CN103173445B - 一种欧米伽3的合成基因、含有合成基因的大肠菌及其构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及基因技术和微生物技术领域，涉及微生物制药领域中的基因工程菌株大肠菌sHJPF02，该菌株通过将欧米伽3合成酶基因导入大肠杆菌BL21得到，保藏登记号为CGMCCNo.7338，具有SEQIDNO.1-3的核苷酸序列。本发明提供的菌株可以生产EPA和DPA，可在工业化生产欧米伽3中应用。

Description

一种欧米伽3的合成基因、含有合成基因的大肠菌及其构建方法

技术领域

本发明涉及基因技术和微生物技术领域，涉及微生物制药领域中的基因工程菌株大肠菌sHJPF02。

背景技术

欧米伽3脂肪酸的学名叫做Ω－3脂肪酸，其功用在20世纪20年代就逐渐被发现，当时被称为“维生素F”，近30年内的研究表明，欧米伽3是人体正常生长发育和新陈代谢必需的不饱和脂肪酸，主要含有DHA、EPA和DPA这三种极为重要的生理物质。欧米伽3主要具有以下功效：维护视网膜功能和延缓脑的衰老；促进婴幼儿智力开发和智商提高，增强记忆力；预防心脑血管疾病；抗炎、抑制过敏反应。EPA最重要的功能是具有抗血栓形成、调节血脂、降血压等作用，从而具有预防心血管疾欧米伽3病的作用；DHA俗称脑黄金，最重要的功能是参与脑细胞的形成和发育，添加DHA对促进出生后脑容量发育具有重要意义；DPA 的功效是DHA的十倍以上，且DPA 对幼儿的生长是至关重要的。

加拿大政府最近向25-49岁的国民建议每日应服用1.5-3克的欧米伽3；2004年美国FDA批准欧米伽3脂肪酸治疗高甘油三脂血症的成人患者；最近美国卫生部已同意每日对欧米伽3的吸取量应增加为3克；世界卫生组织（WHO）最近建议成年人欧米伽3每天增加3克的吸收量（必须补充）。2010年欧米伽3的全球市场销售额约38亿美元，大部分来自于海洋鱼类提取法，以深海鱼油的形式出售，其余来自于微生物发酵法，主要是作为食品添加剂加入婴幼儿奶粉、牛奶和其它食品之中。

本发明提供了3个欧米伽3的合成基因和一株生产欧米伽3的基因工程菌株大肠杆菌sHJPF02，该菌株遗传性状稳定，可以生产EPA和DPA，培养和发酵条件适合于工业化生产。

发明内容

发明目的

提供了3个欧米伽3的合成基因和一株生产欧米伽3的基因工程菌株大肠杆菌sHJPF02，该菌株遗传性状稳定，可以生产EPA和DPA，培养和发酵条件适合于工业化生产。

技术方案

欧米伽3的合成基因1，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 1。

欧米伽3的合成基因2，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 2。

欧米伽3的合成基因2，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 3。

该菌株通过将欧米伽3的合成酶基因1-3利用生物工程的方法导入大肠杆菌BL21得到，可以生产EPA和DPA，命名为sHJPF02，分类名为大肠埃希氏菌，Escherichia coli，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）保藏日：2013年3月20日，保藏登记号：CGMCC No. 7338，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 中科院微生物研究所。

一株生产欧米伽3的基因工程菌株构建的方法，将具有SEQ ID NO. 1序列的DNA克隆到质粒pETDeut-1中得到质粒pHJPF01；将具有SEQ ID NO. 2序列的DNA克隆到质粒pACYCDeut-1中得到质粒pHJPF02；将具有SEQ ID NO. 3序列的DNA克隆到质粒pCOLADeut-1中得到质粒pHJPF04；将pHJPF01、pHJPF02和pHJPF04同时导入大肠杆菌BL21得到一株基因工程菌株sHJPF02，该菌株可以生产EPA和DPA。

本发明的有益效果：提供了一株生产欧米伽3的基因工程菌株，该菌株生产EPA的产量稳定在1.0 g/L左右，DPA的产量稳定在0.3 g/L左右，相比于欧米伽3的原始生产菌株，该菌株生长速度快，欧米伽3的产量高，遗传性状稳定，适合于在工业化生产欧米伽3。

该菌株命名为sHJPF02，分类名为大肠埃希氏菌，Escherichia coli，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）保藏日：2013年3月20日，保藏登记号：CGMCC No. 7338，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 中科院微生物研究所。

附图说明

图1是质粒pHJPF01的构建示意图（A）、质粒pHJPF02的构建示意图（B）和pHJPF04的构建示意图（C）。

图2是质粒pHJPF01用限制性内切酶NdeI/XhoI消化的电泳图（A）、质粒pHJPF02用限制性内切酶NdeI/XhoI消化的电泳图（B）和质粒pHJPF04用限制性内切酶NdeI/XhoI消化的电泳图（C）。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。实施例中所使用的液体LB培养基成分：蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，NaCl 1%，pH 7.0，所述百分含量均为质量百分含量。实施例中所使用的固体LB培养基成分，在液体LB培养基中加入1.5%琼脂（质量百分含量）。

实施例1  3个欧米伽3的合成基因的获得

欧米伽3的合成基因1-3，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1-3。由上海生工生物工程公司合成。

实施例2  sHJPF02的获得

SEQ ID NO.1的DNA序列通过DNA人工合成得到，合成后的5'端带有NdeI粘性末端，3'端带有XhoI粘性末端，把SEQ ID NO.1的DNA克隆到质粒pETDuet-1（购自Novagen公司）的NdeI/XhoI位点之中得到质粒pHJPF01（图1A、图2A）；SEQ ID NO.2的DNA序列通过DNA人工合成得到，合成后的5'端带有NdeI粘性末端，3'端带有XhoI粘性末端，把SEQ ID NO.2的DNA克隆到pACYCDuet-1（购自Novagen公司）的NdeI/XhoI位点之中得到质粒pHJPF02（图1B、图2B）；SEQ ID NO.3的DNA序列通过DNA人工合成得到，合成后的5'端带有NdeI粘性末端，3'端带有XhoI粘性末端，把SEQ ID NO.3的DNA克隆到质粒pCOLADuet-1（购自Novagen公司）的NdeI/XhoI位点之中得到质粒pHJPF04（图1C、图2C）；把质粒pHJPF01转化到大肠杆菌BL21（购自上海浩然生物技术有限公司）中得到菌株sBLF01，把质粒pHJPF02转化到sBLF01中得到菌株sHJPF01，把质粒pHJPF04转化到大肠杆菌sHJPF01中得到sHJPF02，其分类名为大肠埃希氏菌，Escherichia coli，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC），保藏日：2013年3月20日，保藏登记号：CGMCC No. 7338。

实施例3  sHJPF02发酵生产EPA和DPA

将sHJPF02接种到含有100 μg/L氨苄青霉素、50 μg/L 氯霉素和50 μg/L 卡那霉素的固体LB培养基中，37 ℃培养箱中过夜；挑选sHJPF02的单克隆接种到含有100 μg/L氨苄青霉素、50 μg/L 氯霉素和50 μg/L 卡那霉素的液体LB培养基中，37 ℃，200rpm，培养16小时；再接种至含有100 μg/L氨苄青霉素、50 μg/L 氯霉素和50 μg/L 卡那霉素的液体LB培养基中，接种量1%，30 ℃，200rpm，培养24小时，8小时后每隔2小时取样分析EPA和DPA的产量。

取sHJPF02的发酵菌液1ml，离心收集菌体；菌体加入2 ml含有2M HCl的甲醇溶液，100 ℃加热1小时，真空下抽干甲醇；抽干后的固体加入1 ml乙酸乙酯和1ml 5 M NaCl，充分混合后，离心取上清液；上清液通过气相色谱分析其中的EPA和DPA的含量。

实施例4 sHJPF02的生产EPA和DPA的稳定性

sHJPF02在含有100 μg/L氨苄青霉素、50 μg/L 氯霉素和50 μg/L 卡那霉素的LB培养基中，37 ℃，200rpm，培养16小时；菌液加入无菌甘油至甘油终浓度为20%，-80℃保存0-6个月，EPA的产量稳定在1.0 g/L左右，DPA的产量稳定在0.3 g/L左右。

                         SEQUENCE LISTING

 <110>  南京江辉生物科技有限公司

 <120>  一种新的欧米伽3的合成基因、含有合成基因的大肠菌及其构建方法

 <130> 

 <160>  3    

 <170>  PatentIn version 3.3

 <210>  1

<211>  7824

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  1

atggttcaag cgcataccaa tccggaaacc catagccagg acaataacga aagccaagag     60

acgcgcctga acaaacgtct gaaggacatg ccaatcgcaa ttgttggtat ggcaagcatt    120

 tttcctaaca gccgttacct gaacaagttt atcagcgaga agatcgacgc cattacggaa    180

ttggtgccgg cgtacaccca tggtaagcgt gccgaagatt acttcgatgc agataagagc    240

 tcaccagaca agagctactg caagcgtggt atggagttcg gtctgccacc aaatattctg    300

 tctgaactga cgtgggatac cagccaactg ctgattctga gcctggtgat tgcaaaagaa    360

 atgacggtgc tgcagttggc ggatgcaggt gggacggtta ccagcgagta cgacaccgac    420

 aagatcggca ttacgctggg cgtgggtggc cttcaagaga ttaacgcaag cctgacggca    480

 cgtctgcaat atccggtgct gaaaaaagtg tttaaaagca gcggtctgag cgacgccgat    540

 agcgacatgc tgatcaagaa gcctcgtagg cagtacatcc actgggagga gaacagcttc    600

 ccgggcagcc tgggcaatgt gatcgcaggc cgcatcgcaa atcgtttcga tgatcgtggt    660

 atgaattgcg tggttgatgc agcgtgcgcg ggtagcctgg ccgcaatgcg tatggccctg    720

 accgagctgg ttgagggccg cagcgaaatg atgatcaccg gcggtgtgtg tacggacaac    780

 atgtatatga gcttcagcaa gacgccagcc tttacgacga atgagacgat ccaaccgttc    840

 ggtcgagagg acattgacag caagggcatg atgattggcg aaggcatcgg tatggttgcc    900

ctgaaacgcc tggaggacgc aggcgatcgt atctatagcg ttatcaaggg cgttggtgcg    960

 agcagcgatg gtaaattcaa gaagcaacac agcatctatg ccccgcgtcc agaaggtcaa   1020

 ctgaagcgtg catacgatga cgccggtttt gcgccagaaa ccgttggtct gatcgaggcc   1080

 cacggcacgg gcaccgccgc aggcgatgtt tatgcggccg cggagtttaa tggcctgaag   1140

 agcgtttttg gcgagaacga ccagcatatc gcactgggca gcgttaagag ccaggttggt   1200

 cacacgaaaa gcacggcagg tacggcgggc gttgtgatta agatgattgc agccctggcg   1260

 aaagttctgc cgccaacgat taatgtgagc aagccgaatc cgaaactgaa cgtggaagat   1320

 

agcccgtttt tcatcaatac gctgttactt gaaacgcgtc cgtggatgcc acgtccggat   1380

 ggtacgccgc gtattagcag ctttggtttc ggtggtacga acttccacct ggtgctggaa   1440

 gagtacagcc cagaacatag ccgtgacgag aagttgctta tctaccgtca acgtcaagtg   1500

 gcgcagagcc tgctgattag cattgagccc aaggcggagc tgatcgcgga gatcaataag   1560

 gtcgccggaa gcatcgacga cgtgctccgc acgctggacc gcttcctcgc gggcgacgag   1620

 cccgcgggct ggcacaccgg cggcatcagg cggtcgcgcg gcgccggagt gcgacgcgag   1680

 ccggaacagg cgcccgaggt caccagggcc ctccacgacg gacggctcga ccgggtgacg   1740

 ctgagcaatg atgccgaggc gtggcagctg ccgagcggca ccagctatcg cagcagcgca   1800

 ctgatcacga tcaacgcgaa ccagaaaacg accaagggta agaaagcggc gaataccccg   1860

 aaagttgcgg cagcgggcca aggtagccag tgtctagcgt acgtgaatat gggcatcgtt   1920

 cagacccgtg gcatgggagc cggtctcttc gagcggttcc ccgaaccgac cgcgctggcc   1980

 ttcgataaga ccccactgag ccaagttgtt agcctaattc cggcgtttga gaaagccgat   2040

 caagcagcac tgctgacgag caccgataat aaagatgcgg cacagagcgc catcggtgtg   2100

 atgagcatga gccagtatca actgttcacg caaagcggtt ttagcgccga catgtttgcc   2160

 ggccacagcc tcggagcccg gctggcgttc ctgctctgcc gccggctgcg cgccgagcga   2220

 tactaccagc tgcgcggtgc cagcatggca gcgagcgcca gctacgcagt tgacaaagat   2280

 ggtagcgtat cagacaaggg caccatgtac gcgattattc tgccggccaa tgagaacgat   2340

 gcggcgaata gcgataatat cgcgaaactg tcagatgata ttagcgagtt cgagggcgtt   2400

 agcgcgacgc agctggttat tgcaggtcca acgcaaagct gtgcggatgc cgcgaaaaag   2460

 gttgcaaatt acaatgcgat cgcagcactg ggttttaagg ccatcgccct gccagtgagc   2520

 cacacgccgc tggtgggtca tgcgcaaaag ctgtttagca atccgttcgc aaaggcgatt   2580

 ccgagcgatg cgaaaagcat taaagccgca tttaaacagc acatgctgca aagcgtgcgt   2640

 gataaagcca agtttacggc gggtgcattt agcaaggtgg atgcaacggg tgacaaacat   2700

 catgaccctc aactgaacaa tatgtatgat gccggtgcac gcgttttcgt ggaatttggc   2760

 ccgaagaata tcctgcaaaa aatggctacg gccacgctgg gcaataaagc agaggcggtt   2820

 agcgtgatta gcatcaaccc aggcaacagc gacgttcaac tgcgtgtggc aaatccaaag   2880

 gtcgaggagc tgtggggcga ggagcccccg cgccaggccg tcgccacgct ccagagccat   2940

 gtatcccacc tgcgccgcgc actgcagccg gcgtccgggc ccggccgtcc caccgtgctg   3000

 cgccaccgcg cgcccggcta cgtcctggaa ctcgcccccg aacagatcga cgtctgccgc   3060

 atcgttgaaa aggaagtgat caagaccgag tacgtggagg tggcgacgag cggcgcaacg   3120

 ttcgagcgcc tggtcgccga cgggcggcgg ctcctggaag gacgcgaccc gcgcgccgcc   3180

 accgtgagca acgtggcccc acaggcaatc gcgccacatg cgagcgcgca agcagcccca   3240

 gcgagcggta gcctggaagc attcttcaat gcacagcaac aggcggccga tctgcaccaa   3300

 

cgcgaggcac gccgccaccc ggcgcgggaa cgcctggtcg gccatctgat gacggcgctg   3360

 ccagcggcaa tggcagcacc aaccccgccg gttgagccga tcaaagcccc ggcaccggtt   3420

 gcagcgccag ttgtgagcgc accagtggtt ccgaccccag ccggcctgag cgcccaaacg   3480

 tcccggctcg ggcggcaggc cgaggcgctc gaagtgtacg aacggacccg cgtccacctg   3540

 gacgaggagt tcggcgtggg cacggccgcc gaactccgcc gggtcaggac cgcgatcctg   3600

 caggcaagcc agaatgccct gaatatgctg acgggccaga cgccggtgac cgccccggtg   3660

 gttaatgcgc cgatcgttaa tagcccggtg gtggaagccg tgaaggtggc accgccagtg   3720

 caaacgccag ttgtgaacac cccggttgtt ccggcggtga aggcaacccc agttgcccaa   3780

 gacaccgcga acgcaaccca taccgccgtt aaactgccag cagcgggtgc gatgaacagc   3840

 atgaagcagg aactcaagaa gcacatggaa gagcggttca tgttcgagtt cgactcggac   3900

 atcaccgagg acaccgacct gttcaaggcg ggcatcctcg actcgttcgg ctacatctcc   3960

 ctgatggcgc acatcgagga ggagtacggc gtgccgctcg gcgacgagat cctcggcaac   4020

 gtcatggtct cgctgaacgg catcgtcggg ctcgtcgacg ccgcccgctc gcgcgccgcc   4080

 gggagccggt ggagcgtcgg tagcaagctg ccggcggcag gcgccatgaa cagcaaactg   4140

 ccagccagcg ccgcagagca gccacagacg gccccagttc aagccgccag cggtctgagc   4200

 cgttattggg ttctgaacac gatgctggag gttgtggccg aaaagaccgg ttacccaacg   4260

 gagatgctgg aactgagcat ggacatggaa gccgatctgg gcatcgatag cggcctaatg   4320

 ggtacggtgc aagatgagct gccaaccctg ccggagctga gcccagagga tctggcggag   4380

 gtggaaattc tgtgtcgtac cctgggcgag atcgtggact atatgaatag caaactgcca   4440

 gcagccggta gcgccccagt gatggccgcc acccaggaag agatcgtcaa gggtctcgcc   4500

 gagatcgtga acgagatcgc cgggatcccc gtcgaggacg tcaagctgga caagtccttc   4560

 accgacgacc tggatgtcga ctcgctgtcc atggtcgagg tcgtcgtcgc cgccgaagag   4620

 cgcttcgacg tgaagatccc cgacgaggac gtcaagaacc tcaagaccgt cggcgacgcg   4680

 tccgactaca tcctcaagca ccagggctgg gagatcgtgg attacatggg cagcaagctg   4740

 ccggccgcag gcatggcatg gaatctatcc ccagccgagg gcgccaatac gcaagcggca   4800

 aacacgaagc tgccggccga aggcgcgaac ttccgaatcg ccggtgcaag ccaggtgatg   4860

 accactgaac tgaccttcga cgagctggcc tcgctgatga aatcggccgc cggtctcacc   4920

 gtcaagccgg aggacttggc gggccggcgc gaagcgacct tcgccgacta cggcctggac   4980

 tcgctcggcc tgctcggcat cgtcggtgag ctggagaacc ggctgggccg gtcgctgccc   5040

 aacgacgccg agcgcagcaa gacgccgcac gacttcctcg acctggtcaa caccgtgcct   5100

 acgacaggag cccaaggtgc caagctgccg gccgcgggtg caatgaacaa gaaacaggcg   5160

 agcgtggaaa cccaaagcgc accggcggcc gagctggcaa cggatctgcc gccgcaccag   5220

 atttcgcagt ccgcgttcga cggctcgaga ctccgggtcg tcctgatgct ggacctccag   5280

 

gacggtgccc agcagcggtt cctcgaagcc tacgagcacc tgcgcaacca ggtggcctcc   5340

 gtccccggcc acatcacgga ccagctgtgc cagtccatcg agaacccctc gcagtggctg   5400

 ccactgagca gcgatattgc atcttttacc ctgagcgccg tgaatgatga tgccattagc   5460

 gatgtgatcg cgcagattag caaacagcac aaaatcgcgg gtttcgtgca tctgcaaccg   5520

 accagtgagt gggagagcgc accgccgttc ctggcctggg tcaacagcga ggaacacgtc   5580

 cagatggtgc agcccctgca tgagtgcgta cgaagcaccc gttccctgcg cttcagcgtg   5640

 ctgcgcgaga ccaccaacgt cgccacccgc gcgcccgagc cgtccaaggg gcggctgcag   5700

 ctggcaaagg cagagctgaa ccaggcggca ctgagcggtc tgaccaaaac cctgggccac   5760

 gaatggccga ccgtgttttg ccgtgcactg gatatcaccc cgagctttga ggcagttgaa   5820

 gaaccccgcg tcggcgacgg tgtggtccgc cacgccctga ccttcaccgt caagcccggc   5880

 agcgaggaga tggtcgccga gatcctggcc ggctacacct cgcccgaggc ccgggtcgac   5940

 gacaccaccc ggctgcgccg cacctcgctg ttcatgcacg gcaaccgcgt cgtacgggcc   6000

 ttcgaatgtg cgctgaccct ggcgaagcaa acgcagagcc actttatcct ggcgggtcgc   6060

 cgcgtcttct tcacccgggc cgcgctgccc gcggtacacc acgtcgcgaa tgccggaccg   6120

 gaagcccgcg acgcacggcg gcacgcgctg tactacgcgg ccaaggaagg ctgcggaatg   6180

 gcgctggccc agatgctggc ccagcaggac gagctggccg cggacgaccc cacctgcccg   6240

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 agcatggacg tgagcagcga cgcggcaatt aagcaaagcc tggcgggtgt ggattcgatg   6360

 acgggcatta tccacggcgc aatggtcacc cgtatgaagc atattcagga caagaccctg   6420

 acgaaggtga gcggtttcgc gggtatcatc gccgaactgg gtcgcgttta cggtaacgcc   6480

 atcgacgcga gcatggtacg ttttcaggcc atgtttagca gcgcagcggg cttctacggc   6540

 cagagcgact atagcatgag caatgagatt aatacgggcc tgaacaaaac cgcactgcaa   6600

gcgatttcgg tctacccgca ggcgaaagtg atgagcttta actggggtcc gtgggatggt   6660

 aaactgaatg cagacagcag cctgaacgcg gagggtagcc tgatcctgag cttcacgacc   6720

 cccctcgacg acaccgatcc cgacctcgtc atcggcgtgc gcggtccccg caagcggggc   6780

 gtcttcaagc gcctgatgga caccgacgag gcaggcggtc tgacgaccga ccgggagctg   6840

 gcgcacttcc tggcgcgctc cgacatggac ctgatcaccg accgccgggc ggcggactcc   6900

 ccggcaaatc gcgtggtgaa caatgcagtg acggtggaac gcgtgctgaa ttggatgcga   6960

 atgccgtttc tggaggatca ttgcattgcg ggcaacccgg tgctgccaac cgtgtgcgcg   7020

 aggcgttacg ttcgtgagac ggcccagcaa ctgtgcggcc tgccggttac cgtgcaggat   7080

 tacaaactgc tgaaaggcat cgtagtagtc accaaggaac cacaggtgct gaccctgacg   7140

 ggcggttccc tggtgggcct gtccgcctcg ctgttcctgg ggcgcctggg cgtacggcac   7200

 atggacagcc tgctgcgtcc gcagtaccag gccaatctgg tgatcaacga ggccgttatc   7260

 

gagcacatgg acatccactg gtcgtaccgc aagctccccg gcggtacggg gatgtactgg   7320

 acccaggact tcgcgatgaa gccggaggcc ccggtcgacg acgcgggcat gaccgagcac   7380

 ccgcgtctgc aaggtattaa acaagttctg attgccgacg atacgcagct ggtttgcaat   7440

 cggctgcggg aactcgtctt cggagccgcc tgtgcggcgt ccgtacgcgc ggcagcgaga   7500

 ctcggtgtgg cggatgcgct gggggatgcg cccgccaccg cggaggagct ggccgccacg   7560

 gtgcacaccg aggcgcgtcc gctgcagcgg ctgctgcgcg ccctgtcctg ctacgggatc   7620

 ttcgccagcg gcgacaaagg ctatctggtt ctgagcgttc tgaagagcac gagccgcagc   7680

 agtatgtcgg caattgcgct gtaccatcag gacggtcgtc tgagctgtac gatgagcagc   7740

 gccaaaacga ccattagcaa gtggacggta gaagcattcc tggcaccagc aaaggcaatc   7800

 ctggtaacgc aagagagcgt gtaa                                          7824

 <210>  2

<211>  5520

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  2

atgacccgcc gtgtggcggt caccggtgtc gggatcgtcg caccgggcgg cgtgggggtg     60

 gacgcagaca ccttgcgtat gacgttctgg cagaacctgc tggacaaaaa ggactctcgc    120

 gggctgaccg cggaccaggt ggccgcgcag gaccggtaca tccagttcgc gatggtccag    180

 tccgaccgtt tctactgcga taagggcatg gtccgtcagg atttttcctt cgatgcaaac    240

 gccgaggagg ccgtacggaa cgcgggcctg gacaccggcg cggagaaccg ctggcgcatg    300

 gatatggcag ctaaagcact gaatgacgcc ggtgttgaca ttactaactc ccaggacaat    360

 gtcagccacg tcgggcagct gtgggacgtg gaccaccggc cggccggccg ccatctgcag    420

 cgggcgttct cgcccagttc gctcgcctcc gcggtggccg aacaggtcgg tgcccgcggc    480

 caacagccga gctttaccct gcaaccgttt ctgtccaatg gtgctatcgc gcataacgct    540

 tccaaactgg ttgccgacgc gctgggtctg agccgttggc tagactttgc tatgcatcag    600

 ccggcgtctg gtgctgctca gctgtctctg gatgcagctt gcgcttcctc tgtatatagc    660

 ctgaaactgg caatgcattg cctgcatacg ggtaaagctg atatgatgct ggctggtgct    720

 atgggtttcg tttctggtgc agacccgttc ttcatcaaca gcatctttca cgcgtaccct    780

 atggctcgtt acacgcgtgt ttcaattcgg aactccaaag gtctgttcgc gggcgagggc    840

 gagggcctgg agatggccga ggcgatcaac cgcgcactcg cccacgcgaa ggtcgacagc    900

 tcccagatcg actatgtcaa cgcgcatggc tcgggcaccc agcagaacga ccggcacgag    960

 aactccgatg gccaggtgaa agcgttcgaa atgcgtcatg cggacgctgc gatgcatgat   1020

 ggcccggacg aacatttcaa catcgaagtt atcgaatgcc acgcgaccgg tactccgctg   1080

 

ggcgacaaag tggagctgac ctgccagtcc cgtttcttca acgataaact gaacggtatg   1140

 cacactccgc tctgtccgac tgctaaatct aacctgggcc acctgctgac ggcagcgggc   1200

 gtctcgaccc gtatcccctt tgatctagca tgcacgatcg tcaaatgcat cgtgacatgc   1260

 ccgattactt ccccgaacca gatgtttggc aatatctcct cccctgccac tctgccgaac   1320

 gatgttctgc cgatgcgatc caaagcaggt aaccgtgcac gccacgcggg cgtttccgta   1380

 gtgcgacggg gcaaccagcc cgaggccggc gccggcgagc aggacggccc gaccagccag   1440

 gagcaggaga ggctgacccg gctgcggcgg gagaaccgcc aactgcgcaa ggacgtggag   1500

 tctatggctg cttggacctc caacatcaac cgtttcgcga acgccattaa ccaacagcag   1560

 ccggccaaac gttggaaggg tctggataaa accgctttca cgccgctgca cccggaactg   1620

 agaatcgatc gtttcgaccc ggggcagtat ccggtgcggt gcgccggaca ggtgccgggt   1680

 ttttcggcgg aggatcggat accgggccgg ctgatcccgc agaccgaccg ctggacccat   1740

 aaagtggctg tcctggtggc aatggaaacc gaactggaac tgcaccagtt ccgtggtcgt   1800

 ctgctgctga tgaaagtagc cgacgaggcg attcatgacg ctaagctggc gtccggctcc   1860

 gtaatggctg catggcctta cgcagcatct ctgaacgccc acggcgtgtc cctgtctgac   1920

 gcgtggttct acgcggcgac cacagggcag atctcgatcc ggcacggtat gcgcgggccg   1980

 agcttcattg gtaatatcat ggcttctcgt attagcagcc tgtgggattt ttgcactgcc   2040

ctgaacggtc cagcgttcac catttctgcg ggtgagcaga gcgtgaaccg cacggtcacc   2100

 gctgcggtgg acctgtccgg ttccattgaa aacatcgttc tgaaaacggc ctctctggct   2160

 gttgctcaga atctgctggc gatggaaagc cgtcaggaac cgctggatgc ggtaatcatc   2220

 gcctatatcc cgttcgacgt cgaggcgtcc gggtacctgc ccggcgaggg cggcgccatc   2280

 ccgctggacc tgatccacca agcgctgggt gttgcggatc aaaccgccac cgacagcgaa   2340

 gcggtagata ctatggcttc cgctatcagc ggttctaccg aacgcatctc ttctgattct   2400

 cacggtgcgc tgctgaactc caactcttat gctactatca actctctgag cttcggtcac   2460

 atcagccagc tggaagccat cctgctgact ccggcgggtc tgtctgacga atctacttct   2520

 tgcgacatcg acctggtgac cgcttcgcca cgcgacgcgc agctgcggtg cgtgctcgtc   2580

 gtggcccggg gttacggggg gttcaacgcg gcgcttgtgc tgcgacggcc ggggacgaac   2640

 accttcgccg cctccggcat gctgcacggt ctgctgatcc aggcttccct gaagcaggac   2700

 gtgcgtgagg tcatcgtccc gctcgtggtg ctggccaacg gtcttgccgc cggcgtgctg   2760

 gtcggcaccc agctcggtgg ctggccgctg ctgcgcagtc tgccgccgga ccggtacgtg   2820

 cacgcgcaca cgttcttcgc cacgcgctac gacccgttca tgccgctctg ccttgtggtg   2880

 aaagcacagc tggctttcct gaactcccgt gagcagggcc tgaaagtggc cgatgctctg   2940

 gcgtttgaac agaaccagtg gctggctcac ctgaagcagc aggtcgccca ggccaatggt   3000

 ggatcagcga tccgctcgct gttcctcgca gccgctgtgc tggccctcgg tgcggtcgcc   3060

 

atctcggtca ccaagaacgt tccggtcaac aagtgggtgc gcacgctcga cccggaccac   3120

ccgacccctg cggacaaacc ttgtatctgg tacaccgcaa actacgccga tctggtggag   3180

 gcgaaagttt ttggcccgga ttacgcagtt attgacaact actctcgccg cgttcgtctg   3240

 ccgactaccg attatgcaga aggcgacatc tacctgctgg tttcccgcgt aaccaagctg   3300

 cgccttgtag gtcatcgccg aggcacgctt cagcgtgcgc cacgggtgag ctgcgtcggt   3360

 gccgggcgca ctgtcatccc catgtgcgca gtcgacgtag taggtgtgga acgccgcggg   3420

 cctggcttcg gcggcgggta tcgcggcata cagcatgagc agtggcacaa cgacgccgaa   3480

 ctggacgacc tgccgcgtgg tggtgacacc ctgcgttacg acatcaaaat caacaacttc   3540

 tatcgtctgc tggactgcac tctgacgttc gctaaaaacg gcgataccct gctgttcttc   3600

 ccgccgcagc cgggtcagcc tctcctgctc ctggctggtc gggccgtcct gctcgccggc   3660

 gccggcctcg ggctggttgc cccgtcgcac ccgccgcagc cgggtcagcc tctcctgctc   3720

 ctggctggtc gggccgtcct gctcgccggc gccggcctcg ggctggttgc cccgtcgcac   3780

 ttcgattatg gtcaaatcca ccatctgctg cactgtgcgc agacggagaa cgctgatatc   3840

 ttcgctggtg aacatcacaa ccaccagcag gcgggtggct gcagcggtaa gcaagactct   3900

 ttcctgatga ttgaacaggt gggcaatctg ctgtgtttcg cttctgaaaa ggatgttcat   3960

 ggtttcatcg aaggccataa acagctggcg ccggatcatt ggggtggtgc gtggggcctg   4020

 tattttccgt gtcacttcaa aggcgaccag gttatggcag cagagggtgg ctccctgatg   4080

 tgtggtcagc tgtttatgct gcacatcggc ctgcaattca tgcataccct ggtcgaaaac   4140

 cagccgctgg aaaacgcatc ccagaaagtg ggtcgtttcc gtggtcgttt ctgccgtggt   4200

 ccgcaacacg gtgagctgac cgaaattacc gaaatcggta tctaccgcat gcatccgcgt   4260

 aaagcaaaca ttgatatcct gctgaacggc aagccttatg ccgcagttgt agactttcag   4320

 gtaatgatca aaaatctggg cgaagagtcc cgttatctga acgacactcc ggaatgcact   4380

 cggcgcaggg ccggaaccgt aggcgtccac cgagatgggg gctgcggccg agcccgagcc   4440

 cttcggtgcg aacgtgcccg agcaggaagt ccctcgccgg aacaggatgc ggtcacgcgc   4500

 cttgtaggtc atcgccgagg cacgcttcag cgtgcgccac gggtgagctg cgtcggtgcc   4560

 atgttcgagt tcgcaaccgg caatattgaa ccagacacgc tgccgtttac cgcgtatcac   4620

 aactctcacg cctctgttat tccgtactcc gtgctgatgg agatcagcct gcaaccgaac   4680

 cgcactgtca tccccatgtg cgcagtcgac gtagtaggtg tggaacgccg cgggcctggc   4740

ttcggcggcg ggtatcgcgg catacagcat accttcgacc gcactgtcat ccccatgtgc   4800

 gcagtcgacg tagtaggtgt ggaacgccgc gggcctggct tcggcggcgg gtatcgcggc   4860

 atacagcatc tgagcgttga cggcgagccg ttctacaaag gcagcgcagt tttcggctat   4920

 gatgcgctga aaaaccagct gggcatcgat ttcaaaggta acggtcgtat cacccagccg   4980

 tggccggcgg atatcaccgt tgacctgctg cacgtggaaa acaacgttga taaacagtcc   5040

 

cacgtggaaa acaacgttcg tgttttccac cactaccgtc tggcaggcgg ccagctgaac   5100

 aaagcggaaa ttgttgacaa aggcggtaaa tttattgaca acggcctggg ttacctgtct   5160

 gcaccttctg attggttctt ctcccgtacc atcgatcaat tccacttcca tcaagatccg   5220

 ccgggctctc tgggtgtaga ggttatggca atcatcgaac tgcagaccta cgctattatg   5280

ctgggtaaag gcaactctaa agacccgaaa ttcggccaga tcctgtctga tttcaccatt   5340

 taccgtggtc aaaaatggaa aattaacccg aacaaacaga tgagcctgct ggatgtccat   5400

 gttaaagatg aaaacggtaa acgtattatc atcagcgcag tcggcgacgc taatctgtct   5460

 aaagacggtc tgcgtattta cgaagtgtgg cacaacgacg ccgaacaggt atctgcgtaa   5520

 <210>  3

<211>  3816

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  3

atgaaggcag tggtctttcc cggccagggc gcccagcggc gtggcatggg gcgcgaactg     60

 agcctggacg ccggtattga cgacgtgagc aatgcgaccg ccctgagcca gcaaaccctg    120

ctcgacgcgc gcttcgtgaa gcgcttcacc gaccgcgtct tcgccggccc gcccgaggag    180

 accggcacga aggagaacca ggccttcgtc tgcctggcgt cgacggtctg gctgcaccac    240

 catctgaccc gttgccatcc gcacgcatat ggcctgggcg aagcggacct gaccgatatg    300

 gccatgaaac gtcagaatgc gctggcgcag gcggaacata ttaccccgac cctggtggat    360

ggctacgcac agctcacccc cgtgcagaag gcccagtggc tggagttccg cacgctgctc    420

 ggctacgcac agctcacccc cgtgcagaag gcccagtggc tggagttccg cacgctgctc    480

ttcacgcaaa tgcaccaaaa tcgtgtggcg aatagcaacc aagccaatgc gaaatattgg    540

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gtgttgccag tccgactggg tcgcaatccc ttcgggccct acccggctga tggtgttgcc    660

 ctggatcagc acatcgtcga gcgaggtcgg agtcgtgctc ccagccgctt tcactcctat    720

 agcaatccgc tggacagcca gcaacagcaa cgtctgaata aaccgagcca cgttatcctg    780

 cgaaacgttt tcgatgacga agtggtggcc gaccccgtag tccttcagct ttacgaagat    840

 accgcaagcg accgaaacgt tttcgatgac gaagtggtgg ccgaccccgt agtccttcag    900

 ctttacgaag atgacacgag cggtagcatc aacgagctgg agtacaagac cccgagcggc    960

 accattaccc atcatgaagc cagctgtctg ctgggtcgta gcggtgtgtg ttttgtgtac   1020

 ggtacggtgt atccacagat gttcgcgcaa ccaggcgttc tgccgcagta cttcccggca   1080

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 aatgcaaaga ccagcgacat gtatgccgaa aacgaactgg cgattgcggg cgtgggtgcg   1200

 

ctgggtagct atatcctgac gaaggtgctg accgaacact ttgcgatcaa gccggatttt   1260

 gcgatgggtt atagcatggg tgaggcgagc atgtgggcaa gcctgaatgt gccgcataac   1320

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 gcgcaagcaa gcagcattaa gttcatcagc gccgcgagcc aaattccaat tagcctgacc   1800

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 ctgaatgccc cgctgagcgc gaataccgat agccatgcga ttggcgcgat taacgcaaag   2040

 ctgaagtgca ttgcccagct gattagccat gatgatcaga ccgcactgaa ggttccactg   2100

 cacctgctga cggcaagcat tacgcgcgag agcctgcaat acctgacgga gaacctgagc   2160

 aatccacaac gtcaacaaag ccaaacggcg cagctggcca cgcagaatga aaaactgagc   2220

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 gaaaagggtc tgggtattag ccaaaatgcg tacctggtta gccacccgca agtgatgacg   2340

 agcattaacg aaagccagca ggatctgccg gaagtgagcg cggaatttgc accagcactg   2400

 ggtcaaagcc tgggcgacag ctttcgtcgt gtgcacggcg tgaagtatgc gtattacgca   2460

 atcagcagcg aagaactggt tattgcgctg ggtgcgatgg caaacggcgg ccaggccggt   2520

 ggtgcggcag gtctgattcc aagccgcgtg attctgtgta gcttcgagca ggcaatcaat   2580

 cgcattcaga cgattctgtg tagcttcgca ctgccgaatg gcccgatcca cagcccgagc   2640

 gagccagcca gcgttgagct gtttctgaaa ctggaacgtg gtcataaggt gcgtacggtg   2700

 tttctgggtc tgaccccgca ggaagcgagc gccattgtgt atctgtatcg cgcagccggt   2760

 ggtgaagttg tgattgcgaa taaagtgatc agccgcgacg cacaagcgaa ggtgagccgt   2820

 ccggcaaccg aagttgcaag caagtttatg caaccggcgc tggttaaaat gctgcaaaag   2880

 gatgttaccg cgatcacccc ggaggcggac agcggcggtc atacggataa tcgcccgctg   2940

 gttaccctgg acgaaggcct ggagcagatg gcactggcac aactggtgcc gatggcggac   3000

 attctggccc tgaaggataa aatccagctg ccaacggcgg agtaccaata taagacgccg   3060

 ggttgtggtg gtggcgtggg catccgtgtt acgccagatg ccgcgctgaa cgcaacgttt   3120

 tacattgtta cgggcagcat caatcaggcg atgggcgcag cgtgtgttga agcgggtgcg   3180

 

acccgcaaac tgagcgaaca cctggcgacc atggccgatg tgacgatggc caccgaacca   3240

 ttcgagatgg gcgttaagct gcaagtggtg gccgcagaca tgaaacgcgg cacgctgttc   3300

 cgcgcgaaca agccaatgct gtatgagatt cgttacgagt acaccagcat tgaggcaatt   3360

 aaactggaga agcaggtgtt tcgtagcacc ctggatgata tcccggcgga agagcgtgag   3420

 cgtgatccga agcagatcga acgtgcggaa tgggcaggca ccgtggcgca cttcaatgaa   3480

 ggtaagcgta aaaacccgat ggcgctgatt tggtatctgg gctttcgtct gagcagccgt   3540

 gaggcgggtc gtgaaatgga ttaccagatt tggagcaata gcggttgggc cggtccggcc   3600

 gcctttaatg aatgggcgaa aggcagctat ctgggtctgg acgactatac ccaacgtaac   3660

 gtggccggaa aaggtacgaa gaaggagcgg ggggacaccc gcaggcgcat ccaggacgtg   3720

 gccctggagc tctttgtccg aaacggctac gagaagacct cgctgcgtga gatcgcggaa   3780

 gttaaagacg cgagctttga cacgcaagcg tgttaa                             3816

 

 

Claims (4)

1.欧米伽3脂肪酸的合成基因1，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 1。

2.欧米伽3脂肪酸的合成基因2，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 2。

3.欧米伽3脂肪酸的合成基因3，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 3。

4.一种含有权利要求1-3所述的合成基因的工程菌株sHJPF02，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏日：2013年3月20日，保藏登记号：CGMCC No. 7338；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所 。