CN103154029A - 抗人tweak的抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

特征在于结合TWEAK的结合TWEAK的抗体，其特征在于包含选自SEQ ID NO：8、16或24的CDR3H作为重链可变结构域，其用于治疗癌症或自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤。

Description

抗人TWEAK的抗体及其用途
本发明涉及抗人TWEAK的抗体(TWEAK抗体)、它们的产生方法、包含该抗体的药物组合物及其用途。
背景技术
人TWEAK(UniProtKB O43508，凋亡的TNF相关弱诱导物；SEQ IDNO：60)是细胞表面结合的II型跨膜蛋白质。TWEAK描述于Chicheportiche，Y.等，J.Biol.Chem.272(1997)32401-32410；Marsters，S.A.等，Curr.Biol.8(1998)525-528；Lynch，C.N.等，J.Biol.Chem.274(1999)8455-8459中。TWEAK的活性形式是可溶性同源三聚体。人和鼠TWEAK在受体结合结构域中显示93％序列同一性。TWEAK受体Fn14(成纤维细胞生长因子诱导的14kDa的蛋白质)是在配体结合结构域中由单个富含半胱氨酸的结构域组成的129aa的I型跨膜蛋白质。TWEAK信号发放经由NF-κB途径激活而发生。TWEAK mRNA在多种组织中表达，且见于大多数主要器官(如心脏、脑、骨骼肌和胰腺)、与免疫系统相关的组织(如脾、淋巴结和胸腺)中。已在心脏、脑、肺、胎盘、血管EC和平滑肌细胞中检测到Fn14mRNA。TWEAK无效和Fn14无效敲除小鼠存活、健康而可育，且具有更多的天然杀伤细胞，并显示增强的先天炎症反应。TWEAK涉及凋亡、增殖、血管发生、缺血半影、脑水肿、多发性硬化。
WO1998/005783、WO2000/042073、WO2003/086311、WO2006/130429、WO2006/130374、WO2006/122187、WO2006/089095、WO2006/088890、WO2006/052926中提到了抗-TWEAK抗体。
发明概述
本发明包含结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含选自SEQ ID NO：8、16或24的CDR3区(CDR3H)作为重链可变结构域。
本发明包含含有SEQ ID NO：1的可变轻链和SEQ ID NO：5的可变重链的抗体、含有SEQ ID NO：9的可变轻链和SEQ ID NO：13的可变重链的抗体，或含有SEQ ID NO：17的可变轻链和SEQ ID NO：21的可变重链的抗体的嵌合、人源化或T细胞表位缺失的变体。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含SEQ ID NO：6的CDR1H、SEQ ID NO：7的CDR2H和SEQ ID NO：8的CDR3H。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含SEQ ID NO：14的CDR1H、SEQ ID NO：15的CDR2H和SEQ ID NO：16的CDR3H。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含SEQ ID NO：22的CDR1H、SEQ ID NO：23的CDR2H和SEQ ID NO：24的CDR3H。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含SEQ ID NO：6的CDR1H、SEQ ID NO：7的CDR2H、SEQ ID NO：8的CDR3H及SEQ ID NO：2的CDR1L、SEQ ID NO：3的CDR2L、SEQ ID NO：4的CDR3L。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含SEQ ID NO：14的CDR1H、SEQ ID NO：15的CDR2H、SEQ ID NO：16的CDR3H及SEQ IDNO：10的CDR1L、SEQ ID NO：11的CDR2L、SEQ ID NO：12的CDR3L。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含SEQ ID NO：22的CDR1H、SEQ ID NO：23的CDR2H、SEQ ID NO：24的CDR3H及SEQ IDNO：18的CDR1L、SEQ ID NO：19的CDR2L、SEQ ID NO：20的CDR3L。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含选自SEQ ID NO：1、9、17、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、56或58的序列作为轻链可变结构域序列。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含选自SEQ ID NO：5、13、21、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57或59的序列作为重链可变结构域序列。
在一个实施方案中，该抗体的特征在于包含选自SEQ ID NO：17、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36的序列作为轻链可变结构域序列，且包含选自SEQ ID NO：21、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列作为重链可变结构域序列。
优选的是选自以下的轻链可变链和重链可变链的组合：1/5、9/13、17/21、25/37、26/38、27/39、28/40、29/41、30/42、31/43、32/44、33/45、34/46、35/47；36/48、56/57、58/59(例如，17/21意指包含SEQ ID NO：17的可变轻链和SEQ ID NO：21的可变重链的抗体)。
本发明的一个实施方案是结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：6的CDR1H、SEQ ID NO：7的CDR2H、SEQ ID NO：8的CDR3H及SEQ ID NO：2的CDR1L、SEQ ID NO：3的CDR2L、SEQ IDNO：4的CDR3L。
本发明的一个实施方案是结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：14的CDR1H、SEQ ID NO：15的CDR2H、SEQ ID NO：16的CDR3H及SEQ ID NO：10的CDR1L、SEQ ID NO：11的CDR2L、SEQ IDNO：12的CDR3L。
本发明的一个实施方案是结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：22的CDR1H、SEQ ID NO：23的CDR2H、SEQ ID NO：24的CDR3H及SEQ ID NO：18的CDR1L、SEQ ID NO：19的CDR2L、SEQ IDNO：20的CDR3L。
本发明的一个实施方案是结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含：a)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；b)SEQ IDNO：27的可变轻链和SEQ ID NO：44的可变重链；c)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；d)SEQ ID NO：26的可变轻链和SEQ ID NO：47的可变重链；e)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ IDNO：44的可变重链；f)SEQ ID NO：31的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；g)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链。
本发明的一个实施方案是结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含：a)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；b)SEQ IDNO：27的可变轻链和SEQ ID NO：44的可变重链；c)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；d)SEQ ID NO：26的可变轻链和SEQ ID NO：47的可变重链；e)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ IDNO：44的可变重链；f)SEQ ID NO：31的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；g)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；或h)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：39的可变重链。
这些抗体在本申请中命名如下。
抗体 SEQ ID NO
27 27、41
28 27、44
29 27、45
30 26、47
31 29、44
32 31、45
33 29、41
34 29、39
本发明的一个实施方案是结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含：a)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；b)SEQ IDNO：27的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；c)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：44的可变重链；d)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；或e)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQID NO：39的可变重链。
在一个实施方案中，结合TWEAK且特征在于上述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体属于人IgG1同种型，在一个实施方案中具有突变L234A+L235A。在一个实施方案中，结合TWEAK且特征在于上述氨基酸序列和氨基酸序列片段的抗体属于人IgG4同种型，优选具有突变S228P和L235E。
本发明的抗体特异性结合人TWEAK，在25℃通过Biacore测量，优选显示15分钟或更长的可溶性鼠TWEAK(SEQ ID NO：61的氨基酸81-225)与抗体间复合物的半衰期，且以4.9ng/ml或更低的IC50值结合鼠TWEAK并抑制鼠TWEAK与Fn14间的相互作用。
优选地，在25℃通过Biacore测量，本发明的抗体显示100分钟或更长、优选110分钟或更长的可溶性人TWEAK(SEQ ID NO：60的氨基酸99-249)与抗体间复合物的半衰期。显示这种半衰期的抗-TWEAK抗体尤其优选用于治疗自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤。
优选地，本发明的抗体以3.5ng/ml或更低、优选2.5ng/ml或更低的IC50值抑制人TWEAK与Fn14间的相互作用。本文所用的IC50意指阻断人TWEAK与Fn14间50％的相互作用的抗体量。
在一个实施方案中，该抗体属于IgG1同种型，在一个实施方案中该抗体具有突变L234A+L235A。在一个实施方案中，本发明的抗体属于人IgG4同种型，优选具有突变S228P和L235E。优选地，该抗体是人源化抗体或人抗体。
本发明的另一实施方案是包含本发明的抗体的药物组合物。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体在制备药物组合物中的用途。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体用于制备用于治疗癌症、自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎(psoratic arthritis)、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的药物。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体用于制备用于治疗自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的药物。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体用于制备用于治疗结肠癌、肺癌或胰腺癌的药物。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体在制备用于治疗癌症、自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的药物中的用途。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体在制备用于治疗自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的药物中的用途。
本发明的另一实施方案是本发明的抗体在制备用于治疗结肠癌、肺癌或胰腺癌的药物中的用途。
本发明的另一实施方案是编码本发明的抗体的核酸。
本发明的另一实施方案是编码本发明的抗体的重链可变结构域和/或轻链可变结构域的核酸。
本发明还提供包含本发明的核酸的表达载体，其能够在原核或真核宿主细胞中表达该核酸，及用于重组产生这种抗体的含有这类载体的宿主细胞。
本发明还包含含有本发明的载体的原核或真核宿主细胞。
本发明还包括用于产生本发明的重组人抗体或人源化抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达本发明的核酸，并从该细胞或细胞培养物上清回收该抗体。本发明还包含可通过这种重组法获得的抗体。
本发明的抗体对需要进行TWEAK靶向治疗的患者显示益处。本发明的抗体具有新的和独创性的特性，其导致对患有癌症、尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者的益处。
本发明还提供用于治疗患有癌症、尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者的方法，其包括对诊断为患有这种疾病(因此需要这种治疗)的患者施用有效量的本发明的结合TWEAK的抗体。该抗体优选以药物组合物施用。
本发明的另一实施方案是用于治疗患有癌症、尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者的方法，其特征在于对该患者施用本发明的抗体。
本发明还包括本发明的抗体在治疗患有癌症、尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者中的用途，以及在制备本发明的药物组合物中的用途。此外，本发明包括用于制备本发明的药物组合物的方法。
本发明还包含含有本发明的抗体的药物组合物，该抗体可选地与用于药用抗体制剂的缓冲剂和/或佐剂在一起。
本发明还提供在可药用载体中包含本发明的抗体的药物组合物。在一个实施方案中，该药物组合物可以包含在制品或试剂盒中。
附图简述
图1：本发明的抗体抑制胶原诱导的关节炎(类风湿性关节炎的鼠模型)。
发明详述
术语“抗体”涵盖多种形式的抗体结构，包括但不限于全抗体(wholeantibody)、双特异性抗体和抗体片段。本发明的抗体优选是人源化抗体、嵌合抗体或其他遗传改造的抗体，只要保留本发明的特征性特性。
“抗体片段”包含全长抗体的部分，优选其可变结构域，或至少其抗原结合部位。抗体片段的实例包括双抗体、单链抗体分子和从抗体片段形成的多特异性抗体。scFv抗体描述于例如Huston，J.S.，Methods inEnzymol.203(1991)46-88中。此外，抗体片段包含单链多肽，该单链多肽具有结合TWEAK的VH结构域的特征(即能够与VL结构域一起组装为功能性抗原结合部位)，或结合TWEAK的VL结构域的特征(即能够与VH结构域一起组装为功能性抗原结合部位)。
本文所用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指单一氨基酸组成的抗体分子的制剂。
术语“人源化抗体”指这样的抗体，其中与亲本免疫球蛋白的构架和/或“互补决定区”(CDR)相比，已将其构架区和/或“互补决定区”(CDR)修饰为包含不同物种的免疫球蛋白的CDR。在优选实施方案中，将兔CDR移植入人抗体的构架区来制备“人源化抗体”。见例如Riechmann，L.等，Nature332(1988)323-327；和Neuberger，M.S.等，Nature314(1985)268-270。
术语“嵌合抗体”指包含来自小鼠的可变区(即结合区)和至少部分衍生自不同来源或物种的恒定区的单克隆抗体，通常通过重组DNA技术制备。嵌合抗体包含例如小鼠可变区和人恒定区。这类小鼠/人嵌合抗体是所表达的包含编码大鼠免疫球蛋白可变区的DNA区段和编码人免疫球蛋白恒定区的DNA区段的免疫球蛋白基因的产物。本发明所涵盖的其他形式的“嵌合抗体”是那些，其中种类或亚类已从原抗体的种类或亚类修饰或改变。这类“嵌合”抗体也称为“类别转换抗体”。用于产生嵌合抗体的方法涉及现为本领域公知的常规重组DNA技术和基因转染技术。见例如Morrison，S.L.等，Proc.Natl.Acad Sci.USA81(1984)6851-6855；美国专利号5,202,238和5,204,244。
术语“T细胞表位缺失的抗体”指通过去除人T细胞表位(蛋白质中具有结合II类MHC分子的能力的肽序列)进行修饰来去除或降低免疫原性的抗体。通过此方法，鉴定肽的氨基酸侧链和具有II类MHC结合沟的特异性结合袋之间的相互作用。突变所鉴定出的免疫原性区来消除免疫原性。这类方法概述于例如WO98/52976中。
本发明的术语“抗TWEAK抗体”和“特异性结合TWEAK的抗体”指能够以足够的亲和力结合TWEAK，使得该抗体在本发明的靶向TWEAK中用作治疗剂的抗体。特异性结合TWEAK的抗体具有10-9M或更小，例如10-9M至10-13M的解离常数(Kd)。
本文所用的“可变结构域”(轻链可变结构域(VL)、重链可变结构域(VH))指直接涉及抗体与抗原结合的每对轻链和重链结构域。可变轻链和重链结构域具有相同的一般结构，每个结构域包含四个构架(FR)区，构架区的序列广泛保守，通过三个“高变区”(或互补决定区，CDR)连接。构架区采用β-折叠构象，CDR可以形成连接β-折叠结构的环。每条链中的CDR通过构架区保持其三维结构，并与来自其他链的CDR一起形成抗原结合部位。抗体的重链和轻链CDR3区在本发明的抗体的结合特异性/亲和力中发挥极其重要的作用，并因此提供本发明的另一目的。
在本文中使用时，术语“抗体的抗原结合部分”指抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。“构架”或“FR”区是除本文定义的高变区残基外的那些可变结构域区域。因此，抗体的轻链和重链可变结构域从N端至C端包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。尤其是，重链的CDR3是对抗原结合贡献最大并定义抗体的特性的区域。按照Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)的标准定义确定CDR和FR区和/或来自“高变环”的那些残基。
术语“CDR1H”指根据Kabat推测的重链可变区的CDR1区。CDR2L、CDR3H等意指来自重链(H)或轻链(L)的各区域。例如，特征在于包含SEQ ID NO：6的CDR1H的抗体意指该抗体在其可变重链中包含此氨基酸序列作为重链可变链CDR1区。例如，特征在于包含SEQ ID NO：6的CDR1H、SEQ ID NO：7的CDR2H、SEQ ID NO：8的CDR3H的抗体意指该抗体在其重链中包含SEQ ID NO：6作为CDR1的序列、SEQ ID NO：7作为CDR2的序列、SEQ ID NO：8作为CDR3的序列。
本文所用的术语“核酸”或“核酸分子”旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链，但优选双链DNA。
本申请内所用的术语“氨基酸”指天然存在的羧基α-氨基酸的组，其包含丙氨酸(三字母密码：ala；单字母密码：A)、精氨酸(arg，R)、天冬酰胺(asn，N)、天冬氨酸(asp，D)、半胱氨酸(cys，C)、谷氨酰胺(gln，Q)、谷氨酸(glu，E)、甘氨酸(gly，G)、组氨酸(his，H)、异亮氨酸(ile，I)、亮氨酸(leu，L)、赖氨酸(lys，K)、甲硫氨酸(met，M)、苯丙氨酸(phe，F)、脯氨酸(pro，P)、丝氨酸(ser，S)、苏氨酸(thr，T)、色氨酸(trp，W)、酪氨酸(tyr，Y)和缬氨酸(val，V)。
在将它与另一核酸放置在功能关系中时，核酸“有效连接”。例如，如果前序列或分泌前导序列的DNA表达为参与多肽分泌的前蛋白，则它与该多肽的DNA有效连接；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则它与该编码序列有效连接；或者，如果核糖体结合位点的放置便于翻译，则它与编码序列有效连接。通常，“有效连接”意味着所连接的DNA序列是共线的，且在分泌前导序列的情况下是毗连且在阅读框中的。但是，增强子不必是毗连的。通过在方便的限制位点连接来实现连接。如果不存在这类位点，则按照常规实践使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。
本文所用的表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，且所有这类命名都包括后代。因此，词语“转化体”和“转化的细胞”包括最初的受试细胞及从其衍生的培养物，而不考虑转移的数目。还应理解，所有后代可以由于有意或无意的突变而并非在DNA含量上精确相同。包括具有与在最初转化的细胞中筛选的功能或生物学活性相同的功能或生物学活性的变体后代。
抗体的“Fc部分”不直接涉及抗体与抗原的结合，但显示多种效应子功能。“抗体的Fc部分”是技术人员公知的术语，且根据抗体的木瓜蛋白酶切割来定义。取决于其重链的恒定区的氨基酸序列，将抗体或免疫球蛋白划分为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM这几类，这些中的几类可以进一步划分为亚类(同种型；表述“同种型”或“亚类”在本文中可互换使用)，例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，IgA1和IgA2。根据重链恒定区，将不同种类的免疫球蛋白分别称为α、δ、ε、γ和μ。抗体的Fc部分直接涉及ADCC(依赖抗体的细胞毒性)及基于补体激活、C1q结合和Fc受体结合的CDC(依赖补体的细胞毒性)。补体激活(CDC)由补体因子C1q与大多数IgG抗体亚类的Fc部分的结合起始。虽然抗体对补体系统的影响依赖于某些条件，但与C1q的结合由Fc部分中确定的结合部位引起。这类结合部位为现有技术已知，并由例如Boackle，R.J.等，Nature282(1979)742-743；Lukas，T.J.等，J.Immunol.127(1981)2555-2560；Brunhouse，R.和Cebra，J.J.，Mol.Immunol.16(1979)907-917；Burton，D.R.等，Nature288(1980)338-344；Thommesen，J.E.等，Mol.Immunol.37(2000)995-1004；Idusogie，E.E.等，J.Immunol.164(2000)4178-4184；Hezareh，M.等，J.Virology75(2001)12161-12168；Morgan，A.等，Immunology86(1995)319-324；EP0307434描述。这类结合部位是例如L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329(根据Kabat的EU参考号编号，见下文)。IgG1、IgG2和IgG3亚类的抗体通常显示补体激活及C1q和C3结合，而IgG4不激活补体系统，且不结合C1q和C3。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含衍生自人来源的Fc部分，且优选包含人恒定区的所有其他部分。本文所用的术语“衍生自人来源的Fc部分”指这样的Fc部分，其是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的人抗体的Fc部分，优选来自人IgG1亚类的Fc部分、突变的来自人IgG1亚类的Fc部分(优选具有突变L234A+L235A)、来自人IgG4亚类的Fc部分或突变的来自人IgG4亚类的Fc部分(优选具有突变S228P和L235E)。最优选的是SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：52(人IgG1亚类)、SEQ ID NO：53(具有突变L234A和L235A的人IgG1亚类)、SEQ ID NO：54(人IgG4亚类)或SEQ ID NO：55(具有突变S228P和L235E的人IgG4亚类)的人重链恒定区。
优选地，本发明的抗体属于人IgG1亚类或属于人IgG4亚类。在一个实施方案中，本发明的抗体属于人IgG1亚类。在一个实施方案中，本发明的抗体属于人IgG4亚类。
本发明的抗体的特征在于恒定链属于人来源。这类恒定链为现有技术公知，并例如由Kabat(见例如Johnson，G.和Wu，T.T.，Nucleic Acids Res.28(2000)214-218)描述。例如，有用的人重链恒定区包含SEQ ID NO：51或28的氨基酸序列。例如，有用的人轻链恒定区包含SEQ ID NO：49的κ轻链恒定区的氨基酸序列。还优选抗体属于兔来源，且包含Kabat(见例如Sequences of Proteins of Immunological Interest，Kabat，E.A.等，第5版，DIANE Publishing(1992))的兔抗体的抗体可变序列框。
本发明包括用于治疗需要治疗的患者的方法，其特征在于对该患者施用治疗有效量的本发明的抗体。
本发明包含本发明的抗体在治疗中的用途。
本发明包含本发明的抗体在制备用于治疗癌症，尤其是结肠癌、肺癌或胰腺癌，或用于治疗自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的药物中的用途。
本发明包含本发明的抗体在治疗癌症或炎性疾病中，优选在治疗结肠癌、肺癌或胰腺癌中，或在治疗自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤中的用途。
本发明的另一实施方案是用于产生抗TWEAK的抗体的方法，其特征在于将编码本发明的抗体的重链的核酸和编码该抗体的轻链的核酸的序列插入一个或两个表达载体，将该一个或两个表达载体插入真核宿主细胞，表达所编码的抗体并从该宿主细胞或上清回收。
优选通过重组手段产生本发明的抗体。这类方法为现有技术公知，且包括在原核和真核细胞中表达蛋白质，随后分离抗体多肽，并通常纯化至可药用纯度。对于蛋白质表达，通过标准方法将编码轻链和重链的核酸或其片段插入表达载体。在适当的原核或真核宿主细胞(如CHO细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、HEK293细胞、COS细胞、酵母或大肠杆菌(E.coli)细胞)中进行表达，并从细胞(从上清或在细胞裂解后)回收抗体。
抗体的重组产生为现有技术公知，并描述于例如Makrides，S.C.，Protein Expr.Purif.17(1999)183-202；Geisse，S.等，Protein Expr.Purif.8(1996)271-282；Kaufman，R.J.，Mol.Biotechnol.16(2000)151-160；Werner，R.G.，Arzneimittelforschung(Drug Res.)48(1998)870-880的综述文章中。
抗体可以以全细胞、细胞裂解物、或部分纯化或基本上纯的形式存在。通过标准技术(包括柱层析和本领域公知的其他技术)进行纯化来消除其他细胞成分或其他污染物，例如其他细胞核酸或蛋白质。见Ausubel，F.等(编辑)，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing andWiley Interscience，New York(1987)。
NS0细胞中的表达由例如Barnes，L.M.等，Cytotechnology32(2000)109-123；Barnes，L.M.等，Biotech.Bioeng.73(2001)261-270描述。瞬时表达由例如Durocher，Y.等，Nucl.Acids.Res.30(2002)E9描述。可变结构域的克隆由Orlandi，R.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86(1989)3833-3837；Carter，P.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89(1992)4285-4289；Norderhaug，L.等，J.Immunol.Methods204(1997)77-87描述。优选的瞬时表达系统(HEK293)由Schlaeger，E.-J.和Christensen，K.在Cytotechnology30(1999)71-83中及Schlaeger，E.-J.在J.Immunol.Methods194(1996)191-199中描述。
通过常规免疫球蛋白纯化方法(如，例如，A蛋白-Sepharose、羟基磷灰石层析、透析或亲和层析)适宜地从培养基分离单克隆抗体。用常规方法容易地分离和测序编码单克隆抗体的DNA和RNA。杂交瘤细胞可以作为这种DNA和RNA的来源。一旦分离，即可将DNA插入表达载体，然后将该表达载体转染入否则将不产生免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞(如HEK293细胞、CHO细胞或骨髓瘤细胞)来获得重组单克隆抗体在该宿主细胞中的合成。
通过本领域已知的多种方法来制备编码抗TWEAK抗体的氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于，从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)，或通过寡核苷酸介导(或位点定向)诱变、PCR诱变和盒诱变此前制备的变体或非变体形式的人源化抗TWEAK抗体来制备。
将本发明的重链和轻链可变结构域与启动子、翻译起始、恒定区、3’非翻译区、多聚腺苷化作用和转录终止的序列组合来形成表达载体构建体。重链和轻链表达构建体可以组合在单个载体中，共转染、连续转染或分开转染入宿主细胞，然后融合该宿主细胞来形成表达两种链的单个宿主细胞。
在另一方面，本发明提供组合物，例如药物组合物，其包含与可药用载体配制在一起的本发明的单克隆抗体或其抗原结合部分中的一种或其组合。
本文所用的“可药用载体”包括生理上相容的任意和所有溶剂、分散介质、涂料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收/吸回延迟剂等。优选地，该载体适合用于注射或灌注。
本发明的组合物可以通过本领域已知的多种方法施用。如技术人员所理解，施用的途径和/或方式将取决于希望的结果而变。
可药用载体包括无菌水溶液或分散体及用于制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。这类介质和物质在药物活性物质中的用途为本领域已知。除水外，该载体可以是例如等渗缓冲盐溶液。
无论所选择的施用途径是什么，通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明的化合物(其可以以适宜的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制为可药用剂型。
为了获得对针对具体患者、组合物和施用方式达到希望的治疗反应有效而对该患者无毒性的活性成分的量(有效量)，可以改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平。所选择的剂量水平将取决于多种药物动力学因素，包括所利用的本发明的具体组合物或其酯、盐或酰胺的活性；施用的途径；施用的时间；所利用的具体化合物的排泄速率；与所利用的具体组合物组合使用的其他药物、化合物和/或物质；所治疗的患者的年龄、性别、体重、状态、一般健康和过往病史；及医学领域公知的类似因素。
本发明包含本发明的抗体在治疗患有癌症，尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者中的用途。
本发明还包括用于治疗患有这种疾病的患者的方法。
本发明还提供用于制备包含有效量的本发明的抗体和可药用载体的药物组合物的方法，及本发明的抗体在这种方法中的用途。
本发明还提供有效量的本发明的抗体(优选与可药用载体一起)制备药剂中的用途；在治疗患有癌症，尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者中的用途。
本发明还提供有效量的本发明的抗体(优选与可药用载体一起)制备药物中的用途；在治疗患有癌症，尤其是患有结肠癌、肺癌或胰腺癌，或患有自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者中的用途。
序列描述
表1：
抗体301
兔轻链可变结构域(VL) SEQ ID NO：1
CDR1L SEQ ID NO：2
CDR2L SEQ ID NO：3
CDR3L SEQ ID NO：4
兔重链可变结构域(VH) SEQ ID NO：5
CDR1H SEQ ID NO：6
CDR2H SEQ ID NO：7
CDR3H SEQ ID NO：8
嵌合轻链301 SEQ ID NO：56
嵌合重链301 SEQ ID NO：57
表2：
抗体304
兔轻链可变结构域(VL) SEQ ID NO：9
CDR1L SEQ ID NO：10
CDR2L SEQ ID NO：11
CDR3L SEQ ID NO：12
兔重链可变结构域(VH) SEQ ID NO：13
CDR1H SEQ ID NO：14
CDR2H SEQ ID NO：15
CDR3H SEQ ID NO：16
嵌合轻链304 SEQ ID NO：58
嵌合重链304 SEQ ID NO：59
表3：
抗体305
兔轻链可变结构域(VL) SEQ ID NO：17
CDR1L SEQ ID NO：18
CDR2L SEQ ID NO：19
CDR3L SEQ ID NO：20
兔重链可变结构域(VH) SEQ ID NO：21
CDR1H SEQ ID NO：22
CDR2H SEQ ID NO：23
CDR3H SEQ ID NO：24
嵌合轻链305 SEQ ID NO：25
VL的人源化变体，305-LC1 SEQ ID NO：26
VL的人源化变体，305-LC2 SEQ ID NO：27
VL的人源化变体，305-LC3 SEQ ID NO：28
VL的人源化变体，305-LC4 SEQ ID NO：29
VL的人源化变体，305-LC5 SEQ ID NO：30
VL的人源化变体，305-LC6 SEQ ID NO：31
VL的人源化变体，305-LC7 SEQ ID NO：32
VL的人源化变体，305-LC8 SEQ ID NO：33
VL的人源化变体，305-LC9 SEQ ID NO：34
VL的人源化变体，305-LC10 SEQ ID NO：35
VL的人源化变体，305-LC11 SEQ ID NO：36
嵌合重链305 SEQ ID NO：37
VH的人源化变体，305-HC1 SEQ ID NO：38
VH的人源化变体，305-HC2 SEQ ID NO：39
VH的人源化变体，305-HC3 SEQ ID NO：40
VH的人源化变体，305-HC4 SEQ ID NO：41
VH的人源化变体，305-HC5 SEQ ID NO：42
VH的人源化变体，305-HC6 SEQ ID NO：43
VH的人源化变体，305-HC7 SEQ ID NO：44
VH的人源化变体，305-HC8 SEQ ID NO：45
VH的人源化变体，305-HC9 SEQ ID NO：46
VH的人源化变体，305-HC10 SEQ ID NO：47
VH的人源化变体，305-HC11 SEQ ID NO：48
表4a：
人恒定区
人κ轻链 SEQ ID NO：49
人λ轻链 SEQ ID NO：50
人IgG1(高加索人同种异型) SEQ ID NO：51
人IgG1(非裔美国人同种异型) SEQ ID NO：52
人IgG1LALA-突变体(高加索人同种异型) SEQ ID NO：53
人IgG4 SEQ ID NO：54
人IgG4SPLE突变体 SEQ ID NO：55
表4b：
人和鼠TWEAK
人TWEAK SEQ ID NO：60
鼠TWEAK SEQ ID NO：61
提供以下实施例和序列表来帮助理解本发明，本发明的真实范围在所附权利要求中显示。应理解，可以在所示方法中进行修改而不背离本发明的精神。
实施例1
免疫的描述
用人/鼠TWEAK免疫兔
在第0天用400μg重组人TWEAK与弗氏完全佐剂，在第21、43和65天用200μg人TWEAK与弗氏不完全佐剂，及在第85天用200μg鼠TWEAK与弗氏不完全佐剂免疫新西兰白兔(穴兔(Oryctolaguscuniculus))。所有免疫均在皮下几个部位进行。在第77和98天制备血清进行效价测定。通过静脉内注射200μg人可溶性TWEAK和200μg鼠可溶性TWEAK来进行最后的加强，并根据其结合人和小鼠TWEAK(实施例2)、中和人和小鼠TWEAK-Fn14相互作用(实施例4和5)及抑制IL8分泌(实施例6)的能力选择抗体。此外，研究了抗体-TWEAK复合物的半衰期(实施例3)。在B16BL6(鼠黑素瘤；B16的转移性肺亚系)、SJSA(骨肉瘤，ATCC CRL-2098)和HCT-116(结肠，ATCC CCL-247)异种移植模型中测试了抗体的抗肿瘤功效。
实施例2
结合人和小鼠TWEAK(ELISA)
通过ELISA测定抗TWEAK抗体与人和小鼠TWEAK的结合。按1μg/ml、25μl/孔，在0.5M碳酸盐包被缓冲液pH9.5中，通过在2-8℃过夜孵育，将人或小鼠重组TWEAK固定在384孔Nunc Maxisorp板上。用PBS/1％BSA室温封闭平板1小时，然后进行两个洗涤步骤(含0.1％
Figure BDA00003001764400181
20的PBS)，并用含不同浓度抗TWEAK抗体的封闭缓冲液或该抗体的杂交瘤上清在室温下孵育1小时。再进行另外4次洗涤后，用1∶5000稀释在封闭缓冲液中的抗-兔-HRP抗体在室温下检测抗体1小时。再进行4个洗涤步骤后，通过加入
Figure BDA00003001764400191
(Roche Diagnostics GmbH)10-30分钟来产生信号。在405nm读出吸光度。
实施例3
用Biacore测定抗体-TWEAK复合物的半衰期
将Biacore链霉抗生物素蛋白包被的传感器封固入系统，使用Biacore2000仪器。以100μl/分钟的流速使用系统缓冲液HBS-ET(10mM HEPESpH7.4，150mM NaCl，1mM EDTA，0.05％20)。样品缓冲液为系统缓冲液。各按150RU将生物素化人可溶性TWEAK(SEQ ID NO：60的氨基酸99-249)和生物素化鼠可溶性TWEAK(SEQ ID NO：61的氨基酸81-225)固定在SA传感器上的不同流动池上。流动池FC1用作空白参考池。以100μl/分钟、2分钟结合时间将100nM的各抗体注入系统作为分析物。监测免疫复合物的解离5分钟。用HBS-ET洗涤传感器表面10秒，并用10mM甘氨酸pH2.252x2分钟注射来再生。在25℃进行此方法。采集区间[240s-300s]中的复合物解离期的动力学限速步骤来计算解离速率kd[1/s](Biacore Evaluation Software4.0)。根据方程t1/2diss＝ln(2)/(60x kd)来计算以分钟计的免疫复合物半衰期。结果显示在表5a和5b中，以及表6b中。
表5a：
Figure BDA00003001764400193
1)：SEQ ID NO：49的人κ轻链恒定区和SEQ ID NO：51的人IgG1恒定区的人恒定区
在另一实验中，测定了嵌合TW-305chi和WO2006/130374的P2D10的嵌合形式(两种嵌合抗体都具有SEQ ID NO：49的人κ轻链恒定区和SEQ ID NO：51的人IgG1恒定区作为人恒定区)的抗体-TWEAK复合物的半衰期(25℃下的t/2diss[分钟])。
表5b：
Figure BDA00003001764400201
1)：SEQ ID NO：49的人κ轻链恒定区和SEQ ID NO：51的人IgG1恒定区的人恒定区
本发明的抗体显示有价值的特性，如，在25℃通过Biacore测量，可溶性人TWEAK(SEQ ID NO：60的氨基酸99-249)和抗体间的复合物的半衰期为100分钟或更长，优选110分钟或更长。显示这种半衰期的抗TWEAK抗体尤其优选用于治疗自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病(例如肌营养不良)、多发性硬化、慢性肾病、骨病(例如多发性骨髓瘤中的骨变性)、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤。
实施例4
中和TWEAK-Fn14相互作用(人)
通过受体相互作用ELISA来显示人TWEAK/人Fn14相互作用的阻断。每孔100μl含1μg/ml人Fn14:Fc(与人IgG1的Fc部分融合的人Fn14胞外域(氨基酸1-75))的PBS，室温下包被96孔
Figure BDA00003001764400202
板(Nunc)1.5小时，并用含5％FBS的PBS溶液在摇动下室温封闭30分钟。同时，将含有2.5ng/ml Flag标记的人可溶性TWEAK(氨基酸106-249)的封闭溶液与不同浓度的抗TWEAK抗体或杂交瘤上清在摇动下室温孵育2小时。用洗涤缓冲液(含0.1％
Figure BDA00003001764400203
20的PBS)洗涤Fn14包被的平板一次后，向每个孔中转入100μlTWEAK-抗体溶液，并在室温下孵育平板1小时，然后用洗涤缓冲液洗涤4次。在孔中装入100μl1∶5000稀释在封闭缓冲液中的抗-FLAG-HRP检测抗体，并在室温下孵育1小时。再进行4个洗涤步骤后，通过加入100μl3，3，5，5-四甲基联苯胺(TMB)溶液约10分钟来产生信号。通过加入100μl1N HCl来终止反应，并在450nm(参考波长620nm)测量吸光度。结果显示在表6中。
实施例5
中和TWEAK-Fn14相互作用(小鼠)
小鼠TWEAK/小鼠Fn14相互作用ELISA遵循与针对人蛋白质所述相似的原理，但使用不同的检测系统，因为小鼠可溶性TWEAK不带标记。简言之，按上文针对人Fn14:Fc所述用小鼠Fn14:Fc(与人IgG1的Fc部分融合的小鼠Fn14胞外域(氨基酸1-75))包被Maxisorp平板，然后封闭和洗涤。将4ng/ml的小鼠可溶性TWEAK与抗TWEAK抗体或杂交瘤上清在封闭缓冲液中预孵育，然后向Fn14包被的平板的每个孔中加入100μl混合物。室温孵育1小时并洗涤4次后，室温下加入含125ng/ml生物素化抗小鼠TWEAK抗体的封闭缓冲液1小时，然后再进行4个洗涤步骤。通过在室温下与1∶5000稀释在封闭缓冲液中的链霉抗生物素蛋白-HRP孵育30分钟来检测TWEAK抗体。按上文所述产生信号并测量吸光度。结果显示在表6a和6b中。
实施例6
IL-8分泌ELISA
在使用A375黑素瘤细胞的IL-8分泌测定中显示抗TWEAK抗体在细胞系统中阻断TWEAK活性。96孔细胞培养板的每个孔用100μl生长培养基(含4.5g/L葡萄糖、含丙酮酸盐和GlutaMAXTM/10％FBS的DMEM)接种10,000个A375细胞(ATCC#CRL1619)，并在37℃/5％CO2孵育48小时。将300ng/ml的人重组可溶性TWEAK与不同浓度的抗TWEAK抗体在生长培养基中室温预孵育30分钟。然后，向细胞培养板的每个孔中加入50μl混合物，然后再孵育48小时，以允许IL-8分泌。200x g离心平板5分钟后取出20μl细胞上清，并与980μl来自“CXCL8QuantikineELISA”试剂盒(R&D Systems)的RD5P Calibrator Diluent混合。按厂家的说明通过ELISA来检测IL-8。结果显示在表6a和6b中。
表6a：
Figure BDA00003001764400221
表6b：
Figure BDA00003001764400222
实施例7
TW-301、TW-304、TW-305的表位区的测定
与Biacore Evaluation Software4.0一起使用Biacore2000仪器。样品和系统缓冲液是HBS-ET pH7.4。由于TWEAK分析物与传感器表面强烈的非特异性结合，不能像往常一样通过Johne，B.等，J.Immun.Meth.160(1993)191-198所述的Biacore交叉竞争实验来进行单个抗体的表位作图。
由于TWEAK蛋白质独特的生化特性，必须开发用TWEAK作为配体的另一种方法。将生物素化TWEAK固定在链霉抗生物素蛋白包被的芯片表面上，并测量连续注入的抗体(抗体1)的表位覆盖。目的是在已结合的第一抗体的存在下检测第二抗体(抗体2)的相对结合水平。从这些相对结合水平计算商(Ab2/Ab1，以％给出的摩尔比，表7)。
按20μl/分钟在链霉抗生物素蛋白包被的传感器流动池上固定5nM的生物素化TWEAK1分钟。按10μl/分钟将各为100nM的第一和第二mAb连续注入系统4分钟，直至达到各TWEAK表位的饱和。作为参考，使用SA包被的流动池。
按30μl/分钟用HBS-ET洗涤系统20秒，随后进行30μl/分钟6MGuadHCl和100mM HCl、每次1分钟的两个再生步骤。这些再生步骤从传感器表面剥离所结合的mAb，并不可逆地变性所固定的生物素化TWEAK。通过将天然生物素化TWEAK蛋白质(补料分批方式)固定在相同的流动池上来重复该过程，直至生物素化TWEAK完全饱和链霉抗生物素蛋白传感器表面。
表7：
交叉封闭实验显示各抗体的可接近性值小于10％，其在此测定的噪音范围之内。它清楚地显示TW-301chi、TW-304chi和TW-305chi结合相同的表位区。
实施例8
胶原诱导的关节炎(类风湿性关节炎的鼠模型)的体内抑制——抗体305(嵌合；TW305)抑制胶原诱导的关节炎(类风湿性关节炎的鼠模型)。
用弗氏完全佐剂中的II型牛胶原免疫6至8周龄雄性DBA1/J小鼠(Jackson Laboratory，Bal Harbor，Maine)，三周后用弗氏不完全佐剂中的II型牛胶原再次免疫(加强，第0天)。从加强前一天开始，每隔一天对小鼠施用嵌合抗体305(＝TW305，见图1)(10mg/kg，n＝12)、Enbrel(10mg/kg，n＝12)或载体(磷酸缓冲盐溶液，n＝12)。在强化后第0、2、5、7、9、12和14天针对关节炎检查小鼠。根据以下标准对关节炎的严重度评分：1＝一个足趾的肿胀和/或发红；2＝两个或多个关节中的肿胀；3＝一个爪子涉及超过两个关节明显肿胀；4＝整个爪子和足趾的严重关节炎。与载体相比，TW-305以与TNF阻断剂Enbrel的作用相似的程度显著降低临床分值(p＜0.05，第14天)。结果显示在图1中。
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Claims (21)

1.结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含选自SEQ ID NO：8、16或24的CDR3H作为重链可变结构域。
2.以下抗体的嵌合、人源化变体或T细胞表位缺失的变体：
a)包含SEQ ID NO：1的可变轻链和SEQ ID NO：5的可变重链的抗体；
b)包含SEQ ID NO：9的可变轻链和SEQ ID NO：13的可变重链的抗体；或
c)包含SEQ ID NO：17的可变轻链和SEQ ID NO：21的可变重链的抗体。
3.权利要求1的抗体，其特征在于：
a)包含SEQ ID NO：6的CDR1H、SEQ ID NO：7的CDR2H、SEQ IDNO：8的CDR3H及SEQ ID NO：2的CDR1L、SEQ ID NO：3的CDR2L、SEQ ID NO：4的CDR3L；或
b)包含SEQ ID NO：14的CDR1H、SEQ ID NO：15的CDR2H、SEQID NO：16的CDR3H及SEQ ID NO：10的CDR1L、SEQ ID NO：11的CDR2L、SEQ ID NO：12的CDR3L；或
c)包含SEQ ID NO：22的CDR1H、SEQ ID NO：23的CDR2H、SEQID NO：24的CDR3H及SEQ ID NO：18的CDR1L、SEQ ID NO：19的CDR2L、SEQ ID NO：20的CDR3L。
4.结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：6的CDR1H、SEQ ID NO：7的CDR2H、SEQ ID NO：8的CDR3H及SEQ IDNO：2的CDR1L、SEQ ID NO：3的CDR2L、SEQ ID NO：4的CDR3L。
5.结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：14的CDR1H、SEQ ID NO：15的CDR2H、SEQ ID NO：16的CDR3H及SEQ IDNO：10的CDR1L、SEQ ID NO：11的CDR2L、SEQ ID NO：12的CDR3L。
6.结合人TWEAK的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：22的CDR1H、SEQ ID NO：23的CDR2H、SEQ ID NO：24的CDR3H及SEQ IDNO：18的CDR1L、SEQ ID NO：19的CDR2L、SEQ ID NO：20的CDR3L。
7.权利要求6的抗体，其特征在于包含：a)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；b)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQID NO：44的可变重链；c)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；d)SEQ ID NO：26的可变轻链和SEQ ID NO：47的可变重链；e)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：44的可变重链；f)SEQID NO：31的可变轻链和SEQ ID NO：45的可变重链；g)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；或h)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：39的可变重链。
8.权利要求6的抗体，其特征在于包含：a)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；b)SEQ ID NO：27的可变轻链和SEQID NO：45的可变重链；c)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：44的可变重链；d)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：41的可变重链；或e)SEQ ID NO：29的可变轻链和SEQ ID NO：39的可变重链。
9.权利要求6的抗体，其特征在于选自SEQ ID NO：1/SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9/SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：17/SEQ ID NO：21、SEQ IDNO：25/SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：26/SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：27/SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：28/SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：29/SEQ IDNO：41、SEQ ID NO：30/SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：31/SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：32/SEQ ID NO：44；SEQ ID NO：33/SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：34/SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：35/SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：36/SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：56/SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58/SEQ IDNO：59的可变轻链序列/可变重链序列的组合。
10.权利要求6的抗体，其特征在于包含选自以下可变重链或轻链的的可变重链或可变轻链：SEQ ID NO：17、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、56、58、21、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、57或59。
11.药物组合物，其特征在于包含权利要求1至10的抗体。
12.权利要求1至10的抗体的用途，用于制备药物组合物。
13.权利要求1至10的抗体，其用于治疗癌症或自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病，例如肌营养不良、多发性硬化、慢性肾病、骨病，例如多发性骨髓瘤中的骨变性、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤。
14.权利要求1至10的抗体，其用于治疗结肠癌、肺癌或胰腺癌。
15.权利要求1至10的抗体的用途，用于制备用于治疗癌症或自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病，例如肌营养不良、多发性硬化、慢性肾病、骨病，例如多发性骨髓瘤中的骨变性、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的药物。
16.权利要求1至10的抗体的用途，用于制备用于治疗结肠癌、肺癌或胰腺癌的药物。
17.核酸，其编码权利要求1至10的抗体。
18.表达载体，其特征在于包含权利要求17的核酸，用于在原核或真核宿主细胞中表达结合TWEAK的抗体。
19.原核或真核宿主细胞，其包含权利要求18的载体。
20.用于产生权利要求1至10的重组抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达权利要求17的核酸，并从所述细胞或细胞培养物上清回收所述抗体。
21.用于治疗罹患癌症或罹患自身免疫病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、肌病，例如肌营养不良、多发性硬化、慢性肾病、骨病，例如多发性骨髓瘤中的骨变性、系统性红斑狼疮、狼疮肾炎和血管损伤的患者的方法，其特征在于对所述患者施用权利要求1至10的抗体。
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