CN1623372A - 一种盆栽红掌苗组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种盆栽红掌苗组培快繁方法,旨在提供一种繁殖速度快、成本低的盆栽红掌苗组培快繁方法。该方法是将红掌嫩叶消毒处理后在加有BA和2,4-D的预处理液中进行预处理,再切块并成批接种于加有6-BA、2.4-D的改良MS诱导培养基上诱导出愈伤组织,将诱导出愈伤组织的叶片切块再置于加有BA、NAA的改良MS或加有TDZ的改良MS分化培养基上分化出不定芽,再将不定芽置于加有6-BA的1/2MS或加有TDZ及活性炭的1/2MS增殖培养基上增殖培养成生根无菌苗,再将无菌苗在适宜条件下进行驯化移栽即可,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分。本发明应用于花卉繁殖领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种盆栽红掌苗组培快繁方法。
背景技术
以前采用的切割扦插进行繁殖的方法,一株红掌一年只能繁殖出3~4株,因其繁殖系数低,远不能满足市场需求。因此,目前盆栽红掌的繁殖方法多采用组织培养法,它是一种利用植物细胞的全能性,离体培养植物小块组织,进行植物无性系快繁的工厂化育苗技术,具体工艺是:切下红掌的幼嫩叶片,先诱导出愈伤组织,再分化出不定芽,再培育成可以移栽驯化的壮苗。一般情况下此过程需要6个月以上,而且需要较高的生产成本(包括培养基成本和培养条件耗费等)。所以现有的盆栽红掌苗繁殖技术仍存在以下缺陷:繁殖速度较慢、成本较高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种繁殖速度快、成本低的盆栽红掌苗组培快繁方法。
本发明所采用的技术方案是:本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2~5天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中升汞处理7~8分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为23~27℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长30~60天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS或加有TDZ 0.02mg/l的改良MS;
(2)培养温度为23~27℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有6-BA 0.1~0.5mg/l的1/2MS或加有TDZ0.01~0.02mg/l及0.3%的活性炭的1/2MS;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2~4厘米、最大叶宽0.7~0.9厘米且带有2~3条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为20~28℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为85~95%。
本发明的有益效果是:由于本发明采用加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D0.1mg/l的改良MS作为诱导培养基,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分,并且在将叶片切块接种于所述诱导培养基上前先用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理20分钟,所以可以有效促进红掌叶片愈伤组织的诱导率并缩短诱导时间;由于本发明利用加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS或加有TDZ 0.02mg/l的改良MS作为分化培养基,所以可以提高愈伤组织快速分化出不定芽;又由于本发明采用加有6-BA 0.1~0.5mg/l的1/2MS或加有TDZ 0.01~0.02mg/l及0.3%的活性炭的1/2MS作为增殖培养基,不定芽在这两种培养基上都能旺盛增殖,且增殖培养中无菌苗都能形成气生根,具有吸收功能,可以直接用于驯化移栽,所以增殖培养快速。本发明通过缩短诱导及增殖培养的时间、简化培养条件或培养方式等工艺,可以降低生产成本,提高商品化生产的效率和利润,因此用本发明的盆栽红掌苗组培快繁方法繁殖速度快、成本低。
具体实施方式
实施例一:
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理7分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用,将叶片浸入无菌水中,是为了防止叶片褐化;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中,以待成批接入培养皿中;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为23℃,在连续黑暗条件下诱导愈伤组织的形成,愈伤组织在黑暗条件下诱导和生长60天后,随后逐渐增加光照,靠近叶柄的叶片基部比较容易诱导愈伤组织,生长30天后,可以在叶片边缘诱导出愈伤组织。
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS;
(2)培养温度为23℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有6-BA 0.1mg/l的1/2MS;增殖培养中无菌苗都能形成气生根,具有吸收功能,可以直接用于驯化移栽;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2厘米、最大叶宽0.7厘米且带有2条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为20℃并注意遮荫以保持弱光条件弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为85%,30天成活率可达95%以上。
本发明通过缩短诱导及增殖培养的时间、简化培养条件或培养方式等工艺,可以降低生产成本,提高商品化生产的效率和利润,因此用本发明的盆栽红掌苗组培快繁方法繁殖速度快、成本低。
实施例二:
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开5天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理8分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为27℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长60天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS;
(2)培养温度为27℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有6-BA 0.5mg/l的1/2MS;在添加0.1mg/l的6-BA培养基上,植株高度高于0.5mg/l的6-BA,但增殖系数低于BA 0.5mg/l;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高4厘米、最大叶宽0.9厘米且带有3条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为28℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为95%。
其余特征同实施例一。
实施例三:
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开4天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理7分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为25℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长45天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS;
(2)培养温度为25℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有6-BA 0.3mg/l的1/2MS;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高3厘米、最大叶宽0.8厘米且带有2条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为24℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为90%。
其余特征同实施例一。
实施例四:
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理7分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为23℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长30天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有TDZ 0.02mg/l的改良MS;
(2)培养温度为25℃、光照为每天12小时;
添加TDZ的分化培养基分化效果较好,30天就可以诱导大部分愈伤组织分化。
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有TDZ 0.01mg/l及0.3%的活性炭的1/2MS,添加TDZ增殖较旺盛,而且植株生长较快,此外增殖培基中添加0.3%的活性炭可以改善植株的生长状态,起到壮苗培养的目的。
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2厘米、最大叶宽0.7厘米且带有2条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(5)保持温度为20℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为85%。
其余特征同实施例一。
实施例五:
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开5天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理8分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为27℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长60天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有TDZ 0.02mg/l的改良MS;
(2)培养温度为27℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有TDZ 0.02mg/l及0.3%的活性炭的1/2MS;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高4厘米、最大叶宽0.9厘米且带有3条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为28℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为95%。
其余特征同实施例四。
实施例六:
本发明盆栽红掌苗组培快繁方法包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开4天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理8分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA 2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为25℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长45天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有TDZ 0.02mg/l的改良MS;
(2)培养温度为25℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有TDZ 0.015mg/l及0.3%的活性炭的1/2MS;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高3厘米、最大叶宽0.8厘米且带有3条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为24℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为90%。
其余特征同实施例四。
Claims (1)
1、一种盆栽红掌苗组培快繁方法,其特征在于:它主要包括以下步骤:
(一)愈伤组织的诱导
(1)取红掌完全展开2~5天的幼嫩叶片作为外殖体;
(2)将所述叶片先用75%酒精处理15秒、再在0.1%升汞溶液中处理7~8分钟取出,用无菌水冲洗5次后浸入无菌水中备用;
(3)将升汞处理后的所述叶片用加有BA2.5mg/l和2,4-D 2.0mg/l的预处理液处理叶片20分钟;
(4)将预处理后的所述叶片切成0.6cm×0.6cm的叶片切块,将所述叶片切块放入无菌水中备用;
(5)将所述叶片切块并成批接种于诱导培养基上进行培养,接种时保持所述叶片切块的叶面向上,所述诱导培养基为加有6-BA 1.0mg/l、2.4-D 0.1mg/l的改良MS,所述改良MS为1/2MS大量元素和常量其他MS成分;
(6)培养温度为23~27℃,先在连续黑暗条件下诱导60天,随后逐渐增加光照再生长30~60天,即可在所述叶片切块的边缘诱导出愈伤组织;
(二)不定芽的诱导和分化
(1)将诱导出的所述愈伤组织置于分化培养基上诱导分化出不定芽,所述分化培养基为加有BA 0.5mg/l、NAA 0.1mg/l的改良MS或加有TDZ 0.02mg/l的改良MS;
(2)培养温度为23~27℃、光照为每天12小时;
(三)无菌苗的增殖培养
将分化出的所述不定芽置于增殖培养基上增殖培养出生根的无菌苗,所述增殖培养基为加有6-BA0.1~0.5mg/l的1/2MS或加有TDZ0.01~0.02mg/l及0.3%的活性炭的1/2MS;
(四)无菌苗的驯化移栽
(1)当所述无菌苗长至株高2~4厘米、最大叶宽0.7~0.9厘米且带有2~3条粗壮根是即可进行移栽驯化;
(2)移栽前一周打开瓶盖以使所述无菌苗逐步适应外界条件;
(3)洗净所述无菌苗根部琼脂并移栽入泥炭土与珍珠岩比例为4∶1的基质内;
(4)保持温度为20~28℃、弱光条件,移栽后的第一周用薄膜覆盖,控制湿度为85~95%。
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