CN102432691A - 一种从芦根中提取多糖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种从芦根中提取多糖的方法，该方法步骤为将新鲜芦根用水冲洗干净，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛后的粉末备用；称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，加入10倍体积80%的乙醇回流提取2h，回收乙醇，残渣烘干，按一定比例加入蒸馏水，提取；水提取液抽滤，旋转蒸发浓缩至一定体积，离心，去除沉淀杂质；sevag法除蛋白；上清液醇沉；离心，沉淀依次用无水乙醇、乙醚、丙酮搅拌洗涤，离心；沉淀于40℃烘干，得芦根粗多糖，硫酸—苯酚比色法测定其含量。本发明得到的芦根粗多糖浸膏率和多糖含量都较高，为芦根多糖的工业化生产提供了依据。

Description

一种从芦根中提取多糖的方法
技术领域
本发明属于中药生物活性成分的提取方法，具体地涉及一种从芦根中提取多糖的方法。
背景技术
芦根为禾本科多年生草本植物芦苇的地下根茎，是一种较常用的中药材。性寒、味甘、归肺、胃经，具有清热、生津、除烦、止呕、利尿之功效。临床主要用于发烧、尿路感染、肺脓疡、支气管炎等病的治疗。芦根提取物对化学性肝损伤有良好的保护和恢复作用，近来有报道，其具有疏肝解郁的作用，所以研究其提取分离方法具有现实的意义，在保健品、饮食方面的运用极具潜力。我国适宜种植芦根的地域广阔，春末夏初或秋季均可采挖，洗净，切段，鲜用或晒干用，芦根产品市场很大，但芦根深加工技术还比较薄弱。
植物多糖具有许多生物活性功能，包括免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗菌抗病毒、保护肝脏等。芦根多糖具有消炎、利尿、保护肝脏、抗肝纤维化、治疗急慢性肝炎等作用。研究发现芦根经化学分离提取得到的有效部分芦根多糖的分子量20 000，由葡萄糖、木糖、阿拉伯糖残基构成并含有β(1→3) 苷键的支链。由于其结构和性质的特殊(分子中阿拉伯糖是左旋糖，较少见) 抗氧化性很强。具有清除生物体内自由基的作用。对四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝损伤有保护作用。研究表明，芦根多糖大、小剂量均可不同程度保护肝细胞，改善肝功能，降低肝脂肪化程度，增强肝细胞抗损伤能力，降低损伤组肝脏内毒物的含量，提高血清和肝脏GSH--Px力，进一步将过氧化物氧化成水和无毒醇。芦根多糖可通过抗氧化、保护肝细胞、抑制胶原沉积等途径来抑制肝纤维化，对化学毒品的肝损伤起到良好的保护和增进健康的作用。芦根多糖还具有促进淋巴细胞的转化和免疫促进作用。近些年，随着生活水平的不断提高，人们的健康保健意识在逐渐增强。多糖作为保健食品的主要成分己悄然兴起。我国多糖资源丰富，尤其是来源于中草药的植物多糖，应用历史悠久，具有巨大的开发前景。
然而，目前还未见用超声+热水提取芦根多糖的相关报道，因此，采用超声+热水提取芦根多糖很有研究意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种从芦根中提取多糖的方法，本发明采用水提醇沉法得到芦根粗多糖，以浸膏提取率为指标，通过正交试验法优化芦根多糖的提取条件，为芦根多糖工业化生产提供依据。
本发明提供了一种从芦根中提取多糖的方法，该方法步骤如下：
（1）将新鲜芦根用水冲洗干净，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛后的粉末备用；
（2）称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，加入10倍体积80%的乙醇回流提取2h，回收乙醇，残渣烘干，按一定比例加入蒸馏水，提取；
（3）水提取液抽滤，旋转蒸发浓缩至一定体积，离心，去除沉淀杂质；
（4）sevag法除蛋白；上清液加1~5倍95%乙醇4℃条件下醇沉4~20h；离心，沉淀依次用无水乙醇、乙醚、丙酮搅拌洗涤，离心；
（5）沉淀于40℃烘干，得芦根粗多糖，硫酸—苯酚比色法测定其含量。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述步骤（1）中烘干条件为60℃恒温鼓风干燥箱内烘干6h~12h。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述步骤（1）中的芦根粉碎后，过30目筛子，过筛后的粉末备用。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述步骤（2）中的加入蒸馏水进行提取的方式为超声处理后热水浴浸提。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述超声处理后热水浴浸提为超声提取条件为料液比1:30-1:35，温度为70度，时间为60-70min，频率为70KHz，之后放入恒温水浴锅中，80℃提取2h。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述步骤（3）中浓缩温度为70℃，真空度为0.09Mpa，浓缩至原体积的1/6。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述步骤（4）中sevag法除蛋白试剂为氯仿：正丁醇=4:1，除蛋白试剂与多糖浓缩液的体积比为1:5。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述的醇沉为上清液加3倍95%乙醇4℃醇沉12h。
本发明提供的从芦根中提取多糖的方法，所述离心的条件为4000r/min离心10min。
本发明具有如下优点及效果：通过本发明，获得了较纯的芦根多糖，经超声前处理后热水浴浸提，粗多糖浸膏率和多糖含量明显高于传统的热水浸提法和超声波提取法。说明采用超声+热水提取的方法能有效提取芦根多糖，为芦根多糖的工业化生产提供了依据。
本发明采用超声+热水提取的方法，有效地从芦根中提取多糖，是从芦根中提取多糖的创新。
附图说明
图1是本发明热水浸提法各因素对粗多糖浸膏率的影响效应曲线图；
图2是本发明热水浸提法各因素对多糖含量的影响效应曲线图；
图3是本发明超声波提取法各因素对粗多糖浸膏率的影响效应曲线图；
图4是本发明超声波提取法各因素对多糖含量的影响效应曲线图。
具体实施方式
下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。
实施例1：
1. 芦根的前处理：
（1）将新鲜芦根用自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗一次，淋干水后，60℃恒温鼓风干燥箱内烘干6h。
（2）然后剪成小段，用粉碎机粉碎，粉碎的芦根经30目筛子过滤，过滤后的粉末备用。
2. 提取芦根多糖的步骤：
（1）将新鲜芦根用水冲洗干净，淋干水后，60℃恒温鼓风干燥箱内烘干6h~12h，然后剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛后的粉末备用；
（2）称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，加入10倍体积80%的乙醇回流提取2h，回收乙醇，残渣烘干，按一定比例加入蒸馏水，提取；
（3）水提取液抽滤，旋转蒸发浓缩至一定体积，离心（4000r/min，10min），去除沉淀杂质；
（4）sevag法除蛋白；上清液加1~5倍95%乙醇4℃条件下醇沉4~20h；离心（4000r/min，10min），沉淀依次用无水乙醇、乙醚、丙酮搅拌洗涤，离心（4000r/min，10min）；
（5）沉淀于40℃烘干，得芦根粗多糖，硫酸—苯酚比色法测定其含量。
3. 结果：
表1 热水浸提法正交试验因素水平表
水平 A B C
  料液比（g：ml） 浸提温度（℃） 浸提时间（h）
1 1:25 70 1
2 1:30 80 2
3 1:35 90 3
Figure 2011104110914100002DEST_PATH_IMAGE001
从表1和表2可见，从粗多糖浸膏率看各因素对提取效果的影响大小顺序是：料液比（A）＞浸提温度（B）＞浸提时间（C）。由此正交试验结果可以看出，芦根多糖热水浸提的最佳提取工艺条件为：以30倍的水为溶剂，在80℃水浴中浸提2h，即A2B2C2 。
从多糖含量看各因素对提取效果的影响大小顺序是：浸提温度（B）＞料液比（A）＞浸提时间（C）。由此正交试验结果可以看出，芦根多糖热水浸提的最佳提取工艺条件为：以35倍的水为溶剂，在80℃水浴中浸提2h，即A3B2C2 。
 
表3 超声波提取法正交试验因素水平表
水平 A B C
  超声温度（℃） 超声时间（min） 超声频率（kHz）
1 50 50 60
2 60 60 70
3 70 70 80
Figure 605321DEST_PATH_IMAGE002
从表3和表4可见，从粗多糖浸膏率看各因素对提取效果的影响大小顺序是：超声温度（A）＞超声时间（B）＞超声频率（C）。由此正交试验结果可以看出，芦根多糖超声法提取的最佳提取工艺条件为：超声温度为70℃， 超声时间为60min，超声频率为70kHz，即A3B2C2。
从多糖含量看各因素对提取效果的影响大小顺序是：超声频率（C）＞超声时间（B）＞超声温度（A）。由此正交试验结果可以看出，芦根多糖超声法提取的最佳提取工艺条件为：超声温度为70℃，超声时间为70min，超声频率为70kHz，即A3B3C2。
对比试验
三种提取方法的比较见表5。
表5 三种提取方法的比较
提取方法 粗多糖浸膏率（%） 多糖含量（mg/g）
热水浸提 2.60 18.30
超声提取 4.50 22.32
超声+热水提取 5.35 30.38
从表5可见，超声+热水提取法提取多糖的效果较佳，芦根粗多糖浸膏率达5.35%，约为传统热水浸提取法的2.06倍，为超声提取法的1.19倍。芦根多糖含量为30.38mg/g，约为传统热水浸提取法的1.66倍，为超声提取法的1.36倍。出现这种结果的原因可能是：超声波提取多糖是利用超声波的强烈震动、强烈空化效应及高速搅拌作用都可以加速植物细胞壁的破碎，有利于多糖等成分的浸出提取。为芦根多糖的工业化生产提供了依据。

Claims (8)

1.一种从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：该方法步骤如下：
（1）将新鲜芦根用水冲洗干净，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛后的粉末备用；
（2）称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，加入10倍体积80%的乙醇回流提取2h，回收乙醇，残渣烘干，按一定比例加入蒸馏水，提取；
（3）水提取液抽滤，旋转蒸发浓缩至一定体积，离心，去除沉淀杂质；
（4）sevag法除蛋白；上清液加1~5倍95%乙醇4℃条件下醇沉4~20h；离心，沉淀依次用无水乙醇、乙醚、丙酮搅拌洗涤，离心；
（5）沉淀于40℃烘干，得芦根粗多糖，硫酸—苯酚比色法测定其含量。
2.按照权利要求1所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤（1）中烘干条件为60℃恒温鼓风干燥箱内烘干6h~12h。
3.按照权利要求1所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的芦根粉碎后，过30目筛子，过筛后的粉末备用。
4.按照权利要求1所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的加入蒸馏水进行提取的方式为超声处理后热水浴浸提。
5.按照权利要求4所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述超声处理后热水浴浸提为超声提取条件为料液比1:30-1:35，温度为70度，时间为60-70min，频率为70KHz，之后放入恒温水浴锅中，80℃提取2h。
6.按照权利要求1所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤（3）中浓缩温度为70℃，真空度为0.09Mpa，浓缩至原体积的1/6。
7.按照权利要求1所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述步骤（4）中sevag法除蛋白试剂为氯仿：正丁醇=4:1，除蛋白试剂与多糖浓缩液的体积比为1:5。
8.按照权利要求1所述的从芦根中提取多糖的方法，其特征在于：所述离心的条件为4000r/min离心10min。
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