CN103181326A

CN103181326A - 红掌盆栽品种的离体组织培养方法

Info

Publication number: CN103181326A
Application number: CN2013101230097A
Authority: CN
Inventors: 谈建中; 周丽丽; 张树初; 郑必平; 王晶; 闫俊芳; 牛瑞鹤; 陈驰
Original assignee: Suzhou University
Current assignee: Suzhou University
Priority date: 2013-04-10
Filing date: 2013-04-10
Publication date: 2013-07-03

Abstract

本发明公开了一种红掌盆栽品种的离体组织培养方法。以叶片、叶柄、花序、佛焰苞片或侧芽为外植体材料，经过灭菌处理后，接种到合适培养基上，培养40～60d后脱分化形成愈伤组织，出愈率可达87.5%；继续培养40～60d后再分化形成不定芽，分化率高达94.12%；经增殖培养可大量快繁试管苗，待试管苗生长一定高度后转入生根培养基，生根后移栽成活率可达95%以上。采用本发明的组织离体培养技术，经愈伤组织诱导不定芽途径，可高效稳定地获得再生植株，实现红掌盆栽品种的快速大量繁殖，并针对红掌不同品种的特点，筛选了合适的外植体材料及培养基条件，在优良红掌品种的种苗生产中具有极高应用用价值。

Description

红掌盆栽品种的离体组织培养方法

技术领域

本发明涉及红掌盆栽品种外植体的离体组织培养方法。

背景技术

红掌（Anthurium andraeanum）为天南星科花烛属多年生草本花卉，原产于南美洲热带雨林，喜高温和高湿的环境条件。红掌茎短缩、节上多气生根，株高50～80cm，叶聚生茎顶、革质，叶心形、椭圆形等。花与叶轮流生长，一片叶下抽出一枝花，佛焰苞心状卵形，颜色有红色、粉色、白色、绿色等，肉穗花序无柄、黄色，适宜的生长条件下全年均可开花。因其花叶奇特，花期长达数月之久，广泛应用于室内外花卉的装饰。

红掌生长周期较长，常规的种子繁殖和分株繁殖很难满足花卉市场的需求，植物组织培养技术无疑是缩短繁殖周期、大量供应种苗的有效途径，并能保证母本的优良品种特性。自上个世纪七十年代，国外Pierk等人利用叶片外植体成功建立红掌组织培养体系以来，组织培养繁殖方法逐步取代了传统繁殖方法，我国在成功引进红掌栽培以来，因其叶花特色，受到国人的喜爱，国内市场对红掌种苗的需求日益扩大，国内纷纷对其组织培养再生技术进行了研究，并取得了一定的进展，但还存在一定问题，如外植体选择、处理方法、培养基组成、激素条件等方面尚无相对统一的说法，结论呈多样性，这与研究者选择的试验品种不同有关，由于品种间差异造成了结论各异。因此，有必要针对红掌不同品种进行离体组织培养与植株再生技术的研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种脱分化、再分化及增殖培养效率高，适用于现行红掌盆栽品种离体组织形成再生植株的培养方法，能快速大量繁殖优良红掌盆栽品种。

实现本发明目的的技术方案是提供一种红掌盆栽品种的离体组织培养方法，包括如下步骤：

1、外植体选择：取展叶5～10 d的叶片、未展开叶的叶柄、初花5～8 d的花序、佛焰苞片、以及侧芽为外植体材料，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；

2、外植体灭菌：将清洗过的叶片、叶柄和佛焰苞片外植体材料，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min；将清洗过的花序和侧芽外植体材料，先经体积浓度为70%～75%的酒精处理10～20s，再用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理6～12 min，无菌水冲洗5～6次；

3、初代培养：将灭菌后的外植体材料接种于培养基中，培养温度22～26℃，光照12～14 h/d，光强1500～2000 lx，经40～60 d后形成具有分化能力的愈伤组织；

4、愈伤组织继代与不定芽分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织，继代培养1～2次后，每次为25～30 d，愈伤组织分化产生不定芽；

5、试管苗的增殖培养：以2～4芽带愈伤组织的不定芽丛，接种至试管苗增殖培养基，30～40 d后，试管苗生长良好，株高达到2～4cm，并伴有少量气生根产生，平均每次继代1瓶可转接3～4瓶；

6、生根培养：将株高3 cm以上、具3～4叶的试管苗，转入生根培养基，25～30 d后获得完整根系的再生植株。

用于叶片愈伤组织诱导时，步骤3所述的培养基包括：基本培养基1/2MS+0.5～5.0 mg/L的玉米素+0.1～1.0 mg/L的 2,4-二氯苯氧乙酸+质量浓度为2～3%的蔗糖，pH 为5.6～5.8。用于叶柄愈伤组织诱导时，步骤3所述的培养基包括：基本培养基1/2 MS+0.5～6.0 mg/L的噻苯隆+0.1～1.0 mg/L 的2,4-二氯苯氧乙酸+质量浓度为2～3%的蔗糖，pH 为5.6～5.8。

步骤5所述的试管苗增殖培养基包括：基本培养基1/2 MS+0.5～3.0 mg/L 的6-苄基腺嘌呤+0.1～1.0 mg/L的α-萘乙酸+100～150 mg/L的水解酪蛋白+质量浓度为2～3%的蔗糖， pH 为5.6～5.8。

步骤6所述的生根培养基包括：基本培养基1/2 MS+ 0.1～1.0 mg/L的α-萘乙酸+300～1000 mg/L的活性炭， pH为5.6～5.8。

与现有技术相比，本发明技术通过诱导叶片、叶柄等脱分化形成愈伤组织，进而诱导分化不定芽丛的途径，高效稳定地获得再生植株，实现了优良红掌盆栽品种的快速大量繁殖，并针对不同品种的特点，筛选了合适的外植体材料及其培养基条件。本发明的效果主要体现在脱分化、再分化及增殖培养的高效率上，适用于现行优良红掌盆栽品种。具体表现为脱分化出愈率高，最高可达94.12%；不定芽分化率高，最高可达86.67%；不定芽分化数多，每块愈伤组织最多可分化18.2个，一般都可达到4～8个；增殖培养的繁殖系数可达3～5；试管苗成活率可达95%以上。因此，在优良红掌盆栽品种的组培快繁中具有良好应用价值。

具体实施方式

实施例1：

选取红掌盆栽品种展叶5 d的叶片、未展开叶的叶柄为外植体，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；将清洗过的叶片、叶柄，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min，无菌水冲洗5～6次。在超净工作台内，将叶片外植体接种于培养基1/2 MS+ TDZ 2.0 mg/L+ 2,4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖，叶柄外植体接种于培养基1/2 MS+ TDZ 4.0 mg/L+ 2,4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖；光照12 h/d，光强2000 lx。培养30 d后，叶柄切口两端膨大，产生黄绿色愈伤组织，出愈率为41.67%，继续培养60 d后，平均每块愈伤组织分化不定芽数为5；叶片培养50 d后产生愈伤组织，切口边缘产生黄绿色愈伤组织，出愈率达到90%，继续培养60 d后，平均每块愈伤组织分化不定芽数为18.2个。当不定芽丛苗高2～3 cm时，转入试管苗继代培养基1/2 MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.3 mg/L +CH 100 mg/L+2%蔗糖，45～60 d后，试管苗繁殖系数达到14；生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1mg/L+活性炭500mg/L，生根率为100%。

实施例2：

选取红掌盆栽品种展叶5 d的叶片、未展开叶的叶柄为外植体，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；将清洗过的叶片、叶柄，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min，无菌水冲洗5～6次。在超净工作台内，将叶片、叶柄外植体接种于培养基1/2MS+ TDZ 4.0 mg/L+ 2,4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖，光照12 h/d，光强2000 lx。培养30 d后，叶柄切口两端膨大，产生黄绿色愈伤组织，出愈率为87.5%，继续培养60 d后，平均每块愈伤组织分化不定芽数为12。叶片在培养50 d后产生愈伤组织，切口边缘产生黄绿色愈伤组织，出愈率达到80%，继续培养60 d后，平均每块愈伤组织分化不定芽数为2.4。在继代培养过程中，以2-4芽带愈伤组织的外植体，转入试管苗继代培养基1/2 MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ IBA 0.3mg/L +CH 100 mg/L+2%蔗糖，45～60 d后，增殖系数为14.4，生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1mg/L+活性炭300 mg/L，生根率为96%。

实施例3：

选取红掌盆栽品种展叶8 d的叶片、未展开叶的叶柄为外植体，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；将清洗过的叶片、叶柄，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min，无菌水冲洗5～6次。将叶片、叶柄外植体接种于培养基1/2 MS+ ZT 2.0 mg/L+ 2,4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖，光照12 h/d，光强2000 lx。培养30 d后，叶柄切口两端膨大，产生黄绿色愈伤组织，出愈率为45.83%，叶片在培养50 d后产生愈伤组织，切口边缘产生黄绿色愈伤组织，出愈率达到59.34%。继续培养60 d，叶片外植体再分化不定芽，平均每块愈伤组织分化不定芽数为2.6，叶柄无不定芽分化。试管苗继代培养基1/2 MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.3 mg/L +YE 50mg/L+2%蔗糖，45～60 d继代一后，增殖系数为8。生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1mg/L+活性炭500 mg/L，生根率为100%。

实施例4：

选取红掌盆栽品种展叶8 d的叶片、未展开叶的叶柄为外植体，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；将清洗过的叶片、叶柄，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min，无菌水冲洗5～6次。将叶片外植体接种于上述培养基1/2 MS+ ZT 2.0 mg/L+ 2,4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖+PVP 300 mg/L，叶柄外植体接种于培养基1/2 MS+ TDZ 2.0 mg/L+ 2,4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖，光照12 h/d，光强2000 lx。培养30 d后，叶柄切口两端膨大，产生黄绿色愈伤组织，出愈率为50%，继续培养愈伤组织无不定芽分化。叶片在培养50 d后产生愈伤组织，切口边缘产生黄绿色愈伤组织，出愈率为79.63%。继续培养60 d后，叶片产生的愈伤组织分化不定芽，平均每块愈伤组织分化不定芽数为5.4个。试管苗增殖阶段选用培养基1/2 MS+ 6-BA 1.0mg/L+ NAA 0.5mg/L +CH 100 mg/L+2%蔗糖，45～60 d后，增值系数为10。生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1mg/L+活性炭1000 mg/L,生根率为100%。

Claims

1.红掌盆栽品种的离体组织培养方法，其特征在于包括如下步骤：

1）外植体选择：取展叶5～10 d的叶片、未展开叶的叶柄、初花5～8 d的花序、佛焰苞片、以及侧芽为外植体材料，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；

2）外植体灭菌：将清洗过的叶片、叶柄和佛焰苞片外植体材料，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min；将清洗过的花序和侧芽外植体材料，先经体积浓度为70%～75%的酒精处理10～20s，再用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理6～12 min，无菌水冲洗5～6次；

3）初代培养：将灭菌后的外植体材料接种于培养基中，培养温度22～26℃，光照12～14 h/d，光强1500～2000 lx，经40～60 d后形成具有分化能力的愈伤组织；

4）愈伤组织继代与不定芽分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织，继代培养1～2次后，每次为25～30 d，愈伤组织分化产生不定芽；

5）试管苗的增殖培养：以2～4芽带愈伤组织的不定芽丛，接种至试管苗增殖培养基，30～40 d后，试管苗生长良好，株高达到2～4cm，并伴有少量气生根产生，平均每次继代1瓶可转接3～4瓶；

6）生根培养：将株高3 cm以上、具3～4叶的试管苗，转入生根培养基，25～30 d后获得完整根系的再生植株。

2.根据权利要求书1所述的红掌盆栽品种的离体组织培养方法，其特征在于：步骤3所述的培养基，用于叶片愈伤组织诱导的培养基包括：基本培养基1/2MS+0.5～5.0 mg/L的玉米素+0.1～1.0 mg/L的 2,4-二氯苯氧乙酸+质量浓度为2～3%的蔗糖，pH 为5.6～5.8。

3.根据权利要求书1所述的红掌盆栽品种的离体组织培养方法，其特征在于：步骤3所述的培养基，用于叶柄愈伤组织诱导的培养基包括：基本培养基1/2 MS+0.5～6.0 mg/L的噻苯隆+0.1～1.0 mg/L 的2,4-二氯苯氧乙酸+质量浓度为2～3%的蔗糖，pH 为5.6～5.8。

4.根据权利要求书1所述的红掌盆栽品种的离体组织培养方法，其特征在于：步骤5所述的试管苗增殖培养基包括：基本培养基1/2 MS+0.5～3.0 mg/L 的6-苄基腺嘌呤+0.1～1.0 mg/L的α-萘乙酸+100～150 mg/L的水解酪蛋白+质量浓度为2～3%的蔗糖， pH 为5.6～5.8。

5.根据权利要求书1所述的红掌盆栽品种的离体组织培养方法，其特征在于：步骤6所述的生根培养基包括：基本培养基1/2 MS+ 0.1～1.0 mg/L的α-萘乙酸+300～1000 mg/L的活性炭， pH为5.6～5.8。