CN103169107B - 一种海带营养成分的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种海带营养成分的制备方法，该方法由以下步骤组成：对海带进行分步提取，分别得到海带乙醇提取液、海带多糖提取液；对海带乙醇提取液进行分离，得到海带低极性营养成分提取液和甘露醇；对海带低极性营养成分提取液进行乳化和喷雾干燥，粉末状海带低极性营养成分；对海带多糖提取液进行分离，得到海带多糖及蛋白质的混合物；将所得到的海带低极性营养成分、多糖及蛋白质的混合物与甘露醇混均，即得到海带营养成分。本发明所述方法符合综合利用和节约资源的要求，所得海带营养成分不仅杂质少，且便于存储。

Description

一种海带营养成分的制备方法

技术领域

本发明涉及海带中营养成分，具体涉及海带中各营养成分的提取、分离及复合方法。

技术背景

海带（Laminaria Japonica）属于褐藻门、海带科、海带目，是一种大型的可食用藻类，在我国辽宁、山东、江苏、浙江、福建及广东沿海均有养殖。海带具有较高的经济价值，被誉为天然的保健食品，在我国有悠久的食用历史，这与海带的多极性成分有营养保健功效密切相关。而国内外关于海带提取分离组分的研究，主要关注在单一组分，主要的研究内容涉及其中的蛋白质、多糖、甘露醇、褐藻胶等，对海带多种组分及较低极性营养成分缺乏综合的研究与开发。

公开号为CN101919541A的发明专利申请的实施例1公开了一种海带提取物的制备方法，该方法由以下步骤，将海带粉末转入物料混合罐，加入4倍（w:v）的浓度为85%的乙醇混合后送入微波提取器，控制微波功率为1600W，物料流速为29L/h，即微波功率与物料流速的比率为55，在温度为30℃下连续微波提取；微波提取液流入真空抽滤器过滤，滤液送入真空浓缩器，滤渣返回至微波提取器在同样的条件下再提取1次，滤渣的二次提取液经真空抽滤器过滤后的滤液也送入真空浓缩器；2次滤液合并于真空浓缩器后，于70℃水浴中在真空度为0.07MPa的条件下浓缩，挥净乙醇即得海带提取物。上述专利申请所述方法所得到的海带提取物虽然保留了海带的香气和滋味，其鲜、甜、咸、香的风味独具特色，但是，只提出了海带中甘露醇和低极性营养成分（如，多不饱和脂肪酸和多酚），其滤渣中大量的海带多糖以及海藻酸钠和膳食纤维没有得到充分利用。此外，上述专利申请所述方法仅以浓度为85%乙醇为溶剂，所得到的海带提取物中含有大量的海盐等杂质。

武文洁等在海带综合利用研究一文（武文洁,樊文乐,衣守志.海带综合利用研究[J].食品科技.2006(01):49～52.）公开一种海带综合利用的方法，该方法对海带进行粉碎，用无水乙醇处理，得到滤液和滤渣，滤液4℃静置24h，沉淀，得甘露醇粗品；将甘露醇粗品用水作为重结晶的溶剂，分别对甘露醇粗品用0.9倍、0.7倍、0.5倍水进行重结晶操作，得到精制甘露醇；滤渣用丙酮处理，得到脱脂海带渣，脱脂海带渣用热水或盐酸溶液提取并进行一系列处理，得到粗褐藻糖胶、海藻酸钠及膳食纤维。但是，由于上文所述方法存在下述不足，不符合综合利用和节约资源的要求：一是以无水乙醇为溶剂，并对滤渣进行丙酮处理得到脱脂海带渣，将海带中的低极性营养成分当作杂质除去；二是由于甘露醇在水中溶解度较高，因此使用水作为重结晶的溶剂，大大的降低了甘露醇的产率。

发明内容

鉴于现有技术存在上述不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种海带营养成分的制备方法，该方法符合综合利用和节约资源的要求，所得海带营养成分不仅杂质少，且便于存储。

本发明解决上述技术问题的方案是：

一种海带营养成分的制备方法，该方法由以下步骤组成：

（1）将海带于50～80℃下干燥后粉碎至20～60目，得海带粉；

（2）取海带粉，加入3～8倍（w:v）体积浓度为70～90%的乙醇溶液微波提取10～20min，真空抽滤，收集滤液，滤渣再以同样的条件微波提取一次，合并滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液于真空度为0.07～0.10Mpa及水浴温度为50～70℃的条件下浓缩，真空干燥，挥净乙醇，得乙醇溶液提取物；其中，所述的微波提取条件为：温度为25～60℃，微波功率（W）与物料体积(mL)的比率为0.1～0.7；

（3）往步骤（2）所收集的滤渣中加入10～40倍（w:v）30～70℃的水，微波提取50～70min，以纱布为滤网进行真空抽滤，并对滤渣进行挤压，合并抽滤和挤压所得到滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液以2000～4000r/min的速度离心5～20min，收集上清液，真空浓缩至相对密度为1.05～1.10；往浓缩液中加入乙醇至乙醇的体积浓度为60～90%，然后置于0～5℃下静置4～12h，真空抽滤，冷冻干燥至含水率低于10%，得到海带多糖和蛋白质混合物；其中，所述的微波提取条件为：温度为60～90℃，微波功率（W）与物料体积(mL)的比率为0.05～0.3；

（4）往步骤（2）中得到的乙醇溶液提取物中加入1～5质量倍的乙醇，于30～70℃水浴条件下搅拌10～40min，真空抽滤，收集滤液，滤渣备用；将滤液于真空度为0.07～0.10Mpa及水浴温度为50～70℃的条件下进行浓缩，真空干燥，挥净乙醇，加入3～8质量倍的乙醇溶解，真空抽滤，收集滤液得到含低极性营养成分的提取液，滤渣备用；合并两次滤渣得到甘露醇粗提物；

（5）往步骤（4）所得到的含低极性营养成分的提取液中加入含低极性营养成分的提取液质量0.01～0.05倍的乳化剂，混均，于真空度为0.070～0.10Mpa及水浴温度为50～70℃的条件下浓缩至相对密度为0.85～0.95，加入1～3质量倍的壁材溶液，混均，于真空度为0.070～0.10Mpa，水浴温度为50～70℃的条件下进行浓缩至得到相对密度为1.4～2.0，喷雾干燥，得到粉末状海带低极性营养成分；其中，

所述的粉末状海带低极性营养成分主要为海带多不饱和脂肪酸和海带多酚；

所述的乳化剂为单甘脂或/和蔗糖酯；当所述的乳化剂由单甘脂和蔗糖酯组成时，所述的单甘脂的用量为50～75重量份，所述的蔗糖酯的用量为25～50重量份；

所述的壁材溶液是将壁材溶解到5～10质量倍60～70℃的水中制得，其中所述壁材按质量百分比由β-环糊精90～99%、干酪素0.7～7%和碳酸钠0.3～3%组成；

所述的喷雾干燥的条件是：物料流速是550～700mL/h，热风温度是160～200℃，热风流速是2～5m³/min；

（6）往步骤（4）所得甘露醇粗提物中加入1～5质量倍的体积浓度为70～95%乙醇溶液，于50～90℃水浴下搅拌20～50min，趁热真空抽滤，收集滤液，然后向滤液中加入0.05～0.15质量倍的水，于搅拌状态下冷却至15～30℃，真空抽滤，收集滤渣，往滤渣加入10～17质量倍的体积浓度为70～95%乙醇溶液，于50～90℃水浴下搅拌10～30min，于搅拌状态下冷却至15～30℃，真空抽滤，收集滤渣，使用体积浓度为70～100%乙醇洗涤滤渣，以80～120℃热风干燥至含水率低于10%，得到甘露醇；

（7）将步骤（3）所得海带多糖和蛋白质混合物、步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分和步骤（6）所得甘露醇合并到一起，混均即得海带营养成分。

本发明所述制备方法所得海带营养成分由以下重量百分的组分组成：海带多糖和蛋白质混合物20～25%，海带低极性营养成分50～60%，甘露醇20～25%。

本发明所述方法得到的海带营养成分可用作保健品、海带汤，也可用于生产具有海带风味的饼干、糕点和面包，还可以作为基料，辅以其他食品开发多种功能食品。

本发明所述方法与现有技术相比具有以下有益效果：

1、步骤（2）采用70～90%的乙醇溶液微波提取，将海带粉中较低极性的海带多不饱和脂肪酸和海带多酚提取到溶液中，与滤渣中的海带多糖和蛋白质分离开来，避免了在分离海带多糖和蛋白质前的脱脂工艺中将它们除去而造成的资源浪费。

2、立即对以上所得到的海带低极性营养成分进行乳化包埋和喷雾干燥，有效地避免了海带多不饱和脂肪酸与海带多酚的氧化，保证了产品质量的稳定性。

3、采用体积浓度为70～95%乙醇溶液进行两次重结晶，显著提高了甘露醇得率和纯度。

附图说明

图1为发明所述海带营养成分的制备工艺流程图。

图2为下述实施例1所得海带多不饱和脂肪酸的GC-MS总离子流图。

图3为紫外光谱吸收曲线，其中实线为间苯三酚标准品的紫外光谱吸收曲线，虚线为本发明所述方法得到的海带多酚样品的紫外光谱吸收曲线。

图4为采用紫外分光光度法建立的测定海带多酚的标准曲线。

图5为紫外光谱吸收曲线，其中实线为甘露醇标准品的紫外光谱吸收曲线，虚线为本发明所述方法得到的甘露醇样品的紫外光谱吸收曲线。

图6为采用紫外分光光度法建立的测定甘露醇纯度的标准曲线。

图7为紫外光谱吸收曲线，其中实线为葡萄糖标准品的紫外光谱吸收曲线，虚线为本发明所述方法得到的海带多糖样品的紫外光谱吸收曲线。

图8为采用紫外分光光度法建立的测定海带多糖纯度的标准曲线。

图9为紫外光谱吸收曲线，其中实线为牛血清蛋白标准品的紫外光谱吸收曲线，虚线为本发明所述方法得到的海带多糖样品的紫外光谱吸收曲线。

图10为采用紫外分光光度法建立的测定海带多糖中蛋白质纯度的标准曲线。

具体实施方式

实施例1：

一、海带各营养成分的制备；

（1）取食用海带于60℃下干燥后将粉碎至30目，得海带粉；

（2）取300g海带粉，加入2100ml体积浓度为75%的乙醇溶液微波提取15min，真空抽滤，收集滤液，滤渣再以同样的条件微波提取一次，合并滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液于真空度为0.09Mpa及水浴温度为65℃的条件下浓缩，真空干燥，挥净乙醇，得乙醇溶液提取物119.4g，滤渣170.2g；其中，所述的微波提取条件为：温度为60℃，微波功率400W；

（3）往步骤（2）所收集的滤渣中加入5957ml65℃的水，微波提取60min，以纱布为滤网进行真空抽滤，并对滤渣进行挤压，合并抽滤和挤压所得到滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液以4000r/min的速度离心10min，收集上清液，真空浓缩至相对密度为1.09；往浓缩液中加入乙醇至乙醇的体积浓度为70%，然后置于0℃下静置10h，真空抽滤，冷冻干燥至含水率低于10%，得到海带多糖及蛋白质混合物19.74g；其中，所述的微波提取条件为：温度为85℃，微波功率为500W；

（4）往步骤（2）中得到的乙醇溶液提取物中加入597g乙醇，于65℃水浴条件下搅拌30min，真空抽滤，收集滤液，滤渣备用；将滤液于真空度为0.090Mpa及水浴温度为65℃的条件下进行浓缩，真空干燥，挥净乙醇，加入114g乙醇溶解，真空抽滤，收集滤液得到含低极性营养成分的提取液144ml，滤渣备用；合并两次滤渣得到甘露醇粗提物111.9g；

（5）往步骤（4）所得到的含低极性营养成分的提取液中加入乳化剂3.3g，混均，于真空度为0.075Mpa及水浴温度为65℃的条件下浓缩至相对密度为0.90，加入20.8g壁材溶液，混均，于真空度为0.085Mpa，水浴温度为70℃的条件下进行浓缩至得到相对密度为1.75，喷雾干燥，得到粉末状海带低极性营养成分55.4g；其中，

所述的乳化剂为单甘脂；

所述的壁材溶液是由将β-环糊精20.09g、干酪素0.54g和碳酸钠0.17g溶解到208.5g70℃的水中制得；

所述的喷雾干燥的条件是：物料流速是550mL/h，热风温度是160℃，热风流速是4m³/min；

（6）往步骤（4）所得甘露醇粗提物中加入559.5g体积浓度为90%乙醇溶液，于75℃水浴下搅拌40min，趁热真空抽滤，收集滤液，然后向滤液中加入51.7g的水，于搅拌状态下冷却至20℃，真空抽滤，收集滤渣，往滤渣加入308g的体积浓度为85%乙醇溶液，于80℃水浴下搅拌20min，于搅拌状态下冷却至15℃，真空抽滤，收集滤渣，使用体积浓度为85%乙醇洗涤滤渣，以110℃热风干燥至含水率低于10%，得到甘露醇21.82g；

（7）将步骤（3）所得海带多糖及蛋白质混合物19.74g、步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分55.4g和步骤（6）所得甘露醇21.82g合并到一起，混均即得海带营养成分。

二、海带营养成分的检测

（一）海带多不饱和脂肪酸的GC-MS法检测

GC-MS检测准备：准确称取2g含粉末状海带低极性营养成分，于60℃水浴，0.095Mpa下回收乙醇，加入体积比为1:15浓硫酸-甲醇溶液20mL，充分摇匀，在60℃下水浴加热回流30min，然后将溶液转入分液漏斗，用正己烷萃取三次，上层转移到100mL容量瓶，正己烷定容。

气相色谱条件：石英毛细管柱TG-5SILMS(30m×0.25mmID×0.25um)；载气为高纯氦气，流速为1.0mL·min^-1；进样口温度为250℃，色谱初始温度为60℃，以3.0℃·min^-1升至180℃，保持20min，再以1.0℃·min^-1升温至220℃，保留10min，最后以5.0℃·min^-1升至300℃；进样量1μL。

质谱条件：电离源为EI源，电离能量为70eV；离子源温度270℃，检测电压1225V；检测离子质量范围m/z33～550u；分流进样，分流比20:1；谱库检索为NIST库。

采用上述方法对本发明所得海带低极性营养成分进行鉴定，其中海带中多不饱和脂肪酸对总脂肪酸的相对含量为58.74%，主要为ω-6族和ω-3族的亚油酸为16.57%、花生四烯酸为3.81%、γ-亚麻酸为2.40%、十八烷四烯酸为3.38%和二十烷五烯酸为2.39%。棕榈酸是主要的饱和脂肪酸，其含量占脂肪酸总量为30.46%。

（二）海带多酚含量的检测

（1）原理

多酚类化合物有极易氧化的羟基，在碱性条件下将钨钼酸还原成蓝色化合物，此化合物在760nm左右有最大吸收峰。一定的条件下，该蓝色化合物颜色的深度与多酚的量成正比。

（2）标准液及样品液的配制

以间苯三酚为标准品，称取间苯三酚0.1000g，用60%乙醇溶解，并定容至100mL，摇匀，制得标准液。

精确称取2.0000g本实施制备的粉末状海带低极性营养成分，加入60%乙醇，搅拌至溶解，转移至100mL的容量瓶，定容，摇匀，即配制成海带低极性营养成分样品溶液。

（3）标准品和样品的吸收曲线

移取1mL标准液和样品液于25mL的具塞比色管中，以1mL蒸馏水作空白，分别加入5mL碱性铜试剂，摇匀，于水浴30℃中放置10min；再加入0.5mL福林-酚试剂，同样立即摇匀，水浴30℃放置30min，冷却后，用紫外可见分光光度计计在400～800nm波长范围内分别进行扫描，得到二者的吸收曲线如图3所示。由图3可见，标准品与样品最大吸收波长为760nm，且吸收曲线一致。

（4）多酚标准曲线的绘制

精密移取标准液3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00mL于50mL容量瓶中并定容，各移取1mL上述标准液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，分别加入5mL碱性铜试剂，摇匀，于水浴30℃中放置10min；再加入0.5mL福林-酚试剂，同样立即摇匀，水浴30℃放置30min，冷却后，于760nm处测定吸光度，得到6种浓度的标准液及空白试剂所对应吸光度，对上述结果进行线性回归便得到相关系数R=0.9990的线性方程：A＝110.9C-0.0324，方程中的A为吸光度，C为标准液的浓度。所述线性方程对应的标准曲线如附图4所示。

（5）样品含量的测定

精确移取1mL样品液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，加入5mL碱性铜试剂，摇匀，于水浴30℃中放置10min；再加入0.5mL福林-酚试剂，同样立即摇匀，水浴30℃放置30min，冷却后，于760nm处测定吸光度，将吸光度值代入上述线性方程即可计算出样品液的浓度，然后再根据样品液的体积便可算得本实例所制得的粉末状海带低极性营养成分中多酚含量为3.42（间苯三酚）mg/g。

（三）海带低极性营养成分粉末的包埋率测定

（1）样品总油及表面油的测定

精确称取3.00g粉末状海带低极性营养成分，加入10mL蒸馏水溶解，待其溶解后加入20mL石油醚萃取，取石油醚层挥干溶剂，即得样品总油；

精确称取3.00g海带低极性营养成分粉末，加入10mL石油醚，搅拌均匀，静置10min，真空抽滤过滤，溶液挥干溶剂，即得表面油；

（2）样品包埋率的测定

根据公式4计算样品包埋率。

采用上述方法对本发明所得粉末状海带低极性营养成分进行检测，其中海带低极性营养成分粉末的喷雾干燥包埋率为92.8%。

（四）甘露醇纯度的检测；

（1）原理

比色法分析测定甘露醇，是利用高碘酸钠与甘露醇反应产生黄色产物（3,5—二乙酰—1,4脱氢二甲基吡啶），此化合物在412nm左右处有最大吸收峰。一定的条件下，该黄色产物颜色的深度与甘露醇的量成正比。

（2）标准液及样品液的配制

以甘露醇为标准品，精确称取0.1000g甘露醇标准品，用蒸馏水溶解，定容至100mL，摇匀，制得标准液；

精确称取0.1000g本实施制备的甘露醇样品，用蒸馏水溶解，并定容至100mL，摇匀，制得样品液。

（3）标准品和样品的吸收曲线

移取1mL标准液和样品液于25mL的具塞比色管中，以1mL蒸馏水作空白，分别加入1mL0.015mol/L NaIO₄的HCl溶液，放置10min后，再加入2mL0.1%L－鼠李糖溶液，4mLNash试剂，在53℃恒温水浴锅中加热15min，冷却后，用紫外可见分光光度计计在400～800nm波长范围内分别进行扫描，得到二者的吸收曲线如图5所示。由图5可见，标准品与样品最大吸收波长为413nm，且吸收曲线一致。

（4）甘露醇标准曲线的绘制

精密移取标准液1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50mL于50mL容量瓶中并定容，各移取1mL上述标准液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，分别加入1mL0.015mol/L NaIO₄的HCl溶液，放置10min后，再加入2mL0.1%L－鼠李糖溶液，4mL Nash试剂，在53℃恒温水浴锅中加热15min，冷却后，于413nm处测定吸光度，得到6种浓度的标准液及空白试剂所对应吸光度，对上述结果进行线性回归便得到相关系数R=0.9991的线性方程：A＝0.00997C+0.01659，方程中的A为吸光度，C为标准液的浓度。所述线性方程对应的标准曲线如附图6所示。

（5）样品纯度的测定

精确移取1mL样品液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，加入1mL0.015mol/LNaIO₄的HCl溶液，放置10min后，再加入2mL0.1%L－鼠李糖溶液，4mL Nash试剂，在53℃恒温水浴锅中加热15min，冷却后，于413nm处测定吸光度，将吸光度值代入上述线性方程即可计算出样品液的浓度，然后再根据样品液的体积便可算得本实例中所制得的甘露醇的纯度为98.8%。

（五）海带多糖含量的检测；

（1）原理

多糖在酸性条件下水解成单糖，单糖在浓硫酸的作用下进一步快速脱水成糖醛衍生物，糖醛衍生物与苯酚直接结合生成橙色衍生物，该衍生物在480～500nm处出现最大吸收峰。

（2）标准液及样品液的配制

以葡萄糖为标准品，精确称取0.1000g葡萄糖标准品，用蒸馏水溶解，定容至100mL，摇匀，制得标准液；

精确称取0.0250g本实施制备的海带多糖及蛋白质混合物样品，用蒸馏水溶解，并定容至100mL，摇匀，制得样品液。

（3）标准品和样品的吸收曲线

移取1mL标准液和样品液于25mL的具塞比色管中，以1mL蒸馏水作空白，分别加入1mL5%苯酚溶液，摇匀，然后缓慢加入5ml浓硫酸，震荡混匀，置于沸水浴中加热30min，冷却后，用紫外可见分光光度计计在400～800nm波长范围内分别进行扫描，得到二者的吸收曲线如图7所示。由图7可见，标准品与样品最大吸收波长为487nm，且吸收曲线一致。

（4）葡萄糖标准曲线的绘制

精密移取标准液1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50mL于50mL容量瓶中并定容，各移取1mL上述标准液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，分别加入1mL5%苯酚溶液，摇匀，然后缓慢加入5ml浓硫酸，震荡混匀，置于沸水浴中加热30min，冷却后，于487nm处测定吸光度，得到6种浓度的标准液及空白试剂所对应吸光度，对上述结果进行线性回归便得到相关系数R=0.9997的线性方程：A＝0.00832C-0.00143，方程中的A为吸光度，C为标准液的浓度。所述线性方程对应的标准曲线如附图8所示。

（5）样品含量的测定

精确移取1mL样品液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，分别加入1mL5%苯酚溶液，摇匀，然后缓慢加入5ml浓硫酸，震荡混匀，置于沸水浴中加热30min，冷却后，于487nm处测定吸光度，将吸光度值代入上述线性方程即可计算出样品液的浓度，然后再根据样品液的体积便可算得本实例中所制得的海带多糖和蛋白质混合物的含量为16.57%。

（六）海带蛋白质纯度的检测；

（1）原理

在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜离子结合生成复合物：福林一酚试剂中的磷钼酸盐一磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色，该衍生物在740～760nm处出现最大吸收峰。

（2）标准液及样品液的配制

以牛血清蛋白为标准品，精确称取0.1000g牛血清蛋白标准品，用蒸馏水溶解，定容至100mL，摇匀，制得标准液；

精确称取0.2000g本实施制备的海带多糖和蛋白质混合物样品，用蒸馏水溶解，并定容至100mL，摇匀，制得样品液。

（3）标准品和样品的吸收曲线

移取1mL标准液和样品液于25mL的具塞比色管中，以1mL蒸馏水作空白，分别加入5mL碱性铜试剂，摇匀，于水浴30℃中放置10min；再加入0.5mL福林-酚试剂，同样立即摇匀，水浴30℃放置30min，冷却后，用紫外可见分光光度计计在400～800nm波长范围内分别进行扫描，得到二者的吸收曲线如图9所示。由图9可见，标准品与样品最大吸收波长为753nm，且吸收曲线一致。

（4）牛血清蛋白标准曲线的绘制

精密移取标准液3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00mL于50mL容量瓶中并定容，各移取1mL上述标准液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，分别加入5mL碱性铜试剂，摇匀，于水浴30℃中放置10min；再加入0.5mL福林-酚试剂，同样立即摇匀，水浴30℃放置30min，冷却后，于753nm处测定吸光度，得到6种浓度的标准液及空白试剂所对应吸光度，对上述结果进行线性回归便得到相关系数R=0.9997的线性方程：A＝0.00283C+0.02835，方程中的A为吸光度，C为标准液的浓度。所述线性方程对应的标准曲线如附图10所示。

（5）样品纯度的测定

精确移取1mL样品液于具塞比色管中，以蒸馏水为空白试剂，分别加入5mL碱性铜试剂，摇匀，于水浴30℃中放置10min；再加入0.5mL福林-酚试剂，同样立即摇匀，水浴30℃放置30min，冷却后，于753nm处测定吸光度，将吸光度值代入上述线性方程即可计算出样品液的浓度，然后再根据样品液的体积便可算得本实例中所制得的蛋白质的含量为6.35%。

实施例2：

（1）取食用海带于80℃下干燥后将粉碎至60目，得海带粉；

（2）取500g海带粉，加入1500ml体积浓度为90%的乙醇溶液微波提取12min，真空抽滤，收集滤液，滤渣再以同样的条件微波提取一次，合并滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液于真空度为0.085Mpa及水浴温度为55℃的条件下浓缩，真空干燥，挥净乙醇，得乙醇溶液提取物186.5g，滤渣300.2g；其中，所述的微波提取条件为：温度为50℃，微波功率500W；

（3）往步骤（2）所收集的滤渣中加入7503ml70℃的水，微波提取70min，以纱布为滤网进行真空抽滤，并对滤渣进行挤压，合并抽滤和挤压所得到滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液以3000r/min的速度离心15min，收集上清液，真空浓缩至相对密度为1.06；往浓缩液中加入乙醇至乙醇的体积浓度为65%，然后置于2℃下静置13h，真空抽滤，冷冻干燥至含水率低于10%，得到海带多糖及蛋白质混合物31.82g；其中，所述的微波提取条件为：温度为85℃，微波功率为600W；

（4）往步骤（2）中得到的乙醇溶液提取物中加入932.5g乙醇，于50℃水浴条件下搅拌20min，真空抽滤，收集滤液，滤渣备用；将滤液于真空度为0.085Mpa及水浴温度为55℃的条件下进行浓缩，真空干燥，挥净乙醇，加入171g乙醇溶解，真空抽滤，收集滤液得到含低极性营养成分的提取液217ml，滤渣备用；合并两次滤渣得到甘露醇粗提物189.2g；

（5）往步骤（4）所得到的含低极性营养成分的提取液中加入乳化剂3.47g，混均，于真空度为0.085Mpa及水浴温度为55℃的条件下浓缩至相对密度为0.92，加入29.1g壁材溶液，混均，于真空度为0.095Mpa，水浴温度为65℃的条件下进行浓缩至得到相对密度为1.76，喷雾干燥，得到粉末状海带低极性营养成分81.51g；其中，

所述的乳化剂为单甘脂；

所述的壁材溶液是由将β-环糊精28.66g、干酪素0.33g和碳酸钠0.11g溶解到203.7g70℃的水中制得；

所述的喷雾干燥的条件是：物料流速是650mL/h，热风温度是180℃，热风流速是5m³/min；

（6）往步骤（4）所得甘露醇粗提物中加入567.6g体积浓度为70%乙醇溶液，于80℃水浴下搅拌20min，趁热真空抽滤，收集滤液，然后向滤液中加入85.66g的水，于搅拌状态下冷却至25℃，真空抽滤，收集滤渣，往滤渣加入684.84g的体积浓度为90%乙醇溶液，于90℃水浴下搅拌30min，于搅拌状态下冷却至20℃，真空抽滤，收集滤渣，使用体积浓度为95%乙醇洗涤滤渣，以110℃热风干燥至含水率低于10%，得到甘露醇38.81g；

（7）将步骤（3）所得海带多糖及蛋白质混合物31.82g、步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分81.51g和步骤（6）所得甘露醇38.81g合并到一起，混均即得海带营养素。

采用实施例1同样的方法进行检测，步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分中，多不饱和脂肪酸对总脂肪酸的相对含量为56.32%，海带多酚的含量为3.68（间苯三酚）mg/g，海带低极性成分喷雾干燥包埋率为89.6%；步骤（3）所得海带多糖及蛋白质混合物中，海带多糖的含量为14.56%，蛋白质的含量为5.42%；步骤（6）所得甘露醇的纯度为97.8%。

实施例3：

（1）取食用海带于70℃下干燥后将粉碎至40目，得海带粉；

（2）取400g海带粉，加入2400ml体积浓度为80%的乙醇溶液微波提取20min，真空抽滤，收集滤液，滤渣再以同样的条件微波提取一次，合并滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液于真空度为0.075Mpa及水浴温度为60℃的条件下浓缩，真空干燥，挥净乙醇，得乙醇溶液提取物154.4g，滤渣226.9g；其中，所述的微波提取条件为：温度为40℃，微波功率600W；

（3）往步骤（2）所收集的滤渣中加入3403ml60℃的水，微波提取50min，以纱布为滤网进行真空抽滤，并对滤渣进行挤压，合并抽滤和挤压所得到滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液以3500r/min的速度离心20min，收集上清液，真空浓缩至相对密度为1.09；往浓缩液中加入乙醇至乙醇的体积浓度为75%，然后置于5℃下静置16h，真空抽滤，冷冻干燥至含水率低于10%，得到海带多糖及蛋白质混合物25.41g；其中，所述的微波提取条件为：温度为80℃，微波功率为400W；

（4）往步骤（2）中得到的乙醇溶液提取物中加入463.2g乙醇，于60℃水浴条件下搅拌15min，真空抽滤，收集滤液，滤渣备用；将滤液于真空度为0.10Mpa及水浴温度为60℃的条件下进行浓缩，真空干燥，挥净乙醇，加入158g乙醇溶解，真空抽滤，收集滤液得到含低极性营养成分的提取液200ml，滤渣备用；合并两次滤渣得到甘露醇粗提物150.4g；

（5）往步骤（4）所得到的含低极性营养成分的提取液中加入乳化剂2.23g，混均，于真空度为0.090Mpa及水浴温度为60℃的条件下浓缩至相对密度为0.90，加入26.7g壁材溶液，混均，于真空度为0.095Mpa，水浴温度为65℃的条件下进行浓缩至得到相对密度为1.81，喷雾干燥，得到粉末状海带低极性营养成分69.21g；其中，

所述的乳化剂为单甘脂和蔗糖酯组成，所述的单甘脂的用量为75重量份，所述的蔗糖酯的用量为25重量份；

所述的壁材溶液是由将β-环糊精25.45g、干酪素0.844g和碳酸钠0.37g溶解到213.3g70℃的水中制得；

所述的喷雾干燥的条件是：物料流速是700mL/h，热风温度是190℃，热风流速是5m³/min；

（6）往步骤（4）所得甘露醇粗提物中加入300.8g体积浓度为75%乙醇溶液，于90℃水浴下搅拌25min，趁热真空抽滤，收集滤液，然后向滤液中加入41.7g的水，于搅拌状态下冷却至20℃，真空抽滤，收集滤渣，往滤渣加入576g的体积浓度为75%乙醇溶液，于70℃水浴下搅拌15min，于搅拌状态下冷却至25℃，真空抽滤，收集滤渣，使用体积浓度为85%乙醇洗涤滤渣，以100℃热风干燥至含水率低于10%，得到甘露醇32.64g；

（7）将步骤（3）所得海带多糖及蛋白质混合物25.41g、步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分69.21g和步骤（6）所得甘露醇32.64g合并到一起，混均即得海带营养素。

采用实施例1同样的方法进行检测，步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分中，多不饱和脂肪酸对总脂肪酸的相对含量为57.65%，海带多酚的含量为3.23（间苯三酚）mg/g，海带低极性成分喷雾干燥包埋率为86.5%；步骤（3）所得海带多糖及蛋白质混合物中，海带多糖的含量为15.32%，蛋白质的含量为6.33%；步骤（6）所得甘露醇的纯度为98.5%。

Claims (2)

1.一种海带营养成分的制备方法，该方法由以下步骤组成：

（1）将海带于50～80℃下干燥后粉碎至20～60目，得海带粉；

（2）取海带粉，加入3～8倍（w:v）体积浓度为70～90%的乙醇溶液微波提取10～20min，真空抽滤，收集滤液，滤渣再以同样的条件微波提取一次，合并滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液于真空度为0.07～0.10Mpa及水浴温度为50～70℃的条件下浓缩，真空干燥，挥净乙醇，得乙醇溶液提取物；其中，所述的微波提取条件为：温度为25～60℃，微波功率（W）与物料体积(mL)的比率为0.1～0.7；

（3）往步骤（2）所收集的滤渣中加入10～40倍（w:v）30～70℃的水，微波提取50～70min，以纱布为滤网进行真空抽滤，并对滤渣进行挤压，合并抽滤和挤压所得到滤液，并收集滤渣备用；合并后的滤液以2000～4000r/min的速度离心5～20min，收集上清液，真空浓缩至相对密度为1.05～1.10；往浓缩液中加入乙醇至乙醇的体积浓度为60～90%，然后置于0～5℃下静置4～12h，真空抽滤，冷冻干燥至含水率低于10%，得到海带多糖和蛋白质混合物；其中，所述的微波提取条件为：温度为60～90℃，微波功率（W）与物料体积(mL)的比率为0.05～0.3；

（4）往步骤（2）中得到的乙醇溶液提取物中加入1～5质量倍的乙醇，于30～70℃水浴条件下搅拌10～40min，真空抽滤，收集滤液，滤渣备用；将滤液于真空度为0.07～0.10Mpa及水浴温度为50～70℃的条件下进行浓缩，真空干燥，挥净乙醇，加入3～8质量倍的乙醇溶解，真空抽滤，收集滤液得到含低极性营养成分的提取液，滤渣备用；合并两次滤渣得到甘露醇粗提物；

（5）往步骤（4）所得到的含低极性营养成分的提取液中加入含低极性营养成分的提取液质量0.01～0.05倍的乳化剂，混均，于真空度为0.070～0.10Mpa及水浴温度为50～70℃的条件下浓缩至相对密度为0.85～0.95，加入1～3质量倍的壁材溶液，混均，于真空度为0.070～0.10Mpa，水浴温度为50～70℃的条件下进行浓缩至得到相对密度为1.4～2.0，喷雾干燥，得到粉末状海带低极性营养成分；其中，

所述的粉末状海带低极性营养成分中的主要营养成分为海带多不饱和脂肪酸和海带多酚；

所述的乳化剂为单甘脂或/和蔗糖酯；当所述的乳化剂由单甘脂和蔗糖酯组成时，所述的单甘脂的用量为50～75重量份，所述的蔗糖酯的用量为25～50重量份；

所述的壁材溶液是将壁材溶解到5～10质量倍60～70℃的水中制得，其中所述壁材按质量百分比由β-环糊精90～99%、干酪素0.7～7%和碳酸钠0.3～3%组成；

所述的喷雾干燥的条件是：物料流速是550～700mL/h，热风温度是160～200℃，热风流速是2～5m³/min；

（6）往步骤（4）所得甘露醇粗提物中加入1～5质量倍的体积浓度为70～95%乙醇溶液，于50～90℃水浴下搅拌20～50min，趁热真空抽滤，收集滤液，然后向滤液中加入0.05～0.15质量倍的水，于搅拌状态下冷却至15～30℃，真空抽滤，收集滤渣，往滤渣加入10～17质量倍的体积浓度为70～95%乙醇溶液，于50～90℃水浴下搅拌10～30min，于搅拌状态下冷却至15～30℃，真空抽滤，收集滤渣，使用体积浓度为70～100%乙醇洗涤滤渣，以80～120℃热风干燥至含水率低于10%，得到甘露醇；

（7）将步骤（3）所得海带多糖和蛋白质混合物、步骤（5）所得粉末状海带低极性营养成分和步骤（6）所得甘露醇合并到一起，混均即得海带营养成分。

2.一种权利要求1所述方法制得的海带营养成分，其特征在于，所述的海带营养成分由以下重量百分的组分组成：海带多糖和蛋白质混合物20～25%，海带低极性营养成分50～60%，甘露醇20～25%

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