CN105010141A

CN105010141A - 一种红掌快速繁殖的方法

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Publication number: CN105010141A
Application number: CN201510399527.0A
Authority: CN
Inventors: 虞龙; 虞沐尧
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-07-09
Filing date: 2015-07-09
Publication date: 2015-11-04

Abstract

本发明公开了一种红掌快速繁殖的方法，选取红掌子株，在质量分数为1-5%抗氧剂中浸泡10-30min，消毒灭菌处理后接种到诱导培养基中培养，先暗培养5-10天，然后光照培养，得到红掌愈伤组织；转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度22-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；待分化出的芽长到1-2cm时，转接到生根培养基中，光照时间5-8h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-30d，得到生根红掌。本发明可以快速获得大量能稳定遗传的红掌，缩短了组培周期，提高了红掌的分化、生根率大大的节约了红掌组培成本。

Description

一种红掌快速繁殖的方法

技术领域

本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种红掌快速繁殖的方法。

背景技术

红掌，又称花烛，安祖花，系天南星科花烛属多年生附生常绿草本植物，原产于南美洲热带雨林。近年来，红掌的品质越来越高，国内市场相对稳定，市场接受越来越好，销售稳定，前景看好。1980年以来，组织培养技术得到快速发展。我国自20世纪80年代引进红掌以来，由于其独特的花型，叶形别致，被赋予“大展宏图，热情”之意。收到了广大人民的喜爱，但其核心技术一直受到国外垄断，因此价格也相当的昂贵。随着人们生活水平质量的提高，对红掌的需求也越来越大，国内很多花卉公司将注意力转入生产成品红掌，仅仅依靠进口种苗，已经不能满足国内市场的需求，红掌像其他时尚花卉一样，在改变其花形、花色，缩短生长周期，增强品种抗性等已成为目前红掌育种的主要目标。

我国对红掌组织培养的研究取得了一定进步，但是红掌在外植体接种后很容易褐化现象和污染的等问题，外植体诱导率低、不易生根，而且在培养条件，激素配比等方面说法迥异，因此探索一种适合红掌组织快殖的方法是很有必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有红掌育种技术的不足，提供一种红掌快速繁殖的方法，生长周期短，成本低，红掌观赏价值高。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种红掌快速繁殖的方法，包括如下步骤：

1）红掌的预处理：选取红掌子株，在质量分数为1-5%抗氧剂中浸泡10-30min、然后再进行消毒灭菌处理；

2）诱导培养：将步骤1）灭菌处理后的红掌子株的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养5-10天，然后光照培养，光照时间4-8h/d，光照强度500-1000lx，培养温度22-28℃，培养时间15-25d，培养得到红掌愈伤组织；

3）增殖培养：将步骤2）中诱导得到的红掌愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度22-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；

4）生根培养：待步骤3)中分化出的芽长到1-2cm时，转接到生根培养基中，光照时间5-8h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-30d，得到生根红掌。

步骤1）中抗氧化剂为抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 或者亚硫酸钠中的至少一种；

步骤1）中消毒灭菌方法为：将红掌子株在75%(体积百分比)乙醇中浸泡7-9秒，无菌水淋洗三次，在质量百分比为0.1-1%的HgCl₂浸泡3-10min，无菌水冲洗数次，洗去残留的HgCl₂。

步骤2）诱导培养基为：MS，细胞分裂素2-8mg/L ,生长激素0.2-2mg/L,活性炭1-10g/L(防止褐化)，蔗糖20-30g/L,琼脂5.5-7.0g/L，pH=5.2-5.8，其中细胞分裂素为6-糠基氨基嘌呤(KT)，6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 中的一种或两种混合，生长激素为吲哚乙酸（IAA）,萘乙酸（NAA）,2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）,吲哚丁酸（IBA）中的一种或几种混合。诱导培养基优选为：MS，细胞分裂素3-5mg/L，生长激素0.2-1mg/L, 活性炭5-10g/L(防止褐化)，蔗糖25-30g/L,琼脂5.5-6.5g/L，pH=5.2-5.8；进一步优选为：MS，细胞分裂素3-4mg/L，生长激素0.5-1.0mg/L, 活性炭5-10g/L(防止褐化)，蔗糖25-30g/L,琼脂5.5-6.0g/L，pH=5.5-5.8。

步骤3）增殖培养基为：MS，细胞分裂素0.2-6mg/L ,生长激素3-5mg/L,蔗糖20-30g/L,琼脂5.5-7.0g/L，pH=5.2-5.8，其中细胞分裂素为6-糠基氨基嘌呤(KT)，6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 中的一种或两种混合，生长激素为吲哚乙酸（IAA）,萘乙酸（NAA）,2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）,吲哚丁酸（IBA）中的一种或几种混合。增殖培养基优选为：MS，细胞分裂素0.2-5mg/L，生长激素3.2-4.0mg/L,蔗糖25-30g/L,琼脂5.5-6.5g/L，pH=5.2-5.8；进一步优选为：MS，细胞分裂素0.2-1.0mg/L，生长激素3.5-4.0mg/L,蔗糖25-30g/L,琼脂5.5-6.0g/L，pH=5.5-5.8

步骤4）生根培养基为：1/2MS，生长激素0.1-2mg/L，蔗糖15-25g/L，琼脂5.5-7.0g/L，pH=5.2-6.0，其中生长激素为吲哚乙酸（IAA）,萘乙酸（NAA），吲哚丁酸（IBA）中的一种或几种混合。生根培养基优选为：1/2MS，生长激素0.2-1mg/L，蔗糖15-20g/L，琼脂6-6.5g/L，pH=5.5-6.0；进一步优选为：1/2MS，生长激素0.8-1.2mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，pH=5.6-5.8；

诱导培养步骤优选控制条件为：将灭菌处理后的红掌子株的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养5天，然后光照培养，光照时间8h/d，光照强度1000lx，培养温度24℃，培养时间15d，培养得到红掌愈伤组织，愈伤组织诱导率达到98%；

增殖培养步骤优选控制条件为：将红掌愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度3000lx，培养温度26℃，培养时间25d，分化出芽；

生根培养步骤优选控制条件为：待分化出的芽长到1-2cm时，转接到生根培养基中，光照时间8h/d，光照强度1800lx，培养温度28℃，培养时间30d，得到生根红掌，生根率100%

有益效果：本发明提供了一种红掌快速繁殖的方法，通过对红掌的茎尖进行诱导、分化、增殖，结合对培养基及其培养条件研究，获得红掌快速繁殖的方法，该方法可以缩短红掌组培时间，最快60天就可以生根，降低成本，提高成活、分化、生根率。

具体实施方式

下面结合具体实施实例对本发明做进一步描述，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明本。

本发明中所采用的MS培养基的配方见表1。以下实施例中的百分比均为质量百分比。

实施例1

诱导培养基：MS，KT 3 mg/L , NAA 0.5mg/L, IAA 0.2 mg/L活性炭2g/L，蔗糖25g/L,琼脂6g/L.pH=5.6；

增殖培养基：MS，6-BA 0.7mg/L, NAA3mg/L,蔗糖30g/L,琼脂7g/L.pH=5.6；

生根培养基：1/2MS， NAA0.2mg/L，蔗糖15g/L，琼脂6.5 g/L，pH=5.6-5.8；

选取红掌茎尖作为外植体，在3%抗坏血酸中浸泡10min，无菌水冲洗三次，在75%乙醇中浸泡8秒，无菌水淋洗三次，在0.1% HgCl₂浸泡8min，无菌水冲洗去HgCl₂，在无菌环境下将其接种于诱导培养基中培养，先暗培养5天，然后光照培养，光照时间8h/d，光照强度1000lx，培养温度24℃，培养20d，茎尖开始产生黄绿色愈伤组织，愈伤组织诱导率达到98%，转入增殖培养基，光照时间10h/d，光照强度3000lx，培养温度26℃，培养20d平均每块愈伤组织分化7-8个不定芽，待不定芽长到1-2cm时转入生根培养基， 8h/d的光照，1700lx光照强度，28℃培养培养22d，每个不定芽都生根，生根率100%。

实施例2

诱导培养基：MS，6-BA 5 mg/L，2,4-D 1 mg/L，活性炭2 g/L，蔗糖28 g/L,琼脂6g/L，pH=5.6；

增殖培养基：MS，6-BA 0.5 mg/L，NAA3.5 mg/L,蔗糖30g/L,琼脂5.8 g/L，pH=5.6；

生根培养基：1/2MS，NAA 0.6 mg/L，蔗糖20 g/L，琼脂6 g/L，pH=5.6-5.8；

选取红掌茎尖作为外植体，在3%聚乙烯比咯烷酮中浸泡10min，无菌水冲洗三次，在75%乙醇中浸泡5秒，无菌水淋洗三次，在0.4% HgCl₂浸泡8min，无菌水冲洗去HgCl₂，在无菌环境下将其接种于诱导培养基中培养，先暗培养10天，然后光照培养，光照时间7 h/d，光照强度800lx，培养温度26℃，培养25d，茎尖开始产生黄绿色愈伤组织，愈伤组织诱导率达到96%，转入增殖培养基，光照10h/d，光照强度3300lx，26℃培养20d，平均每块愈伤组织分化7个不定芽，待不定芽长到1-2cm时转入生根培养基，光照8h/d，光照强度2000lx， 28℃培养培养25d，每个不定芽都生根，生根率100%。

实施例3

诱导培养基：MS，6-BA 3mg/L，2, 4-D 0.5mg/L, NAA 0.5mg/L, 活性炭5 g/L，蔗糖30 g/L,琼脂6 g/L.pH=5.8；

增殖培养基：MS，6-BA 0.5mg/L，NAA 4 mg/L,蔗糖28g/L,琼脂6 g/L，pH=5.6；

生根培养基：1/2MS， IAA 0.8mg/L，蔗糖25g/L，琼脂6.5 g/L，pH=5.6-5.8；

选取红掌茎尖作为外植体，在2%抗坏血酸中浸泡20min，无菌水冲洗三次，在75%乙醇中浸泡8秒，无菌水淋洗三次，在0.1% HgCl₂浸泡8min，无菌水冲洗去HgCl₂，在无菌环境下将其接种于诱导培养基中培养，先暗培养10天，然后光照培养，光照时间8h/d，光照强度800 lx，培养温度24℃，培养15 d，茎尖开始产生黄绿色愈伤组织，愈伤组织诱导率达到96%，转入增殖培养基，光照12h/d，光照强度3000lx，28℃培养20d，平均每块愈伤组织分化9个不定芽，待不定芽长到1-2cm时转入生根培养基培养，光照6h/d，光照强度1600lx，28℃培养25d，每个不定芽都生根，生根率100%。

实施例4

诱导培养基：MS，KT 3.5mg/L， IBA 0.5mg/L，活性炭2g/L，蔗糖25g/L，琼脂6g/L，pH=5.6中；

增殖培养基：MS，6-BA 0.7mg/L，NAA 3mg/L,蔗糖25g/L,琼脂7g/L，pH=5.6；

生根培养基：1/2MS，IBA0.2mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6.5 g/L，pH=5.6-5.8；

选取红掌茎尖作为外植体，在1%亚硫酸钠中浸泡15min，无菌水冲洗三次，在75%乙醇中浸泡8秒，无菌水淋洗三次，在0.5% HgCl₂浸泡3min，无菌水冲洗去HgCl₂，在无菌环境下将其接种于诱导培养基中培养，先暗培养10天，然后光照培养，光照时间8h/d，光照强度1000lx，培养温度24℃，培养15d，茎尖开始产生黄绿色愈伤组织，愈伤组织诱导率达到97%，转入增殖培养基中光照10h/d，光照强度3000lx，26℃培养25d，平均每块愈伤组织分化13个不定芽，待不定芽长到1-2cm时转入生根培养基，光照8h/d，光照强度2000lx，28℃培养时间30d中培养23d，每个不定芽都生根，生根率100%。

实施例5

诱导培养基：MS，KT 3.5mg/L, IAA 1mg/L，活性炭8g/L，蔗糖25g/L，琼脂6g/L，pH=5.6中；

增殖培养基：MS，6-BA 0.5mg/L，NAA 3.5mg/L,蔗糖30g/L,琼脂6g/L，pH=5.8；

生根培养基：1/2MS，NAA 1.2mg/L，蔗糖20g/L，琼脂7.0 g/L，pH=5.6-5.8；

选取红掌茎尖作为外植体，在3%聚乙烯比咯烷酮浸泡15min，无菌水冲洗三次，在75%乙醇中浸泡8秒，无菌水淋洗三次，在0.5% HgCl₂浸泡3min，无菌水冲洗去HgCl₂，在无菌环境下将其接种于诱导培养基中培养，先暗培养5天，然后光照培养，光照时间8h/d，光照强度1000lx，培养温度24℃，培养15d，茎尖开始产生黄绿色愈伤组织，愈伤组织诱导率达到98%，转入增殖培养基，光照12h/d，光照强度3100lx，培养温度28℃中培养20d，平均每块愈伤组织分化8个不定芽，待不定芽长到1-2cm时转入生根培养基光照时间8h/d，光照强度1700lx，培养温度23℃中培养23d，每个不定芽都生根，生根率100%。

上述实施例中所用MS培养基配方见表1，1/2MS培养基由MS培养基中各组分浓度减半即可。

表1：

Claims

1.一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）红掌的预处理：选取红掌子株，在质量分数为1-5%抗氧剂中浸泡10-30min，然后再进行消毒灭菌处理；

2.根据权利要求1所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤1）中所述抗氧化剂为抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮或者亚硫酸钠中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤1）中所述消毒灭菌方法为：将红掌子株在75%乙醇中浸泡7-9秒，无菌水淋洗三次，在HgCl₂中浸泡3-10min，无菌水冲洗至无HgCl₂残留。

4.根据权利要求1所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤2）中诱导培养基为：MS，细胞分裂素2-8mg/L，生长激素0.2-2mg/L，活性炭1-10g/L，蔗糖20-30g/L，琼脂5.5-7.0g/L，pH=5.2-5.8，其中细胞分裂素为6-糠基氨基嘌呤，6-苄基氨基嘌呤中的一种或两种混合，生长激素为吲哚乙酸，萘乙酸，2,4-二氯苯氧乙酸，吲哚丁酸中的一种或几种混合。

5.根据权利要求1所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤3）增殖培养基为：MS，细胞分裂素0.2-6mg/L ，生长激素3-5mg/L，蔗糖20-30g/L，琼脂5.5-7.0g/L，pH=5.2-5.8，其中细胞分裂素为6-糠基氨基嘌呤，6-苄基氨基嘌呤中的一种或两种混合，生长激素为吲哚乙酸，萘乙酸，2,4-二氯苯氧乙酸，吲哚丁酸中的一种或几种混合。

6.根据权利要求1所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤4）生根培养基为：1/2MS，生长激素0.1-2mg/L，蔗糖15-25g/L，琼脂5.5-7.0g/L，pH=5.2-6.0，其中生长激素为吲哚乙酸，萘乙酸，吲哚丁酸中的一种或几种混合。

7.根据权利要求3所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：HgCl₂的质量百分比为0.1-1%。

8.根据权利要求4所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤2）中诱导培养基为：MS，细胞分裂素3-5mg/L，生长激素0.2-1mg/L, 活性炭5-10g/L，蔗糖25-30g/L,琼脂5.5-6.5g/L，pH=5.2-5.8。

9.根据权利要求5所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤3）增殖培养基为：MS，细胞分裂素0.2-5mg/L，生长激素3.2-4.0mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂5.5-6.5g/L，pH=5.2-5.8。

10.根据权利要求6所述的一种红掌快速繁殖的方法，其特征在于：步骤4）生根培养基为：1/2MS，生长激素0.2-1mg/L，蔗糖15-20g/L，琼脂6-6.5g/L，pH=5.5-6.0。