TW202334220A - 人類腫瘤壞死因子α抗體 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於特異性結合人類TNFα之可溶性及膜形式之抗體、包含此類TNFα抗體之組合物以及使用此類TNFα抗體及組合物之方法。
Description
本發明屬於醫藥領域。特定言之，本發明係關於結合人類腫瘤壞死因子α (Tumor Necrosis Factor Alpha；TNFα)之可溶性及膜形式之抗體、包含此類TNFα抗體之組合物以及使用此類TNFα抗體及組合物之方法。
慢性自體發炎性免疫病症由身體針對其自身組織產生之免疫反應引起。免疫細胞(諸如T及B淋巴球)之過量及長期活化，及促炎性細胞介素TNFα以及其他介質(諸如介白素6 (IL-6)、介白素1 (IL-1)及干擾素γ (IFN-γ))之過度表現在自體發炎性免疫反應之致病機制中起主要作用。
腫瘤壞死因子α (亦稱為TNFα、腫瘤壞死因子、TNF、惡病質素)為多效性均三聚細胞介素，據報導其係由經活化之巨噬細胞、單核球、CD4
+及CD8
+T淋巴球、自然殺手(NK)細胞、B細胞、嗜中性球及內皮細胞分泌。TNFα在可溶性及膜形式(膜結合之前驅物形式可藉由金屬蛋白酶TNFα轉化酶(TACE)以蛋白分解方式裂解成可溶性均三聚體)兩者中表現。可溶性TNFα (sTNFα)經由1型受體(TNFR1，亦稱為TNFRSF1A、CD120a及p55)及2型受體(TNFR2，亦稱為TNFRSF1B、CD120b及p75)促進各種生物活性。TNFα結合至其受體(主要為TNFR1及TNFR2)，且傳輸用於生物功能(諸如發炎及細胞死亡)之分子信號。TNFR係藉由sTNFα及跨膜TNFα (tmTNFα)兩者活化。TNFα在調節免疫細胞中起作用且與慢性發炎(尤其在急性期發炎反應中)相關聯。過量之TNFα與各種慢性自體發炎性免疫病症相關聯。
靶向慢性自體發炎性免疫病症之抗TNFα治療劑為已知的，且審批通過或處於臨床開發中。此類治療劑包括阿達木單抗(adalimumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、戈利木單抗(golimumab)、賽妥珠單抗(certolizumab)及依那西普(Etanercept)。(Jang, D-i., Int. J. Mol. Sci., 2021, 22(5): 2719)然而，其使用之主要缺點為在一些接受抗TNFα治療劑治療之患者中會產生抗藥物抗體。此類抗藥物抗體可為與TNFα同時結合至抗TNFα治療劑之非中和抗體，或其可為中和抗體，其降低血清中抗TNFα治療劑之有效濃度及/或與TNFα競爭抗原結合位點(互補位)，由此抑制抗TNFα治療劑之工作機制。(Schie KA等人, Annals of the Rheumatic Diseases, 2015,
74: 311-314)。舉例而言，研究顯示，超過百分之九十之抗TNFα藥物抗體為中和的且可與其他抗TNFα抗體治療劑交叉反應。(Schie KA等人, 2015)。因此，在一些情況下，據報導，對抗TNFα治療劑產生抗藥物抗體之患者在投與藥物期間或在投與藥物之後的第一天內具有對此等治療劑減弱之臨床反應及/或不良事件，諸如輸注相關反應，其特徵在於諸如發熱、搔癢病、支氣管痙攣或心血管性虛脫之症狀(Atiqi, S., Front Immunol., 2020, 26(11): 312)。因此，抗藥物抗體反應可使得患者之治療選項受到限制。
因此，仍需要替代性抗TNFα治療劑，其以所需之親和力中和可溶性及膜TNFα，提供持久之作用持續時間且能夠治療慢性自體發炎性免疫病症。特定言之，仍需要一種抗人類TNFα抗體，其具有降低之引發抗藥物抗體反應的風險及/或不大量地結合至針對其他抗TNFα抗體治療劑之抗藥物抗體。另外仍需要一種抗人類TNFα抗體，其能夠治療慢性自體發炎性免疫病症且能夠在已對使用其他TNFα治療劑之治療產生抗藥物抗體反應之患者中治療慢性自體發炎性免疫病症。此類抗人類TNFα抗體較佳亦將具有低免疫原性風險及/或良好可發展性概況，諸如有助於開發、製造及調配之良好物理化學特性。
本發明提供結合及中和人類TNFα且抑制經TNF受體介導之反應(例如，NFkB活化、細胞介素產生)的抗人類TNFα抗體。本發明進一步提供包含此類抗人類TNFα抗體之組合物及使用此類抗人類TNFα抗體及組合物之方法。特定言之，本發明提供抗人類TNFα抗體，其具有所需之結合親和力、結合及中和可溶性及膜人類TNFα、在結合至膜TNFα時內化及/或對針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體展現低結合至無結合，且具有用於治療患有慢性自體發炎性免疫病症之患者的潛力，該等患者在先前用抗TNFα治療劑(例如，阿達木單抗)治療時已產生抗藥物抗體。此類慢性自體發炎性免疫病症包括類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis；RA)、幼年特發性關節炎(Juvenile Idiopathic Arthritis)、牛皮癬性關節炎(Psoriatic Arthritis；PsA)、僵直性脊椎炎(Ankylosing Spondylitis；AS)、克羅恩氏病(Crohn's Disease；CD)、潰瘍性結腸炎(Ulcerative Colitis；UC)、斑塊型牛皮癬(Plaque Psoriasis；PS)、化膿性汗腺炎(Hidradenitis Suppurativa；HS)、葡萄膜炎、非感染性中間、後部或全葡萄膜炎(non-infectious Intermediate, Posterior or Pan Uveitis)，或貝塞特氏病(Behcet's Disease)。如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體進一步呈現低免疫原性風險及/或良好可發展性概況(諸如良好物理化學特性(例如，黏度、聚集、穩定性))以促進開發、製造及調配。因此，本文中所提供之抗人類TNFα抗體具有一或多個以下特性：1)以所需之結合親和力結合人類TNFα，2)以所需之結合親和力結合恆河獼猴(rhesus macaque monkey)及/或犬科TNFα，3)抑制經TNFR介導之信號傳導(例如，NFkB)，4)抑制活體內細胞介素產生(例如，CXCL1)，5)與針對其他抗TNFα治療劑(例如，阿達木單抗)之抗藥物抗體具有低結合至無結合，6)在結合至膜TNFα時內化，7)具有低免疫原性風險，及/或8)具有良好可發展性概況(諸如具有可接受之黏度及/或聚集概況)以促進開發、製造及調配。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，且該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 1，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 3，LCDR1包含SEQ ID NO: 4，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 7之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 9之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中：
a. HCDR1包含SEQ ID NO: 22；
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LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及
LCDR3包含SEQ ID NO: 6；
b. HCDR1包含SEQ ID NO: 22；
HCDR2包含SEQ ID NO: 23；
HCDR3包含SEQ ID NO: 13；
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LCDR3包含SEQ ID NO: 15或47；
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d. HCDR1包含SEQ ID NO: 1；
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在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 1，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 13，LCDR1包含SEQ ID NO: 14，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 15。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 16之VH及包含SEQ ID NO: 17之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 18之HC及包含SEQ ID NO: 19之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 22，HCDR2包含SEQ ID NO: 23，HCDR3包含SEQ ID NO: 13，LCDR1包含SEQ ID NO: 4，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，人類TNFα抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。在一些實施例中，結合人類TNFα之抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 22，HCDR2包含SEQ ID NO: 23，HCDR3包含SEQ ID NO: 13，LCDR1包含SEQ ID NO: 14，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 15。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 17之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 19之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 22，HCDR2包含SEQ ID NO: 23，HCDR3包含SEQ ID NO: 13，LCDR1包含SEQ ID NO: 14，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 27之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 28之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 22，HCDR2包含SEQ ID NO: 23，HCDR3包含SEQ ID NO: 13，LCDR1包含SEQ ID NO: 46，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，SEQ ID NO: 46包含胺基酸殘基QASQGIXaa
7NYLN，其中SEQ ID NO: 46之Xaa
7為絲胺酸或精胺酸。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 27之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈(LC)。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 28之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 22，HCDR2包含SEQ ID NO: 23，HCDR3包含SEQ ID NO: 13，LCDR1包含SEQ ID NO: 14，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 47。在一些實施例中，SEQ ID NO: 47包含胺基酸殘基QQYDXaa
5LPLT，其中SEQ ID NO: 47之Xaa
5為天冬醯胺或離胺酸。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 17之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 24之VH及包含SEQ ID NO: 27之VL。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 19之輕鏈(LC)。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 25之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 28之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 1，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 30，LCDR1包含SEQ ID NO: 31，LCDR2包含SEQ ID NO: 5且LCDR3包含SEQ ID NO: 32。在一些實施例中，抗體包含有包含SEQ ID NO: 33之VH及包含SEQ ID NO: 34之VL。在一些實施例中，結合人類TNFα之抗體包含有包含SEQ ID NO: 35之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 36之輕鏈(LC)。
在本發明之一些實施例中，抗人類TNFα抗體為完全人類抗體。在本發明之一些實施例中，抗人類TNFα抗體具有人類IgG1同型。
在本發明之一些實施例中，抗人類TNFα抗體具有經修飾之人類IgG1。在一些實施例中，修飾在重鏈可變區(VH)中。在一些實施例中，修飾在輕鏈可變區(VL)中。在一些實施例中，修飾在VH及VL中。在其他實施例中，經修飾之人類IgG1 VH及/或VL向本發明之抗人類TNFα抗體提供所需之黏度概況及/或免疫原性風險概況。
在本發明之其他實施例中，抗人類TNFα抗體具有經修飾之人類IgG1恆定域，其包含經工程改造之半胱胺酸殘基以用於產生抗體結合物化合物(亦稱為生物結合物) (參見WO 2018/232088 Al)。更特定言之，在本發明之此類實施例中，抗人類TNFα抗體包含胺基酸殘基124 (EU編號)處之半胱胺酸，或胺基酸殘基378 (EU編號)處之半胱胺酸，或胺基酸殘基124 (EU編號)處之半胱胺酸及胺基酸殘基378 (EU編號)處之半胱胺酸。本文亦提供包含如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體之抗體藥物結合物。
在本發明之一些實施例中，抗人類TNFα抗體結合可溶性及膜TNFα，且抑制TNFα與人類TNF受體(TNFR)之結合。在本發明之一些實施例中，抗人類TNFα抗體結合可溶性及膜人類TNFα，且抑制人類TNFα與人類TNF受體之結合且抑制經TNFR介導之反應。在一些實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體抑制人類TNFα與人類TNFR之結合，且因此抑制經TNFR介導之反應，諸如：人類TNFR活化、NFkB磷酸化、細胞介素產生及/或經可溶性及膜TNFα誘導之細胞殺傷。在一些實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合人類TNFα，且在表現TNFR之細胞上抑制約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%之經TNFR介導之NFkB磷酸化及信號轉導。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合人類TNFα，且抑制約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%之經TNFα誘導之細胞介素產生(例如，CXCL1)。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合人類TNFα，且抑制約45%至約95%之經TNFα誘導之細胞介素產生(例如，CXCL1)。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合可溶性人類TNFα，且抑制約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%之經TNFα誘導之細胞殺傷。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合膜TNFα，且抑制約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%之經膜TNFα誘導之細胞殺傷。
在一些實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合膜人類TNFα且內化至表現膜TNFα之細胞中。在此類實施例中，本發明之抗體結合膜人類TNFα且約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%內化至表現膜TNFα之細胞中。
在一些實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體與針對其他抗TNFα治療劑(例如，阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗或依那西普)之抗藥物抗體具有低結合至無結合。在特定實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合。在此類實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體可用於治療在先前用如本文所定義之抗TNFα治療劑(例如，阿達木單抗)治療時已產生抗藥物抗體之患者。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體可用於治療患者，其自先前用此類其他抗TNFα治療劑治療時已產生針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體，且因此對其他抗TNFα治療劑具有減弱之臨床反應或不良反應。在此類實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體具有足夠不同之胺基酸及核酸序列，從而使得其與針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體具有低結合至無結合。在特定實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體具有足夠不同之CDR胺基酸序列，從而使得其與針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體具有低結合至無結合。在一些實施例中，其他抗TNFα治療劑為阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗或依那西普。
在一些實施例中，本發明提供編碼結合人類TNFα之新穎抗體之HC或LC或VH或VL的核酸，或包含此類核酸之載體。
在一些實施例中，本發明提供包含SEQ ID NO: 11、12、20、21、26、29、37或38之序列的核酸。
在一些實施例中，提供編碼結合人類TNFα之抗體之重鏈或輕鏈的核酸。在一些實施例中，提供包含編碼SEQ ID NO: 9、10、18、19、25、28、35或36之序列的核酸。在一些實施例中，提供包含編碼抗體重鏈之序列的核酸，該抗體重鏈包含SEQ ID NO: 9、18、25或35。舉例而言，核酸可包含選自SEQ ID NO: 11、20、26或37之序列。在一些實施例中，提供包含編碼抗體輕鏈之序列的核酸，該抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 10、19、28或36。舉例而言，核酸可包含選自SEQ ID NO: 12、21或29或38之序列。
在本發明之一些實施例中，提供編碼結合人類TNFα之抗體之VH或VL的核酸。在一些實施例中，提供包含編碼SEQ ID NO: 7、8、16、17、24、27、33或34之序列的核酸。在一些實施例中，提供包含編碼抗體VH之序列的核酸，該抗體VH包含SEQ ID NO: 7、16、24或33。在一些實施例中，提供包含編碼抗體VL之序列的核酸，該抗體VL包含SEQ ID NO: 8、17、27或34。
本發明之一些實施例提供包含編碼抗體重鏈或輕鏈之核酸序列的載體。舉例而言，此類載體可包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之核酸序列。
本文亦提供包含編碼抗體VH或VL之核酸序列的載體。舉例而言，此類載體可包含編碼SEQ ID NO: 7、16、24或33之核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 8、17、27或34之核酸序列。
本文亦提供包含編碼抗體重鏈之第一核酸序列及編碼抗體輕鏈之第二核酸序列的載體。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之第二核酸序列。
在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 9之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 18之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 19之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 25第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 25之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 19之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 25之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 28之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 35之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 36之第二核酸序列。
本文亦提供組合物，其包含編碼抗體重鏈之核酸序列的第一載體及包含編碼抗體輕鏈之核酸序列的第二載體。在一些實施例中，組合物包含第一載體，其包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之第二核酸序列。
在一些實施例中，組合物包含有包含編碼SEQ ID NO: 9之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列的第二載體。在一些實施例中，組合物包含有包含編碼SEQ ID NO: 18之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 19之核酸序列的第二載體。在一些實施例中，組合物包含有包含編碼SEQ ID NO: 25之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列的第二載體。在一些實施例中，組合物包含有包含編碼SEQ ID NO: 25之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 19之核酸序列的第二載體。在一些實施例中，組合物包含有包含編碼SEQ ID NO: 25之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 28之核酸序列的第二載體。在一些實施例中，組合物包含有包含編碼SEQ ID NO: 35之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 36之核酸序列的第二載體。
本發明之核酸可在宿主細胞中表現，例如在核酸已可操作地連接至表現控制序列之後。能夠表現與其可操作地連接之核酸的表現控制序列為此項技術中熟知的。表現載體可包括編碼一或多個信號肽之序列，該一或多個信號肽促進多肽自宿主細胞分泌。含有所關注之核酸(例如，編碼抗體之重鏈或輕鏈之核酸)的表現載體可藉由熟知方法(例如，穩定或短暫之轉染、轉型、轉導或感染)轉移至宿主細胞中。另外，表現載體可包含一或多種選擇標記物(例如，四環素、新黴素及二氫葉酸還原酶)以輔助偵測經所需核酸序列轉型之宿主細胞。
在另一態樣中，本文提供包含本文中所描述之核酸、載體或核酸組合物之細胞，例如宿主細胞。宿主細胞可為經表現本文所描述之抗體之全部或一部分的一或多種表現載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染的細胞。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本發明抗體之HC及LC多肽的表現載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本文所描述之抗體之HC多肽的第一載體及表現本文所描述之抗體之LC多肽的第二載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染。此類宿主細胞(例如，哺乳動物宿主細胞)可表現結合經本文所描述之人類TNFα的抗體。已知能夠表現抗體之哺乳動物宿主細胞包括CHO細胞、HEK293細胞、COS細胞及NS0細胞。
在一些實施例中，細胞(例如，宿主細胞)包含載體，其包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之第二核酸序列。
在一些實施例中，細胞(例如，宿主細胞)包含有包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之核酸序列的第二載體。
本發明進一步提供一種方法，其係用於藉由在使抗體表現之條件下培養上文所描述之宿主細胞(例如，哺乳動物宿主細胞)且自培養基回收所表現之抗體來產生結合本文中所描述之人類TNFα的抗體。可藉由習知技術純化其中已分泌抗體之培養基。可使用各種蛋白質純化之方法，且此類方法為此項技術中已知的且描述於(例如) Deutscher, Method in Enzymology 182: 83-89 (1990)及Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 第3版, Springer, NY(1994)中。
本發明進一步提供藉由任何本文中所描述之方法所產生之抗體或其抗原結合片段。
在另一態樣中，本文提供包含本文中所描述之抗體、核酸或載體之醫藥組合物。此類醫藥組合物亦可包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。醫藥組合物可藉由此項技術中熟知之方法(例如，
Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第22版(2012), A. Loyd等人, Pharmaceutical Press)製備。
本文中所描述之結合人類TNFα之抗體、核酸、載體或醫藥組合物可用於治療TNFα相關病症，諸如慢性自體發炎性免疫病症，包括(但不限於)類風濕性關節炎(RA)、幼年特發性關節炎、牛皮癬性關節炎(PsA)、僵直性脊椎炎(AS)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎、斑塊型牛皮癬(PS)、化膿性汗腺炎、葡萄膜炎、非感染性中間、後部、全葡萄膜炎，或貝塞特氏病。
在一些實施例中，本文提供用於在有需要之個體(例如，人類患者)中治療TNFα相關病症(例如，慢性自體發炎性免疫病症)之方法，其包含向個體投與本文中所描述之治療有效量之結合人類TNFα的抗體、編碼此類結合人類TNFα之抗體的核酸、包含此類核酸之載體，或包含此類結合人類TNFα之抗體、核酸或載體的醫藥組合物。本文中所描述之抗體、核酸、載體或醫藥組合物可藉由非經腸途徑(例如，皮下及靜脈內)投與。在實施例中，TNFα相關病症為慢性自體發炎性免疫病症。此類慢性自體發炎性免疫病症包括(但不限於)類風濕性關節炎(RA)、幼年特發性關節炎、牛皮癬性關節炎(PsA)、僵直性脊椎炎(AS)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎、斑塊型牛皮癬(PS)、化膿性汗腺炎、葡萄膜炎、非感染性中間、後部、全葡萄膜炎，或貝塞特氏病。在一些實施例中，投與治療有效量之結合人類TNFα之抗體的個體先前用其他抗TNFα治療劑治療，且其中個體產生針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體。在此類實施例中，其他抗TNFα治療劑係選自阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗或依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對至少四種或更多種選自由以下組成之群之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對至少三種或更多種選自由以下組成之群之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對至少兩種或更多種選自由以下組成之群之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合。
本文亦提供本文中所描述之結合人類TNFα之抗體、核酸、載體或醫藥組合物，其用於療法中。此外，本發明亦提供本文中所描述之結合人類TNFα之抗體、核酸、載體或醫藥組合物，其用於治療TNFα相關病症，例如慢性自體發炎性免疫病症。此類慢性自體發炎性免疫病症包括(但不限於)類風濕性關節炎(RA)、幼年特發性關節炎、牛皮癬性關節炎(PsA)、僵直性脊椎炎(AS)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎、斑塊型牛皮癬(PS)、化膿性汗腺炎、葡萄膜炎、非感染性中間、後部、全葡萄膜炎，及貝塞特氏病。本文中所描述之抗體、核酸、載體或醫藥組合物可藉由非經腸途徑(例如，皮下及靜脈內)投與。在本發明之一些實施例中，投與治療有效量之結合人類TNFα之抗體的個體先前用其他抗TNFα治療劑治療，且其中個體產生針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體。在此類實施例中，其他抗TNFα治療劑係選自阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗或依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對至少四種或更多種選自由以下組成之群之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對至少三種或更多種選自由以下組成之群之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對至少兩種或更多種選自由以下組成之群之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在又其他實施例中，如本文中所揭示之抗人類TNFα抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合。
本文提供本文中所描述之結合人類TNFα之抗體、核酸、載體或醫藥組合物之用途，其係用於製造用以治療TNFα相關病症(例如，慢性自體發炎性免疫病症)之藥劑。此類慢性自體發炎性免疫病症包括(但不限於)類風濕性關節炎(RA)、幼年特發性關節炎、牛皮癬性關節炎(PsA)、僵直性脊椎炎(AS)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎、斑塊型牛皮癬(PS)、化膿性汗腺炎、葡萄膜炎、非感染性中間、後部、全葡萄膜炎，及貝塞特氏病。
在一些實施例中，本發明之抗體結合人類TNFα且與針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體具有低結合至無結合。在此類實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合人類TNFα，中和可溶性及膜人類TNFα且抑制經TNF受體介導之反應。在一些實施例中，其他抗TNFα治療劑係選自阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗或依那西普。在一些實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體與針對至少四種或更多種由以下組成之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體與針對至少三種或更多種由以下組成之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體與針對至少兩種或更多種由以下組成之其他抗TNFα治療劑的抗藥物抗體具有低結合至無結合：阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及依那西普。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合。在此類實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體為IgG1。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體結合人類TNFα，且與針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體具有低結合至無結合，其中抗人類TNFα抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC包含SEQ ID NO: 9、18、25或35且LC包含SEQ ID NO: 10、19、28或36。在此類實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體中和人類TNFα且抑制經TNF受體介導之反應。在其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體為內化抗體。在又其他實施例中，本發明之抗人類TNFα抗體具有低免疫原性。
本專利申請案根據35 U.S.C. §119(e)主張2021年11月11日遞交之美國臨時申請案第63/278,245號之權利；其揭示內容以引用之方式併入本文中。
除非另外說明，否則如本文中所使用之術語「TNFα」係指可溶性及/或膜TNFα，以及任何由處理細胞中之TNFα前驅蛋白而產生之天然成熟TNFα。除非另外指示，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源之TNFα，該等脊椎動物包括哺乳動物，諸如犬科動物、靈長類動物(例如，人類及石蟹獼猴或恆河猴)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠)。該術語亦包括天然存在之TNFα變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。人類TNFα之實例的胺基酸序列為此項技術中已知的，例如NCBI寄存編號：NP_000585 (SEQ ID NO: 39)。石蟹獼猴TNFα之實例的胺基酸序列亦為此項技術中已知的，例如UniProt參考序列P79337 (SEQ ID NO: 45)。恆河獼猴TNFα之實例的胺基酸序列亦為此項技術中已知的，例如UniProt參考序列P48094 (SEQ ID NO: 40)。犬科TNFα之實例的胺基酸序列亦為此項技術中已知的，例如GenBank寄存編號：CAA64403 (SEQ ID NO: 44)。術語人類「TNFα」在本文中用於共同地指代全部已知之人類TNFα同功型及多型性形式。本文中所使用之序列編號係基於無信號肽之成熟蛋白。
除非另外說明，否則如本文中所使用之術語「TNFR」或「TNF受體」係指任何天然成熟TNFR，例如TNFR1 (亦稱為p55或p60)或TNFR2 (亦稱為p75或p80)。除非另外指示，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源之TNFR，該等脊椎動物包括哺乳動物，諸如犬科動物、靈長類動物(例如，人類及石蟹獼猴或恆河猴)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠)。該術語亦包括天然存在之TNFR變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。人類TNFR1之實例的胺基酸序列為此項技術中已知的，例如GenBank寄存編號：AAA61201 (SEQ ID NO: 48)。人類TNFR2之實例的胺基酸序列為此項技術中已知的，例如NCBI寄存編號：NP_001057 (SEQ ID NO: 49)。術語「TNFR」在本文中用於共同地指代全部已知之人類TNFR同功型及多型性形式。
如本文中所使用之術語「TNFα相關病症」係指與經TNFα誘導之TNF受體介導之信號傳導的調節異常相關聯之病症，諸如與經TNFα誘導之TNFR1及/或TNFR2信號傳導的調節異常相關聯之病症。經此類TNFα介導之病症可例如包括如本文中所揭示之慢性自體發炎性免疫病症。
如本文中所使用之術語「抗藥物抗體」或「ADA」係指在哺乳動物中由向該哺乳動物投與之治療劑的免疫反應所形成之抗體。在本發明之一些實施例中，針對治療劑形成之抗藥物抗體可中和該治療劑之作用，因此改變治療劑之藥物動力學(PK)及/或藥效動力學(PD)特性、干擾治療劑之作用、及/或降低療效、及/或減弱對治療劑之臨床反應。針對治療劑之抗藥物抗體亦可在患者中引起不良免疫反應，從而使得患者可不為用該治療劑進行進一步治療之候選者。不良免疫反應之實例包括(但不限於)在投與藥物期間或在投與藥物之後第一天內的輸注相關反應，其特徵在於諸如發熱、搔癢病、支氣管痙攣或心血管性虛脫之症狀(Atiqi, S., Front Immunol., 2020, 26(11): 312)。
如本文中所使用之術語與抗藥物抗體之「低結合至無結合」係指本發明之抗人類TNFα抗體與針對其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體的結合，其中此類結合確定為低於用於量測結合之分析法的截止點或在分析法之預定可變性範圍內。在此類方法中，截止點為預定之臨界值，其用於鑑別與抗藥物抗體之陽性結合。在一些實施例中，分析法之預定之可變性係低於約20%以上之分析法截止點。在此類實施例中，將本發明之抗人類TNFα抗體與針對其他治療劑(例如，阿達木單抗)之抗藥物抗體的結合(低於約20%以上之分析法截止點)視為低結合。在一些實施例中，將本發明之抗人類TNFα抗體與針對其他治療劑(例如，阿達木單抗)之抗藥物抗體的結合(處於或低於分析法截止點)視為無結合。
術語「其他抗TNFα治療劑」係指結合TNFα且抑制經TNF受體介導之反應的試劑，不包括本文中所描述之抗人類TNFα抗體。此類藥劑可包括(但不限於)抗體、抗體片段或抗原結合片段，其包含保持與抗原相互作用之能力的抗體之至少一部分，該抗原諸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv、scFab、二硫鍵連接之Fv (sdFv)、Fd片段或線性抗體，其可例如融合至Fc區或IgG重鏈恆定區。在一些實施例中，其他抗TNFα治療劑可為例如阿達木單抗、英夫利昔單抗、戈利木單抗、賽妥珠單抗及/或依那西普。
如本文中所使用之術語「抗體」係指結合抗原之免疫球蛋白分子。抗體之實施例包括單株抗體、多株抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、雙特異性或多特異性抗體，或結合抗體。抗體可為任何類別(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA)及任何子類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。本發明之實施例亦包括抗體片段或抗原結合片段，術語「抗體片段或抗原結合片段」包含保持與抗原相互作用之能力的抗體之至少一部分，該抗原諸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv、scFab、二硫鍵連接之Fv (sdFv)、Fd片段或線性抗體，其可例如融合至Fc區或IgG重鏈恆定區。
例示性抗體為包含以下四條多肽鏈之免疫球蛋白G (IgG)型抗體：經鏈間二硫鍵交聯之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)。四條多肽鏈中之各者之胺基端部分包括具有約100至125個或更多個胺基酸之主要負責抗原識別的可變區。四條多肽鏈中之各者之羧基端部分含有主要負責效應功能之恆定區。各重鏈包含重鏈可變區(VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區係指抗體之包含抗體重鏈之Fc區及CH1域的區。各輕鏈包含輕鏈可變區(VL)及輕鏈恆定區。IgG同型可進一步劃分為子類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)。恆定區中之胺基酸殘基之編號係基於如Kabat中之EU索引。Kabat等人,
Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Bethesda, MD: U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health (1991)術語EU索引編號或EU編號在本文中可互換地使用。
VH及VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間穿插有稱為構架區(FR)之更保守區。CDR暴露於蛋白質之表面上且為對抗體之抗原結合特異性而言重要的區。各VH及VL包含自胺基端至羧基端依以下次序排列之三個CDR及四個FR：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中，重鏈之三個CDR稱為「HCDR1、HCDR2及HCDR3」且輕鏈之三個CDR稱為「LCDR1、LCDR2及LCDR3」。CDR含有與抗原形成特異性相互作用之大部分殘基。將胺基酸殘基分配至CDR可根據熟知方案進行，包括描述於以下中之方案：Kabat (Kabat等人, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))、Chothia (Chothia等人, 「Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins」, Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987)；Al-Lazikani等人, 「Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins」, Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997))、North (North等人, 「A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations」, Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011))，或IMGT (可在www.imgt.org獲取國際ImMunoGeneTics資料庫；參見Lefranc等人, Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212)。IMGT及North CDR定義之組合用於如本文所描述之例示性抗人類TNFα抗體。
如本文中所使用之術語「Fc區」係指抗體之包含抗體重鏈之CH2及CH3域的區。視情況地，Fc區可包括抗體重鏈之鉸鏈區的一部分或整個鉸鏈區。諸如效應功能之生物活性可歸因於Fc區，其隨抗體同型變化。抗體效應功能之實例包括：Fc受體結合、經抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、經抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、吞噬作用、細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
如本文中所使用之術語「抗原決定基」係指抗原之胺基酸殘基，其結合於抗體。抗原決定基可為線性抗原決定基、構形抗原決定基或雜合抗原決定基。術語「抗原決定基」可參考結構抗原決定基使用。根據一些實施例，結構抗原決定基可用於描述由抗體覆蓋之抗原區(例如在結合至抗原時抗體之覆蓋面積)。在一些實施例中，結構抗原決定基可描述抗原之胺基酸殘基，其在抗體之胺基酸殘基之特定接近性內(例如，在特定數目之埃(Angstrom)內)。術語「抗原決定基」亦可參考功能抗原決定基使用。根據一些實施例，功能抗原決定基可用於描述抗原之胺基酸殘基，其以促成抗原與抗體之間的結合能之方式與抗體之胺基酸殘基相互作用。抗原決定基可根據不同實驗技術(亦稱為「抗原決定基定位技術」)確定。應理解，抗原決定基之確定可基於所使用之不同抗原決定基定位技術變化，且亦可隨所使用之不同實驗條件變化，例如歸因於由特定實驗條件誘導之抗原的構形變化或裂解。抗原決定基定位技術為此項技術中已知的(例如，Rockberg及Nilvebrant,
Epitope Mapping Protocols: Methods in Molecular Biology, Humana Press, 第3版2018；Holst等人, Molecular
Pharmacology1998, 53(1): 166-175)，包括(但不限於) X射線結晶法、核磁共振(NMR)光譜法、定點誘變、物種交換誘變、丙胺酸掃描誘變、位阻誘變、氫-氘交換(HDX)及交叉阻斷分析法。
除非另外指示，否則如本文中所使用之術語「結合(bind)」及「結合(binds)」欲意謂蛋白質或分子與另一蛋白質或分子形成化學鍵或吸引相互作用之能力，藉由此項技術中已知之常用方法所測定，其使得兩種蛋白質或分子接近。
如本文中所使用之術語「核酸」係指核苷酸之聚合物，包括含有單股及/或雙股核苷酸之分子，諸如併入有核苷酸之天然、經修飾及/或類似物的DNA、cDNA及RNA分子。本發明之聚核苷酸亦可包括例如藉由DNA或RNA聚合酶或合成反應併入其中之受質。
如本文中所使用之術語「個體」係指哺乳動物，包括(但不限於)人類、黑猩猩、猿、猴、牛、馬、綿羊、山羊、豬、兔、狗、貓、大鼠、小鼠、天竺鼠及類似動物。個體較佳為人類。
如本文中所使用，術語「治療有效量」係指蛋白質或核酸或載體或組合物之量，其將引起個體之所需生物或醫療反應(例如，降低或抑制蛋白質活性)，或改善症狀、緩解病況、減緩或延緩疾病進展，或預防疾病等。在一非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指蛋白或核酸或載體或組合物之必需量(在劑量及時段及投與方式下)，當向個體投與該必需量時可有效地至少部分緩解、抑制、預防及/或改善病況或病症或疾病以達成所需之治療劑結果。蛋白或核酸或載體或組合物之治療有效量可根據以下因素改變：諸如疾病病況，個體之年齡、性別及體重以及蛋白或核酸或載體或組合物引發個體之所需反應的能力。治療有效量亦為其中本發明之蛋白或核酸或載體或組合物之任何毒性或不利作用超過治療有益作用之量。
如本文中所使用之術語「抑制」係指例如生物反應或活性之減低、降低、減緩、減少、停止、中斷、終止、拮抗或阻斷，但未必指示生物反應之完全消除。
如本文中所使用之術語「治療(treatment)」或「治療(treating)」係指其中可減緩、控制、延緩或停止本文中所揭示之病症或疾病之進展，或改善病症或疾病症狀，但未必指示所有病症或疾病症狀完全消除之所有過程。治療包括投與蛋白質或核酸或載體或組合物以用於治療患者(尤其人類)之疾病或病況。
如本文中所使用，術語「中和」係指抗體、抗體片段或結合分子抵消或使得抗原之至少一種活性或功能失活或無效之能力。
如本文中所使用之術語「約」意謂10%以內。
如本文中所使用，除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所使用之術語「一(a)」、「一(an)」、「該(the)」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。
實例
提供以下實例以進行說明，但不限制所主張之本發明。
實例 1 ： 抗人類 TNF α 抗體之產生及工程改造。 抗體產生 ： 為了產生對人類TNFα具有特異性之抗體，用重組人類TNFα免疫接種具有人類免疫球蛋白可變區之基因轉殖小鼠。用人類TNFα進行篩檢且測試與其他TNFα物種之交叉反應性。對石蟹獼猴具有交叉反應性之抗體進行選殖、表現且藉由標準程序純化，且在經TNFα誘導之細胞毒性分析法中測試中和。抗體在其CDR、可變域構架區及IgG同型中經選擇及工程改造以改良結合親和力及可發展性特性，諸如穩定性、溶解度、黏度、疏水性及聚集。
人類TNFα之胺基酸序列提供為SEQ ID NO: 39，石蟹獼猴TNFα之胺基酸序列提供為SEQ ID NO: 45。
TNFα抗體可以藉由熟知方法合成及純化。適合之宿主細胞，諸如中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovarian；CHO)可使用預定HC:LC載體比率(若使用兩種載體)經用於分泌抗體之表現系統，或編碼重鏈及輕鏈兩者之單一載體系統短暫或穩定地轉染。已分泌出抗體之澄清培養基可使用常用技術來純化。
改良黏度之抗體工程改造 ： 發現親本TNFα抗體譜系在濃縮時具有高黏度。黏度為用於評估經由自動注射器遞送治療抗體之可行性的關鍵可發展性標準。抗體之誘變分析需要改良生物物理學特性且保持所需親和力及效能而不增加免疫原性風險之精確平衡。親本抗體之電腦模擬建模用於鑑別包含6個互補決定區(CDR)之表面中之電荷不平衡區。篩檢由誘變產生之抗體以用於TNFα結合，且選擇與親本mAb (藉由ELISA所測定)相比保持或改良標靶結合以及具有所需黏度及其他可發展性特性的此等抗體以用於進一步開發。
降低免疫原性風險之抗體工程改造 ： 在MHC相關肽蛋白質體學(MAPPS)分析法中進一步測試例示性抗人類TNFα抗體以確定免疫原性風險。簡言之，鑑別具有特異性CDR序列之抗體的主要組織相容複合體(MHC)結合肽。構築具有鑑定為潛在地降低免疫原性之突變的CDR庫且進行篩檢以用於TNFα結合。篩檢及選擇抗體以藉由工程改造最佳化低免疫原性風險，同時平衡維持對TNFα之所需結合親和力及其他所需可發展性特性。
表1及表2展示例示性抗人類TNFα抗體序列，其經工程改造以平衡所降低之黏度、低免疫原性風險及其他所需可發展性特性，同時保持對人類TNFα之所需結合親和力。
表 1 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體之 CDR 胺基酸序列
表 2 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體之胺基酸序列
| TNF α 抗體 | CDR 序列 | |||||
| HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 | |
| Ab1 | SEQ ID NO: 1 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 3 | SEQ ID NO: 4 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab2 | SEQ ID NO: 1 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 13 | SEQ ID NO: 14 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 15 |
| Ab3 | SEQ ID NO: 22 | SEQ ID NO: 23 | SEQ ID NO: 13 | SEQ ID NO: 4 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab4 | SEQ ID NO: 22 | SEQ ID NO: 23 | SEQ ID NO: 13 | SEQ ID NO: 14 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 15 |
| Ab5 | SEQ ID NO: 22 | SEQ ID NO: 23 | SEQ ID NO: 13 | SEQ ID NO: 14 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab6 | SEQ ID NO: 1 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 31 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 32 |
| TNF α 抗體 | VH | VL | HC | LC |
| Ab1 | SEQ ID NO: 7 | SEQ ID NO: 8 | SEQ ID NO: 9 | SEQ ID NO: 10 |
| Ab2 | SEQ ID NO: 16 | SEQ ID NO: 17 | SEQ ID NO: 18 | SEQ ID NO: 19 |
| Ab3 | SEQ ID NO: 24 | SEQ ID NO: 8 | SEQ ID NO: 25 | SEQ ID NO: 10 |
| Ab4 | SEQ ID NO: 24 | SEQ ID NO: 17 | SEQ ID NO: 25 | SEQ ID NO: 19 |
| Ab5 | SEQ ID NO: 24 | SEQ ID NO: 27 | SEQ ID NO: 25 | SEQ ID NO: 28 |
| Ab6 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 34 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 36 |
實例 2 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體之結合親和力 結合親和力 ， 方法 1 ： 以抗原下調ELISA (antigen-down ELISA)形式測試抗體對人類、恆河獼猴、小鼠、大鼠、兔及犬科TNFα蛋白質之結合親和力。簡言之，用每孔20 μL之1 μg/mL人類TNFα (Syngene)、2 μg/mL恆河獼猴TNFα (R&D Systems，目錄號1070-RM)、2 μg/mL小鼠TNFα (R&D Systems，目錄號410-MT/CF)或2 μg/mL大鼠TNFα (R&D Systems，目錄號510-RT-CF)、2 μg/mL兔TNFα (R&D Systems，目錄號5670-TG/CF)或2 μg/mL犬科TNFα (R&D Systems，目錄號1507-CT/CF) (稀釋於碳酸鹽緩衝液(pH 9.3) (0.015 M Na
2CO
3及0.035 M NaHCO
3)中)塗佈384孔高結合盤(Greiner Bio-one #781061)，且在4℃儲存隔夜。次日，在室溫下用80 μL酪蛋白(Thermo Fisher Pierce，目錄號37528)阻斷盤1小時，移除阻斷緩衝液，且向盤中添加20 μL表現於CHO細胞中之滴定純化抗體(以20 μg/mL之起始濃度在酪蛋白中稀釋且滴定3倍，下調8點)。在37℃下培育盤90分鐘，接著在PBS/0.1% Tween中洗滌三次。將以1:1500稀釋之20 μL二級抗體試劑山羊-抗人類κ-AP (Southern Biotech，目錄號2060-04)添加至盤中且在37℃下培育45分鐘。將盤在PBS/0.1% Tween中洗滌3次，且向每個孔中加入20 μL在分子級水中稀釋至1:35之鹼性磷酸酶受質溶液。一旦顯色(大約15至30分鐘)，在Molecular Device Spectramax盤讀出器上以560 nM OD讀出盤，且使用Softmax Pro 4.7軟體獲取資料。在GraphPad Prism中進行資料分析。
如表3中所顯示之結果證實，例示性抗人類TNFα抗體Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5及Ab6結合具有所需親和力之人類、恆河獼猴及犬科TNFα。
表 3 . 例示性抗人類 TNF α 抗體 對 人類、恆河獼猴及犬科 TNF α 之結合親和力
| 抗體 | 人類 TNF α EC 50(µg/mL) | 恆河獼猴 TNF α EC 50(µg/mL) | 犬科TNF α EC 50(µg/mL) |
| Ab1 | 0.2225 | 0.1555 | 0.2204 |
| Ab2 | 0.222 | 0.1621 | 0.24 |
| Ab3 | 0.2164 | 0.1414 | 0.2401 |
| Ab4 | 0.2134 | 0.1444 | 0.2306 |
| Ab5 | 0.2201 | 0.1607 | 0.1757 |
| Ab6 | 0.1313 | 0.1148 | 0.162 |
結合親和力 ， 方法 2 ： 使用MSD Sector S 600儀器(Meso Scale Discovery, Rockville, MD)讀出MSD盤。使用Thermo-Fisher生物素標記套組來生物素標記人類及石蟹獼猴TNFα。MSD分析法盤製備如下：在室溫(大約25℃)下用每孔40 μL之1 μg/mL經生物素標記之人類TNFα或經生物素標記之石蟹獼猴TNFα於PBS中之溶液來塗佈經多陣列鏈黴抗生物素蛋白塗佈之96孔盤(Meso Scale Discovery，目錄號L15SA-1)一個小時。在塗佈之後，將盤在PBS+0.1% Tween (PBST)中洗滌3次，接著在室溫下用於PBS中之1%牛血清白蛋白(BSA)阻斷1小時。接著用PBS洗滌盤3次，隨後添加樣品溶液。溶液平衡滴定(SET)樣品在1% BSA中製備。將抗人類TNFα抗體Ab1稀釋至10 pM且連續稀釋TNFα總共12次稀釋。使TNFα滴定及固定抗體溶液以1:1組合來製備SET溶液。在37℃下培育SET溶液大約72小時以允許結合達到平衡。將40 μL之SET溶液轉移至所製備之MSD盤中重複三次，且在室溫下培育2.5分鐘以藉由手動輕拍盤在攪拌下捕獲游離抗體。在培育之後，用PBST洗滌盤3次。接著，將40 μL之於1% BSA中之1 μg/mL SULFO-Tag抗人類/NHP κ抗體(Meso Discovery Scale，目錄號D20TF-6)添加至所有孔中。使其在室溫下靜態培育一個小時。接著用PBST洗滌盤3次，隨後在讀出盤之前添加150 μL之MSD GOLD讀出緩衝液A (Meso Scale Discovery，目錄號R92TG-2)。在各個別實驗中重複製備稀釋系列三次，且進行三次獨立重複實驗。使用來自MSD-SET資料之XLfit中之二次動力學模型來測定K
D。將重複之K
D值輸入人類及石蟹獼猴TNFα之GraphPad Prism中以測定標準差統計資料。
此分析法之結果顯示，例示性抗人類TNFα抗體Ab1以8.5±1.6 pM之K
D結合至人類TNFα，且以21.2±7.4 pM之K
D結合至石蟹獼猴TNFα。
實例 3 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體之功能活性 膜結合 TNF α 抗體之內化 ： 在經穩定轉染以表現膜人類TNFα (不可裂解TNFα)之CHO細胞株上活體外測試例示性抗人類TNFα抗體在結合至膜表現TNFα後的內化。簡言之，使用製造商之方法使F(ab')2片段山羊抗人類IgG (Jackson #109-006-098)結合至pHrodo pH敏感型染料(Fisher P36014)。例示性抗人類TNFα抗體與等莫耳量之F(ab')2山羊抗hIgG-pHrodo一起在CHO生長培養基中室溫培育30分鐘。將抗體染料混合物添加至經CHO人類TNFα轉染之細胞中，接著在37℃下在5% CO
2振盪器培育箱中培育3、6及24小時之時間點。例示性TNFα抗體之最終濃度為10 µg/mL及3.3 µg/mL。在指定時間點洗滌細胞且在BD Fortessa流式細胞儀上分析。
如表4中所顯示之結果證實，所測試之抗人類TNFα抗體在與3.33 μg/mL及10 μg/mL之表現於CHO細胞上之膜人類TNFα結合後內化至CHO細胞中。結果進一步證實，抗人類TNFα抗體在結合表現於溶酶體上之膜TNFα後內化至溶酶體中(資料未示出)。
表 4 . 例示性抗人類 TNF α 抗體之內化
| 抗體 | 抗體 µg/mL | 在 3 小時處之內化 (Phrodo MFI) | 在 6 小時處之內化 (Phrodo MFI) | 在 24 小時處之內化 (Phrodo MFI) |
| Ab1 | 3.33 | 1913 | 3663 | 1152 |
| Ab2 | 3.33 | 1811 | 3266 | 1168 |
| Ab3 | 3.33 | 2107 | 3823 | 1197 |
| Ab4 | 3.33 | 2128 | 3518 | 1177 |
| hIgG1 同型 | 3.33 | 304 | 318 | 313 |
| Ab1 | 10.0 | 3083 | 5989 | 4575 |
| Ab2 | 10.0 | 2686 | 5158 | 4643 |
| Ab3 | 10.0 | 3339 | 6281 | 4811 |
| Ab4 | 10.0 | 2998 | 5750 | 4352 |
| hIgG1 同型 | 10.0 | 339 | 340 | 337 |
經可溶性及膜 TNF α 誘導之細胞殺傷之抑制 ：在基於活體外細胞之分析法中使用天然表現TNF受體之L929小鼠纖維肉瘤細胞評估例示性抗人類TNFα抗體對經可溶性及膜TNFα誘導之細胞殺傷的抑制。當與放線菌素D組合時，TNFα在此等細胞中誘導典型之細胞凋亡，由於形成過量之可藉由TNFα中和補救之反應性氧中間物而引起細胞快速死亡。活細胞之數量可使用MTS-四唑鎓細胞毒性分析法來量測，其中代謝上之活性細胞中之粒線體去氫酶使MTS-四唑鎓還原成彩色甲䐶產物，其可藉由微盤讀出器(Biotek Cytation 5成像多模式讀出器)偵測。
經可溶性 TNF α 誘導之細胞殺傷之抑制 ： 為評估例示性抗人類TNFα抗體抑制經可溶性TNFα誘導之細胞殺傷的能力，分別用人類TNFα或石蟹獼猴TNFα處理L929細胞。將以每100 µL 10,000個細胞再懸浮於分析法培養基(1×DMEM培養基、10% FBS、1% 青黴素-鏈黴素、1% MEM必需胺基酸、1% L-麩醯胺酸、1%丙酮酸鈉)中之L929細胞添加至96孔盤中且置放於組織培養培育箱中隔夜。次日，使例示性抗體以15 µg/mL至0.0005 µg/mL範圍內之濃度稀釋(用三倍稀釋)，且向含有兩個以下條件中之一者的孔中重複添加100 µL各濃度之例示性抗人類TNFα抗體兩次：200 pg/mL重組人類TNFα或750 pg/mL重組石蟹獼猴TNFα，且在室溫下培育盤30分鐘。人類IgG1同型對照抗體用作陰性對照物。接著將抗體/TNFα/放線菌素D混合物轉移至具有L929黏附細胞之96孔盤中，且在組織培養培育箱中培育18小時。移除分析法培養基，且將100 µL之MTS-四唑鎓受質混合物添加至孔中且在組織培養培育箱中培育盤2小時。為測定細胞死亡，在微盤讀出器(Biotek Cytation 5成像多模式讀出器)上在490 nm下讀出盤。結果表示為濃度，其中50%之經TNFα誘導之細胞毒性(IC
50，兩個獨立實驗之平均值±SEM)係藉由例示性抗人類TNFα抗體抑制，使用資料之3參數S形擬合(GraphPad Prism 9)計算。IC
50值顯示於表5a中。
經膜 TNF α 誘導之細胞殺傷之抑制 ：為了評估例示性抗人類TNFα抗體抑制經膜TNFα誘導之細胞殺傷的能力，不可裂解TNFα構築體經穩定轉染至中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中以產生表現細胞表面(膜) TNFα之CHO細胞。產生在TNFα之裂解位點處具有已知突變之不可裂解TNFα構築體，其允許在不存在TNFα裂解之情況下在細胞表面上表現生物活性TNFα (Mueller等人1999)。L929細胞與表現人類不可裂解TNFα之CHO細胞之培育引起L929細胞快速死亡。為確定例示性抗人類TNFα抗體是否可中和所觀測到之細胞殺傷，對例示性抗體中之各者評估15 µg/mL至0.0005 µg/mL之劑量範圍(用三倍稀釋)。將各濃度之例示性抗人類TNFα抗體(100微升/孔)重複添加至含有每孔500個CHO TNFα轉染物細胞+6.25 µg/mL放線菌素D之盤中兩次。將抗體加CHO細胞混合物在室溫下培育30分鐘，且接著添加至L929細胞盤中。人類IgG1同型對照抗體用作陰性對照物，且在與抗人類TNFα抗體類似之劑量範圍下測試。基本上如關於經可溶性TNFα誘導之細胞殺傷分析法所描述來測定L929細胞死亡。IC
50值顯示於表5b中。
如表5a及表5b中所顯示之結果證實，例示性抗人類TNFα抗體抑制經可溶性人類TNFα或可溶性石蟹獼猴TNFα誘導之L929細胞殺傷，及經人類膜TNFα誘導之L929細胞的細胞殺傷。觀測到細胞殺傷反應之劑量依賴性抑制。特定言之，所測試之例示性抗人類TNFα抗體對經可溶性人類TNFα誘導之細胞殺傷之抑制的IC
50(表5a)範圍為約0.13 µg/mL至約0.22 µg/mL，且對經石蟹獼猴TNFα誘導之細胞殺傷之抑制約0.02 µg/mL至約0.3 µg/mL。所測試之例示性抗人類TNFα抗體對經人類膜TNFα誘導之細胞殺傷之抑制的IC
50(表5b)範圍為約0.13 µg/mL至約0.12 µg/mL。如所預期，陰性對照物hIgG1同型不抑制經TNFα誘導之細胞殺傷。
表 5a . 例示性抗人類 TNF α 抗體抑制經可溶性人類及可溶性石蟹獼猴 TNF α 誘導之 L929 細胞的細胞殺傷
表 5b . 例示性抗人類 TNF α 抗體抑制經膜 TNF α 誘導之 L929 細胞的細胞殺傷
| 可溶性人類 TNFα | 可溶性石蟹獼猴TNF α | |||
| 抗體 | IC 50(µg/mL) | 標準誤差之平均值 | IC 50(µg/mL) | 標準誤差之平均值 |
| hIgG1 同型 | n/a | n/a | n/a | n/a |
| Ab1 | 0.16 | 0.02 | 0.02 | 0.005 |
| Ab2 | 0.13 | 0.03 | 0.02 | 0.004 |
| Ab3 | 0.19 | 0.02 | 0.02 | 0.004 |
| Ab4 | 0.19 | 0.00 | 0.02 | 0.005 |
| Ab5 | 0.22 | 0.04 | 0.03 | 0.009 |
| 抗體 | IC 50(µg/mL) | 標準誤差之平均值 |
| hIgG1 同型 | n/a | n/a |
| Ab1 | 0.13 | 0.04 |
| Ab2 | 0.13 | 0.07 |
| Ab3 | 0.15 | 0.08 |
| Ab4 | 0.13 | 0.05 |
| Ab5 | 0.20 | 0.09 |
實例 4 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體結合之表徵 與針對阿達木單抗之石蟹獼猴抗藥物抗體之結合 ： 評估例示性抗人類TNFα抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體(抗阿達木單抗抗體)之結合，該等抗藥物抗體由來自經阿達木單抗高免疫之石蟹獼猴的親和力純化高免疫猴血清(AP-HIMS)獲得。使用阿達木單抗-AffiGel10純化來自經阿達木單抗高免疫之石蟹獼猴的抗阿達木單抗抗體。在ACE-橋分析法中使用AP-HIMS之滴定來偵測抗阿達木單抗抗體。分析法遵循FDA免疫原性測試指導來開發。簡言之，用1×TBST (Boston BioProducts, IBB-181X)洗滌經鏈黴抗生物素蛋白塗佈之96孔盤(Pierce, 15500)，且在室溫下使用於TBST/0.1%牛血清白蛋白(BSA; Sigma, A7888)中之100微升/孔的30 nM經生物素標記之阿達木單抗塗佈1小時。用TBST洗滌盤三次，且用TBS (Fisher, BP2471-1) 1:10稀釋親和力純化之抗阿達木單抗抗體，且以100微升/孔添加至經塗佈之盤中且在4℃下培育隔夜。第二天，用TBST洗滌盤三次，且在室溫下使用65微升/孔之300 mM乙酸(Fisher Scientific, A38-500)來酸溶離所捕獲之抗阿達木單抗抗體5分鐘。接著，在中和緩衝液(0.375 M Tris，300 mM NaCl，pH 9)中，使聚丙烯96孔盤(Corning, 3359)負載有50 μL之1 μg/mL經生物素標記之阿達木單抗及經釕標記之阿達木單抗中之各者。隨後，將50 μL經酸溶離之樣品添加至在中和緩衝液及ADA中含有混合物之聚丙烯盤中，且使其在室溫下橋接至經標記之抗體1小時。洗滌MSD Gold 96孔鏈黴抗生物素蛋白盤(Mesoscale, L15SA-1)，且在室溫下用TBS+1% BSA阻斷1小時，隨後洗滌，且將80 μL之經橋接樣品添加至盤中1小時。用TBST洗滌盤三次，且將150微升/孔之2×MSD緩衝液(Mesoscale, R92TC-2)添加至盤中。在MSD SQ120讀出器上讀出盤以提供表示為電化學發光單位(ECLU)之第1層信號。
亦在ACE-橋分析法中測試相同AP-HIMS以偵測針對例示性抗人類TNFα抗體Ab6之抗體，基本上遵循上文關於阿達木單抗所概述之相同方法，但使用經生物素及釕標記之Ab6。接著，繪製隨所測試之AP-HIMS濃度變化之所得ECLU信號。
如圖1中所顯示之結果證實，在與阿達木單抗與其自身抗藥物抗體(最大ECLU信號40000)之結合相比，例示性抗人類TNFα抗體Ab6與針對阿達木單抗之抗藥物抗體(最大ECLU信號4000)具有低結合至無結合，該等抗藥物抗體純化自經阿達木單抗高免疫之石蟹獼猴之血清。特定言之，結果顯示例示性抗人類TNFα抗體Ab6僅識別約10%之由石蟹獼猴產生之針對阿達木單抗的抗藥物抗體，表明此結合可能係歸因於位置遠離CDR區(諸如抗體恆定區)之共有序列。
與針對阿達木單抗之人類患者抗藥物抗體之結合 ： 評估在由參與研究RA-BEAM之經阿達木單抗治療之患者獲得的21名患者血清樣品中例示性抗人類TNFα抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體(抗阿達木單抗抗體)之結合。藉由使用基本上如關於石蟹獼猴ADA評估所描述之方法，在基線後收集21個血清樣品且確認針對阿達木單抗具有高ADA滴度。接著，使用基本上如關於石蟹獼猴ADA評估所描述之方法來評估21個血清樣品與例示性抗人類TNFα抗體Ab6之結合。
如圖2中所顯示之結果證實，在所測試之21個患者樣品中之16個中，例示性抗人類TNFα抗體Ab6與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合(ECLU信號低於分析法之截止點(102 ECLU))。在確定免疫原性中，截止點為用於鑑別「推定陽性」或含有抗藥物抗體之樣品的臨界值。如圖2中所示，21個樣品中有五個具有高於截止點之ECLU信號，但均低於截止點以上20%，且因此判定為在分析法可變性之內。在用阿達木單抗治療之人類患者中，抗人類TNFα抗體Ab6與針對阿達木單抗之抗藥物抗體的顯著低結合或無結合指示Ab6及阿達木單抗抗體序列相當不同，從而使得由所測試之人類個體針對阿達木單抗產生之對阿達木單抗中存在之抗原決定基具有特異性的ADA未被Ab6共用，且因此未由Ab6顯著識別。此等結果指示例示性抗人類TNFα抗體用於治療對針對其他TNFα治療劑(諸如阿達木單抗)之抗藥物抗體產生減弱之臨床反應或不良反應的患者之潛在用途。
實例 5 ： 免疫原性評估對LCDR1及HCDR3肽叢集進行DC內化分析法、MAPPS分析法及T細胞增殖分析法以評估例示性TNFα抗體之免疫原性風險。
樹突狀細胞內化分析法 ：評估衍生自樹突狀細胞(DC)之人類CD14+單核球內化例示性抗人類TNFα抗體之能力。將CD14+單核球自周邊血液單核細胞(PBMC)分離，培養且分化成不成熟樹突狀細胞(用IL-4及GM-CSF)，所有均使用標準方法。為獲得成熟DC，用1 µg/mL LPS處理細胞4小時。
例示性抗人類TNFα抗體在完全RPMI培養基中以8 μg/mL稀釋，且在完全RPMI培養基中以相同體積與稀釋至5.33 μg/mL之偵測探針Fab-TAMRA-QSY7混合，且在4℃下在黑暗中培育30分鐘以形成複合物，接著添加至不成熟及成熟DC培養物中且在37℃下在CO
2培育箱中培育24小時。用2% FBS PBS洗滌細胞且再懸浮於100 µL具有Cytox綠色活/死染料之2% FBS PBS中。在BD LSR Fortessa X-20上收集資料且在FlowJo中分析。活的單細胞被閘控，且TAMRA螢光陽性細胞之百分比記錄為讀數。為允許將分子與產生自不同供體之資料進行比較，使用標準化內化指數。使用式1使內化信號針對IgG1同型(經標準化之內化指數=0)及內部陽性對照物PC (經標準化之內化指數=100)標準化：
(1)
其中X
TAMRA、IgG1同型
TAMRA及PC
TAMRA分別為測試分子X、IgG1同型及PC之TAMRA陽性群體的百分比。
如表6中所顯示之結果證實，所測試之抗人類TNFα抗體在結合至不成熟及成熟樹突狀細胞上之TNFα後內化至細胞中。
表 6 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體之 DC 內化
| 抗體 | 不成熟樹突狀細胞內化指數 | 成熟樹突狀細胞內化指數 |
| Ab1 | 19.4 | 26.7 |
| Ab2 | 21.9 | 38.3 |
| Ab3 | 20.0 | 35.2 |
| Ab4 | 33.6 | 43.1 |
| Ab5 | 54.6 | 52.7 |
MHC 相關肽蛋白質體學 ( MAPP ) 分析法 ： MAPP概況為先前用例示性抗人類TNFα抗體處理之人類樹突狀細胞上之呈遞MHC-II的肽。使用標準方法將CD14+單核球自周邊血液單核細胞(PBMC)分離，培養且分化成不成熟樹突狀細胞(用IL-4及GM-CSF)。在第4天將例示性抗體添加至不成熟樹突狀細胞中，且在5小時培育之後更換含有LPS之新鮮培養基以使細胞轉型為成熟樹突狀細胞。第二天，成熟樹突狀細胞在具有蛋白酶抑制劑及DNA酶之RIPA緩衝液中溶解。使用與鏈黴抗生物素蛋白珠粒偶合之經生物素標記之抗MHC-II抗體來進行MHC-II複合物之免疫沈澱。溶離結合之複合物且過濾。藉由質譜儀分析經分離之MHC-II肽。肽鑑別係藉由內部蛋白質體學管線使用不具有針對牛/人類資料庫之酶搜尋參數的搜尋算法來生成，其中測試序列附接至資料庫。將自例示性抗體鑑別之肽與親本序列比對。
如表7中所顯示之結果證實，例示性抗人類TNFα抗體具有不同程度之MAPP呈遞。Ab1在10個測試供體中之3個中顯示具有1個非生殖系叢集之最低MAPP呈遞。
表 7 . 例示性抗人類 TNF α 抗體之 MAPP 分析
| 樣品 | 所有供體之非生殖系叢集之數目 | 含有≥ 1 個叢集之供體數目 |
| Ab1 | 1 | 3/10 |
| Ab2 | 2 | 6/10 |
| Ab3 | 2 | 5/10 |
| Ab4 | 3 | 5/10 |
| Ab5 | 3 | 8/10 |
T 細胞增殖分析法 ： 評估例示性抗人類TNFα抗體MAPP衍生之肽叢集藉由誘導細胞增殖以活化CD4+ T細胞之能力。CD8+ T細胞自來自10個健康供體之低溫保藏PBMC中消耗且用1 µM羧基螢光素二乙酸酯丁二醯亞胺酯(CFSE)標記。以每孔每毫升4×10
6個細胞將經CD8+ T細胞消耗之PBMC接種於具有5% CTS
TM免疫細胞SR (Gibco，目錄號A2596101)之AIM-V培養基(Life Technologies，目錄號12055-083)中，且在2.0 mL含有不同測試分子之以下中重複進行測試三次：DMSO對照物、培養基對照物、匙孔血藍蛋白(KLH；陽性對照物)、PADRE-X肽(合成疫苗輔助肽，陽性肽對照物)或各別抗人類TNFα抗體MAPP衍生之肽叢集(各種肽10 μM)。培養細胞且在37℃及5% CO
2下培育7天。在第7天，樣品用以下細胞表面標記物染色：抗CD3、抗CD4、抗CD14、抗CD19及DAPI，從而使用配備高通量取樣器(High Throughput Sampler；HTS)之BD LSRFortessa
TM藉由流式細胞分析技術偵測活力。使用FlowJo®軟體(FlowJo, LLC, TreeStar)分析資料，且計算細胞分裂指數(Cellular Division Index；CDI)。簡言之，藉由使來自受肽刺激孔中增殖之CFSE
dimCD4+ T細胞百分比除以未受刺激孔中增殖之CFSE
dimCD4+ T細胞百分比來計算各MAPP衍生之肽叢集的CDI。≥2.5之CDI被視為代表陽性反應。評估所有供體中之供體出現率百分比。
如表8a及表8b中所證實之結果顯示，Ab2之LCDR1 (表8a)及HCDR3 (表8b)肽分別在約22.0%及25%之供體中誘導T細胞反應頻率，表明當與陽性對照物相比時，Ab2之免疫原性風險顯著降低。KLH陽性對照物誘導在100%之供體中之T細胞反應，且PADRE-X (合成疫苗輔助肽)陽性對照物在兩個研究中分別在67%及62.5%之供體中誘導T細胞反應。此範圍屬於此分析法之預期範圍(48.1%+24.4陽性供體出現率)內。
表 8a . 由 MAPP 衍生之肽在健康供體中誘導之 CD4 + T 細胞反應之頻率。
表 8b . 由 MAPP 衍生之肽在健康供體中誘導之 CD4 + T 細胞反應之頻率。
| 所測試之分子 | 陽性供體 % | 中值 CDI ( 陽性供體 ) | 中值CDI ( 所有供體 ) | 範圍 | 陽性供體之數目(CDI＞2.5) | |
| 高 | 低 | |||||
| KLH | 100.0 | 190.8 | 190.8 | 1170.1 | 8.8 | 9/9 |
| PADRE-X | 67.0 | 4.0 | 3.1 | 17.8 | 0.5 | 6/9 |
| Ab2 LCDR1 肽 | 22.0 | 5.5 | 1.1 | 6.0 | 0.6 | 2/9 |
| 所測試之分子 | 陽性供體 % | 中值 CDI ( 陽性供體 ) | 中值CDI ( 所有供體 ) | 範圍 | 供體之數目 | |
| 高 | 低 | |||||
| KLH | 100.0 | 230.2 | 230.2 | 3558.5 | 12.0 | 8/8 |
| PADRE-X | 62.5 | 15.3 | 7.5 | 45.5 | 0.3 | 5/8 |
| Ab2 HCDR3 肽 | 25.0 | 7.2 | 1.3 | 7.7 | 0.1 | 2/8 |
實例 6 . 例示性抗人類 TNF α 抗體之生物物理特性評估例示性抗人類TNFα抗體之生物物理特性之可開發性。
黏度 ： 例示性抗人類TNFα抗體樣品在共同調配緩衝液基質中在pH 6下濃縮至約125 mg/mL。在15℃下使用VROC® initium (RheoSense)用9次重複量測之平均值量測各抗體之黏度。如表9中所證實，結果顯示例示性抗人類TNFα抗體Ab1 (9.7 cP)、Ab2 (9.2 cP)、Ab3 (11.4 cP)及Ab4 (10.6 cP)具有可開發性之良好黏度概況。
熱穩定性 ： 使用微差掃描熱量法(Differential Scanning Calorimetry；DSC)以評估例示性抗體針對熱變性之穩定性。抗體在PBS (pH 7.2緩衝液)中之熱解鏈溫度(在未解析時藉由資料配適獲得)列於表9中(T起始、TM1、TM2及TM3)。儘管各域之熱轉變並非全部充分解析表9中所顯示之資料，但證實例示性抗人類TNFα抗體Ab1、Ab2、Ab3及Ab4具有可開發性之良好熱穩定性概況。
溫度應力時之聚集 ： 在大約100 mg/mL下評估例示性抗體隨時間推移之溶液穩定性。在5℃及35℃下培育樣品28天之週期。在培育之後，用尺寸排阻層析法(size exclusion chromatography；SEC-HPLC)分析樣品之高分子量(%HMW)物種的百分比。如表9中所顯示之結果證實，例示性抗人類TNFα抗體Ab1、Ab2、Ab3及Ab4具有可開發性之良好聚集概況。
實例 9 . 例示性抗人類 TNF α 抗體之生物物理特性
| 抗體 | T 起始 | TM1 | TM2 | TM3 | 黏度(cP) | 在5 ℃ 下之 %HMW 28 d | 在35 ℃ 下之 %HMW 28 d |
| Ab1 | 63.9 | 73.4 | 76.4 | 85.6 | 9.7 | 1.0 | 3.6 |
| Ab2 | 64.8 | 72.5 | 81.0 | 87.4 | 9.2 | 0.6 | 4.3 |
| Ab3 | 57.7 | 71.8 | 79.9 | 86.9 | 11.4 | 0.8 | 5.8 |
| Ab4 | 64.9 | 73.1 | 79.7 | 87.2 | 10.6 | 0.7 | 3.3 |
實例 7 ： 例示性抗人類 TNF α 抗體之活體內表徵 活體內經人類 TNF α 誘導之 CXCL1 細胞介素產生之抑制 ： 在活體內評估例示性抗人類TNFα抗體對經TNFα誘導之CXCL1的中和。向C57/B6小鼠投與人類TNFα誘導小鼠血漿CXCL1含量之快速且短暫的增加。此允許對例示性抗人類TNFα抗體之活體內中和能力進行詢問。
簡言之，向C57/B6小鼠(N=8/組)皮下投與0.3 mg/kg或3 mg/kg之例示性抗體或3 mg/kg之非結合同型對照物。在抗體投與後二十四小時，藉由以每小鼠3 µg之劑量腹膜內注射人類TNFα來刺激小鼠。人類TNFα刺激後兩小時處死小鼠，收集血液且藉由離心使其澄清至血漿。根據製造商之說明書，使用商業MSD分析法(MesoScale Discovery, P/N. K152QTG-1)分析小鼠血漿之CXCL1濃度。
如表10中所顯示之結果證實，相對於經同型對照物處理之小鼠，例示性抗人類TNFα抗體以劑量依賴性方式顯著抑制活體內經人類TNFα誘導之血漿CXCL1產生(p＜0.05，ANOVA隨後圖凱之多重比較檢驗(Turkey's Multiple Comparison test))。特定言之，例示性抗人類TNFα抗體在3 mg/kg下抑制約82%至約93%活體內經TNFα誘導之血漿CXCL1產生，且在0.3 mg/kg下約46.5%至約64.5%。因此，表明例示性抗人類TNFα抗體中和活體內經人類TNFα誘導之生物作用。
表 10 ： 活體內經人類 TNFα 誘導之 CXCL1 細胞介素產生之抑制
| 血漿 CXCL1 濃度 | |||||
| 抗體 | 劑量mg/kg | 平均值(pg/mL) | ± SEM (pg/mL) | 抑制 % | P 值對比同型 |
| IgG1 同型對照物 | 3 | 1013.0 | 213.1 | 0.0% | |
| Ab1 | 3 | 185.7 | 40.1 | 83.9% | ＜0.0001 |
| 0.3 | 391.6 | 81.2 | 63.0% | 0.0002 | |
| Ab2 | 3 | 203.4 | 33.3 | 82.1% | ＜0.0001 |
| 0.3 | 554.4 | 59.3 | 46.5% | 0.0164 | |
| Ab3 | 3 | 158.9 | 32.9 | 86.6% | ＜0.0001 |
| 0.3 | 378.3 | 52.8 | 64.4% | 0.0001 | |
| Ab4 | 3 | 100.1 | 10.3 | 92.6% | ＜0.0001 |
| 0.3 | 449.3 | 52.8 | 57.2% | 0.0009 | |
| Ab5 | 3 | 182.1 | 27.8 | 84.3% | ＜0.0001 |
| 0.3 | 521.7 | 136.9 | 49.8% | 0.0071 | |
| 無TNF α IP 注射之IgG1 同型對照物 | 3 | 27.3 | 9.2 | 100.0% |
序列表 Ab1 SEQ ID NO : 1 Ab1 、 Ab2 及 Ab6 之 HCDR1 SEQ ID NO : 2 Ab1 、 Ab2 及 Ab6 之 HCDR2 SEQ ID NO : 3 Ab1 之 HCDR3 SEQ ID NO : 4 Ab1 及 Ab3 之 LCDR1 SEQ ID NO : 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 及 Ab6 之 LCDR2 SEQ ID NO : 6 Ab1 、 Ab3 及 Ab5 之 LCDR3 SEQ ID NO : 7 Ab1 之 VH SEQ ID NO : 8 Ab1 及 Ab3 之 VL SEQ ID NO : 9 Ab1 之 HC SEQ ID NO : 10 Ab1 及 Ab3 之 LC SEQ ID NO : 11 Ab1 之 HC DNA SEQ ID NO : 12 Ab1 及 Ab3 之 LC DNA Ab2 SEQ ID NO : 1 Ab1 、 Ab2 及 Ab6 之 HCDR1 SEQ ID NO : 2 Ab1 、 Ab2 及 Ab6 之 HCDR2 SEQ ID NO : 13 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR3 SEQ ID NO : 14 Ab2 、 Ab4 及 Ab5 之 LCDR1 SEQ ID NO : 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 及 Ab6 之 LCDR2 SEQ ID NO : 15 Ab2 及 Ab4 之 LCDR3 SEQ ID NO : 16 Ab2 之 VH SEQ ID NO : 17 Ab2 及 Ab4 之 VL SEQ ID NO : 18 Ab2 之 HC SEQ ID NO : 19 Ab2 及 Ab4 之 LC SEQ ID NO : 20 Ab2 之 HC DNA SEQ ID NO : 21 Ab2 及 Ab4 之 LC DNA Ab3 SEQ ID NO : 22 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR1 SEQ ID NO : 23 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR2 SEQ ID NO : 13 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR3 SEQ ID NO : 4 Ab2 、 Ab4 及 Ab5 之 LCDR1 SEQ ID NO : 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 及 Ab6 之 LCDR2 SEQ ID NO : 6 Ab1 、 Ab3 及 Ab5 之 LCDR3 SEQ ID NO : 24 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 VH SEQ ID NO : 8 Ab1 及 Ab3 之 VL SEQ ID NO : 25 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HC SEQ ID NO : 10 Ab1 及 Ab3 之 LC SEQ ID NO : 26 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HC DNA SEQ ID NO : 12 Ab1 及 Ab3 之 LC DNA Ab4 SEQ ID NO : 22 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR1 SEQ ID NO : 23 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR2 SEQ ID NO : 13 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR3 SEQ ID NO : 14 Ab2 、 Ab4 及 Ab5 之 LCDR1 SEQ ID NO : 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 及 Ab6 之 LCDR2 SEQ ID NO : 15 Ab2 及 Ab4 之 LCDR3 SEQ ID NO : 24 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 VH SEQ ID NO : 17 Ab2 及 Ab4 之 VL SEQ ID NO : 25 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HC SEQ ID NO : 19 Ab2 及 Ab4 之 LC SEQ ID NO : 26 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HC DNA SEQ ID NO : 21 Ab2 及 Ab4 之 LC DNA Ab5 SEQ ID NO : 22 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR1 SEQ ID NO : 23 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR2 SEQ ID NO : 13 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR3 SEQ ID NO : 14 Ab2 、 Ab4 及 Ab5 之 LCDR1 SEQ ID NO : 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 及 Ab6 之 LCDR2 SEQ ID NO : 6 Ab1 、 Ab3 及 Ab5 之 LCDR3 SEQ ID NO : 24 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 VH SEQ ID NO : 27 Ab5 之 VL SEQ ID NO : 25 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HC SEQ ID NO : 28 Ab5 之 LC SEQ ID NO : 26 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HC DNA SEQ ID NO : 29 Ab5 之 LC DNA Ab6 SEQ ID NO : 1 Ab1 、 Ab2 及 Ab6 之 HCDR1 SEQ ID NO : 2 Ab1 、 Ab2 及 Ab6 之 HCDR2 SEQ ID NO : 30 Ab6 之 HCDR3 SEQ ID NO : 31 Ab6 之 LCDR1 SEQ ID NO : 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 及 Ab6 之 LCDR2 SEQ ID NO : 32 Ab6 之 LCDR3 SEQ ID NO : 33 Ab6 之 VH SEQ ID NO : 34 Ab6 之 VL SEQ ID NO : 35 Ab6 之 HC SEQ ID NO : 36 Ab6 之 LC SEQ ID NO : 37 Ab6 之 HC DNA SEQ ID NO : 38 Ab6 之 LC DNA SEQ ID NO : 39 人類 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 40 恆河獼猴 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 41 小鼠 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 42 大鼠 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 43 兔 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 44 犬科 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 45 石蟹獼猴 TNF α 蛋白 SEQ ID NO : 46 LCDR1 共有序列 其中Xaa
7為絲胺酸或精胺酸
SEQ ID NO : 47 LCDR3 共有序列 其中Xaa5為天冬醯胺或離胺酸
SEQ ID NO : 48 人類 TNFR1 SEQ ID NO : 49 人類 TNFR2
圖 1展示例示性抗人類TNFα抗體Ab6與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合，該等抗藥物抗體形成於經阿達木單抗高免疫之石蟹獼猴中。
圖 2展示例示性抗人類TNFα抗體Ab6與針對阿達木單抗之抗藥物抗體具有低結合至無結合，該等抗藥物抗體形成於用阿達木單抗治療之人類患者中。
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Claims (38)
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(heavy chain variable region；VH)及輕鏈可變區(light chain variable region；VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 1； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 3； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 4； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項1之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 7且該VL包含SEQ ID NO: 8。
- 如請求項1或2之抗體，其中該抗體包含重鏈(heavy chain；HC)及輕鏈(light chain；LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 9且該LC包含SEQ ID NO: 10。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 1； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 13； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 14； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 15。
- 如請求項4之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 16且該VL包含SEQ ID NO: 17。
- 如請求項4或5之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 18且該LC包含SEQ ID NO: 19。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 22； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 23； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 13； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 4； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 22； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 23； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 13； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 14； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 15。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 22； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 23； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 13； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 14； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 22； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 23； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 13； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 46； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 22； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 23； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 13； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 14； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 47。
- 如請求項7至11中任一項之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 24且該VL包含SEQ ID NO: 8、17或27。
- 如請求項7至11中任一項之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 25且該LC包含SEQ ID NO: 10、19或28。
- 一種結合人類TNFα之抗體，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 1； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 30； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 31； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 32。
- 如請求項14之抗體，其中該VH包含SEQ ID NO: 33且該VL包含SEQ ID NO: 34。
- 如請求項14或15之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 35且該LC包含SEQ ID NO: 36。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 9、18、25或35且該LC包含SEQ ID NO: 10、19、28或36。
- 如請求項1、2、4、5、7至11、14及15中任一項之抗體，其中該抗體包含輕鏈及重鏈，其中該重鏈包含： 胺基酸殘基124 (EU編號)處之半胱胺酸； 胺基酸殘基378 (EU編號)處之半胱胺酸；或 胺基酸殘基124 (EU編號)處之半胱胺酸及胺基酸殘基378 (EU編號)處之半胱胺酸。
- 如請求項1、2、4、5、7至11、14及15中任一項之抗體，其中該抗體包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC為人類IgG1同型。
- 一種核酸，其包含編碼SEQ ID NO: 9、10、18、19、25、28、35或36之序列。
- 一種載體，其包含如請求項20之核酸。
- 如請求項21之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之第二核酸序列。
- 一種組合物，其包含：包含編碼SEQ ID NO: 9、18、25或35之核酸序列的第一載體及包含編碼SEQ ID NO: 10、19、28或36之核酸序列的第二載體。
- 一種細胞，其包含如請求項21至22中任一項之載體。
- 如請求項24之細胞，其中該細胞為哺乳動物細胞。
- 一種用於產生抗體之方法，其包含在表現該抗體之條件下培養如請求項24至25之細胞及自該培養基回收該經表現之抗體。
- 一種抗體，其係藉由如請求項26之方法產生。
- 一種抗體藥物結合物，其包含如請求項1至19或27中任一項之抗體。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至19或27中任一項之抗體及醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。
- 一種請求項1至19或27中任一項之抗體之用途，其係用於製造用以治療個體中之TNFα相關病症之藥劑。
- 如請求項40之用途，其中該TNFα相關病症為慢性自體發炎性免疫病症。
- 如請求項41之用途，其中該慢性自體發炎性病症係選自類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis；RA)、幼年特發性關節炎(Juvenile Idiopathic Arthritis)、牛皮癬性關節炎(Psoriatic Arthritis；PsA)、僵直性脊椎炎(Ankylosing Spondylitis；AS)、克羅恩氏病(Crohn's Disease；CD)、潰瘍性結腸炎(Ulcerative Colitis)、斑塊型牛皮癬(Plaque Psoriasis；PS)、化膿性汗腺炎(Hidradenitis Suppurativa)、葡萄膜炎、非感染性中間、後部、全葡萄膜炎(Non-Infectious Intermediate, Posterior, Pan Uveitis)，或貝塞特氏病(Behcet's Disease)。
- 如請求項30之用途，其中該個體接受用其他抗TNFα治療劑進行之先前治療，且其中該個體產生針對該其他抗TNFα治療劑之抗藥物抗體。
- 如請求項33之用途，其中該其他抗TNFα治療劑係選自阿達木單抗(Adalimumab)、英夫利昔單抗(Infliximab)、戈利木單抗(Golimumab)、賽妥珠單抗(Certolizumab)或依那西普(Etanercept)。
- 如請求項33之用途，其中該抗體與針對阿達木單抗之抗藥物抗體展現低結合至無結合。
- 如請求項1、2、4、5、7至11、14、15、17及27中任一項之抗體，其中該抗體中和人類TNFα。
- 如請求項1、2、4、5、7至11、14、15、17及27中任一項之抗體，其中該抗體為內化抗體。
- 如請求項1、2、4、5、7至11、14、15、17及27中任一項之抗體，其中該抗體具有低免疫原性。
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