CN1586176A - 一种薰衣草组织培养方法 - Google Patents
一种薰衣草组织培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1586176A CN1586176A CN 200410085334 CN200410085334A CN1586176A CN 1586176 A CN1586176 A CN 1586176A CN 200410085334 CN200410085334 CN 200410085334 CN 200410085334 A CN200410085334 A CN 200410085334A CN 1586176 A CN1586176 A CN 1586176A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lavender
- callus
- culture
- medium
- days
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000178870 Lavandula angustifolia Species 0.000 title claims abstract description 71
- 235000010663 Lavandula angustifolia Nutrition 0.000 title claims abstract description 71
- 239000001102 lavandula vera Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 235000018219 lavender Nutrition 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims 8
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 71
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 13
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 33
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 25
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 25
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 9
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 6
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 3
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims 3
- 239000006160 differential media Substances 0.000 claims 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 abstract description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 5
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 5
- 239000000171 lavandula angustifolia l. flower oil Substances 0.000 description 4
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 241001529749 Lavandula Species 0.000 description 2
- 235000002997 Lavandula Nutrition 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 2
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 1
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明涉及一种薰衣草组织培养方法，该方法根据植物叶片再生原理，以叶片为外植体，建立生长迅速的愈伤组织悬浮系，进而建立高频稳定再生体系。本发明采用固体—液体悬浮—固体培养的方法，提供了一种薰衣草离体快繁的方法，是在MS培养基上培养薰衣草叶片，建立生长迅速的愈伤组织悬浮培养体系，最后再生薰衣草幼苗，得到薰衣草无性系。本发明薰衣草芽分化率可达92.5％，生根率可达100％。与固体培养相比，本发明不仅能够提高愈伤组织生长速度和芽分化率，而且具有操作简便，劳动量少和劳动强度小，接种量大的特点，为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及植物组织培养技术，具体地说是一种薰衣草组织培养方法。
背景技术
薰衣草(Lavandula angustifolia，cv.Munstead)是唇形科薰衣草属多年生半灌木，有强烈芳香气味，原产于地中海。其生长迅速，根系发达，喜光耐旱，适合在广袤的干旱地区种植。薰衣草油是从薰衣草的全草经提炼得到的，具有安宁镇静、洁净心身、清热解毒、散淤消肿、超风发汗之效，广泛应用于医药、食品、饮料、烟草、牙膏、化妆品、香皂、洗涤剂、消毒剂和其它加香产品等工业领域。近年来，薰衣草油的需求量日益剧增。野生的薰衣草因生态环境受到严重破坏，日益减少，远远不能满足市场需求。新疆是薰衣草的种植基地，其种植面积占全国的95％以上，但目前生产上栽培的都是60年代育成的老品种，退化严重，薰衣草油质量严重下降，影响了其国际竞争力。此外，薰衣草不能度过新疆等干旱地区严寒的冬天，使得薰衣草的生产成本大大提高。因此，为了促进薰衣草种植业的发展，追求低成本，高品质和高效益，开发新的繁育方式，引进新的优良品种，已成为当今薰衣草市场发展的热点问题。运用细胞工程手段，通过植物组织培养方法快速繁殖薰衣草，可以固定杂种优势，保持品种特异性。利用薰衣草组织在合适的培养基上进行离体繁殖，可加速品种繁殖速度，快速扩大种质资源，保持优良品种的性状，用较少的空间，较少个体和时间获得遗传上与亲本植株相同的大量再生无毒苗。这种繁殖方式为薰衣草的产业化发展开拓了一条有效途径，其经济效益和社会效益是巨大的。此外，组织培养技术结合转基因技术，可以提高薰衣草抗旱抗寒的能力，改善薰衣草油的质量，从而降低生产成本，提高经济效益。组培快繁转基因薰衣草的关键是建立高效的受体系统如愈伤组织和植株高频再生系统。目前，薰衣草组织培养已有少量报道，C.Sudria等通过茎尖培养获得了薰衣草(Lavandula dentate L.)的再生植株(Plant Cell，Tissue and Organ Culture，1999，58)，Jordan AM等通过茎段培养获得了薰衣草(Lavandula dentate L.)的再生植株(Biotech，1998，73(1))，但通过愈伤组织悬浮培养进而分化出芽而获得再生植株的研究国内外尚未见报。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效的薰衣草组织培养方法，为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定基础。经过大量的实验研究，根据植物叶片再生原理，发明了以叶片为外植体，建立生长迅速的愈伤组织悬浮系，进而建立高频稳定再生体系。本发明采用固体—液体悬浮—固体培养的方法，提供了一种薰衣草离体快繁的方法，是在MS培养基上培养薰衣草叶片，建立生长迅速的愈伤组织悬浮培养体系，最后再生薰衣草幼苗，得到薰衣草无性系。本发明薰衣草芽分化率可达92.5％，生根率可达100％。与固体培养相比，本发明不仅能够提高愈伤组织生长速度和芽分化率，而且具有操作简便，劳动量少和劳动强度小，接种量大的特点，其发展前景十分看好。
本发明所述的一种薰衣草组织培养方法，按下列步骤进行：
a、选择一年生薰衣草幼嫩叶片为外植体，先用75％酒精表面灭菌15-25秒，再用0.1％升汞溶液浸泡2-5分钟，然后用无菌水冲洗至干净，切割成片状，将其接入琼脂固化MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA 0.5mg/L的愈伤组织诱导培养基，15-25天后，得到愈伤组织；
b、将新鲜、松散的愈伤组织接入液体培养基MS+2，4-D 0.01-0.1mg/L+6-BA 0.5-1.0mg/L，在25±1℃、无光、100r/min的条件下振荡培养14-18天，建立了生长迅速的薰衣草愈伤组织悬浮培养体系；
c、将愈伤组织从液体培养基中取出，接入琼脂固化MS+NAA 0.1-0.5mg/L+6-BA 2.0-3.0mg/L的芽分化培养基，35-40天后，得到薰衣草分化组培苗；
d、将分化出的组培苗接种到琼脂固化MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L的芽继代培养基，进行继代培养，15-20天，得到大量的组培苗；
e、在1/2 MS+IAA 0.2-0.5mg/L+6-BA 0-0.1mg/L+1.0g/L活性炭的固体培养基上，对组培苗进行生根培养，35-45天，形成生根小植株。
所选的薰衣草叶片是具有25-35天苗龄的幼嫩叶片，将其切割成0.2-0.7cm2的小片状，背面朝下进行接种。
固体培养的条件是2500-3500lx日光灯照射，光照10-15h/d，25±1℃下培养，湿度保持65±5％。
固体培养接种量是100mL三角瓶3-5个外植体，每个三角瓶含35-45mL琼脂固化的培养基。
再生的组培苗长到3-6cm，转到琼脂固化的生根培养基上进行生根。
固体培养基需添加琼脂0.5％-0.6％。
液体培养愈伤组织接种量是25-75g/L，250mL三角瓶含100mL液体培养基。
本发明所述的一种薰衣草组织培养方法，根据本发明中的方法与固体培养相比，愈伤组织的生长速度可提高3-4倍，芽分化率可提高60％-70％，继代培养时的接种量可提高2-3倍。此外，本发明的培养周期可相应的减少1-4个月。由此，就可以低成本的大规模的繁殖薰衣草苗。
以下将本发明方法与传统固体培养方法的主要区别概括如表1
表1
方法 接种量 生长速率 芽分化率 芽数/外植 劳动量 培养周期
体
固体 少 慢 低 少 多 长
培养 固体继代培 固体继代培 愈伤组织不继代， 0.9～1.6 加琼脂、化胶 固体继代培养
养最适接量 养愈伤组织 芽不分化，继代培 个芽/外植 操作烦琐，费时 每代25～30
是12.5g/L 生长速率最 养2～4代，芽分化 体 费力，培养基分 天，2～4代
大达5.84 率可达57.5％ 装费时费力 50～120d，整
g/L·d 个周期5～7月
本发 多 快 高 多 少 短
明 液体悬浮培 液体悬浮培 液体悬浮培养12～ 1.8～2.6 液体悬浮培养 液体悬浮培养
养最适接种 养愈伤组织 18d，转接至固体 个芽/外植 减少了加琼脂 12～18d，整个
量是50g/L 生长速率最 分化培养基，芽分 体 、化胶这一工 周期3～4月
大达24.14 化率可达92.5％ 序，培养液分装
g/L·d 简便
附图说明
图1为本发明在液体培养基中所形成的愈伤组织悬浮培养体系的图；
图2为本发明在三角瓶中培养基上分化组培苗的图；
图3为本发明所得的生根小植株的图；
图4为本发明所得的移栽至花盆的生根小植株的图。
本发明要建立悬浮系必须先获得愈伤组织；选择具有25-35天苗龄的薰衣草幼嫩叶片为外植体，将叶片先用75％酒精表面灭菌15-25秒，再用0.1％升汞溶液浸泡2-5分钟，然后用无菌水冲洗至干净，把叶片切成0.2-0.7cm2左右的小片状，接入琼脂固化MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA 0.5mg/L的愈伤组织诱导培养基，15-25天后，得到愈伤组织；挑取新鲜、松散的愈伤组织以25-75g/L的接种量接入含100mL液体培养基MS+2，4-D 0.01-0.1mg/L+6-BA 0.5-1.0mg/L的250mL三角瓶中，在(25±1)℃、无光、100r/min的条件下振荡培养14-18天，建立了生长迅速的薰衣草愈伤组织悬浮培养体系(图1)；
将愈伤组织从液体培养基中取出，接入琼脂固化MS+NAA 0.1-0.5mg/L+6-BA 2.0-3.0mg/L的芽分化培养基，35-40天后，得到薰衣草分化组培苗(图2)；
把分化出的组培苗接种到琼脂固化MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L的芽继代培养基，进行继代培养，15-20天，得到大量的组培苗；在1/2MS+IAA 0.2-0.5mg/L+6-BA 0-0.1mg/L+1.0g/L活性炭的固体培养基上，对3-6cm以上分化组培苗进行生根培养，35-45天，形成生根小植株(图3)。
固体培养的培养条件是，2500-3500lx日光灯照射，光照12h/d，(25±1)℃下培养，湿度保持(65±5)％。
培养基需添加蔗糖1.5-3.0％，琼脂0.5％-0.6％，并调pH值5.80-5.90。
固体培养接种量是100mL三角瓶3-5个外植体，每个三角瓶含40mL琼脂固化的培养基。
具体实施方式
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但不能解释为本发明被下面这些实施例所限制。
实施例1
愈伤组织诱导
实验材料：薰衣草(Lavandula angustifolia，cv.Munstead)种苗，法国引进新品种，取叶片为外植体。
a、选择一年生薰衣草嫩叶片为外植体，具体选择具有25天苗龄的薰衣草幼嫩叶片，将叶片先用75％酒精表面灭菌15秒，再用0.1％升汞溶液浸泡2min，然后用无菌水冲洗至干净，把叶片切成0.2cm2的小片状，接入含0.5％琼脂的愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA0.5mg/L，在光照2500lx、光照时间10h/d、(25±1)℃、湿度(65±5)％的条件下培养15天，叶片全部出现愈伤组织，诱导率达到100％，所出愈伤组织大多为质地致密、绿色或浅绿色愈伤组织，少部分为黄色、疏松的愈伤组织，黄色、疏松愈伤组织的比例为20％。
愈伤组织悬浮系的建立
b、将新鲜、松散的愈伤组织以25g/L的接种量接入含100mL液体培养基MS+2，4-D 0.01mg/L+6-BA 0.5mg/L的250mL三角瓶中，在25±1℃、无光、100r/min的条件下振荡培养14天，建立了生长迅速的薰衣草愈伤组织悬浮培养体系，其生长速率可达18.68g/L·d(愈伤组织生长速率＝(该接种量下第14天的收获量-接种量)/(每瓶培养液体积×14)，单位g/L·d)。
芽分化和芽继代
c、将光滑、颗粒状的愈伤组织从液体培养基中取出，接入含0.5％琼脂的芽分化培养基MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L，35天，大部愈伤组织可分化，芽分化率85.0％；
d、把分化出的组培苗接种到含0.5％琼脂的芽继代培养基MS+NAA2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L，进行继代培养，15天，可得到大量的组培苗。
培养条件为：光照2500lx、光照时间12h/d、(25±1)℃、湿度(65±5)％。
分化组培苗生根与移栽
e、挑取生长健壮，长度3cm的分化组培苗接入含0.5％琼脂的生根培养基1/2MS+IAA 0.2mg/L+1.0g/L活性炭，35天形成生根小植株，生根率可达100％。生根苗取盖炼苗2天，即可移栽到室内花盆，注意保湿，成活率可达100％，半个月可长出新的小叶，表明移栽成活，此时可移入地里种植。
实施例2
愈伤组织诱导
实验材料：薰衣草(Lavandula angustifolia，cv.Munstead)种苗，法国引进新品种，取叶片为外植体。
a、选择一年生薰衣草嫩叶片为外植体，具体选择具有30天苗龄的薰衣草幼嫩叶片，将叶片先用75％酒精表面灭菌20秒，再用0.1％升汞溶液浸泡3min，然后用无菌水冲洗至干净，把叶片切成0.5cm2的小片状，接入含0.5％琼脂的愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA0.5mg/L，在光照3500lx、光照时间12h/d、(25±1)℃、湿度(65±5)％的条件下培养20天，叶片全部出现愈伤组织，诱导率达到100％，所出愈伤组织大多为质地致密、绿色或浅绿色愈伤组织，少部分为黄色、疏松的愈伤组织，黄色、疏松愈伤组织的比例为38％。
愈伤组织悬浮系的建立
b、将新鲜、松散的愈伤组织以50g/L的接种量接入含100mL液体培养基MS+2，4-D 0.05mg/L+6-BA 0.5mg/L的250mL三角瓶中，在25±1℃、无光、100r/min的条件下振荡培养15天，建立了生长迅速的薰衣草愈伤组织悬浮培养体系。在该液体培养基中，愈伤组织生长较快，质量最好，其生长速率可达24.14g/L·d(愈伤组织生长速率＝(该接种量下第14天的收获量-接种量)/(每瓶培养液体积×14)，单位g/L·d)。
芽分化和芽继代
c、将光滑、颗粒状的愈伤组织从液体培养基中取出，接入含0.5％琼脂的芽分化培养基MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0mg/L，40天，大部愈伤组织可分化，芽分化率92.5％；
d、把分化出的组培苗接种到含0.5％琼脂的芽继代培养基MS+NAA2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L，进行继代培养，20天，可得到大量的组培苗。
培养条件为：光照3500lx、光照时间12h/d、(25±1)℃、湿度(65±5)％。
分化组培苗生根与移栽
e、挑取生长健壮，长度超过5cm的分化组培苗接入含0.5％琼脂的生根培养基1/2 MS+IAA 0.5mg/L+1.0g/L活性炭，40天形成生根小植株，生根率可达100％。生根苗取盖炼苗3天，即可移栽到室内花盆，注意保湿，成活率可达100％，半个月可长出新的小叶，表明移栽成活，此时可移入地里种植。
实施例3
愈伤组织诱导
实验材料：薰衣草(Lavandula angustifolia，cv.Munstead)种苗，法国引进新品种，取叶片为外植体。
a、选择一年生薰衣草嫩叶片为外植体，具体选择具有35天苗龄的薰衣草幼嫩叶片，将叶片先用75％酒精表面灭菌25秒，再用0.1％升汞溶液浸泡5min，然后用无菌水冲洗至干净，把叶片切成0.7cm2的小片状，接入含0.6％琼脂的愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA0.5mg/L，在光照3500lx、光照时间15h/d、(25±1)℃、湿度(65±5)％的条件下培养25天，叶片全部出现愈伤组织，诱导率达到100％，所出愈伤组织大多为质地致密、绿色或浅绿色愈伤组织，少部分为黄色、疏松的愈伤组织，黄色、疏松愈伤组织的比例为30％。
愈伤组织悬浮系的建立
b、将新鲜、松散的愈伤组织以75g/L的接种量接入含100mL液体培养基MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L的250mL三角瓶中，在25±1℃、无光、100r/min的条件下振荡培养18天，建立了生长迅速的薰衣草愈伤组织悬浮培养体系，其生长速率可达20.38g/L·d(愈伤组织生长速率＝(该接种量下第14天的收获量-接种量)/(每瓶培养液体积×14)，单位g/L·d)。
芽分化和芽继代
c、将光滑、颗粒状的愈伤组织从液体培养基中取出，接入含0.6％琼脂的芽分化培养基MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 3.0mg/L，40天，大部愈伤组织可分化，芽分化率82.5％；
d、把分化出的组培苗接种到含0.6％琼脂的芽继代培养基MS+NAA2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L，进行继代培养，20天，可得到大量的组培苗。
培养条件为：光照3500lx、光照时间12h/d、(25±1)℃、湿度(65±5)％。
分化组培苗生根与移栽
e、挑取生长健壮，长度超过6cm的分化组培苗接入含0.6％琼脂的生根培养基1/2MS+IAA 0.5mg/L+6-BA 0.1mg/L+1.0g/L活性炭，45天形成生根小植株，生根率可达100％。生根苗取盖炼苗3天，即可移栽到室内花盆，注意保湿，成活率可达100％，半个月可长出新的小叶，表明移栽成活，此时可移入地里种植。
根据本发明中的方法，与固体培养相比，愈伤组织的生长速度可提高3-4倍，芽分化率可提高60％～70％，继代培养时的接种量可提高2-3倍。此外，本发明的培养周期可相应的减少1-4个月。由此，就可以低成本的大规模的生长薰衣草苗。
Claims (7)
1、一种薰衣草组织培养方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、选择一年生薰衣草幼嫩叶片为外植体，先用75％酒精表面灭菌15-25秒，再用0.1％升汞溶液浸泡2-5分钟，然后用无菌水冲洗至干净，切割成片状，将其接入琼脂固化MS+2，4-D 0.1mg/L+6-BA 0.5mg/L的愈伤组织诱导培养基，15-25天后，得到愈伤组织；
b、将新鲜、松散的愈伤组织接入液体培养基MS+2，4-D 0.01-0.1mg/L+6-BA 0.5-1.0mg/L，在25±1℃、无光、100r/min的条件下振荡培养14-18天，建立了生长迅速的薰衣草愈伤组织悬浮培养体系；
c、将愈伤组织从液体培养基中取出，接入琼脂固化MS+NAA 0.1-0.5mg/L+6-BA 2.0-3.0mg/L的芽分化培养基，35-40天后，得到薰衣草分化组培苗；
d、将分化出的组培苗接种到琼脂固化MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L的芽继代培养基，进行继代培养，15-20天，得到大量的组培苗；
e、在1/2 MS+IAA 0.2-0.5mg/L+6-BA 0-0.1mg/L+1.0g/L活性炭的固体培养基上，对组培苗进行生根培养，35-45天，形成生根小植株。
2、根据权利要求1所述的一种薰衣草组织培养方法，其特征是所选的薰衣草叶片是具有25-35天苗龄的幼嫩叶片，将其切割成0.2-0.7cm2的小片状，背面朝下进行接种。
3、根据权利要求1所述的一种薰衣草组织培养方法，其特征是固体培养的条件是2500-3500lx日光灯照射，光照10-15h/d，25±1℃下培养，湿度保持65±5％。
4、根据权利要求1所述的一种薰衣草组织培养方法，其特征是固体培养接种量是100mL三角瓶3-5个外植体，每个三角瓶含35-45mL琼脂固化的培养基。
5、根据权利要求1所述的一种薰衣草组织培养方法，其特征是再生的组培苗长到3-6cm，转到琼脂固化的生根培养基上进行生根。
6、据权利要求1-5所述的一种薰衣草组织培养方法，其特征是固体培养基需添加琼脂0.5％0.6％。
7、根据权利要求1所述的一种薰衣草组织培养方法，其特征是液体培养愈伤组织接种量是25-75g/L，250mL三角瓶含100mL液体培养基。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410085334 CN1271923C (zh) | 2004-10-11 | 2004-10-11 | 一种薰衣草组织培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410085334 CN1271923C (zh) | 2004-10-11 | 2004-10-11 | 一种薰衣草组织培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1586176A true CN1586176A (zh) | 2005-03-02 |
| CN1271923C CN1271923C (zh) | 2006-08-30 |
Family
ID=34605159
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410085334 Expired - Fee Related CN1271923C (zh) | 2004-10-11 | 2004-10-11 | 一种薰衣草组织培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1271923C (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100425126C (zh) * | 2006-03-03 | 2008-10-15 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种薰衣草快速再生方法 |
| CN102823492A (zh) * | 2012-08-08 | 2012-12-19 | 中国科学院武汉植物园 | 一种薰衣草快速繁殖的方法 |
| CN102986528A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-03-27 | 云南农业大学 | 一种羽叶薰衣草的壮苗生根方法及其壮苗生根培养基 |
| CN103210904A (zh) * | 2012-11-21 | 2013-07-24 | 成都中医药大学 | 一种川芎种质的离体保存方法及川芎离体保存培养基 |
| EP3127534A1 (en) * | 2015-08-07 | 2017-02-08 | Zachodniopomorski Uniwersytet Technologiczny w Szczecinie | Oil/water cosmetic emulsion |
| CN114828820A (zh) * | 2019-12-19 | 2022-07-29 | 莱雅公司 | 非诱发去分化薰衣草植物细胞、其提取物及其美容用途 |
| CN116982555A (zh) * | 2023-08-07 | 2023-11-03 | 新疆中亚果树产业研究院有限公司 | 一种薰衣草快速生根壮苗的方法 |
-
2004
- 2004-10-11 CN CN 200410085334 patent/CN1271923C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100425126C (zh) * | 2006-03-03 | 2008-10-15 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种薰衣草快速再生方法 |
| CN102823492A (zh) * | 2012-08-08 | 2012-12-19 | 中国科学院武汉植物园 | 一种薰衣草快速繁殖的方法 |
| CN102823492B (zh) * | 2012-08-08 | 2013-10-09 | 中国科学院武汉植物园 | 一种薰衣草快速繁殖的方法 |
| CN102986528A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-03-27 | 云南农业大学 | 一种羽叶薰衣草的壮苗生根方法及其壮苗生根培养基 |
| CN103210904A (zh) * | 2012-11-21 | 2013-07-24 | 成都中医药大学 | 一种川芎种质的离体保存方法及川芎离体保存培养基 |
| CN103210904B (zh) * | 2012-11-21 | 2014-12-17 | 成都中医药大学 | 一种川芎种质的离体保存方法及川芎离体保存培养基 |
| EP3127534A1 (en) * | 2015-08-07 | 2017-02-08 | Zachodniopomorski Uniwersytet Technologiczny w Szczecinie | Oil/water cosmetic emulsion |
| CN114828820A (zh) * | 2019-12-19 | 2022-07-29 | 莱雅公司 | 非诱发去分化薰衣草植物细胞、其提取物及其美容用途 |
| CN116982555A (zh) * | 2023-08-07 | 2023-11-03 | 新疆中亚果树产业研究院有限公司 | 一种薰衣草快速生根壮苗的方法 |
| CN116982555B (zh) * | 2023-08-07 | 2024-07-19 | 新疆中亚果树产业研究院有限公司 | 一种薰衣草快速生根壮苗的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1271923C (zh) | 2006-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101258835B (zh) | 铁皮石斛优质种苗快速繁殖方法 | |
| CN105815213A (zh) | 一种猕猴桃离体再生体系的建立方法 | |
| CN101720670B (zh) | 旱半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN104012417B (zh) | 小木漆高效快速扩繁方法 | |
| CN110396495B (zh) | 喜马拉雅紫茉莉愈伤组织、增殖方法与悬浮细胞繁殖方法 | |
| CN109220791A (zh) | 一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法 | |
| CN103518625B (zh) | 琴叶榕叶片的组织培养基及离体再生方法 | |
| CN109757373A (zh) | 一种荆半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102823505B (zh) | 一种黑莓组培苗叶片高效循环再生的方法 | |
| CN101507415A (zh) | 一种棉毛鹿茸草的离体培养法 | |
| CN101194594B (zh) | 桫椤的一种繁殖方法 | |
| CN103181323A (zh) | 一种蓝莓胚状体培养方法 | |
| CN105746352B (zh) | 多肉植物巨大赤线ho1的组织培养法 | |
| CN108142283B (zh) | 一种梓叶槭的组培快繁方法 | |
| CN103340153A (zh) | 一种以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养方法 | |
| CN1271923C (zh) | 一种薰衣草组织培养方法 | |
| CN101785430A (zh) | 一项以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养技术 | |
| CN105052740A (zh) | 一种利用橡胶草叶片再生植株的方法 | |
| CN112042532B (zh) | 一种诱导彩色马蹄莲产生愈伤组织的培养基及其在建立彩色马蹄莲再生体系中的应用 | |
| CN100425126C (zh) | 一种薰衣草快速再生方法 | |
| CN111194695A (zh) | 一种美洲黑杨鲁林1号的组培快繁方法 | |
| CN111202002A (zh) | 一种赪桐的组培快繁方法 | |
| Naidu et al. | Conservation of an endangered medicinal plant Centella asiatica through plant tissue culture | |
| CN102715091A (zh) | 一种油棕组织培养的繁殖方法 | |
| CN117751845B (zh) | 一种黑峰秋海棠的组培快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060830 Termination date: 20101011 |