚阳离子型氨基聚合物也可用于递送。任选地,悬浮液也可包括适宜稳定剂或增加化合物溶解度并允许制备高浓度溶液的制剂。
尤其利于配制呈单位剂型的口服或肠胃外组合物以利于施用和剂量的均匀性。如本文中所用,单位剂型指适合作为所治疗受试者的单位剂量的物理离散单位;每一个单位包括与所需医药载体结合的产生所需疗效而计得的预确定量的本发明化合物。关于本发明单位剂型的规格由本发明化合物的独特特征和将达到的特别疗效,复合治疗个体的活性剂技术所固有的限制决定并直接相关。
包含至少一种本发明化合物的本发明药物组合物可包含一种或多种药物赋形剂。所述赋形剂的实例包括,但不限于,结合剂、填充剂、润滑剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、防腐剂、缓冲剂、润湿剂、崩解剂、泡腾剂和其它赋形剂。这些赋形剂在本领域中已知。赋形剂实例包括:(1)结合剂,其包括多种纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素,例如,
和
硅化微晶纤维素(ProSolv SMCC
TM)、黄蓍胶和明胶;(2)填充剂,例如多种淀粉、乳糖、乳糖单水合物和无水乳糖;(3)崩解剂,例如,海藻酸、Primogel、玉米淀粉、轻度交联的聚乙烯吡咯烷酮、马铃薯淀粉、玉蜀黍淀粉和改性淀粉、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羟基乙酸淀粉钠和其混合物;(4)润滑剂,包括作用于待压缩粉末流动性的制剂,包括硬脂酸镁、胶体二氧化硅(例如
)、滑石、硬脂酸、硬脂酸钙和硅胶;(5)助流剂,例如,胶体二氧化硅;(6)防腐剂,例如,山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸和其盐,对羟基苯甲酸的其它酯,例如,对羟基苯甲酸丁酯,醇,例如乙醇或苯甲醇,酚类化合物,例如苯酚,或季化合物,例如苯扎氯铵;(7)稀释剂,例如药学上可接受的惰性填料,例如,微晶纤维素、乳糖、磷酸氢钙、糖类和/或以上任意混合物;稀释剂实例包括微晶纤维素,例如
和
乳糖,例如,乳糖单水合物、无水乳糖和
磷酸氢钙,例如
甘露醇;淀粉;山梨糖醇;蔗糖;和葡萄糖;(8)甜味剂,包括任何天然或人工甜味剂,例如,蔗糖、糖精蔗糖、木糖醇、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜和安赛蜜;(9)调味剂,例如薄荷、水杨酸甲酯、橙子香精、
(MAFCO的商标)、泡泡糖调味料、水果调味料等;以及(10)泡腾剂,包括泡腾组合,例如有机酸和碳酸盐或碳酸氢盐。适宜有机酸包括,例如,柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、己二酸、琥珀酸和海藻酸以及酸酐和酸式盐。适宜碳酸盐和碳酸氢盐包括,例如,碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、甘氨酸碳酸钠、L-赖氨酸碳酸盐和精氨酸碳酸盐。另外,可仅存在泡腾组合的碳酸氢钠组分。
E.包含本发明组合物的试剂盒
本发明也涵盖包含本发明组合物的试剂盒。所述试剂盒可包含,例如,(1)至少一种本发明化合物;和(2)至少一种药学上可接受的载体,例如溶剂或溶液。其它试剂盒组分可任选包括,例如,(1)本文中所确定的任一种药学上可接受的赋形剂,例如,稳定剂、缓冲剂等,(2)至少一种容器、小瓶或容纳和/或混合试剂盒组分的类似设备;以及(3)递送设备,例如,吸入器、喷雾器、注射器等。
F.制备本发明化合物的方法
本发明化合物可利用已知合成方法或通过改变已知的合成方法轻易合成。如技术人员所了解,以下所述方法可合成具有多种取代基的喹啉。合成方法实例在以下的实施例部分中阐述。
如需要,可通过本领域中已知的常规步骤进一步纯化和分离对映体和非对映体。因此,例如,化合物对映体的分离可通过使用手性HPLC和相关色谱技术进行。可类似地分离非对映体。但是,在一些情况中,可仅通过,例如,控制沉淀或结晶物理分离非对映体。
本发明方法当如本文中所述进行时,可在技术可常达到的温度下进行。在一个实施方案中,方法是在约25℃至约110℃的温度下进行。在另一个实施方案中,温度是在约40℃至约100℃的范围内。在又另一个实施方案中,温度是在约50℃至约95℃的范围内。
需碱的合成步骤利用任何方便的有机或无机碱。通常,碱并非亲核的。因此,在一个实施方案中,碱选自碳酸盐、磷酸盐、氢氧化物、醇盐、二硅氮烷的盐和叔胺。
本发明当如本文中所述进行时,在几分钟至几小时后可基本上完全,这取决于反应物性质和量以及反应温度。确定反应何时基本上完全可通过本领域中已知的一般技术评价,例如,HPLC、LCMS、TLC和1H NMR。
G.治疗方法
本发明涵盖通过使用一种或多种本发明化合物预防或治疗(例如,缓解一种或多种症状)医学病症的方法。所述方法包括对需要治疗的患者施用治疗有效量的本发明化合物。本发明组合物也可用于预防性治疗。
用于本发明治疗方法的本发明化合物可为:(1)本文中所述的新颖化合物,或其药学上可接受的盐、其立体异构体、其前药、其代谢物或其N-氧化物;(2)先于本发明所知道的化合物,但并不了解该化合物是GSNOR抑制剂,或其药学上可接受的盐、其立体异构体、其前药、其代谢物或其N-氧化物;或(3)先于本发明所知道的化合物,已知该化合物是GSNOR抑制剂,但并不了解该化合物用于本文中所述的治疗方法,或其药学上可接受的盐、立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物。
患者可为任何动物,驯养、家畜或野生的,包括,但不限于,猫、狗、马、猪和牛,优选人类患者。如本文中所用,术语患者和受试者可互换。
如本文中所用,“治疗”阐述了为战胜疾病、病症或不适而对患者进行的处理和关照,包括施用本发明化合物以防止症状或并发症发病,缓解症状或并发症,或根治疾病、病症或不适。更具体地讲,“治疗”包括逆转、减弱、缓解、最大化降低、抑制或中止至少一种有害症状或疾病(不适)状态的效果、疾病进展、疾病病原体(例如,细菌或病毒)或其它异常症状。治疗直到症状和/或病理得以改善。
一般来说,剂量(即,治疗有效量)每天在1μg/kg至10μg/kg范围内,通常在10μg/kg至1g/kg或10μg/kg至100mg/kg治疗受试者体重的范围内。
H.GSNOR用途
在具有高有害GSNOR含量或GSNOR活性的受试者中,可例如通过施用一种或多种所公开的化合物来调节,所述化合物破坏或下调GSNOR功能,或降低GSNOR含量。这些化合物可与其它GSNOR抑制剂一起施用,如抗-GSNOR抗体或抗体片段、反义GSNOR、iRNA或小分子或其它抑制剂,单独或与本文中详述的其它制剂组合。
本发明提供一种治疗受NO供体疗法而改善的不适困扰的受试者的方法。该方法包括对受试者施用治疗有效量的GSNOR抑制剂。
疾病可包括与血氧不足和/或肺和气道的平滑肌收缩和/或肺部感染和/或肺炎和/或肺损伤(例如,肺动脉高压、ARDS、哮喘、肺炎、肺纤维化/间质性肺病、囊肿性纤维化、COPD)相关的肺病;心血管病和心脏病(例如,高血压、缺血性冠脉症候群、动脉粥样硬化、心力衰竭、青光眼);血管生成所表征的疾病(例如,冠状动脉病);存在血栓形成风险的疾病;存在再狭窄风险的疾病;炎症(例如,AIDS相关痴呆、炎症性肠病(IBD)、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、结肠炎和牛皮癣);功能性肠病(例如,肠易激症候群(IBS));存在细胞凋亡风险的疾病(例如,心力衰竭、动脉粥样硬化、退行性神经疾病、关节炎和肝损伤(例如,药物引起、缺血性或酒精性));性无能;睡眠呼吸暂停;糖尿病性伤口愈合;皮肤感染;牛皮癣治疗;对食物的渴望而由吃引起的肥胖;中风;再灌注损伤(例如,心或肺或挤压损伤的创伤肌损伤);和预处理心或脑有利于NO抵抗随后的缺血性事件的疾病、中枢神经系统(CNS)疾病(例如,焦虑、压抑、精神失常和精神分裂症);和细菌引起的感染(例如,尤其,肺结核、艰难梭菌(C.difficile)感染)。
在一个实施方案中,疾病是肝损伤。肝损伤可包括,例如,急性肝毒性。急性肝毒性可导致急性衰竭。急性肝衰竭(ALF)是一种非常见但可能致命的药物相关的副作用,通常导致肝移植(LT)或死亡。对乙酰氨基酚是急性肝毒性和急性肝衰竭的最常见起因,但急性肝毒性可因为其它药剂,例如醇和其它药物。不管是否是因为单过量剂量或在重复的超治疗吸收后,可将对乙酰氨基酚中毒进展分为四个阶段:临床前毒性作用(正常的血清丙氨酸转氨酶浓度)、肝损伤(高浓度的丙氨酸转氨酶)、肝衰竭(患有肝性脑病的肝损伤)和康复。只要存在足够的谷胱甘肽,则使肝脏免遭损伤。过剂量的对乙酰氨基酚(单次大量吸收或重复的超治疗吸收)可耗尽肝脏的谷胱甘肽储存并使肝损伤。本发明化合物可治疗和/或预防肝损伤和/或急性肝毒性。在这个实施方案中,适量的本发明化合物是足以治疗和/或预防肝损伤的量并可不在临床前和/或临床实验的过度试验下确定。在一个实施方案中,治疗量是至少0.001mg/kg、至少0.002mg/kg、至少0.003mg/kg、至少0.004mg/kg、至少0.005mg/kg、至少0.006mg/kg、至少0.007mg/kg、至少0.008mg/kg、至少0.009mg/kg、至少0.01mg/kg、至少0.02mg/kg、至少0.03mg/kg、至少0.04mg/kg、至少0.05mg/kg、至少0.06mg/kg、至少0.07mg/kg、至少0.08mg/kg、至少0.09mg/kg、至少0.1mg/kg、至少0.2mg/kg、至少0.3mg/kg、至少0.4mg/kg、至少0.5mg/kg、至少0.6mg/kg、至少0.7mg/kg、至少0.8mg/kg、至少0.9mg/kg、至少1mg/kg、至少1.5mg/kg、至少2mg/kg、至少2.5mg/kg、至少3mg/kg、至少3.5mg/kg、至少4mg/kg、至少4.5mg/kg、至少5mg/kg、至少6mg/kg、至少7mg/kg、至少8mg/kg、至少9mg/kg、至少10mg/kg、至少15mg/kg、至少20mg/kg、至少30mg/kg、至少40mg/kg、至少50mg/kg、至少60mg/kg、至少70mg/kg、至少80mg/kg、至少90mg/kg、至少100mg/kg。施用可每小时,每天四次、两次或一次,或每周四次、两次或一次,或每周,或每隔一周,每三周,或每月。
在一个实施方案中,疾病是创伤(包括手术和热)、具有已知再生能力的器官(例如,皮肤、胃粘膜、气道上皮和软骨结构、肝、神经元结构,例如脊髓,骨髓和骨)的传染性、毒性、老化和缺血性损伤。我们已经显示了,通过使用高特异性小分子来抑制GSNOR可治疗、修复和促进哺乳动物组织的再生。举例来说,小分子抑制剂可有效于治疗、并促进因灌注已知引起严重肺损伤的化学剂而造成损伤的哺乳动物肺组织的修复和再生(猪胰弹性蛋白酶)(Blonder等,ATS2011摘要引用)。在这个实施方案中,适量本发明化合物是足以再生组织/器官的量并可不在临床前和/或临床实验的过度试验下确定。
在一个实施方案中,疾病是创伤(包括手术和热)、不认为具有再生能力的器官的传染性、毒性、老化和缺血性损伤。实例包括心脏、肺、肾、中枢神经系统、外周神经系统、外周血管组织、肝、胰、肾上腺、甲状腺、睾丸、卵巢、视网膜、舌、骨、膀胱、食道、喉、胸腺、脾、头的软骨结构和关节的软骨结构。在这个实施方案中,适量的本发明化合物是足以再生组合/器官的量并可不在临床前和/或临床实验的过度试验下确定。
在一个实施方案中,活体外和活体内移植和再生器官和结构,包括干细胞。在这个实施方案中,适量的本发明化合物是足以再生组织/器官的量并可不在临床前和/或临床实验的过度试验下确定。
在一个实施方案中,本发明化合物或其药学上可接受的盐或其前药、立体异构体、代谢物或N-氧化物,可与NO供体组合在一起施用。NO供体捐赠一氧化氮或相关氧化还原物种,更常见地,提供一氧化氮生物活性,该活性是利用一氧化氮识别的活性,例如,血管舒张或受体蛋白的刺激或抑制,受体蛋白例如ras蛋白、肾上腺素能受体、NFκB。NO供体包括S-亚硝基、O-亚硝基、C-亚硝基和N-亚硝基化合物和其硝基衍生物以及金属NO络合物,但不排除其它产生NO生物活性的化合物,可用于本文中化合物在"Methods in NitricOxide Research,"Feelisch等.eds.,71-115页(J.S.,John Wiley&Sons,New York,1996)中描述,其以引用的方式并入本文中。用于本文中的身为C-亚硝基化合物(其中亚硝基连接到叔碳)的NO供体包括美国专利No.6,359,182和WO02/34705中所描述的那些。用于本文中的S-亚硝基化合物(包括S-亚硝基硫醇)实例包括,例如,S-亚硝基谷胱甘肽、S-亚硝基-N-乙酰基青霉胺、S-亚硝基-半胱氨酸和其乙酯、S-亚硝基半胱酰甘氨酸、S-亚硝基-γ-甲基-L-高半胱氨酸、S-亚硝基-L-高半胱氨酸、S-亚硝基-γ-硫代-L-亮氨酸、S-亚硝基-δ-硫代-L-亮氨酸和S-亚硝基白蛋白。本文中所用的其它NO供体实例是硝普钠(nipride)、亚硝酸乙酯、异山梨醇、硝化甘油、SIN1(吗多明(molsidomine))、氟诺明(furoxamine)、N-羟基(N-亚硝胺)和已用NO或疏水性NO供体饱和的全氟碳。
GSNOR抑制剂和氨氯地平(一种已知的NO释放剂)的R(+)对映体的组合(Zhang等,J.Cardiovasc.Pharm.39:208-214(2002))也是本发明的一个实施方案。
本发明也提供了一种治疗受病理性增生细胞折磨的受试者的方法,其中该方法包括对所述受试者施用治疗有效量的GSNOR抑制剂。GSNOR抑制剂是如上定义的化合物,其药学上可接受的盐或其立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物,并与药学上可接受的载体组合。治疗到症状和/或病理减轻结束。
在另一个实施方案中,病理性增生细胞可为病理性增生微生物。所涉及微生物可为GSNOR表达后保护微生物免遭亚硝化应激或感染微生物的宿主细胞表达酶,进而保护微生物免遭亚硝化应激的那些微生物。如本文中所用,术语“病理性增生微生物”意指病理微生物,包括但不限于,病理细菌、病理病毒、病理衣原体(Chlamydia)、病理原生动物、病理立克次体(Rickettsia)、病理真菌和病理支原体。关于可施用微生物的更多细节在美国专利6,057,367的11和12栏中给出。术语“感染病理微生物的宿主细胞”包括感染病理病毒的哺乳动物细胞和含有细胞内微生物或原生动物的哺乳动物细胞,例如,含有结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻疯分枝杆菌(Mycobacterium leper)(麻疯病)或伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)(伤寒症)的巨噬细胞。
在另一个实施方案中,病理性增生细胞可为病理蠕虫。如本文中所用,术语“病理蠕虫”指病理线虫、病理吸虫和病理绦虫。关于可使用蠕虫的更多细节在美国专利6,057,367的12栏中给出。
在另一个实施方案中,病理性增生细胞可为病理性增生哺乳动物细胞。如本文中所用,术语“病理性增生哺乳动物细胞”意指在所述哺乳动物体内大小或数量增长对哺乳动物或其器官产生有害作用的哺乳动物细胞。该术语包括,例如,引起再狭窄的病理性增生或增大细胞、引起良性前列腺肥大的病理性增生或增大细胞、引起心肌肥大的病理性增生细胞和发炎部位的增生细胞,例如关节炎的滑膜细胞或细胞增生疾病相关细胞。
如本文中所用,术语“细胞增生性疾病”指细胞的未调节和/或异常生长会发展癌性或非癌性的非所需病症或疾病的病症,例如,牛皮癣病症。如本文中所用,术语“牛皮癣病症”指涉及角化细胞过度增生、炎性细胞浸润和细胞因子变质的疾病。细胞增生性疾病可为癌前病症或癌症。癌症可为原发癌或转移癌,或两者。
如本文中所用,术语“癌症”包括实体瘤,例如肺癌、乳癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腺癌、鳞状癌、肉瘤、恶性胶质瘤、平滑肌肉瘤、肝瘤、头颈癌、恶性黑色素瘤、非黑素瘤皮肤癌和血液肿瘤和/或恶性肿瘤,例如,白血病、儿童白血病和淋巴瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、淋巴细胞和皮肤来源的淋巴瘤、急性和慢性白血病,例如急性淋巴细胞、急性髓细胞或慢性髓细胞白血病、浆细胞肿瘤、淋巴肿瘤和AIDS相关癌症。
除了牛皮癣病症外,可利用本方明组合物治疗的增生性疾病类型是上皮和皮样囊肿、脂肪瘤、腺瘤、毛细血管和皮肤血管瘤、淋巴管瘤、痣损伤、畸胎瘤、肾瘤、肌纤维瘤病、成骨性肿瘤和其它混合体型块、等。在一个实施方案中,增生性疾病包括发育不良以及类似疾病。
在一个实施方案中,治疗癌症包括肿瘤尺寸减小、肿瘤数目减少、肿瘤生长延缓、远离原发肿瘤的其它组织或器官中转移病灶减少、患者存活率改善或患者生活品质改善或以上至少两种。
在另一个实施方案中,细胞增生性疾病治疗包括细胞增生速率降低,增生细胞比例降低,细胞增生面积或区域尺寸减小,或具有异常外观或形态的细胞的数目或比例降低,或以上至少两种。
在又另一个实施方案中,本发明或其药学上可接受的盐、其立体异构体、其前药、其代谢物或其N-氧化物可与第二种化疗剂组合施用。在另一个实施方案中,第二种化疗剂选自以下组成的组:他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)、来曲唑(letrozole)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、洛伐他汀(lovastatin)、含羞草素(minosine)、吉西他滨(gemcitabine)、araC、5-氟尿嘧啶、甲氨蝶呤(methotrexate)、多西他赛(docetaxel)、戈舍瑞林(goserelin)、新长春碱(vincristin)、长春碱(vinblastin)、诺考达唑(nocodazole)、替尼泊苷(teniposide)、依托泊苷(etoposide)、埃博霉素(epothilone)、诺维本(navelbine)、喜树碱(camptothecin)、daunonibicin,放线菌素(dactinomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、安吖啶(amsacrine)、阿霉素(doxorubicin)、表阿霉素(epirubicin)、依达比星(idarubicin)、imatanib、吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、索拉非尼(sorafenib)、苹果酸舒尼替尼(sunitinib malate)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)和贝伐单抗(bevacizumab)。
在一个实施方案中,本发明化合物或其药学上可接受的盐、其立体异构体、其前药、其代谢物或其N-氧化物可与施以亚硝化或氧化应激的药剂组合施用。与本文中GSNOR抑制剂以组合疗法施用的选择性施以亚硝化应激以抑制病理性增生细胞增生的药剂以及其剂量和施用路径包括并入本文中的美国专利6,057,367中公开的那些。与本文中GSNOR抑制剂以组合疗法施用的施以氧化应激的补充剂(即,增加GSSG(氧化谷胱甘肽)对GSH(谷胱甘肽)的比例或NAD(P)对NAD(P)H的比例或增加硫代巴比妥酸的药剂)包括,例如,L-丁硫氨酸-S-亚砜亚胺(BSO)、谷胱甘肽还原酶抑制剂(例如,BCNU)、线粒体呼吸抑制剂或解偶联剂和增加活性氧种类(ROS)的药物,例如阿霉素(adriamycin),采用标准剂量和标准施用路径。
GSNOR抑制剂也可与磷酸二酯酶抑制剂(例如,咯利普兰(rolipram)、西洛司特(cilomilast)、罗氟司特(roflumilast)、
(sildenifil citrate)、
(他达拉非(tadalafil))、
(维得尼非(vardenifil))等)、β-激动剂、类固醇、抗蕈毒碱或白三烯拮抗剂(LTD-4)一起施用。本领域技术人员可轻易根据将改善的疾病确定治疗有效量。
GSNOR抑制剂可用作改善β-肾上腺素能信号传导的方法。尤其,GSNOR抑制剂单独或与β-激动剂组合可用于治疗或预防心力衰竭或其它血管疾病(例如,高血压和哮喘)。GSNOR抑制剂也可通过加强Gs G-蛋白以使平滑肌松弛(例如,气道和血管),以及通过衰弱Gq G-蛋白,进而阻止平滑肌收缩(例如,气道和血管)来调节G蛋白偶联受体(GPCR)。
用于治疗受NO供体疗法所改善的疾病困扰的受试者的治疗有效量是使所治疗疾病改善或预防该疾病相关风险的GSNOR体内抑制量。例如,对哮喘而言,治疗有效量是支气管扩张有效量;对囊肿性纤维化而言,治疗有效量是气道阻塞改善有效量;对ARDS而言,治疗有效量是血氧不足改善有效量;对于心脏病,治疗有效量是心绞痛缓解或血管生成有效量;对于高血压,治疗有效量是降血压有效量;对于缺血性冠脉疾病,治疗量是血流增加有效量;对于动脉粥样硬化,治疗有效量是逆转内皮机能障碍有效量;对于青光眼,有效量是降低眼压的有效量;对于血管生成表征的疾病,治疗有效量是抑制血管生成的有效量;对于存在血栓形成风险的疾病,治疗有效量是抑制血栓形成的有效量;对于存在再狭窄发生风险的疾病,治疗有效量是抑制再狭窄有效量;对于慢性炎症,治疗有效量是减弱炎症的有效量;对于存在细胞凋亡风险的疾病,治疗有效量是防止细胞凋亡的有效量;对于性无能,治疗有效量是达到或维持勃起的有效量;对于肥胖,治疗有效量是导致饱腹感的有效量;对于中风,治疗有效量是增加血流或TIA保护有效量;对于再灌注损伤,治疗有效量是增强功能的有效量;而对于心脑的预处理,治疗有效量是细胞保护有效量,例如,肌钙蛋白或CPK所测得。
用于治疗受病理性增生细胞折磨的受试者的治疗有效量意指GSNOR体内抑制量,其是抗增生有效量。如本文中所用的抗增生有效量意指使增生率降低至少约20%,至少约10%,至少约5%或至少约1%的量。
I.在设备中的用途
本发明化合物或其药学上可接受的盐,或其立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物,可在该化合物存在有利的情况中用于不同设备。该设备可为任何装置或容器,例如,可移植装置,其中本发明化合物可在植入患者体内前涂覆手术用网状物或心血管支架。本发明化合物也可用于多种用于体外测定或培养细胞的设备。
本发明化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体、前药、代谢物或N-氧化物也可用作开发、分离或纯化本发明化合物的结合配体的药剂,例如抗体、天然配体等。本领域技术人员可轻易确定本发明化合物的相关用途。
实施例
给出以下实施例以阐述本发明。但是,应了解,本发明不限于这些实施例中所述的特定条件或细节。在该说明书中,对公开文献(包括美国专利)的任意和所有参照是以引用的方式特定地并入。
实施例1-56列出了用作本发明GSNOR抑制剂的新颖式I喹啉类似物。以下实例性方案阐述了一些制造式I喹啉类似物的一般方法。实施例1-56中阐述了制备每一种化合物的合成方法。实施例1-56中也包括每一种化合物的支持性质谱数据和/或质子NMR数据。
实施例57中详述了相应中间体的合成细节。
以下方案1-5阐述了制备喹啉类似物的一般方法。
方案1
关于一般方案1的详细实施例,参见实施例1的化合物1.
方案2
关于方案2,A条件的详细实施例,参见实施例2的化合物2。
关于方案2,B条件的详细实施例,参见实施例8的化合物8。
方案3
关于方案3的详细实施例,参见实施例9的化合物9。
方案4
关于方案4,路径A的详细实施例,参见实施例11的化合物11。
关于方案4,路径B的详细实施例,参见实施例12的化合物12。
方案5
关于方案5,化合物A的详细实施例,参见实施例33的化合物33。
关于方案5,化合物B的详细实施例,参见实施例24的化合物24。
关于方案5,化合物C的详细实施例,参见实施例23的化合物23。
实施例1:化合物1:4-(6-羟基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案1
步骤1:4-(6-甲氧基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:
在氩气下,将2mL DMF加入到2-氯-6-甲氧基-3-甲基喹啉(100mg,0.482mmol)、4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(184mg,1.02mmol)、TEA(0.35mL,2.41mmol)和PdCl2(dppf)(35mg,0.048mmol)的混合物中。然后,在微波反应器中,在120℃下,将该混合物搅拌2.5h。然后,利用水(25mL)稀释粗制混合物并利用EtOAc(25mL x2)萃取。利用盐水(50mL)洗涤有机物,利用硫酸钠干燥,并进行浓缩以得到250mg粗产物。柱色谱纯化粗产物,利用己烷中5%EtOAc至己烷中80%EtOAc的梯度,得到37mg(25%收率)4-(6-甲氧基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯。
步骤2:4-(6-羟基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸的合成
将4-(6-甲氧基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯(37mg,0.121mmol)溶于2mL DCM中并添加BBr3(150μL)。使该混合物在室温下搅拌1天,然后添加10mL H2O。使溶液剧烈搅拌1h,然后过滤出固体。利用H2O洗涤固体,并真空干燥,得到9.5mg(28%收率)化合物1。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.37(s,1H),8.10(d,2H),7.94(d,1H),7.78(d,2H),7.42-7.39(dd,1H),7.24-7.23(d,1H),2.43(s,3H).MS(ESI):m/z280.10[M+H]+。
实施例2:化合物2:2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)-3-甲基喹啉-6-醇
按照方案2:A条件
步骤1:2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)-6-甲氧基-3-甲基喹啉的合成
在氩气下,将7mL DEGME和3mL H2O加入到2-氯-6-甲氧基-3-甲基喹啉(100mg,0.482mmol)、4-(lH-四唑-5-基)苯基硼酸(91.2mg,0.482mmol)、K2CO3(199mg,1.45mmol)和PdCl2(dppf)(17.6mg,0.024mmol)的混合物中。在微波反应器中,在150℃下,将该混合物搅拌1.5小时。利用1N NaOH(10mL)稀释粗制混合物,并利用浓HCl缓慢地酸化至pH4.0。过滤固体,得到128mg(84%收率)所需产物。
步骤2:(2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)-3-甲基喹啉-6-醇)的合成
将2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)-6-甲氧基-3-甲基喹啉(128mg,0.40mmol)溶于5mL NMP中并将Na2S(47mg,0.60mmol)加入其中。然后,在微波反应器中,在140℃下,将该混合物搅拌4小时。真空浓缩后,将粗产物溶于5mL1N NaOH中,并利用1N HC1缓慢地酸化至pH4。过滤固体,并真空干燥,得到46.2mg(38%收率)化合物2。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.10-10.00(bs,1H),8.18-8.15(d,2H),8.08(s,1H),7.87-7.84(m,3H),7.30-7.26(d,1H),7.13(s,1H),2.45(s,3H).MS(ESI):m/z304.11[M+H]+。
实施例3:化合物3:4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案2,A条件:起始材料:2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1)(100mg,0.52mmol)和(4-(甲氧基羰基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ13.06-12.90(bs,1H),10.14(s,1H),8.36-8.33(d,2H),8.30-8.27(d,1H),8.11-8.06(m,3H),7.97-7.94(d,1H),7.38-7.34(dd,1H),7.20(s,1H).MS(ESI):m/z266.08[M+H]+。
实施例4:化合物4:2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇
按照方案2,A条件:起始材料:2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1)和(4-(lH-四唑-5-基)苯基)硼酸。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.15(s,1H),8.45(d,2H),8.31-8.28(d,1H),8.22-8.12(m,3H),7.98-7.95(d,1H),7.39-7.35(dd,1H),7.21(s,1H).MS(ESI):m/z290.08[M+H]+。
实施例5:化合物5:1-(6-羟基喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸
步骤1:4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯的合成:在微波反应器的密封管中,在180℃下,利用含2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1)(90mg)的MeCN(0.8mL)和TEA(100mg)溶液处理哌啶-4-羧酸乙酯(100mg)6小时。利用EtOAc水溶液处理和柱纯化后,利用EtOAc/己烷洗脱,得到呈固体形式的4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯(90mg)。
步骤2:化合物5的合成:在100℃下,利用含乙硫醇钠(150mg)的NMP(2mL)溶液处理4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯(90mg)48h。利用Dowex50W X8阳离子交换柱纯化所需产物(50mg),利用水和2N NH4OH溶液洗脱。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ7.82(1H,d,J=9Hz),7.42(1H,d,J=9hz),7.13(1H,d,J=9Hz),7.08(1H,dd,J=3,9Hz),6.93(1H,d,J=3Hz),4.2-4.4(2H,m),2.88-2.97(2H,m),2.15-2.21(1H,m),1.80-1.86(2H,m),1.45-1.60(1H,m)ppm.MS(ESI):m/z273.0[M+l]+。
实施例6:化合物6:(1r,4r)-4-(6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸
步骤1:(1r,4r)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸甲酯和(1s,4s)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸甲酯的合成:将4-(6-羟基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸甲酯(261mg)(化合物16)溶于EtOAc(10mL)中并与10%Pd/C(38.5mg)混合。立刻对系统抽真空并注入氢气。将该步骤重复三次。使反应混合物在氢气下搅拌3小时。过滤移除催化剂并在减压下浓缩后,通过快速硅胶色谱分离所得混合物,利用EtOAc/己烷洗脱,分别得到(1s,4s)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸甲酯(153mg)和(1r,4r)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸甲酯(72mg)。
步骤2:化合物6的合成:按照实施例5中步骤2所述的步骤,从(1r,4r)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸甲酯(72mg,以上产物)开始,得到所需化合物6。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ8.03(1H,d,J=9Hz),7.75(1H,d,J=9hz),7.33(1H,d,J=9Hz),7.24(1H,dd,J=3,9Hz),7.08(1H,d,J=3Hz),3.30(1H,m),2.76(1H,m),2.25-1.90(4H,m)1.75-1.50(4H,m)ppm.MS(ESI):m/z272.0[M+l]+。
实施例7:化合物7:(1s,4s)-4-(6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸
按照实施例5的步骤2所述的步骤,从(1s,4s)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸甲酯(72mg,参见实施例6步骤1的合成)开始,得到所需化合物7。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ7.97(1H,d,J=9Hz),7.74(1H,d,J=9hz),7.26(1H,dd,J=3,9Hz),7.24(1H,d,J=9Hz),7.08(1H,d,J=3Hz)、3.34(1H,m),2.75(1H,m),2.25-1.50(8H,m)ppm.MS(ESI):m/z272.0[M+l]+。
实施例8:化合物8:3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案2,B条件:
步骤1:3-氯-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的合成
在N2氛围下,使2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1)(200mg,1.04mmol)、4-羧基-2-氯苯基硼酸(247mg,1.24mmol)和K2CO3(369mg,2.70mmol)在DEGME/H2O(7.0mL/2.0mL)中的混合物脱气三次。然后,添加PdCl2(dppf)(75mg,0.104mmol),在N2氛围下,将该混合物加热至110℃,并加热3小时。利用EtOAc(100mL)稀释反应混合物,并过滤。利用盐水(20mL)洗涤滤液,利用Na2SO4干燥,过滤并浓缩,得到呈黄色固体形式的3-氯-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸(150mg,收率46%),其用于下一个步骤中而无需进一步纯化。
步骤2:化合物8的合成:将AlCl3(320mg,2.40mmol)加入3-氯-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸(150mg,0.479mmol)在无水CH2Cl2(5mL)中的悬浮液中。使反应混合物回流过夜。利用饱和NH4Cl(10mL)猝灭混合物,并利用CH2Cl2/MeOH(v/v=10:l,30mL x3)萃取水层。利用盐水洗涤合并的有机层,利用Na2SO4干燥,过滤,并浓缩得到粗产物,通过制备型HPLC纯化(0.1%TFA作为添加剂),得到3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸(25mg,收率18%)。1H NMR(DMSO,400MHz):δ10.20(brs,1H),8.30(d,J=8.4Hz,1H),8.10-8.00(m,2H),7.95(d,J=9.2Hz,1H),7.80(d,J=8.0Hz,1H),7.72(d,J=8.8Hz,1H),7.38(dd,J=6.4,2.8Hz,1H),7.22(d,J=2.4Hz,1H),MS(ESI):m/z299.9[M+H]+。
实施例9:化合物9:2-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案3:
在N2氛围中,在130℃下,将2-氯喹啉-6-醇(中间体2)(50mg,0.270mmol)、4-硼-2-氯苯甲酸(55mg,0.270mmol)、K2CO3(75mg,0.540mmol)和Pd(dppf)Cl2(25mg,0.0306mmol)在2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(1.5mL)和水(0.4mL)中的混合物搅拌3小时。将所得混合物冷却到室温并过滤。减压下浓缩滤液,利用制备型HPLC(0.1%TFA作为添加剂)纯化残余物,得到呈黄色固体形式的化合物9(33mg,收率40%)。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.39(d,J=8.4Hz,1H),8.29(d,J=1.6Hz,1H),8.16-8.02(m,4H),7.47(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.25(d,J=2.4Hz,1H).MS(ESI):m/z298.0[M-l]-。
实施例10:化合物10:2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案3:起始材料:2-氯喹啉-6-醇(中间体2)和4-硼-2-氟苯甲酸。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.54(d,J=8.4Hz,1H),8.20-8.06(m,3H),8.06-7.96(m,2H),7.55(dd,J=9.2,2.4Hz,1H),7.32(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z283.6[M+l]+。
实施例11:化合物11:2-(4-(2H-四唑-5-基)苯基)-4-氯喹啉-6-醇
步骤1:4-(4-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:按照方案2,步骤1,从4-氰基苯基硼酸和2,4-二氯-6-甲氧基喹啉开始,其中所用溶剂是DMF,所用催化剂是Pd(PPh3)4。将混合物加热到100℃,并加热3小时,冷却,然后倾入冰水中。过滤分离出所得固体,水洗,干燥,然后从甲醇中重结晶以得到所需产物。
步骤2:4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:按照方案1,步骤2的步骤,利用乙酸乙酯/水处理。制备型-TLC纯化得到所需产物。
步骤3:2-(4-(2H-四唑-5-基)苯基)-4-氯喹啉-6-醇的合成:按照方案4,A路径。在室温下,将TMSN3(455mg,4.18mmol)和Bu2SnO(15mg,0.069mmol)加入4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈(65mg,0.23mmol)的甲苯(2mL)溶液中。使混合物加热回流过夜。减压下移除挥发物。利用制备型-HPLC纯化残余物,得到化合物11(10mg,13.5%)。1H NMR(MeOD-d4,500MHz):δ8.34(d,J=8.5Hz,2H),8.21(s,1H),8.19(s,2H),8.07(d,J=9.0Hz,1H),7.51(d,J=2.5Hz,1H),7.47(dd,J=2.5Hz,J=9.5Hz,1H).MS(ESI):m/z324.0[M+l]+。
实施例12:化合物12:3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(2H)-酮
步骤1:4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:按照方案3,从2-氯喹啉-6-醇(中间体2)和4-氰基苯基硼酸开始,使用l,4-二噁烷:H2O溶液。在微波反应器中,在100℃下,使反应进行1小时。进行乙酸乙酯处理,然后柱色谱(己烷中5%至50%EtOAc梯度)。
步骤2:N-羟基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲脒的合成。参见方案4,路径B。将4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈(900mg,3.68mmol)溶于25mLEtOH中,将NH2OH·HCl(500mg,7.36mmol)和TEA(1.5mL)加入其中。使混合物在80℃下搅拌2小时,然后真空浓缩。然后,使粗制固体悬浮于25mL H2O中并搅拌1小时。过滤并干燥固体,得到所需产物(800mg,78%收率)。
步骤3:(3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(2H)-酮)的合成:将N-羟基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲脒(800mg,2.86mmol)溶于25mL THF和CDI(557mg,3.44mmol)中,并添加TEA(0.2mL)。将混合物在65℃下搅拌2小时,然后真空浓缩。将粗制物溶于10mL1NNaOH中,并利用硅藻土过滤。然后,利用1N HC1使混合物酸化到pH4.5,过滤并干燥固体。在50℃下,使固体在10mL EtOAc中浆化过夜,然后过滤得到化合物12(315mg,36%收率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.19(s,1H),8.42(d,2H),8.28(d,1H),8.14-8.11(d,1H),8.00-7.94(m,3H),7.39-7.35(dd,1H),7.21(s,1H).MS(ESI):m/z306.44[M+H]+。
实施例13:化合物13:3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案3:起始材料:2-氯喹啉-6-醇和4-硼-3-氟苯甲酸。1HNMR(CD3OD,400MHz):δ8.31(d,J=8.4Hz,1H),7.94-7.86(m,3H),7.81-7.74(m,2H),7.35(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.15(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z283.6[M+H]+。
实施例14:化合物14:4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸
按照方案3:起始材料:2-氯喹啉-6-醇和4-硼-3-甲氧基苯甲酸。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.81(d,J=8.4Hz,1H),8.14(d,J=9.2Hz,1H),8.10(d,J=8.4Hz,1H),7.89(dd,J=6.8,1.6Hz,2H),7.85(d,J=8.4Hz,1H),7.69(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.48(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z295.7[M+H]+。
实施例15:化合物15:5-(6-羟基喹啉-2-基)噻吩-2-羧酸
按照方案3:起始材料:2-氯喹啉-6-醇和5-硼噻吩-2-羧酸。1HNMR(CD3OD,400MHz):δ8.25(d,J=8.8Hz,1H),7.97(dd,J=9.2,3.2Hz,2H),7.88-7.82(m,2H),7.41(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.19(d,J=2.4Hz,1H).MS(ESI):m/z271.6[M+H]+。
实施例16:化合物16:4-(6-羟基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸
步骤1:4-(6-羟基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸甲酯的合成:按照方案3:起始物:2-氯喹啉-6-醇和4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基)环己-3-烯羧酸甲酯。
步骤2:4-(6-羟基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸的合成:利用LiOH的碱性水解条件得到最终所需产物。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ12.24(1H,s),9.92(1H,s),8.04(1H,d,J=9Hz),7.75(1H,d,J=9hz),7.66(1H,d,J=9Hz),7.24(1H,dd,J=3,9Hz),7.08(1H,d,J=3Hz),6.74(1H,s),3.30(1H,m),2.84(1H,m),2.50(4H,m),2.08(1H,m),1.71(1H,m)ppm.MS(ESI):m/z270.0[M+l]+。
实施例17:化合物17:4-(3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(4-氯-3-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:按照方案3,其中起始物是2,4-二氯-3-氟-6-甲氧基喹啉(中间体3)和4-硼苯甲酸,其中,利用硅胶柱(PE/EtOAc=l/1)纯化粗产物,得到化合物4-(4-氯-3-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸和4-(3-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的混合物,可用于下一个步骤而无需进一步纯化。
步骤2:4-(3-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:将Pd/C(10%Pd,100mg)加入来自步骤1的混合物在无水MeOH(5mL)中的溶液中。在H2氛围中,在25℃下,使混合物搅拌1小时。过滤出固体,浓缩滤液得到产物(60mg,两步收率66%)。
步骤3:4-(3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:按照方案2,步骤2,B条件。1H NMR(DMSO,400MHz):δ13.35(brs,1H),10.40(brs,1H),8.25(d,J=12.8Hz,1H),8.27(s,4H),8.01(d,J=9.2Hz,1H),7.40(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.25(d,J=2.8Hz,1H)。
实施例18:化合物18:4-(4-氯-3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(4-氯-3-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:合成如实施例17中步骤1所述。
步骤2:4-(4-氯-3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:按照方案2,步骤2,B条件。1H NMR(DMSO,400MHz):δ13.25(brs,1H),10.75(brs,1H),8.10(s,4H),8.05(d,J=9.2Hz,1H),7.41(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.35(d,J=2.4Hz,1H)。
实施例19:化合物19:4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(3-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:按照方案3,其中起始物是2,3-二氯-6-甲氧基喹啉(中间体4)和4-硼苯甲酸。
步骤2:4-(4-氯-3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:按照方案2,步骤2,B条件。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.35(s,1H),8.17(d,J=8.0Hz,2H),7.95(d,J=9.2Hz,1H),7.80(d,J=8.0Hz,2H),7.40(dd,J=9.2,2.4Hz,1H),7.15(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z299.8[M+H]+。
实施例20:化合物20:3-(2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
步骤1:2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:按照方案3,从2-氯喹啉-6-醇(中间体2)和4-氰基-3-氟苯基硼酸开始,其中利用硅胶柱色谱纯化粗产物。
步骤2和3:3-(2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮的合成。按照方案4,途径B,步骤1:真空移除溶剂后,处理粗产物2-氟-N-羟基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲脒,而无需纯化。按照方案4,路径B,步骤2:硅胶柱纯化,利用10%MeOH的DCM洗脱,得到所需产物。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ10.22(1H,s),8.27-8.33(2H,m),8.16(1H,d,J=9Hz),7.91-7.99(2H,m),7.66(1H,d,J=9Hz),7.39(1H,dd,J=3,9Hz),7.21(1H,d,J=3Hz)ppm.MS(ESI):m/z324.0[M+l]+。
实施例21:化合物21:3-(3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮
按照实施例20中针对化合物20所述的步骤,从2-氯喹啉-6-醇(中间体2)和4-氰基-2-氟苯基硼酸开始。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ10.22(1H,s),8.27-8.33(2H,m),7.97(1H,d,J=9Hz),7.77-7.82(2H,m),7.39(1H,dd,J=3,9Hz),7.21(1H,d,J=3Hz)ppm.MS(ESI):m/z324.0[M+l]+。
实施例22:化合物22:4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:按照方案1的步骤2,从4-(4-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲腈开始(合成参见实施例11的步骤1)。
步骤2:4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:使4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈(40mg,0.14mmol)、浓HC1(1mL)和二噁烷(1mL)的溶液在90℃下加热过夜。利用乙酸乙酯萃取混合物。浓缩有机层,利用制备型HPLC纯化,得到化合物22(10mg,收率:23%)。1HNMR(MeOD-d4,500MHz):8.16(d,J=8.0Hz,2H),8.10(d,J=8.5Hz,2H),8.07(s,1H),7.96(d,J=9.0Hz,1H),7.41(d,J=2.5Hz,1H),7.35(dd,J=3.0Hz,J=9.0Hz,1H).MS(ESI):m/z300[M+l]+。
实施例23:化合物23:2-(2-氯-4-(2H-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇
方案5,化合物C的实施例步骤。
步骤1:3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酰胺的合成:使3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸(化合物8,实施例8)(400mg,1.33mmol)和SOCl2(10mL)的混合物回流1小时,然后减压下浓缩,得到呈灰白色固体形式的粗制产物(400mg)。将NH4OH(10mL)加入该固体中,使该反应混合物在30℃下搅拌1小时。利用HCl水溶液(2M)酸化所得混合物,直到pH=6,利用EtOAc(50mL x3)萃取,利用Na2SO4干燥并浓度,得到呈固体形式的粗产物(360mg)。
步骤2:3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:在30℃下,使粗制3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酰胺(360mg)、TFAA(505mg,2.40mmol)和Et3N(364mg,3.62mmol)在DCM(20mL)中的混合物搅拌过夜。使所得混合物悬浮于水(50mL)中,并利用EtOAc(50mL x3)萃取。利用Na2SO4干燥合并的有机层并减压下浓缩。利用硅胶柱色谱纯化残余物(PE/EtOAc=10/1),得到呈固体形式的产物(250mg,3步收率67%)。
步骤3:2-(2-氯-4-(2H-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇的合成:使3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈(230mg,0.819mmol)、NaN3(55mg,0.820mmol)和LiCl(70mg,1.64mmol)在二乙二醇单甲醚(5mL)中的混合物回流4小时。使所得混合物冷却,利用硅胶垫过滤并通过制备型-HPLC(0.1%TFA作为添加剂)进行纯化,得到化合物23(32mg,收率12%)。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.52(d,J=8.4Hz,1H),8.34(s,1H),8.21(d,J=8.0Hz,1H),8.04(d,J=9.2Hz,1H),7.92-7.82(m,2H),7.54(dd,J=9.2,2.0Hz,1H),7.34(d,J=2.0Hz,1H).MS(ESI):m/z323.6[M+H]+。
实施例24:化合物24:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噁二唑-2(3H)-酮
方案5,化合物B的实施例步骤。
步骤1:2-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酰基)肼羧酸叔丁酯的合成:使4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸(化合物3,实施例3)(200mg,0.754mmol)、EDCI(145mg,0.754mmol)和BocNHNH2(100mg,0.754mmol)在DCM(10mL)和DMF(10mL)中的混合物在25℃下搅拌过夜,然后水/EtOAc处理。利用硅胶柱色谱纯化粗产物(PE/EtOAc=1/1),得到呈黄色固体形式的产物(200mg,收率70%)。
步骤2:4-(6-羟基喹啉-2-基)苯并酰肼的合成:使2-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酰基)肼羧酸叔丁酯(240mg,0.633mmol)和HC1/MeOH(20mL,4M)的混合物在25℃下搅拌过夜。减压下浓缩所得混合物至干,得到产物(120mg,收率68%)。
步骤3:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噁二唑-2(3H)-酮的合成:使4-(6-羟基喹啉-2-基)苯并酰肼(90mg,0.322mmol)和CDI(454mg,3.22mmol)在DCM(20mL)中的混合物回流过夜。使所得混合物冷却到室温,然后进行水/EtOAc处理。利用制备型-HPLC纯化粗产物(0.1%TFA作为添加剂),得到化合物24(18mg,收率11%)。1HNMR(CD3OD,400MHz):δ8.64-8.48(m,1H),8.38-7.96(m,6H),7.66-7.24(m,2H).MS(ESI):m/z305.7[M+H]+。
实施例25:化合物25:3-(二甲氨基)-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:3-氨基-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:按照方案2,步骤1,条件B,从2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸和2-氯-6-甲氧基喹啉开始,利用硅胶柱色谱进行纯化(PE/EtOAc=8/1),得到产物。
步骤2:3-(二甲氨基)-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:在0℃下,依序将水性HCHO(37%水溶液,0.4mL)、NaBH3CN(327mg,5.19mmol)和ZnCl2(348mg,2.60mmol)加入上述化合物(400mg,1.30mmol)的MeOH/CH2Cl2(10mL/20mL)溶液中。使混合物在30℃下搅拌6小时。利用冰水猝灭混合物,利用CH2Cl2(30mL x3)萃取水层,利用盐水(30mL)洗涤合并的有机层,利用无水Na2SO4干燥并真空浓缩,得到产物(400mg,收率92%)。
步骤3:3-(二甲氨基)-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:按照方案2,步骤2,条件B,其中利用硅胶柱色谱纯化粗产物(PE/EtOAc=5/1),得到所需产物。
步骤4:3-(二甲氨基)-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:将水性LiOH(1M,4mL)加入上述化合物(290mg,0.901mmol)在THF/MeOH(8mL/4mL)中的溶液中。使混合物在30℃下搅拌3小时。利用H2O(10mL)稀释混合物,利用2M HCl将水层中和至pH7。水/CH2Cl2处理后,进行硅胶柱色谱(CH2Cl2/MeOH=10/1),得到化合物25(80mg,收率29%)。1H NMR(MeOD-d4,400MHz):δ8.15(d,J=8.8Hz,1H),7.95(d,J=9.2Hz,1H),7.87-7.81(m,2H),7.76(d,J=8.0Hz,1H),7.60(d,J=8.0Hz,1H),7.38(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.20(d,J=2.4Hz,1H),2.65(s,6H).MS(ESI):m/z308.9[M+H]+。
实施例26:化合物26:4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(4-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:使4-(4-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲腈(参见实施例11,步骤1)(1g,3.4mmol)、CsF(5.2g,34mmol)和n-Bu4NBr(109mg,0.34mmol)在DMSO(10mL)中的混合物加热到150℃,并加热2小时。水/EtOAC处理后,柱色谱纯化(PE/EA=10/1),得到所需产物(300mg,31.7%)。
步骤2:4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲腈的合成:按照方案1的步骤2,其中水/EtOAc处理后,柱色谱(PE:EA=4:1),得到所需产物。
步骤3:4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:使以上化合物(100mg,0.38mmol)和NaOH(152mg,3.8mmol)在l,4-二噁烷/H2O(1mL/1mL)中的混合物加热至回流并过夜。减压下移除挥发物。利用制备型-HPLC并随后利用制备型-TLC(EtOAc)纯化残余物,得到化合物26(10mg,9.3%)。1H NMR(MeOD-d4,500MHz):8.22-8.17(m,4H),8.04(d,J=9.5Hz,1H),7.79(d,J=12.0Hz,1H),7.43(dd,J=2.5Hz,J=9.0Hz,1H),7.31(d,J=2.0Hz,1H).MS(ESI):m/z284.0[M+l]+。
实施例27:化合物27:4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲基苯甲酸
按照方案3:起始物:2-氯喹啉-6-醇和3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸甲酯。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.45(brs,1H),8.61-8.46(m,1H),8.03(d,J=8.8Hz,1H),7.96(s,1H),7.92(d,J=8.0Hz,1H),7.78(d,J=8.8Hz,1H),7.66(d,J=8.0Hz,1H),7.50(d,J=8.0Hz,1H),7.35(s,1H),2.42(s,3H).MS(ESI):m/z279.9[M+H]+。
实施例28:化合物28:4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)-3-氟苯甲酸
步骤1:4-(3-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)-3-氟苯甲酸的合成:方案3:从2,3-二氯-6-甲氧基喹啉(中间体4)和4-硼-3-氟苯甲酸开始。水/EtOAc处理后,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=1/1),得到所需产物。
步骤2:4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)-3-氟苯甲酸的合成:方案1,步骤2:其中使反应回流18小时,然后利用含有10%MeOH的水/EtOAc处理。制备型-HPLC纯化后得到化合物28。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ13.45(brs,1H),10.39(brs,1H),8.52(s,1H),7.94-7.88(m,2H),7.80(d,J=10.4Hz,1H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.38(dd,J=6.8,2.4Hz,1H),7.21(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z317.8[M+H]+。
实施例29:化合物29:3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-5(2H)-酮
步骤1:N-羟基-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲脒的合成:方案4,路径B,步骤1:使4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲腈(通过方案3制备)(780mg,3.00mmol)悬浮于甲醇(10mL)中,添加羟胺盐酸盐(639mg,10.7mmol)、K2CO3(414mg,3.00mmol)。使反应混合物回流12小时。加水(15mL),过滤收集沉淀的固体,利用乙醇(5mL)洗涤,高真空下干燥得到产物(600mg)。
步骤2:3-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-5(2H)-酮的合成:方案4,路径B,步骤2:将TCDI(410mg,2.30mmol)加入以上产物(450mg)的THF(10mL)溶液中,使混合物在30℃下搅拌3小时。反应完全后,移除溶剂得到产物(300mg)。
步骤3:3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-5(2H)-酮的合成:方案1,步骤2:使反应回流过夜,然后进行水/EtOAc处理,制备型-HPLC纯化(0.1%TFA作为添加剂)得到化合物29。1H NMR(DMSO-d6,300MHz):δ13.50(brs,1H),8.40-8.26(m,3H),8.18-8.04(m,3H),7.95(d,J=9.0Hz,1H),7.36(dd,J=9.0,2.4Hz,1H),7.20(d,J=2.7Hz,1H).MS(ESI):m/z322.0[M+H]+。
实施例30:化合物30:4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸
按照方案3:从2-氯喹啉-6-醇和4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(中间体5)开始。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.21(brs,1H),8.35-8.25(m,3H),7.89(d,J=9.2Hz,1H),7.79(d,J=8.0Hz,1H),7.57(d,J=8.4Hz,1H),7.38(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.23(d,J=2.4Hz,1H).MS(ESI):m/z333.7[M+H]+。
实施例31:化合物31:4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案3:从4-羧基苯基硼酸和2-氯-3-(三氟甲基)喹啉-6-醇(中间体6)开始。1H NMR(DMSO,400MHz):δ13.10(brs,1H),10.45(brs,1H),8.84(s,1H),8.02(d,J=8.4Hz,2H),7.97(d,J=8.8Hz,1H),7.60(d,J=8.0Hz,2H),7.50(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.40(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z333.9[M+H]+。
实施例32:化合物32:2-(4-羧基苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物
步骤1:4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:方案1,步骤1,从4-(甲氧基羰基)苯基硼酸和2-氯喹啉-6-醇开始,利用Na2CO3来替代TEA。
步骤2:6-羟基-2-(4-(甲氧基羰基)苯基)喹啉1-氧化物的合成:将mCPBA(372mg,2.16mmol)加入以上化合物(200mg,0.72mmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液中。在室温下,将混合物搅拌三天。减压下移除挥发物。利用饱和Na2CO3溶液(10mL)和EtOAc(20mL)分配残余物。利用盐水(10mL)洗涤有机相,利用Na2SO4干燥,浓缩和柱色谱纯化,得到产物(40mg,18.9%)。
步骤3:2-(4-羧基苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物的合成:使以上化合物(40mg,0.14mmol)和NaOH(16mg,0.41mmol)在1,4-二噁烷/水(1.5mL/0.5mL)中的溶液在80℃下加热2小时。真空移除挥发物。利用水(8mL)和EtOAc(10mL)分配残余物。分离水相,利用1N HC1酸化到pH=5。过滤所得沉淀,利用水和EtOH洗涤,真空干燥得到化合物32(10mg,25.6%)。1H NMR(MeOD-d4,500MHz):8.61(d,J=9.5Hz,1H),8.20(d,J=8.0Hz,2H),8.04-7.99(m,3H),7.65(d,J=8.5Hz,1H),7.48(dd,J=2.0Hz,J=9.0Hz,1H),7.30(d,J=2.0Hz,1H);MS(ESI):m/z282.0[M+l]+。
实施例33:化合物33:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噻二唑-2(3H)-酮
方案5,化合物A的实施例步骤:
步骤1:2-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酰基)肼羧酸叔丁酯的合成:方案5,路径A的步骤1(参见实施例24,步骤1),从4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸(按照方案3制备)开始。
步骤2:2-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基碳硫基)肼羧酸叔丁酯的合成:使上述化合物(2.30g,5.85mmol)和劳氏试剂(2.30g,5.69mmol)在无水甲苯(150mL)中的混合物回流过夜。真空浓缩所得混合物。利用MeOH洗涤残余物,分离固体。真空浓缩滤液,硅胶柱纯化残余物(PE/EtOAc=3/1),得到粗制2-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基碳硫基)肼羧酸叔丁酯(2.00g)。
步骤3:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噻二唑-2(3H)-酮的合成:使2-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基碳硫基)肼羧酸叔丁酯(500mg,1.49mmol)和AlCl3(600mg,4.50mmol)在无水DCM(50mL)中的混合物回流过夜。使反应冷却,然后水/EtOAc处理。利用制备型-HPLC纯化残余物(0.1%TFA作为添加剂),得到呈固体形式的化合物33(35mg,收率7%)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ13.22(brs,1H),10.22(brs,1H),8.40-8.28(m,3H),8.11(d,J=8.8Hz,1H),7.98(d,J=8.8Hz,1H),7.86(d,J=8.4Hz,2H),7.38(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.22(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z321.7[M+H]+。
实施例34:化合物34:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-3(2H)-酮
步骤1:4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酰胺的合成:将NaOH水溶液(1M,10mL)加入到4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲腈(5.00g,15.4mmol,按照方案2,步骤1制备,从中间体1和4-氰基苯基硼酸开始)的DMSO(40mL)悬浮液中。将混合物冷却到0℃。逐滴添加H2O2(30%,30mL)水溶液。添加后,将混合物在0℃下搅拌30分钟。利用饱和Na2SO3(100mL)使混合物猝灭,过滤。利用H2O(50mL)和MeOH(50mL)洗涤沉淀。高真空干燥滤饼,得到呈固体形式的所需产物(5.50g,收率:99+%)。
步骤2:5-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-3-醇的合成:在30℃下,将草酰氯(1.10g,8.99mmol)迅速地加入到4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酰胺(2.00g,7.19mmol)的DCE(20mL)悬浮液中。将混合物加热到70℃,加热16小时。真空移除溶剂,得到黄色固体(2.00g),可直接使用而无需进一步纯化。将此物质(2.00g)的TMSN3(30mL)悬浮液加热到90℃,加热两天。真空移除过量TMSN3,利用EtOH(200mL)稀释残余物。过滤出混合物,浓缩滤液得到呈固体形式的5-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-3-醇(700mg,两步收率:30%)。
步骤3:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-3-醇的合成:按照方案2,步骤2,条件B,得到呈固体形式的化合物34(60mg,收率:18%)。1H NMR(DMSO400MHz):δ12.90(brs,1H),10.15(brs,1H),8.45(d,J=8.4Hz,2H),8.30(d,J=8.4Hz,1H),8.15-8.10(m,3H),7.92(d,J=9.2Hz,1H),7.5(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.20(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z305.9[M+H]+。
实施例35:化合物35:(1r,4r)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸
步骤1:4-(3-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸乙酯的合成:按照方案2,步骤1(参见实施例8,步骤1),从4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基)环己-3-烯羧酸乙酯和2,3-二氯-6-甲氧基喹啉(中间体4)开始。
步骤2:4-(3-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯的合成:将Rh(PPh3)3Cl(90.0mg0.0900mmol)加入到4-(3-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸乙酯(900mg,2.60mmol)的EtOH(40mL)溶液中。在H2下(15psi),使混合物在30℃下搅拌4天。过滤混合物,浓缩滤液得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=10/1)得到所需产物(234mg,收率26%)。
步骤3:(1r,4r)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸的合成:在0℃下,将BBr3(0.3mL,2.9mmol)逐滴加入4-(3-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯(200mg,0.580mmol)在无水CH2Cl2(10mL)中的混合物中。使混合物在0℃下搅拌2小时。加水(10mL),利用EtOAc(30mL x3)萃取混合物。利用盐水(20mL x2)洗涤合并的有机层,利用Na2SO4干燥,过滤,浓缩得到粗产物,利用制备型-HPLC纯化(0.1%TFA作为添加剂)得到呈固体形式的(1r,4r)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸(化合物35,65mg,收率37%),和呈固体形式的(1s,4s)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸(化合物36,26mg,收率15%)。NOE确定结构。化合物35数据:1H NMR(DMSO400MHz):δ10.08(brs,1H),8.27(s,1H),7.79(d,J=8.8Hz,1H),7.26(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.08(d,J=2.8Hz,1H),3.18(tt,Jaa=12.0Hz,Jea=3.2Hz,1H),2.28(tt,Jaa=12.0Hz,Jea=3.2Hz,1H),2.03(d,J=10.4Hz,2H),1.91(d,J=10.8Hz,2H),1.72-1.60(m,2H),1.55-1.40(m,2H).MS(ESI):m/z306.0[M+H]+。
实施例36:化合物36:(1s,4s)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸
合成参见实施例35。1H NMR(DMSO400MHz):δ10.11(brs,1H),8.28(s,1H),7.82(d,J=9.2Hz,1H),7.27(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.09(d,J=2.8Hz,1H),3.32-3.19(m,1H),2.70-2.60(m,1H),2.25-2.14(m,2H),1.85-1.70(m,4H),1.70-1.58(m,2H).MS(ESI):m/z306.0[M+H]+。
实施例37:化合物37:3-氯-4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案2,条件B,从2-氯-4-氟-6-甲氧基喹啉(中间体7)和4-羧基-2-氯苯基硼酸开始。1H NMR(MeOD400MHz):δ8.20(d,J=1.2Hz,1H),8.10(dd,J=8.0,1.6Hz,1H),8.02(d,J=9.2,1.2Hz,1H),7.75(d,J=8.0Hz,1H),7.52-7.45(m,2H),7.47(d,J=2.4Hz,1H).MS(ESI):m/z317.9[M+H]+。
实施例38:化合物38:2-(5-(2H-四唑-5-基)噻吩-2-基)喹啉-6-醇
步骤1和2:5-(6-羟基喹啉-2-基)噻吩-2-甲腈的合成:按照方案1所示的两步式合成,从2-氯-6-甲氧基喹啉和5-氰基噻吩-2-基硼酸开始,存在小变化:步骤1中所使用的碱是碳酸钠,而溶剂是DME(二甲氧基乙烷)/水。在步骤2中,淬灭/冰水后,进行标准的乙酸乙酯萃取,然后利用制备型-TLC进行纯化(PE:EA=1:1)。
步骤3:2-(5-(2H-四唑-5-基)噻吩-2-基)喹啉-6-醇的合成:按照方案4,路径A。1H-NMR(DMSO-d6500MHz):10.15(s,1H),8.23(d,J=9.0Hz,1H),8.05(d,J=8.5Hz,1H),7.99(d,J=4.0Hz,1H),7.86(d,J=9.0Hz,1H),7.78(d,J=3.5Hz,1H),7.34(dd,J=2.5,9.0Hz,1H),7.17(d,J=2.0Hz,1H).MS(ESI):m/z296.0[M+1]+。
实施例39:化合物39:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-3(2H)-酮
步骤1:4-(6-甲氧基喹啉-2-基)硫代苯甲酰胺的合成:将劳氏试剂(2.60g,6.44mmol)加入4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酰胺(合成参见实施例34步骤1,3.00g,10.8mmol)的无水甲苯(50mL)悬浮液中。使混合物回流3小时。利用MeOH(50mL)稀释混合物,并过滤。减压下浓缩滤液,得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=1/1)得到呈固体形式的产物(1.30g,收率41%)。
步骤2和3:5-(4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-3(2H)-酮的合成:在0℃下,将草酰氯(0.3mL,3.9mmol)逐滴加入4-(6-甲氧基喹啉-2-基)硫代苯甲酰胺(500mg,1.07mmol)的DCE(10mL)溶液中。将混合物加热到90℃,并加热2小时。逐滴添加TMSN3(0.8mL,5.7mmol)。使混合物在100℃下搅拌2小时。将水(10mL)加入混合物中。过滤混合物,利用IPA(20mL)洗涤滤饼得到产物(280mg,收率49%)。
步骤4:5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-3(2H)-酮的合成:脱甲基化按照方案2,步骤2,B条件。1H NMR(DMSO400MHz):δ12.76(brs,1H),10.16(brs,1H),8.41(d,J=8.4Hz,2H),8.29(d,J=8.8Hz,1H),8.15-8.02(m,3H),7.95(d,J=9.2Hz,1H),7.36(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.19(d,J=2.4Hz,1H),MS(ESI):m/z321.9[M+H]+。
实施例40:化合物40:3-氟-4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
按照方案2,条件B制备化合物,从2-氯-4-氟-6-甲氧基喹啉(中间体7)和4-羧基-2-氟苯基硼酸开始。注意:在步骤2中,制备型HPLC纯化后,所收集馏分立刻使用饱和NaHCO3中和到pH6,然后利用EtOAc/MeOH(v/v=10/1,50mL x3)萃取。利用盐水(50mL)洗涤合并的有机层,利用Na2SO4干燥,真空浓缩得到所需产物。1H NMR(MeOD400MHz):δ8.10-8.00(m,2H),7.98(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),7.85(dd,J=11.6,1.2Hz,1H),7.62(dd,J=11.6,2.0Hz,1H),7.45(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.31(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z301.8[M+H]+。
实施例41:化合物41:1-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸
步骤1:l-(6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯的合成:将甲基-4-哌啶羧酸酯(5.50g,38.5mmol)和Et3N(1.17g,11.6mmol)加入2-氯-6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉(1.00g,3.85mmol)(合成参见中间体6,步骤8)的IPA(5mL)溶液中。使混合物加热至回流,回流48小时。用水(100mL)稀释混合物,利用DCM(100mL x3)萃取,用盐水(200mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,过滤并在减压下浓缩得到粗产物,利用硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc=15/1),得到呈固体形式的产物(600mg,收率43%)。
步骤2:1-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸的合成:在0℃下,将BBr3(0.4mL,4.08mmol)逐滴加入l-(6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸甲酯(300mg,0.815mmol)的DCM(5mL)溶液中。使混合物在0℃下搅拌20小时。在0℃下,将水(10mL)逐滴加入混合物中。真空浓缩混合物,然后利用EtOAc(150mL)稀释,过滤,真空浓缩。制备型-HPLC纯化(0.1%TFA作为添加剂)得到呈固体形式的化合物41(26mg,收率9.4%)。1H NMR(MeOD400MHz):δ8.51(s,1H),7.82(d,J=8.8Hz,1H),7.41(dd,J=8.8,2.8Hz,1H),7.21(d,J=2.8Hz,1H),3.55-3.49(m,2H),3.13-3.02(m,2H),2.58-2.49(m,1H),2.09-2.00(m,2H),1.93-1.82(m,2H).MS(ESI):m/z340.7[M+H]+。
实施例42:化合物42:4-(5-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:使用微波将2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1,200mg,1.0mmol)、4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(205mg,1.1mmol)、Pd(dppf)Cl2(366mg,0.5mmol)和碳酸钠(212mg,2.0mmol)在1,4-二噁烷/水(3mL/0.6mL)中的混合物加热到120℃,加热1小时。过滤出沉淀;分别利用EA(10mL)、丙酮(10mL)和水(10mL)洗涤;干燥得到产物(120mg,40.9%)。
步骤2:4-(5-氯-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:将SO2Cl2(55mg,0.41mmol)加入以上化合物(100mg,0.34mmol)的AcOH(2mL)溶液中。将反应混合物加热到60℃,加热3小时。然后,将混合物在室温下搅拌过夜。过滤出沉淀,利用AcOH(10mLx3)洗涤,干燥得到呈粉末形式的产物(100mg,90.1%)。
步骤3:4-(5-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:按照方案1,步骤2,制备型HPLC纯化得到产物。1H-NMR(DMSO-d6500MHz):8.50(d,J=9.0Hz,1H),8.32(d,J=8.0Hz,2H),8.25(d,J=8.5Hz,1H),8.10(d,J=8.0Hz,2H),7.96(d,J=9.5Hz,1H),7.62(d,J=9.0Hz,1H);MS(ESI):m/z300.0[M+l]+。
实施例43:化合物43:(1r,4r)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸
步骤1:4-(6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸乙酯的合成:按照方案2,步骤1(参见实施例8,步骤1),从4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基环己-3-烯羧酸乙酯和2-氯-6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉(合成参见中间体6,步骤8)开始,进行柱色谱纯化(PE/EtOAc=10/1)。
步骤2:4-(6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯的合成:按照化合物35的步骤2,利用0.15当量催化剂,在H2(15psi)中,在20℃下进行4天。
步骤3:(1r,4r)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸的合成:按照化合物35的步骤3,其中使反应在10℃下搅拌20小时,然后利用水猝灭。利用制备型-HPLC纯化粗产物,得到呈固体形式的4-(6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸乙酯(化合物43,109mg,收率29%),和呈固体形式的(1s,4s)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸(化合物44,25mg,收率7%)。化合物43数据:1HNMR(DMSO400MHz):δ10.27(brs,1H),8.61(s,1H),7.89(d,J=9.2Hz,1H),7.44(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.32(d,J=2.8Hz,1H),3.01-2.91(m,1H),2.40-2.30(m,1H),2.00-1.90(m,2H),1.95-1.78(m,4H),1.53-1.38(m,2H).MS(ESI):m/z339.9[M+H]+。
实施例44:化合物44:(1s,4s)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸
合成参见实施例43:1H NMR(DMSO400MHz):δ10.26(br s,1H),8.59(s,1H),7.89(d,J=9.2Hz,1H),7.43(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.31(d,J=2.0Hz,1H),3.09-2.95(m,1H),2.75-2.62(m,1H),2.28-2.16(m,2H),1.98-1.80(m,2H),1.60-1.55(m,4H).MS(ESI):m/z339.9[M+H]+。
实施例45:化合物45:4-(5-溴-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:利用微波将2-氯-6-甲氧基喹啉(合成参见US61/391,225)(200mg,1.0mmol)、4-甲氧基羰基)苯基硼酸(205mg,1.1mmol)、Pd(dppf)Cl2(366mg,0.5mmol)和碳酸钠(212mg,2.0mmol)在1,4-二噁烷/水(3mL/0.6mL)中的混合物加热至120℃,加热1小时。过滤出沉淀;分别利用EtOAc(10mL)、丙酮(10mL)和水(10mL)洗涤;干燥得到呈黑色固体形式的产物(120mg,40.9%)。
步骤2:4-(5-溴-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:将Br2(0.3mL,6.45mmol)加入4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯(630mg,2.15mmol)的DCM(9mL)溶液中。使反应混合物在室温下搅拌过夜。然后,利用盐水和DCM分配混合物。过滤出沉淀,干燥得到呈固体形式的产物(800mg,100%)。MS(ESI):m/z=373.0[M+l]+。
步骤3:化合物45的合成:将BBr3(0.38mL,4.0mmol)加入上述产物(150mg,0.40mmol)的DCM(5mL)溶液中,并在室温下搅拌过夜。小心地加水(20mL),利用EtOAc(20mLx3)萃取混合物,浓缩,制备型-HPLC纯化得到呈灰色粉末形式的化合物45(40mg,29.2%)。MS(ESI):m/z=346.0[M+l]+。1H-NMR(DMSO-d6500MHz):8.48(d,J=8.5Hz,1H),8.35(d,J=8.0Hz,2H),8.25(d,J=9.0Hz,1H),8.10(d,J=7.5Hz,2H),8.01(d,J=8.5Hz,1H),7.60(d,J=9.0Hz,1H)ppm。
实施例46:化合物46:3-溴-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:3-氨基-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:在N2氛围中,将Pd(dppf)Cl2(158mg,0.193mmol)加入化合物2-氯-6-甲氧基喹啉(1.70g,8.78mmol)、2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(2.05g,10.5mmol)和K2CO3(2.43g,17.6mmol)在乙二醇单甲醚/H2O(35mL/5mL)中的混合物中。然后,将混合物加热至80℃,加热3小时。水处理和EtOAc萃取后,硅胶柱纯化所得粗产物(PE/EtOAc=15/1至3/1),得到呈黄色固体形式的产物(500mg,收率19%)。
步骤2:3-溴-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:在0℃下,将NaNO2(44.8mg,0.649mmol)的H2O(3mL)溶液逐滴加入上述产物(200mg,0.649mmol)在HBr(40%)/H2O(5mL/5mL)中的混合物中,使反应混合物在0℃下搅拌30分钟。添加CuBr(186mg,1.30mmol),使混合物在25℃下搅拌2小时。利用NaOH水溶液(2M)使反应混合物碱化到pH=7-8,利用EtOAc(30mL x3)萃取。利用盐水(30mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,过滤,减压下浓缩得到呈黄色固体形式的产物(205mg,收率85%)。
步骤3:化合物46的合成:在0℃下,将BBr3(0.26mL,2.8mmol,d=2.64g/mL)逐滴加入上述化合物(205mg,0.550mmol)的无水DCM(6mL)溶液中。使所得混合物在25℃下搅拌48小时。利用H2O(30mL)猝灭反应混合物,过滤,利用EtOAc(10mL)洗涤滤饼,得到呈黄色固体形式的化合物46(90mg,收率48%)。1H NMR(DMSO-d6400MHz):δ10.27(brs,1H),8.36(d,J=8.8Hz,1H),8.24(d,J=1.6Hz,1H),8.06(dd,J=8.0,1.6Hz,1H),7.95(d,J=9.2Hz,1H),7.76(d,J=8.0Hz,1H),7.71(d,J=8.8Hz,1H),7.41(dd,J=9.2,2.4Hz,1H),7.26(d,J=2.4Hz,1H).LC-MS纯度:94.8%.MS(ESI):m/z343.9[M+H]+。
实施例47:化合物47:4-(4-(二甲氨基)-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
使30mg4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸(化合物26)与含有1mmol Me2NH·HCl和0.5ml DIEA的3ml DMF混合,加热到160℃,加热30分钟。使溶剂蒸发至干,加水。过滤出固体,水洗,干燥。利用丙酮研磨粗产物,得到10.5mg化合物47。1H NMR(DMSO-d6300MHz TMS):δ13.2(b,1H),10.28(s,1H),8.22(m,2H),8.11(d,1H),7.99(d,1H),7.50(s,1H),7.39(d,1H),7.26(s,1H),3.24(s,6H),MS(ESI):m/z=309.30[M+l]+。
实施例48:化合物48:4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸
步骤1:2-氯-4-氟喹啉-6-醇的合成:使2-氯-4-氟-6-甲氧基喹啉(合成参见US61/391,225)(280mg,1.32mmol)和BBr3(0.3mL,3.2mmol,2.64g/mL)在DCM(5mL)中的混合物溶液在20℃下搅拌12小时。水处理和DCM萃取后得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=50/1),得到呈白色固体形式的产物(177mg,收率69%)。
步骤2:化合物48的合成:在N2氛围下,使以上产物(133mg,0.670mmol)、4-(二羟基硼基)-3-甲氧基苯甲酸(156mg,0.801mmol)、K2CO3(278mg,2.01mmol)、Pd(dppf)Cl2(30mg,0.026mmol)在DMF(3mL)和H2O(0.6mL)中的混合物在130℃下搅拌2.5小时。使混合物冷却到室温,利用HC1水溶液(1M)酸化到pH=6,并通过EtOAc(30mL x3)萃取。用盐水(50mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,真空浓缩。硅胶柱纯化残余物(DCM/MeOH=15/1),得到呈灰白色固体形式的化合物48(10.5mg,收率5%)。1H NMR(CD3OD400MHz TMS):δ8.01(dd,J=8.8,1.2Hz,1H),7.88-7.76(m,3H),7.63(d,J=11.2Hz,1H),7.43(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.33(d,J=2.8Hz,1H),3.98(s,3H).MS(ESI):m/z313.8[M+H]+。
实施例49:化合物49:3-氰基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:3-氨基-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸2-甲氧基乙酯的合成:按照化合物46的步骤1所述的偶联步骤,从2-氯-6-甲氧基喹啉(1.70g,8.78mmol)和2-氨基-4-(甲氧基羰基)苯基硼酸(2.05g,10.5mmol)开始。注意:所需化合物和溶剂之间发生酯交换。得到呈黄色固体形式的产物(1.10g,收率35%)。
步骤2:3-溴-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸2-甲氧基乙酯的合成:在0℃下,将NaNO2(97.9mg,1.42mmol)的H2O(5mL)溶液逐滴加入上述产物(500mg,1.42mmol)在HBr(40%)/H2O(10mL/10mL)中的混合物中,使反应混合物在0℃下搅拌30分钟。添加CuBr(407mg,2.84mmol),使混合物在25℃下搅拌2小时,然后利用NaOH(2M)水溶液碱化到pH=7-8,利用EtOAc(20mL x3)萃取。利用盐水(20mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,过滤,真空浓缩得到呈黄色固体形式的产物(580mg,收率98%)。
步骤3:3-氰基-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸2-甲氧基乙酯的合成:将Zn(CN)2(329mg,2.80mmol)和Pd(PPh3)4(162mg,0.140mmol)加入上述产物(580mg,1.40mmol)的DMF(15mL)溶液中。在N2氛围下,使所得混合物在120℃下搅拌16小时。冷却到室温后,过滤混合物,利用EtOAc(60mL)稀释滤液,用H2O(20mL x3)和盐水(20mL洗涤,通过无水Na2SO4干燥,过滤,减压下浓缩得到粗产物。利用硅胶柱纯化粗产物(PE/EtOAc=50/1至10/1),得到呈黄色固体形式的产物(180mg,收率36%)。
步骤4:3-氰基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸2-羟基乙酯的合成:在0℃下,将BBr3(0.24mL,2.5mmol,d=2.64g/mL)逐滴加入上述产物(180mg,0.497mmol)的无水DCM(10mL)溶液中。使所得混合物在25℃下搅拌2小时。加水(20mL),然后,利用NaOH(2M)水溶液碱化到pH=7~8,利用DCM(30mL x3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,过滤,真空浓缩得到呈灰白色固体形式的产物(100mg,收率60%)。
步骤5:化合物49的合成:将LiOH·H2O(25.1mg,0.598mmol)加入以上产物(100mg,0.299mmol)在MeOH(5mL)和THF(5mL)中的溶液中。使混合物在25℃下搅拌16小时。利用1N HC1将反应混合物酸化到pH=5~6,利用EtOAc(20mL x3)萃取所得混合物。利用盐水(20mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,过滤,浓缩得到粗产物。利用EtOAc(10mL)洗涤粗产物,得到呈黄色固体形式的化合物49(35mg,收率45%)。1H NMR(DMSO-d6400MHz):δ13.66(brs,1H),10.32(brs,1H),8.40(d,J=1.6Hz,1H),8.37(d,J=8.4Hz,1H),8.32(dd,J=8.0,1.6Hz,1H),8.16(d,J=8.0Hz,1H),8.02-7.90(m,2H),7.42(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.25(d,J=2.8Hz,1H).MS(ESI):m/z290.6[M+H]+。
实施例50:化合物50:2-(4-羧基-2-氯苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物
将3-氯过苯甲酸(77%纯度,1.19g)加入3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸(化合物8)(620mg)的HOAc(8mL)溶液中。使所得混合物在90℃下加热3小时。减压下移除HOAc后,利用DCM研磨所得混合物,从EtOH/水中再结晶两次,得到呈无色固体形式的所需产物(245mg)。1H NMR(DMSO-d6300MHz TMS):δ10.49(1H,s),8.43(1H,d,J=9Hz),8.06(1H,d,J=3Hz),8.01(1H,dd,J=9和3Hz),7.82(1H,d,J=6Hz),7.69(1H,d,J=6Hz),7.47(1H,d,J=9Hz),7.37(1H,dd,J=9和3Hz),7.31(1H,d,J=3Hz)ppm;MS(ESI):m/z316,[M+H+]。
实施例51:化合物51:4-(4-氨基-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(4-氨基-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:在N2氛围下,使中间体8(4.70g,22.5mmol)、4-甲氧基羰基苯基硼酸(4.01g,22.5mmol)、K2CO3(6.53g,47.2mmol)、Pd(dppf)Cl2(470mg,0.407mmol)在DMF(20mL)和H2O(4mL)中的混合物溶液在130℃下搅拌5小时。使混合物冷却,利用HC1水溶液(1M)酸化,直到pH=6,利用EtOAc(80mL x3)萃取。利用盐水(150mL)洗涤合并的有机层,通过无水Na2SO4干燥,真空浓缩。利用EtOAc(50mL)洗涤残余物,过滤混合物,然后浓缩,得到呈灰白色固体形式的产物(3.20g,收率46%)。
步骤2:化合物51的合成:使上述产物(300mg,0.97mmol)和BBr3(1mL,10.5mmol,2.64g/mL)在DCM(10mL)中的混合物在20℃下搅拌72小时。加水(20mL),利用DCM(20mL x3)萃取,通过无水Na2SO4干燥,真空浓缩得到粗产物。利用MeOH(20mL)研磨得到呈黄色固体形式的化合物51(29.0mg,收率11%)。1H NMR(DMSO-d6400MHz TMS):δ13.52(brs,1H),10.53(brs,1H),8.74(brs,2H),8.20(d,J=8.4Hz,2H),8.01-7.96(m,3H),7.65(d,J=1.6Hz,1H),7.56(dd,J=9.2,2.4Hz,1H),6.98(s,1H).MS(ESI):m/z280.9[M+H]+。
实施例52:化合物52:4-(3-氰基-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:2-氯-6-甲氧基喹啉-3-甲腈的合成:将NH3.H2O(30mL,25%)和I2(1.26g,4.90mmol)加入2-氯喹啉-3-甲醛(1.00g,4.50mmol)在THF(30mL)中的混合物中,使混合物在20℃下搅拌8小时。水处理和EtOAc萃取得到粗产物。硅胶柱纯化(PE/EtOAc=10/1至2/1),得到呈黄色固体形式的产物(370mg,收率38%)。
步骤2:4-(3-氰基-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸的合成:将4-羧基苯基硼酸(75.0mg,0.350mmol)、K2CO3(73.0mg,0.525mmol)和PdCl2(dppf)(20.0mg,2.73x10-3mmol)加入上述产物(75.0mg,0.350mmol)在DMF/H2O(5mL/1mL)中的混合物中,使反应混合物脱气(3x,s),加热到100℃,加热3小时。利用HC1(1M)水溶液将反应混合物酸化到pH=6,用EtOAc(5mL x3)萃取;利用盐水(5mL)洗涤有机层,通过无水Na2SO4干燥,过滤,真空浓缩。硅胶柱纯化(PE/EtOAc=4/1至0/1),得到呈黄色固体形式的产物(45.0mg,收率42%)。
步骤3:化合物52的合成:将BBr3(0.4mL)逐滴加入上述产物(80.0mg,0.263mmol)的DCM(2.5mL)溶液中。在N2氛围下,使所得混合物在30℃下搅拌24小时。水处理,EtOAc萃取,得到粗产物。制备型-HPLC纯化(0.1%TFA作为添加剂),得到呈白色固体形式的化合物52(6.0mg,收率8%)。1H NMR(MeOD-d6400MHz):δ8.78(s,1H),8.22(d,J=8.0Hz,2H),8.05-8.01(m,3H),7.56(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.28(d,J=2.4Hz,1H).MS(ESI):m/z290.8[M+H]+。
实施例53:化合物53:4-(5-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(5-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:将选择性氟试剂(selectfluoro)(453mg,1.28mmol)加入4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯(合成参见化合物45,步骤1)(250mg,0.85mmol)的MeCN(5mL)溶液中。使反应混合物在50℃下加热过夜。减压下移除溶剂,接着水处理,DCM萃取,得到呈棕色固体形式的产物(300mg,113%)。
步骤2:化合物53的合成:将BBr3(2.4g,9.6mmol)加入上述产物(300mg,0.96mmol)的DCM(2mL)溶液中。使反应混合物在室温下搅拌过夜。小心地加水(40mL)。收集沉淀,制备型-HPLC纯化,得到呈棕色粉末形式的化合物53(76.8mg,25.9%)。1H-NMR(DMSO-d6500MHz TMS):8.45(d,J=9.0Hz,1H),8.35(d,J=8.5Hz,2H),8.22(d,J=9.0Hz,1H),8.10(d,J=8.5Hz,2H),7.84(d,J=9.5Hz,1H),7.56(t,J=9.5Hz,1H)ppm.MS(ESI):m/z=284.1[M+l]+。
实施例54:化合物54:4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:按照一般的铃木偶联条件,微波加热下,利用(4-(甲氧基羰基)苯基)硼酸(74mg)、Pd(dppf)Cl2(催化剂)和碳酸氢钠(69mg)的二噁烷(2mL)和水(0.4mL)溶液在100℃下处理2-氯-8-氟喹啉-6-基乙酸酯(中间体9)(89.3mg)处理2小时。水处理后,快速硅胶柱纯化,得到呈浅棕色固体形式的4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯和4-(6-乙酰氧基-8-氟喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的混合物(120mg)。
步骤2:化合物54的合成:利用2N NaOH(4mL)的MeOH(4mL)溶液水解4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯和4-(6-乙酰氧基-8-氟喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的混合物(120mg)。利用12N HC1酸化后,过滤收集所需产物4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸(65mg)。1H NMR(DMSO-d6300MHz TMS):δ8.36-8.33(3H,m),8.18(1H,d,J=9Hz),8.09(2H,d,J=9Hz),7.24(1H,dd,J=12和3Hz),7.09(1H,d,J=3Hz)ppm,MS(ESI):m/z284,[M+H+]。
实施例55:化合物55:3-羟基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
使70mg4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸(化合物48)悬浮于10ml DCM中,添加0.25ml BBr3。使混合物在室温下搅拌2天。加入20ml水以猝灭反应。蒸发移除DCM,过滤出沉淀,水洗,干燥得到29mg3-羟基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸。1H NMR(DMSO-d6300MHz TMS):δ10.34(s,1H),8.45(d,1H),8.30(d,1H),8.24(d,1H),7.97(d,1H),7.46(m,3H),7.26(d,1H),MS(ESI):m/z=282.30[M+l]+。
实施例56:化合物56:3-氟-4-(5-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸
步骤1:3-氟-4-(6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:在微波辐射下,使2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1)(300mg,1.55mmol)、3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸甲酯(中间体10)(415mg,1.48mmol)、Pd(dppf)Cl2(110mg,0.15mmol)和碳酸钠(320mg,3.0mmol)在1,4-二噁烷/水(6mL/1mL)中的混合物加热到120℃,加热4小时。过滤出沉淀,利用EA洗涤。利用盐水洗涤合并的滤液,通过Na2SO4干燥,过滤,真空浓缩。硅胶色谱纯化残余物(PE/EA=30/1),得到呈白色固体形式的产物(220mg,46%)。MS(ESI):m/z312.2[M+l]+。
步骤2:3-氟-4-(5-氟-6-甲氧基喹啉-2-基)苯甲酸甲酯的合成:将选择性氟试剂(296mg,0.835mmol)加入上述产物(260mg,0.835mmol)的CH3CN(30mL)溶液中。使反应混合物在50℃下加热3小时,浓缩。使残余物在水(20mL)与DCM(20mL)之间分配。分离水相,利用DCM(20mL x2)萃取。利用盐水(50mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,浓缩。硅胶色谱纯化残余物(PE/EA=30/1),得到产物(190mg,粗制)。MS(ESI):m/z=330.1[M+l]+。
步骤3:化合物56的合成:将BBr3(1.45g,5.77mmol)加入上述产物(190mg,0.577mmol)的DCM(2mL)冰冷溶液中。使反应混合物在室温下搅拌过夜,利用水(40mL)缓慢地猝灭。收集沉淀,利用制备型-HPLC纯化得到呈棕色粉末形式的化合物56(140mg,81%)。1H-NMR(DMSC-d6,500MHz,TMS):δ8.47(d,J=8.5Hz,1H),8.15(t,J=8.0Hz,1H),7.97(dd,J=2.5Hz,1H),7.93(dd,J=1.5Hz,1H),7.82-7.86(m,2H),7.57(t,J=9.0Hz,1H)ppm;MS(ESI):m/z=302.1[M+l]+。
实施例57:中间体的合成
中间体1:2-氯-6-甲氧基喹啉的合成
步骤1:6-甲氧基喹啉1-氧化物的合成:将H2O2(30%水溶液,1.9mL,18.9mmol)加入6-甲氧基喹啉(2.00g,12.6mmol)的AcOH(10mL)溶液中,使混合物加热到70℃,加热21小时。利用2M NaOH将混合物碱化到pH8-9,利用CH2Cl2(200mL)萃取,利用盐水(50mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,浓缩得到粗产物,硅胶柱纯化(EtOAc/MeOH=10/1)得到呈固体形式的6-甲氧基喹啉1-氧化物(1.20g,55%)。
步骤2:6-甲氧基喹啉-2-醇的合成:使6-甲氧基喹啉1-氧化物(300mg,1.71mmol)的Ac2O(5.0mL)溶液回流2小时。减压下移除溶剂。将残余物溶于EtOAc(50mL)中,利用盐水(10mL)洗涤有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,浓缩得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=l/2),得到6-甲氧基喹啉-2-醇(200mg,收率67%)。
步骤3:2-氯-6-甲氧基喹啉的合成:使6-甲氧基喹啉-2-醇(400mg,2.29mmol)的POCl3(5.0mL)溶液回流2小时。减压下移除溶剂,将残余物溶于EtOAc(50mL)中,利用饱和NaHCO3(30mL x2)洗涤有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,浓缩得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=10/1)得到呈固体形式的2-氯-6-甲氧基喹啉(380mg,收率86%)。1H NMR(CDC13400MHz):δ7.92(d,J=8.4Hz,1H),7.85(d,J=9.2Hz,1H),7.32-7.25(m,2H),7.00(d,J=2.4Hz,1H),3.86(s,3H)。
中间体2:2-氯喹啉-6-醇的合成
在0℃下,将BBr3(6mL,62.2mmol)逐滴加入2-氯-6-甲氧基喹啉(中间体1)(2.00g,10.4mmol)的无水DCM(100mL)溶液中。使反应混合物在25℃下搅拌2小时,利用饱和NH4Cl水溶液(50mL)猝灭,过滤。利用CH2Cl2/MeOH(v/v=10/1,30mL x2)萃取滤液,利用盐水(30mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,减压下浓缩得到呈黄色固体形式的2-氯喹啉-6-醇(1.30g,收率70%)。lH NMR(CDC13300MHz):δ7.95(t,J=8.1Hz,2H),7.35(dd,J=6.0,3.3Hz,2H),7.13(d,J=2.7Hz,1H)。
中间体3:2,4-二氯-3-氟-6-甲氧基喹啉的合成
步骤1:2-氟丙二酸的合成:在25℃下,将LiOH·H2O(2.70g,64.3mmol)加入2-氟丙二酸二乙酯(5.00g,28.1mmol)的EtOH(100mL)溶液中。将混合物加热到50℃,加热16小时。过滤混合物,收集固体。使滤液浓缩至干,得到油。将油和固体溶于H2O(30mL)和MTBE(100mL)中,添加浓HCl使混合物酸化到pH1,利用MTBE(30mL x2)萃取水层,通过Na2SO4干燥合并的有机层,过滤,浓缩,得到呈固体形式的2-氟丙二酸(3.00g,收率88%)。
步骤2:2,4-二氯-3-氟-6-甲氧基喹啉的合成:将氟丙二酸(1.00g,8.13mmol)的POCl3(10mL)悬浮液加热到85℃以使固体溶解。使混合物冷却到60℃,在1小时内,逐份添加对氨基苯甲醚(900mg,7.32mmol)。添加后,使反应混合物回流2小时。真空移除溶剂。利用冰水稀释混合物,添加NH3·H2O碱化到pH9。利用EtOAc(30mL x3)萃取水层,利用盐水(20mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,浓缩得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=10/1)得到2,4-二氯-3-氟-6-甲氧基喹啉(650mg,收率36%)。1H NMR(CDCl3300MHz):δ7.92(d,J=9.0Hz,1H),7.41-7.31(m,2H),4.00(s,3H)。
中间体4:2,3-二氯-6-甲氧基喹啉的合成
步骤1:2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺的合成:使4-甲氧基苯胺(5.00g,40.6mmol)、氯乙酸(8.6g,91.5mmol)、EDCI(12.0g,61.2mmol)、HOBT(8.4g,61.3mmol)和NMM(13mL,122mmol)在无水CH2Cl2(50mL)中的混合物在30℃下搅拌3小时。利用冰水使混合物猝灭,然后利用CH2Cl2(30mL x2)萃取。利用盐水(30mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,过滤,浓缩,得到粗产物,硅胶柱纯化(PE/EtOAc=5/1)得到产物(1.60g,收率20%)。
步骤2:2,3-二氯-6-甲氧基喹啉的合成:在0℃下,将POCl3(1.6mL,17.5mmol)逐滴加入DMF(0.29mL,3.80mmol)中。添加后,逐份添加2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(500mg,2.50mmol)。使混合物在25℃下搅拌15分钟,加热到75℃,加热3小时。利用冰水使反应混合物猝灭,利用2M NaOH中和到pH7。EtOAc水溶液处理,然后硅胶柱纯化(PE/EtOAc=20/1)得到中间体4(50mg,收率9%)。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.06(s,1H),7.81(d,J=9.6Hz,1H),7.30(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),6.92(d,J=2.8Hz,1H),3.87(s,3H)。
中间体5:4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成
在N2氛围下,将Pd(PPh3)4(816mg,0.706mmol)加入4-溴-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.00g,3.53mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.79g,7.06mmol)和KOAc(1.04g,10.6mmol)在DMSO(15mL)中的混合物中。然后,将混合物加热到120℃,加热3小时。使反应混合物冷却,水/EtOAc处理,得到呈黄色油形式的粗产物(2.3g)。
中间体6:2-氯-3-(三氟甲基)喹啉-6-醇的合成
步骤1:(5-甲氧基-2-硝基苯基)甲醇的合成:将SOCl2(20mL)加入5-甲氧基-2-硝基苯甲酸(20.0g,0.102mol)的无水THF(200mL)溶液中,使混合物回流4小时。减压下移除溶剂,将残余物溶于无水THF(100mL)中。在0℃下,在30分钟内,将溶液逐滴加入NaBH4(7.70g,0.202mol)在无水THF(100mL)和DMF(140mL)中的悬浮液中。使混合物在30℃下搅拌3小时,然后利用冰水(100mL)猝灭,利用2MNaOH碱化到pH8。EtOAc处理后,真空移除溶剂,柱色谱纯化(PE/EtOAc=1/1)得到产物(12.0g,收率66%)。
步骤2:叔丁基(5-甲氧基-2-硝基苄氧基)二甲基硅烷的合成:将咪唑(9.80g,144mmol)加入(5-甲氧基-2-硝基苯基)甲醇(12.0g,65.6mmol)在无水THF(200mL)和DMF(20mL)中的溶液中。然后,在0℃下,逐份添加TBSCl(11.8g,78.6mmol),使混合物在30℃下搅拌2小时。利用冰水(100mL)使混合物猝灭。EtOAc处理后,真空移除溶剂,柱色谱纯化(PE/EtOAc=10/1),得到呈黄色油形式的产物(16.0g,收率84%)。
步骤3:2-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-4-甲氧基苯胺的合成:将10%Pd/C(1.40g)加入叔丁基(5-甲氧基-2-硝基苄氧基)二甲基硅烷(14.0g,47.1mmol)的EtOH(200mL)溶液中,在H2(40psi)下,使混合物在30℃下搅拌2小时。过滤出固体,减压下浓缩滤液,得到呈黄色油形式的产物(14.0g)。1H NMR(DMSO400MHz):δ6.75(d,J=2.4Hz,1H),6.60-6.55(m,2H),4.55(s,2H),4.40(brs,2H),3.61(s,3H),0.90(s,9H),0.09(s,6H)。
步骤4:N-(2-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-4-甲氧基苯基)-3,3,3-三氟丙酰胺的合成:在20℃下,使2-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-4-甲氧基苯胺(14.0g)、3,3,3-三氟-丙酸(7.30g,57.0mmol)、EDCI(15.0g,76.5mmol)、HOBT(11.0g,80.2mmol)和NMM(22mL,157mmol)在无水CH2Cl2(200mL)中的混合物搅拌2小时。利用CH2Cl2(100mL)稀释混合物,利用1M HC1(100mL)、H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤有机层,通过Na2SO4干燥,浓缩得到产物。
步骤5:3,3,3-三氟-N-(2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)丙酰胺的合成:将TBAF(16.6g,63.6mmol)的无水THF(60mL)溶液加入N-(2-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-4-甲氧基苯基)-3,3,3-三氟丙酰胺(20.0g)的无水THF(200mL)溶液中。使混合物在35℃下搅拌30分钟。利用冰水使混合物猝灭。水/EtOAc处理后,真空移除挥发物。硅胶柱色谱纯化粗产物(PE/EtOAc=1/2),得到所需产物。1H NMR(CDC13400MHz):δ8.60(brs,1H),7.82(d,J=8.8Hz,1H),6.85(dd,J=9.2,3.2Hz,1H),6.75(d,J=2.8Hz,1H),4.65(s,2H),3.80(s,3H),3.23(q,J=10.4Hz,2H)。
步骤6:3,3,3-三氟-N-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)丙酰胺的合成:将MnO2(20.0g,229mmol)加入3,3,3-三氟-N-(2-(羟甲基)-4-甲氧基苯基)丙酰胺(6.30g,23.9mmol)的无水CH2Cl2(200mL)溶液中。使混合物回流16小时。过滤出混合物,浓缩滤液,得到所需产物(5.30g,收率84%)。
步骤7:6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2(lH)-酮的合成:将K2CO3(14.0g,101mmol)加入3,3,3-三氟-N-(2-甲酰基-4-甲氧基苯基)丙酰胺(5.30g,20.3mmol)的DMF(100mL)溶液中。将混合物加热到60℃,加热1.5小时。利用EtOAc(200mL)稀释混合物,过滤。利用H2O(100mL)和盐水(100mL)洗涤滤液,通过Na2SO4干燥,真空浓缩得到所需产物(4.60g,收率94%)。1H NMR(CDC13300MHz):δ12.25(brs,1H),8.18(s,1H),7.40(d,J=9.0Hz,1H),7.25(dd,J=9.0,2.7Hz,1H),7.02(d,J=2.7Hz,1H),3.87(s,3H)。
步骤8:2-氯-6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉的合成:使6-甲氧基-3-(三氟甲基)喹啉-2(lH)-酮(4.60g,18.9mmol)的POCl3(30mL)溶液回流2.5小时。减压下移除溶剂,利用2M NaOH使残余物中和到pH7。EtOAc处理后,减压下移除挥发物。硅胶柱色谱纯化残余物(PE/EtOAc=15/1),得到所需产物(4.60g,收率94%)。
步骤9:2-氯-3-(三氟甲基)喹啉-6-醇的合成:在0℃下,将BBr3(3.0mL,31.8mmol)加入上述产物(1.00g,3.83mmol)的无水CH2Cl2(20mL)溶液中。使混合物在0℃下搅拌2小时。利用冰-水(10mL)使混合物猝灭,利用CH2Cl2(30mL x3)萃取。利用盐水(50mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,减压下浓缩得到呈固体形式的中间体6(600mg,收率63%)。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.37(s,1H),8.00(d,J=9.2Hz,1H),7.48(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.22(d,J=2.8Hz,1H)。
中间体7:2-氯-4-氟-6-甲氧基喹啉的合成
步骤1:2,4-二氯-6-甲氧基喹啉的合成:使对氨基苯甲醚(100g,0.813mol)和丙二酸(85.0g,0.817mol)在POCl3(500mL)中的混合物回流6小时。真空移除过量POCl3,利用8M NaOH使残余物中和到pH7。利用CH2Cl2(300mL x3)萃取水层,利用盐水(500mL)洗涤,通过Na2SO4干燥,真空干燥。硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc=15/1)得到所需产物(35.0g,收率:19%)。
步骤2:2-氯-6-甲氧基喹啉-4-胺的合成:在密封管中,使2,4-二氯-6-甲氧基喹啉(5.00g,22.0mmol)在NH3(g)/MeOH(饱和,40mL)中的悬浮液加热到150℃,加热16小时。移除溶剂,利用MeOH(20mL)稀释残余物。过滤出混合物,浓缩滤液得到粗产物。硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc=2/1)得到呈固体形式的产物(7.50g,收率:55%)。
步骤3:2-氯-4-氟-6-甲氧基喹啉的合成:使2-氯-6-甲氧基喹啉-4-胺(4.50g,21.6mmol)的HF-吡啶(45mL)溶液冷却到-10-0℃。然后,逐份添加NaNO2(1.80g,26.1mmol),使混合物在0℃下搅拌1小时,在30℃下搅拌1小时。然后,将混合物加热到65℃,加热1.5小时。利用冰-水(100mL)使混合物猝灭;利用2M NaOH使水层中和到pH7。过滤出混合物,利用EtOAc(50mL x3)萃取滤液,利用盐水(100mL)洗涤有机层,通过Na2SO4干燥,真空浓缩。硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc=15/1)得到中间体7(3.60g,收率:40%)。1H NMR(CDC13400MHz):δ7.92(dd,J=9.2,1.6Hz,1H),7.40(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.25(s,1H),7.10(d,J=9.2Hz,1H),3.97(s,3H)。
中间体8:2-氯-6-甲氧基喹啉-4-胺的合成
步骤1:2,4-二氯-6-甲氧基喹啉的合成:使对氨基苯甲醚(100g,0.813mol)和丙二酸(85.0g,0.817mol)在POCl3(500mL)中的混合物回流6小时。真空移除过量POCl3,利用8M NaOH使残余物中和到pH7。利用CH2Cl2(300mL x3)萃取水层,利用盐水(500mL)洗涤合并的有机层,通过Na2SO4干燥,真空浓缩得到粗产物,硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc=15/1)得到呈白色固体形式的2,4-二氯-6-甲氧基喹啉(35.0g,收率:19%)。
步骤2:中间体8的合成:在密封管中,将2,4-二氯-6-甲氧基喹啉(5.00g,22.0mmol)在NH3(g)/MeOH(饱和,40mL)中的悬浮液加热到150℃,加热16小时。真空移除溶剂,利用MeOH(20mL)稀释残余物。过滤出混合物,浓缩滤液得到粗产物,硅胶柱色谱纯化(PE/EtOAc=2/1)得到呈黄色固体形式的2-氯-6-甲氧基喹啉-4-胺(7.50g,收率:55%)。
中间体9:2-氯-8-氟喹啉-6-基乙酸酯的合成
步骤1:3-氯-N-(2-氟-4-羟苯基)丙酰胺的合成:使4-氨基-3-氟苯酚(3.4g)与3-氯丙酰氯(3.56g)在丙酮(60mL)中混合,回流下加热3小时。EtOAc/水处理后,分离的有机层通过Na2SO4干燥,真空浓缩。硅胶色谱纯化粗产物得到呈浅棕色固体形式的产物(2.95g)。
步骤2:8-氟-6-羟基-3,4-二氢喹啉-2(lH)-酮的合成:使3-氯-N-(2-氟-4-羟苯基)丙酰胺(2.1g)与无水AICl3(7g)混合,在160℃下加热过夜。利用1N HC1处理所得混合物,利用EtOAc萃取。分离有机层和减压下移除溶剂后,收集呈浅棕色固体形式的所需粗产物(1.8g)。
步骤3:8-氟-2-氧-l,2,3,4-四氢喹啉-6-基乙酸酯的合成:利用含乙酰氯(330mg)和TEA(0.68mL)的DCM(8mL)溶液处理粗制8-氟-6-羟基-3,4-二氢喹啉-2(lH)-酮(0.574g)3小时。利用EtOAc/水进行水溶液处理后,利用快速柱色谱纯化粗产物得到呈无色固体形式的所需产物(382mg)。
步骤4:8-氟-2-羟基喹啉-6-基乙酸酯的合成:将DDQ(1.2g)加入8-氟-2-氧-l,2,3,4-四氢喹啉-6-基乙酸酯(718mg)的甲苯(8mL)溶液中。使所得溶液在70℃下加热48小时。利用EtOAc水溶液处理后,快速硅胶柱色谱纯化粗产物得到呈无色固体形式的纯产物(550mg)。
步骤5:中间体9的合成:将POCl3(0.6mL)加入8-氟-2-羟基喹啉-6-基乙酸酯(550mg)的DMF(6mL)溶液中。然后,将该混合物在80℃下加热几个小时。水溶液处理后,快速硅胶柱色谱得到所需产物2-氯-8-氟喹啉-6-基乙酸酯(380mg)。
中间体10:3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-l,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸甲酯的合成:
步骤1:4-溴-2-氟苯甲酸甲酯的合成:将草二酰氯(4.6g,36mmol)逐滴加入4-溴-2-氟苯甲酸(4g,18mmol)的甲醇(10mL)溶液中。加热到60℃反应过夜,缓慢地加入冰水中,利用DCM(50mL x2)萃取。利用盐水洗涤合并的萃取液,通过Na2SO4干燥,浓缩得到呈棕色固体形式的所需产物(3.7g,88%)。
步骤2:中间体10的合成:将Pin2B2(1.31g,5.15mmol)、乙酸钾(1.26g,12.87mmol)和Pd(dppf)Cl2(106.2mg,0.128mmol)加入4-溴-2-氟苯甲酸甲酯(lg,4.29mmol)的1,4-二噁烷(20mL)溶液中。对系统抽真空并再注入N2。使反应混合物在100℃下加热17小时。浓缩混合物,硅胶色谱纯化残余物(PE/EA=15/1)得到呈黄色固体形式的中间体10(950mg,79%)。1H-NMR(CDCl3,500MHz,TMS):δ7.80(t,J=1.5Hz,2H),7.67(d,J=10Hz,lH),3.92(s,3H),1.37(s,12H)ppm。
实施例58:GSNOR测定
对多种化合物的抑制GSNOR活性的能力进行体外测定。实施例1-56中GSNOR抑制剂化合物具有约<10μM的IC50。实施例1-4、6、8、10-14、16-35、37-43、45-50和52-56中的GSNOR抑制剂化合物具有约<0.5μM的IC50。实施例1-4、8、10-14、17-28、30、31、37、40-41、43、46、48-49和52-56中GSNOR抑制剂化合物具有约<0.1μM的IC50。
Biochemistry2000,39,10720-10729中描述了GSNOR表达和纯化。
GSNOR发酵:在37℃下过夜培养后,使包含100ug/ml氨比西林的在2XYT培养基中的GSNOR甘油原液穿刺生长预培养物。然后,将细胞加入含有氨比西林的新鲜2XYT(4L)中并在诱导前,在37℃下,生长到0.6-0.9的OD(A600)。在20℃下,过夜培养期间,利用0.1%阿拉伯糖诱导GSNOR表达。
GSNOR纯化:通过氮空化使大肠杆菌(E.coli)细胞体溶解,利用AKTA FPLC(Amersham Pharmacia)通过Ni亲和色谱纯化澄清溶解产物。利用具有0-500mM咪唑梯度的20mM Tris pH8.0/250mMNaCl洗脱柱。利用Ulp-1在4℃下整夜消化含有Smt-GSNOR融合物的GSNOR洗脱馏分以移除亲和标记物,然后在相同的条件下,再次进行Ni柱洗脱。将GSNOR回收在流经馏分中,通过Q-琼脂糖凝胶和肝素流通色谱进一步纯化以结晶,利用20mM Tris pH8.0,1mMDTT,l0uM ZnSO4。
GSNOR测定:每天制得新鲜GSNO和酶/NADH溶液。过滤溶液,并暖到室温。GSNO溶液:100mM NaPO4(pH7.4),0.480mMGSNO。将396μL GSNO溶液加入小玻璃管中,然后添加DMSO中的8μL测试化合物(或对于反应对照,仅添加DMSO),利用吸管头混合。在100%DMSO中制得所测试化合物的10mM原液浓度。在100%DMSO中进行2倍连续稀释。将8μL每一个稀释剂加入测试中,使测定中DMSO的最终浓度为1%。测试化合物浓度是100至0.003μM。酶/NADH溶液:100mM NaPO4(pH7.4),0.600mM NADH,1.0μg/mL GSNO还原酶。将396μL酶/NADH溶液加入小玻璃管中使反应开始。将小玻璃试管放入Cary3E UV/可见分光光度计中,记录25℃下三分钟内的340nm吸光值/min的变化。对每一个化合物浓度的测定进行三次。利用SigmaPlot的酶动力学模块的标准曲线分析计算每一个化合物的IC50。
最终测定条件:100mM NaPO4,pH7.4,0.240mM GSNO,0.300mM NADH,0.5μg/mL GSNO还原酶,和1%DMSO。最终体积:800μL/小玻璃管
实施例59:GSNORi在试验性哮喘中的效力
试验性哮喘模型:
使用患有卵清蛋白(OVA)引起的哮喘的小鼠模型来筛选GSNOR抑制剂对乙酰甲胆碱(MCh)引起的支气管狭窄/气道高反应性的效力。这是一个广泛使用并明确表征的模型,其表现出具有类似人类哮喘的急性、过敏性哮喘表现型。利用如下方案评价GSNOR抑制剂效力:在OVA致敏和气道刺激后施用GSNOR抑制剂,然后利用MCh刺激。利用整体体积描记法(Penh;Buxco),评价MCh加量刺激后的支气管狭窄。也用嗜酸性粒细胞渗入支气管肺泡灌洗液(BALF)的量来衡量肺炎。将GSNOR抑制剂的效果与媒介和作为阳性对照的可必特(Combivent)(吸入式;IH)比较。
材料和方法
变应原致敏和刺激方案
使OVA(500μg/ml)的PBS与等体积的10%(w/v)硫酸铝钾的蒸馏水混合,利用10NNaOH调节到pH6.5后,室温下培养60分钟。在750xg下离心5分钟后,使OVA/明矾颗粒再悬浮于蒸馏水中,到达初始体积。使小鼠在第0天腹膜内(IP)注射100μg与明矾复合的OVA(0.2mL500μg/mL生理盐水)。IP注射0.2-mL克他命(ketamine)和甲苯噻嗪(xylazine)在生理盐水中的混合物(分别0.44和6.3mg/mL),使小鼠麻醉,并仰卧于板上。将二百五十微克(100μl2.5mg/ml)OVA(在第8天)和125μg(50μ12.5mg/ml)OVA(在第15、18和21天)放在每一个动物的舌后。
肺功能测试(Penh)
对神智清醒、自由活动、自主呼吸的小鼠进行最后一次OVA刺激24小时后,利用Buxco室(Wilmington,NC),整体体积描记法测量气道对乙酰甲胆碱的体内反应。利用超声波雾化器产生的雾化盐水或增量的乙酰甲胆碱(5、20和50mg/mL)刺激小鼠2分钟。将支气管狭窄程度表示为增强的呼吸间歇(Penh),一种无量纲计算值,其与同一个小鼠的气道阻力、阻抗和胸膜腔内压的测量值相关。取得Penh读数,计算4分钟的平均值。在每一次喷雾刺激后,如下计算Penh:Penh=[(Te/Tr-1)x(PEF/PIF)],其中Te是呼气时间,Tr是松弛时间,PEF是呼气流量峰值,而PIF是吸气流量峰值×系数0.67。盒压从最大值变化到最大值的使用者所定义的百分比的时间表示松弛时间。Tr测量值从盒压最大值开始,40%时结束。
BALF中嗜酸性粒细胞渗入液
气道高反应性测量后,心脏刺穿使小鼠放血,然后从两肺部或将左肺打结后从右肺部的主支气管收集BALF。计数0.05mL等份液的全部BALF细胞,使其余流体在4℃下200xg离心10分钟。使细胞团再悬浮于含有10%BSA的盐水中,涂在载玻片上。利用0.05%伊红水溶液和5%丙酮的蒸馏水使嗜酸性粒细胞染色5分钟,利用蒸馏水冲洗,利用0.07%亚甲蓝复染色。另外,利用DiffQuik来染色嗜酸性粒细胞和其它白细胞。
GSNOR抑制剂和对照
使GSNOR抑制剂在磷酸盐缓冲盐水(PBS)pH7.4或0.5%w/v羧甲基纤维素中复水,浓度为0.00005至3mg/mL。将GSNOR抑制剂以单剂量或多剂量静脉内(IV)或灌胃投给小鼠(10mL/kg)。在MCh刺激前的30分钟至72h期间施用。使GSNOR抑制剂效果与同样方式服用的媒介比较。
在所有研究中,将可必特用作阳性对照。利用装有物质的吸入器装置将可必特(Boehringer Ingelheim)投到肺部,但对小鼠的施用进行调整,利用吸管头。在MCh刺激前的48小时、24小时和1小时施用可必特。每次吸入(或投与)的可必特提供18μg异丙托溴铵(IpBr)和103μg硫酸舒喘灵或约0.9mg/kg IpBr和5mg/kg舒喘灵的剂量。
统计分析
利用GraphPad Prism5.0(San Diego,CA)计算切基线、盐水和增量的MCh刺激的Penh的曲线下面积值,并表示为各自(IV或口服)媒介对照的百分比。利用单向ANOVA、Dunnetts或Bonferroni事后比较检验或t-检验(JMP8.0,SAS Institute,Cary,NC或MicrosoftExcel),计算每一个研究中的处理组与各自媒介对照组的统计差异。将处理组与各自媒介对照组间的p值<0.05视为显著不同。
结果
在OVA哮喘模型中,在评价前48h、24h和1h的三次口服10mg/kg后,化合物8(实施例8)显著(p<0.05)比媒介对照组降低BAL中嗜酸性粒细胞渗入37%。
在OVA哮喘模型中,在评价前48h、24h和1h的三次口服10mg/kg后,化合物3(实施例3)显著(p<0.05)比媒介对照组降低BAL中嗜酸性粒细胞渗入42%。
在OVA哮喘模型中,在评价前48h、24h和1h的三次口服10mg/kg后,化合物27(实施例27)显著(p<0.05)比媒介对照组降低BAL中嗜酸性粒细胞渗入23%。
在OVA哮喘模型中,在评价前的24h单剂量IV投与10mg/kg后,化合物4(实施例4)显著(p<0.05)比媒介对照组降低MCh-引起的AHR19%并比媒介对照组降低BALF中嗜酸性粒细胞渗入20%。
实施例60:小鼠药物动力学(PK)研究
试验模型
使用小鼠来确定本发明化合物的药物动力学。通过口服(PO)或静脉内(IV)施用试验物,将此物种广泛地用于评价化合物的生物利用率。在最活跃时IV或PO施用来评价雄性BALB/c小鼠的血浆暴露量以比较本发明化合物的效力。
材料和方法
IV施用本发明化合物
使本发明化合物在磷酸盐缓冲盐水(PBS)/10%Solutol(HS15)澄清溶液中复水,使浓度为0.2mg/mL,以IV单剂量给小鼠施用(2mg/kg)。通过侧尾静脉给动物投药。异氟醚麻醉后,通过心脏穿刺在指定的时间点(0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、16、24小时)收集血样(每个动物多达1mL血液)。将血液收集到含有Li-肝素的管中。在收集后的约30分钟内,在离心前使血样放在冰上。在LC/MS/MS分析前,将血浆转移到标记的聚丙烯管中,-70℃下冷冻。
PO施用本发明化合物
使本发明化合物在40%丙二醇/40%碳酸丙二酯/20%的5%蔗糖澄清溶液中复水,使浓度为2mg/mL,通过灌胃单口服剂量给小鼠施用(10mg/kg)。异氟醚麻醉后,通过心脏穿刺,在施用过了0.25、0.5、1、2、4、8、12、16、20和24小时后收集血样。将血液收集到含有Li-肝素的管中。在收集后的约30分钟内,在离心前使血样放在冰上。在LC/MS/MS分析前,将血浆转移到标记的聚丙烯管中,-70℃下冷冻。
LC/MS/MS分析
利用LC-MS/MS分析每个时间点的血浆样品,定量下限(LLOQ)为1ng/mL。分析血浆,确定每一个样品中本发明化合物的量,和每一个本发明化合物在相关矩阵中所产生的回归曲线。
利用WinNonlin分析来计算IV和PO施用的PK参数:
IV部分的PK参数:AUClast;AUCINF;Tl/2;Cl;Vss;Cmax;MRT
PO部分的PK参数:AUClast;AUCINF;Tl/2;Cmax;Cl,MRT。
除了以上PK参数,计算生物利用率(%F)。
对实施例3、4、8、13、19、27和28的化合物进行测试,所有化合物具有大于9%的生物利用率。实施例3、8、13和27的化合物具有大于45%的口服生物利用率。
实施例61:GSNOR抑制剂在试验性炎症性肠病(IBD)中的效力
模型概述:
将患有急性和慢性葡聚糖硫酸钠(DSS)引起的IBD的小鼠模型用以探索GSNORi对此疾病的效力。急性和慢性DSS-引起的IBD是广泛使用的明确表征的模型,此产生类似于人类疾病所观察到的结肠病理变化。在这些模型和人类疾病中,使结肠隐窝中上皮细胞粉碎,导致上皮障壁机能障碍、组织炎症、浮肿和溃疡。GSNORi治疗可通过修复s-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)含量而利于IBD,进而防止或逆转上皮障壁机能障碍。
急性预防性模型:
通过对雄性C57B1/6小鼠的饮用水施用DSS,连续6天导致试验性IBD(每组N=8至10个小鼠)。以0.1至10mg/kg/天的剂量,口服GSNORi,持续10天,从DSS暴露前两天开始,DSS暴露后再持续两天。DSS暴露过了两天后,以盲的方式通过内镜检查术和组织病理学评价GSNORi的作用,采用五点等级,从得分=0(正常组织)到得分=4(组织溃疡损伤和明显的病理变化)。也评价了发炎路径所涉及的循环细胞因子含量。使GSNORi效果与媒介处理的对照组比较。在这个研究中,将皮质类固醇泼尼松龙(prednisolone)用作阳性对照,每天口服3mg/kg/天。将幼鼠(N=5)视为正常组织对照进行评价。
慢性治疗模型:
通过对雄性C57B1/6小鼠的饮用水施用DSS,连续6天导致试验性IBD(每组N=10至12个小鼠)。以10mg/kg/天的剂量,口服GSNORi,持续14天,从中断DSS暴露后的第一天开始。投与GSNORi7天和14天后通过内镜检查术,投与GSNORi14天后通过组织病理学以盲的方式评价GSNORi的效力,采用五点等级,从得分=0(正常组织)到得分=4(组织溃疡损伤和明显的病理变化)。也评价了发炎路径所涉及的循环细胞因子含量。使GSNORi效果与媒介处理的对照组比较。在这个研究中,将皮质类固醇泼尼松龙(prednisolone)用作阳性对照,每天口服3mg/kg/天。也将幼鼠(N=5)视为正常组织对照进行评价。
结果:
化合物3(实施例3)减弱急性DSS引起的IBD的小鼠模型的结肠损伤和炎症反应所涉及的低含量细胞因子。采用预防性投药方案,连续10天以0.1、1或10mg/kg/天口服化合物3后,通过内镜检查术和组织病理学评价表现出严重结肠损伤得分的小鼠的百分比明显(p<0.05)比媒介对照组降低38%至88%。化合物3也使循环炎性细胞因子向未处理幼鼠中所观察到的含量修复。化合物3的这些效果相当于或大于泼尼松龙观察结果。
化合物8(实施例8)减缓患有急性DSS-引起的IBD的小鼠模型的结肠损伤。采用预防性投药方案,连续10天以10mg/kg/天口服化合物8后,通过内镜检查术或组织病理学评价表现出严重结肠损伤得分的小鼠的百分比分别比媒介对照组降低44%或26%。
化合物19(实施例19)减缓患有急性DSS-引起的IBD的小鼠模型的结肠损伤。采用预防性投药方案,连续10天以10mg/kg/天口服化合物19后,通过内镜检查术评价表现出严重结肠损伤得分的小鼠的百分比比媒介对照组降低31%。
化合物13(实施例13)减缓患有慢性DSS-引起的IBD的小鼠模型的结肠损伤。采用治疗性投药方案,长达连续14天以10mg/kg/天口服化合物13后,通过内镜检查术或组织病理学评价表现出严重结肠损伤得分的小鼠的百分比分别比媒介对照组显著(p<0.05)降低52%或53%。
实施例62:GSNOR抑制剂在试验性慢性阻塞性肺病(COPD)中的效力
短期吸烟的COPD模型
对患有短期(4天或11天)暴露于烟雾所引起的慢性阻塞性肺病(COPD)的小鼠模型进行GSNOR抑制剂效力的评价。对支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞的渗入和炎症以及组织转化/修复所涉及的BALF中趋化因子的含量进行测量,以评价GSNOR抑制剂对COPD发生和发展所相关的一些早期事件的影响。
模型概述:
利用患有急性(4天)和亚慢性(11天)烟雾引起的COPD的小鼠模型探索GSNOR抑制剂对COPD的效力。使动物暴露于烟雾得到患有COPD的模型,其中损伤是由与人类疾病相同的病原体引起,并且损伤类似于人类疾病,包括气道阻塞、气腔扩大、以及这些病理所涉及的炎症反应。在动物模型中,肺病理学的变化只有在长期(几个月)暴露于烟雾后明显,因此使慢性模型不能作为有效筛选工具。最近,已将探索小鼠在短期(2周或更短)暴露于烟雾后的炎症反应的模型用作筛选新颖治疗剂对COPD的效力和作用机理的工具。炎症在COPD开始和进展中所起的关键作用使得这些短期模型与新颖治疗剂效力的初期测试相关。
急性(4天)烟雾暴露模型:利用全身暴露室,使雌性C57B1/6小鼠(每组N=8)暴露于烟雾。使小鼠每天暴露于来自连续6个香烟(Kentucky3R4F,不使用过滤嘴)的烟雾,循环4次,连续4天,循环之间30分钟的无烟间隔。每天以10mg/kg/天口服GSNOR抑制剂,口服7天,烟雾暴露前2天开始,暴露后再持续1天。最后一次烟雾暴露过了大概24小时后,通过光学显微镜量化BALF中总细胞、白细胞和白细胞差别,并且通过ELISA量化BALF趋化因子含量,来评价GSNOR抑制剂作用。使GSNOR抑制剂作用与媒介所处理的对照组比较。将PDE4抑制剂罗氟司特(roflumilast)用作研究的阳性对照。使一组幼鼠(N=8)暴露于空气,并用作研究的阴性对照。
亚慢性(11天)烟雾暴露模型:使雌性C57B1/6小鼠(每组N=10)暴露于Marlboro100香烟不经过过滤嘴所产生的烟雾。在研究第1天,暴露时间是25分钟,在研究第2天,35分钟,在研究第3到11天,45分钟。在每天暴露于烟雾前的一小时施用GSNOR抑制剂。以1至10mg/kg/天口服GSNOR抑制剂,持续11天。在最后一次暴露过了24小时后,通过光学显微镜量化BALF中所有细胞数,以及白细胞的差别,来评价GSNOR抑制剂的作用。将GSNOR抑制剂作用与媒介处理对照组比较,并表示为烟雾所引起的BALF细胞数增加的抑制百分比。将罗氟司特用作研究的阳性对照,并以5mg/kg/天投药。使一组幼鼠(N=10)暴露于空气,投以媒介作为研究的阴性对照。
结果:
化合物3(实施例3)减弱烟雾所引起的BALF细胞渗入和BALF炎症趋化因子的变化。急性4天烟雾模型以10mg/kg/天口服7天后,与媒介处理对照组比较,化合物3显著(p<0.05)分别减少BALF中总细胞、白细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸粒细胞66%、80%、75%、84%和95%。化合物3的这些效果与罗氟司特观察结果相当或更好。化合物3也使BALF趋化因子朝幼鼠的含量恢复。在亚慢性11天模型中,连续11天以10mg/kg/天口服后,化合物3分别抑制烟雾所引起的BALF中总细胞(p<0.05)、巨噬细胞、嗜中性粒细胞(p<0.05)、嗜酸粒细胞和淋巴细胞(p<0.05)增加25%、24%、41%、70%和49%。以5mg/kg/天口服后,化合物3分别抑制BALF中总细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞(p<0.05)和淋巴细胞(p<0.05)22%、23%、29%和46%。
在亚慢性11天模型中,连续11天口服1至10mg/kg/天后,化合物8(实施例8)分别显著(p<0.05)抑制烟雾引起的BAL中总细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞增加达35%至48%、24%至43%、41%至70%和49%至65%。采用1、5或10mg/kg/天,不存在剂量反应。化合物8的作用与罗氟司特相当。
在亚慢性11天模型中,连续11天口服1mg/kg/天后,化合物13(实施例13)分别显著(p<0.05)抑制烟雾引起的BAL中总细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞增加56%、53%、67%和60%。化合物13的作用与罗氟司特相当。
在亚慢性11天模型中,连续11天口服1mg/kg/天后,化合物27(实施例27)分别显著(p<0.05)抑制烟雾引起的BAL中总细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞增加44%、41%、64%和46%。化合物27的作用与罗氟司特相当。
实施例63:小鼠的对乙酰氨基酚毒性的探索性研究
先前已表明S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)受到抑制可改善动物模型的胃肠损伤的阴性表现。对这些观察结果进行延伸,可对患有肝损伤的小鼠模型评价S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)或GSNOR抑制剂(GSNORi)对对乙酰氨基酚(ACAP)引起的肝毒性的作用。收集血样用于肝功能测定,在研究结束时收集组织样品用于组织病理学检查。
材料和方法
GSNORi、GSNO、对乙酰氨基酚(ACAP,Sigma)媒介(施用用1/2cc注射器)、异氟醚、收集血液的181cc注射器w/26g针头、用于临床化学的90血清分离管。
一般研究设计:在投药前,使动物(5只/组)适应至少3天。在研究第一天的单一时间=0,对禁食动物进行对乙酰氨基酚治疗(300mg/kg PO)。两小时后,将GSNORi(10mg/kg/剂量)或GSNO(5mg/kg/剂量)静脉内施用给治疗组。在治疗组首次施用过了24和48小时后,投以GSNORi或GSNO。观察小鼠的临床毒性症状,ACAP施用过了6、24和72小时后,收集血液用于肝功能测试:碱性磷酸酶(ALK)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)和总胆红素(TBILI)。72小时时收集肝用于组织病理学检查。
研究纲要
研究日程
媒介、GSNO和GSNORi制剂
媒介对照物是调节到pH7.4的磷酸盐缓冲盐水(PBS)(不含钙、钾或镁)。将媒介组分称入配衡天平的容器中,并加入纯净水(w/v)。必要时,利用磁力搅拌器,使l0x原液混合。然后,利用去离子水以1:9的比例(v/v)稀释l0x原液。使GSNO暖至室温,然后制备溶液。使用前,用氮喷射PBS溶液。使1mg/mL GSNO溶液冷却(即,放在冰浴上),避光,在制备后的4小时内使用。使GSNORi制剂在磷酸盐缓冲盐水(PBS)pH7.4中复水,浓度为1mg/mL。每天,将GSNORi以单剂量(IV)施用给小鼠(10mL/kg)。ACAP施用过了2小时后投药,然后26和50小时后投药。将GSNO或GSNORi作用与以同样方式投药的ACAP和盐水比较。
计算:平均体重,平均肝器官重量和临床病理终点(+/-SD),采用与媒介对照组比较的T-检验和ANOVA(α=0.05)。将临床病理数据制成平均值,除非数据并非标准分配,在这种情况下,中间件可以最小值和最大值的范围表示。
实施例64:评价STAM小鼠中的GSNORi抗NASH纤维化活性的探索性研究
我们先前已表明S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)受到抑制可改善小鼠模型的胃肠损伤和ACAP损伤的阴性表现。对这些观察结果进行延伸,评价STAM(信号转导衔接分子)小鼠的GSNOR抑制剂(GSNORi)逆转非酒精性脂肪肝炎(NASH)引起的肝病的纤维化活性的效果。在这些小鼠中,在两星期内,发现从肝脂肪变性到纤维化的连续变化,与人类NASH组织病理学极为类似。
材料和方法
GSNORi,替米沙坦(Telmisartan),媒介(投药用1/2cc注射器),异氟烷,收集血液的181cc注射器w/26g针头,用于临床化学的90血清分离管
一般研究设计:在研究开始前,使动物(6只/组)适应。在研究期间,使4周大动物饮食,组1(正常小鼠)接受正常饮食,而组2-4(STAM小鼠)食用高脂肪食物。在研究第7周,使小鼠开始口服GSNORi,在研究第9周,赐死。观察小鼠的临床毒性症状,收集血液/组织用于肝分析:血浆甘油三酯(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);基因表达:Timp-1、α-SMA、胶原蛋白3、TNF-α和MCP-1和利用HE染色以评分(NAFLD)活性和天狼猩红染色(纤维化区域)的组织病理学检查。
研究纲要
ND:正常饮食,HFD:高脂肪饮食
计算:平均体重,平均肝器官重量和临床病理终点(+/-SD),采用与媒介对照组比较的T-检验和ANOVA(α=0.05)。将临床病理数据制成平均值,除非数据并非标准分配,在这种情况下,中间件可以最小值和最大值的范围表示。
本领域技术人员清楚可对本发明的方法和组合物进行多处修改和变化,而不脱离本发明主旨或范围。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种如式I的化合物:
其中
m选自由0、1、2或3组成的组;
R1独立地选自由氯、氟、溴、氰基以及甲氧基组成的组;
R2b和R2c独立地选自由氢、卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和N(CH3)2组成的组;
X选自由以下组成的组:
n选自由0、1和2组成的组;
R3独立地选自由卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和NR4R4’组成的组,其中R4和R4’独立地选自由C1-C3烷基组成的组,或R4当与R4’一起时形成具有3至6个成员的环;以及
A选自由以下组成的组:
或其药学上可接受的盐、立体异构体或N-氧化物。
2.根据权利要求1所述的化合物,其中
R1独立地选自由氯、氟和溴组成的组;
X选自由以下组成的组
R3独立地选自由卤素、C1-C3烷基、氟化C1-C3烷基、氰基、C1-C3烷氧基和NR4R4’组成的组,其中R4和R4’独立地选自由C1-C3烷基组成的组,或R4当与R4’一起时形成具有3至6个成员的环。
3.根据权利要求1所述的化合物,其中m选自由0和1组成的组;R2b和R2c独立地选自由氢、氯、氟、甲基、三氟甲基、氰基、甲氧基和N(CH3)2组成的组;n选自由0和1组成的组;且R3独立地选自由氟、氯、溴、甲基、三氟甲基、氰基、甲氧基和N(CH3)2组成的组。
5.根据权利要求4所述的化合物,其中A是COOH。
6.根据权利要求1所述的化合物,所述化合物选自由以下组成的组:
4-(6-羟基-3-甲基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)-3-甲基喹啉-6-醇;
4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-(lH-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇;
1-(6-羟基喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸;
(1r,4r)-4-(6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
(1s,4s)-4-(6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-(2H-四唑-5-基)苯基)-4-氯喹啉-6-醇;
3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(2H)-酮;
3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸;
5-(6-羟基喹啉-2-基)噻吩-2-羧酸;
4-(6-羟基喹啉-2-基)环己-3-烯羧酸;
4-(3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-氯-3-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
3-(2-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮;
3-(3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-5(4H)-酮;
4-(4-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(2-氯-4-(2H-四唑-5-基)苯基)喹啉-6-醇;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噁二唑-2(3H)-酮;
3-(二甲氨基)-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲基苯甲酸;
4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)-3-氟苯甲酸;
3-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-5(2H)-酮;
4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-(三氟甲基)苯甲酸;
4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-羧基苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,3,4-噻二唑-2(3H)-酮;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噁二唑-3(2H)-酮;
(1r,4r)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
(1s,4s)-4-(3-氯-6-羟基喹啉-2-基)环己烷羧酸;
3-氯-4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(5-(2H-四唑-5-基)噻吩-2-基)喹啉-6-醇;
5-(4-(6-羟基喹啉-2-基)苯基)-l,2,4-噻二唑-3(2H)-酮;
3-氟-4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
1-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)哌啶-4-羧酸;
4-(5-氯-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
(1r,4r)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸;
(1s,4s)-4-(6-羟基-3-(三氟甲基)喹啉-2-基)环己烷羧酸;
4-(5-溴-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
3-溴-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-(二甲氨基)-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(4-氟-6-羟基喹啉-2-基)-3-甲氧基苯甲酸;
3-氰基-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
2-(4-羧基-2-氯苯基)-6-羟基喹啉1-氧化物;
4-(4-氨基-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(3-氰基-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(5-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;
4-(8-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸;和
3-氟-4-(5-氟-6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸。
7.根据权利要求6所述的化合物,其中所述化合物是3-氯-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸。
8.根据权利要求6所述的化合物,其中所述化合物是3-氟-4-(6-羟基喹啉-2-基)苯甲酸。
9.根据权利要求6所述的化合物,其中所述化合物是4-(6-羟基喹啉-2-基)-3-甲基苯甲酸。
10.根据权利要求1所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐作为GSNOR抑制剂的用途。
11.根据权利要求6所述的化合物作为GSNOR抑制剂的用途。
12.一种药物组合物,其包含治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。
13.一种治疗疾病或病症的方法,其包括对需要治疗的患者施用治疗有效量的根据权利要求1所定义的式I化合物。
14.一种制造根据权利要求1所定义的式I化合物的方法。