CN103183740A - 一种北五味子多糖的生产方法 - Google Patents

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一种北五味子多糖的生产方法,其特征在于包括顺序进行的如下工艺步骤:(A)制备活化酵母液;(B)研磨北五味子;(C)发酵北五味子;(D)提取北五味子多糖;(E)测定北五味子多糖含量。其优点为,该北五味子多糖的生产方法操作简单,成本低,可以缩短北五味子多糖的生产周期,显著提高北五味子多糖的产量,为发酵法提高北五味子多糖的产量提供理论基础。

Description

一种北五味子多糖的生产方法
技术领域
本发明涉及一种多糖的生产方法,特别是一种北五味子多糖的生产方法。
背景技术
北五味子是木兰科植物五味子[Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.]的干燥成熟果实,是著名的滋补性中药,因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全,故名五味子,具有敛肺、滋肾、生津、收汗、涩精之功效。现代药理研究证实五味子对中枢神经系统、呼吸系统均有兴奋作用,亦能促进肝糖原异生,加快肝糖原分解,在治疗神经衰弱、肝炎等的药物中应用十分广泛。五味子有南北之分,据《本草纲目》记载“五味子南产者红,北产者黑,入滋补药,必用北者为良”,北五味子的化学成分主要为五味子木脂素、挥发油、五味子醇、多糖等。有研究表明,北五味子多糖对CCl4导致的肝损伤小鼠具有保护作用,同时,北五味子多糖对部分肝切除小鼠再生有明显促进作用,表明其可使受损的肝功能恢复加快,促进肝细胞的生长;另外,北五味子多糖还能明显提高小鼠的耐缺氧能力,具有抗疲劳作用,亦能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量增加,说明北五味子多糖能够提高机体对环境的适应能力和防御能力。综上可见,北五味子多糖有着很高的药用价值。但是,目前北五味子多糖主要从北五味子实体中提取,所提取的北五味子多糖有限,并且提取步骤复杂,生产周期长、成本高。
发明内容
本发明的目的是:提供一种北五味子多糖的生产方法,该方法操作简单,成本低,可以缩短北五味子多糖的生产周期,显著提高北五味子多糖的产量。
本发明的目的可以通过下述技术方案来实现:
一种北五味子多糖的生产方法,其特征在于包括顺序进行的如下工艺步骤:
(A)制备活化酵母液:首先,取食用米粉100g,加水1000mL,并加入酵母10g,37℃水浴保温2小时,制成活化酵母液备用;
(B)研磨北五味子:取北五味子干燥果实,研磨成粉备用;
(C)发酵北五味子:取经步骤(B)研磨得到的北五味子粉100g,加入100mL经步骤(A)制成的活化酵母液,置于500mL摇瓶中,在37℃温度下缓慢震荡培养120小时,然后在80℃温度下烘干制成北五味子发酵样品备用;
(D)提取北五味子多糖:将经步骤(C)制成的北五味子发酵样品粉碎后,精密称取10g,装于滤纸筒中封好,置于索氏提取器的提取管中,依次用温度为30~60℃的石油醚、乙醚和体积分数80%乙醇作为溶剂各回流提取4小时,待索氏提取器提取管中的残渣挥干溶剂后,再用水回流提取4小时;然后将索氏提取器底部烧瓶内的溶液减压浓缩至索氏提取器底部烧瓶容积的一半体积,再向烧瓶内减压浓缩后溶液中加入0.1%活性炭,脱色,过滤,过滤后的滤液中加入体积分数95% 乙醇使滤液含乙醇体积分数为80%,静置过夜,过滤,过滤后的残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤,并在60℃ 温度下烘干,即得北五味子多糖;多次精密称取粉碎后的北五味子发酵样品,每次称取10g样品,多次重复以上提取北五味子多糖步骤,直到所制成的全部北五味子发酵样品都被提取多糖完毕;
(E)测定北五味子多糖含量。
本发明在步骤(A)中,所加入的酵母为面包酵母或者啤酒酵母或者富硒酵母。
本发明的优点是:该北五味子多糖的生产方法操作简单,成本低,可以缩短北五味子多糖的生产周期,显著提高北五味子多糖的产量,为发酵法提高北五味子多糖的产量提供理论基础。
具体实施方式
一种北五味子多糖的生产方法,其特征在于包括顺序进行的如下工艺步骤:
(A)制备活化酵母液:首先,取食用米粉100g,加水1000mL,并加入酵母10g,37℃水浴保温2小时,制成活化酵母液备用;
(B)研磨北五味子:取北五味子干燥果实,研磨成粉备用;
(C)发酵北五味子:取经步骤(B)研磨得到的北五味子粉100g,加入100mL经步骤(A)制成的活化酵母液,置于500mL摇瓶中,在37℃温度下缓慢震荡培养120小时,然后在80℃温度下烘干制成北五味子发酵样品备用;
(D)提取北五味子多糖:将经步骤(C)制成的北五味子发酵样品粉碎后,精密称取10g,装于滤纸筒中封好,置于索氏提取器的提取管中,依次用温度为30~60℃的石油醚、乙醚和体积分数80%乙醇作为溶剂各回流提取4小时,待索氏提取器提取管中的残渣挥干溶剂后,再用水回流提取4小时;然后将索氏提取器底部烧瓶内的溶液减压浓缩至索氏提取器底部烧瓶容积的一半体积,再向烧瓶内减压浓缩后溶液中加入0.1%活性炭,脱色,过滤,过滤后的滤液中加入体积分数95% 乙醇使滤液含乙醇体积分数为80%,静置过夜,过滤,过滤后的残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤,并在60℃ 温度下烘干,即得北五味子多糖;多次精密称取粉碎后的北五味子发酵样品,每次称取10g样品,多次重复以上提取北五味子多糖步骤,直到所制成的全部北五味子发酵样品都被提取多糖完毕;
(E)测定北五味子多糖含量。
在步骤(A)中,所加入的酵母为面包酵母或者啤酒酵母或者富硒酵母。
本发明采用苯酚-硫酸比色法测定北五味子多糖的含量,其操作步骤如下:
1)标准葡萄糖溶液的配制:精密称取干燥恒重的葡萄糖25.2mg,加适量水溶解,转移至250mL容量瓶中,加水至刻度定容,摇匀,配成浓度为100.8ug·mL-1标准葡萄糖溶液备用。
2)体积分数5%苯酚溶液的配制:取苯酚100g,加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g蒸馏,收集182℃温度下的馏份,称取7.5g,加水150mL溶解,配成体积分数5%苯酚溶液,置于棕色瓶内放冰箱备用。
3)标准曲线绘制:分别精密量取标准葡萄糖溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL 置干燥试管中, 并分别加水定容成1.0mL,再分别加入体积分数5%苯酚溶液1.6mL,摇匀,然后加浓硫酸7.0mL,充分摇匀,室温放置25min,同时做一空白溶液,空白溶液以1.0mL蒸馏水按上述步骤作相同处理工作,然后在490nm处测定吸光度值,以吸光度值为纵坐标,标准糖浓度为横坐标,绘制标准曲线,并利用回归方程计算出标准曲线。
4)换算因子的测定:精确称取在60℃ 温度下干燥恒重的北五味子多糖20mg,加水溶解后定容到100mL容量瓶中,摇匀,做为多糖储备液;精确量取多糖储备液0.2mL,并加水定容至1mL,按测定标准曲线同样的方法测定其吸光度值,然后按下式计算换算因子f:
f = W/CD ,式中:W为多糖重量(ug) ,C为定容后多糖液中葡萄糖的浓度(ug·mL-1),D为多糖的稀释因子,测得 f=1.82。
5)北五味子发酵样品多糖含量的测定:精密称取北五味子发酵样品粉沫0. 20g,用体积分数80%乙醇浸泡过夜,再装于滤纸筒中封好,置于索氏提取器的提取管中,用体积分数80%乙醇回流提取2小时,待索氏提取器提取管中的残渣挥干溶剂后,再继续以水回流提取2小时,将索氏提取器底部烧瓶内的溶液反复洗至250mL容量瓶中,定容,摇匀成为样品液;测定时,精密吸取样品液1mL,按测定标准曲线同样的方法测定其吸光度值,然后按下式计算多糖含量:
多糖含量(%)= CDf/W×100,式中:C 为样品液的葡萄糖的浓度(ug·mL-1),D为样品液的稀释因子,f 为换算因子,W 为北五味子发酵样品的重量(ug)。
通过测定发现,本发明北五味子分别经面包酵母、啤酒酵母和富硒酵母发酵后其五味子多糖含量均有所提高,其中北五味子经啤酒酵母发酵120小时后其多糖含量比不经发酵处理的原北五味子多糖含量提高77.88%,经富硒酵母发酵120小时后其多糖含量提高57.93%,而经面包酵母发酵120小时后其多糖含量提高36.65%。由此可见,利用酵母菌发酵北五味子对五味子多糖含量的提高有促进作用,本发明所述的北五味子多糖的生产方法,能够显著提高北五味子多糖的产量,为发酵法提高北五味子多糖的产量提供理论基础。

Claims (2)

1.一种北五味子多糖的生产方法,其特征在于包括顺序进行的如下工艺步骤:
(A)制备活化酵母液:首先,取食用米粉100g,加水1000mL,并加入酵母10g,37℃水浴保温2小时,制成活化酵母液备用;
(B)研磨北五味子:取北五味子干燥果实,研磨成粉备用;
(C)发酵北五味子:取经步骤(B)研磨得到的北五味子粉100g,加入100mL经步骤(A)制成的活化酵母液,置于500mL摇瓶中,在37℃温度下缓慢震荡培养120小时,然后在80℃温度下烘干制成北五味子发酵样品备用;
(D)提取北五味子多糖:将经步骤(C)制成的北五味子发酵样品粉碎后,精密称取10g,装于滤纸筒中封好,置于索氏提取器的提取管中,依次用温度为30~60℃的石油醚、乙醚和体积分数80%乙醇作为溶剂各回流提取4小时,待索氏提取器提取管中的残渣挥干溶剂后,再用水回流提取4小时;然后将索氏提取器底部烧瓶内的溶液减压浓缩至索氏提取器底部烧瓶容积的一半体积,再向烧瓶内减压浓缩后溶液中加入0.1%活性炭,脱色,过滤,过滤后的滤液中加入体积分数95% 乙醇使滤液含乙醇体积分数为80%,静置过夜,过滤,过滤后的残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤,并在60℃ 温度下烘干,即得北五味子多糖;多次精密称取粉碎后的北五味子发酵样品,每次称取10g样品,多次重复以上提取北五味子多糖步骤,直到所制成的全部北五味子发酵样品都被提取多糖完毕;
(E)测定北五味子多糖含量。
2.根据权利要求1所述的一种北五味子多糖的生产方法,其特征是:在步骤(A)中,所加入的酵母为面包酵母或者啤酒酵母或者富硒酵母。
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