KR101584416B1 - 인간 tweak에 대한 항체 및 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

서열번호 8, 16 또는 24로 이루어진 군에서 선택된 CDR3H를 중쇄 가변 도메인으로 포함하는 것을 특징으로 하는, TWEAK에 결합하는 것을 특징으로 하는 TWEAK에 결합하는 항체는 암 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료에 유용하다.

Description

인간 TWEAK에 대한 항체 및 그의 용도{ANTIBODIES AGAINST HUMAN TWEAK AND USES THEREOF}
본 발명은 인간 TWEAK에 대한 항체(TWEAK 항체), 그의 제조 방법, 상기 항체를 함유하는 약학 조성물, 및 그의 용도에 관한 것이다.
인간 TWEAK(유니프롯(UniProt)KB O43508, TNF-관련 약 세포자멸사 유도인자(TNF-related weak inducer of apoptosis); 서열번호 60)는 세포 표면 결합된 II형 막횡단 단백질이다. TWEAK는 문헌 [Chicheportiche, Y., et al., J. Biol. Chem. 272, 32401-32410 (1997); Marsters, S.A., et al., Curr. Biol. 8, 525-528 (1998); Lynch, C.N., et al., J. Biol. Chem. 274, 8455-8459 (1999)]에 기술되어 있다. TWEAK의 활성 형태는 가용성 단독삼량체(homotrimer)이다. 인간 및 뮤린 TWEAK는 수용체 결합 도메인(domain)에서 93% 서열 동일성을 나타낸다. TWEAK 수용체 Fn14(섬유아세포 성장 인자 유도성 14 kDa 단백질)는 리간드 결합 도메인 중 하나의 단일 시스테인 풍부 도메인으로 이루어진 129개 아미노산 I형 막횡단 단백질이다. TWEAK의 신호전달은 NF-KB 경로 활성화를 통해 일어난다. TWEAK mRNA는 다양한 조직에서 발현되며, 심장, 뇌, 골격근 및 췌장과 같은 대부분의 주요 장기, 비장, 림프절 및 흉선과 같은 면역계와 관련된 조직에서 발견된다. Fn14 mRNA는 심장, 뇌, 폐, 태반, 혈관 EC 및 평활근 세포에서 검출되었다. TWEAK-부재 및 Fn14-부재 유전자제거(knockout) 마우스는 생존가능하고 건강하며 번식력이 있고, 더 많은 자연 살해 세포를 가지며, 증대된 선천성 염증 반응을 나타낸다. TWEAK는 세포자멸사(apoptosis), 증식, 신생혈관생성, 허혈 음영(ischemic penumbra), 뇌부종, 다발성 경화증에 수반된다.
항-TWEAK 항체는 WO 1998/005783 호, WO 2000/042073 호, WO 2003/086311 호, WO 2006/130429 호, WO 2006/130374 호, WO 2006/122187 호, WO 2006/089095 호, WO 2006/088890 호, WO 2006/052926 호에 언급되어 있다.
본 발명은 서열번호 8, 16 또는 24로 이루어진 군에서 선택된 CDR3 영역(CDR3h)을 중쇄 가변 도메인으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체를 포함한다.
본 발명은 서열번호 1의 가변 경쇄 및 서열번호 5의 가변 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 9의 가변 경쇄 및 서열번호 13의 가변 중쇄를 포함하는 항체, 또는 서열번호 17의 가변 경쇄 및 서열번호 21의 가변 중쇄를 포함하는 항체의 키메라, 인간화 또는 T-세포 에피토프 결핍 변이체를 포함한다.
한 태양에서, 상기 항체는 서열번호 6의 CDR1H, 서열번호 7의 CDR2H 및 서열번호 8의 CDR3H를 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 서열번호 14의 CDR1H, 서열번호 15의 CDR2H 및 서열번호 16의 CDR3H를 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 서열번호 22의 CDR1H, 서열번호 23의 CDR2H 및 서열번호 24의 CDR3H를 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 서열번호 6의 CDR1H, 서열번호 7의 CDR2H, 서열번호 8의 CDR3H, 및 서열번호 2의 CDR1L, 서열번호 3의 CDR2L, 서열번호 4의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 서열번호 14의 CDR1H, 서열번호 15의 CDR2H, 서열번호 16의 CDR3H, 및 서열번호 10의 CDR1L, 서열번호 11의 CDR2L, 서열번호 12의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 서열번호 22의 CDR1H, 서열번호 23의 CDR2H, 서열번호 24의 CDR3H, 및 서열번호 18의 CDR1L, 서열번호 19의 CDR2L, 서열번호 20의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 경쇄 가변 도메인 서열로서 서열번호 1, 9, 17, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 56 또는 58로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 상기 항체는 중쇄 가변 도메인 서열로서 서열번호 5, 13, 21, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 57 또는 59로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
한 태양에서, 항체는 경쇄 가변 도메인 서열로서 서열번호 17, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 36으로 이루어진 군에서 선택된 서열, 및 중쇄 가변 도메인 서열로서 서열번호 21, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 또는 48로 이루어진 군에서 선택된 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
1/5, 9/13, 17/21, 25/37, 26/38, 27/39, 28/40, 29/41, 30/42, 31/43, 32/44, 33/45, 34/46, 35/47, 36/48, 56/57, 58/59(예를 들면, 17/21은 서열번호 17의 가변 경쇄 및 서열번호 21의 가변 중쇄를 포함하는 항체를 의미한다)로 이루어진 군에서 선택된 가변 경쇄 및 중쇄의 조합이 바람직하다.
본 발명의 한 태양은 서열번호 6의 CDR1H, 서열번호 7의 CDR2H, 서열번호 8의 CDR3H, 및 서열번호 2의 CDR1L, 서열번호 3의 CDR2L, 서열번호 4의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체이다.
본 발명의 한 태양은 서열번호 14의 CDR1H, 서열번호 15의 CDR2H, 서열번호 16의 CDR3H, 및 서열번호 10의 CDR1L, 서열번호 11의 CDR2L, 서열번호 12의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체이다.
본 발명의 한 태양은 서열번호 22의 CDR1H, 서열번호 23의 CDR2H, 서열번호 24의 CDR3H, 및 서열번호 18의 CDR1L, 서열번호 19의 CDR2L, 서열번호 20의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체이다.
본 발명의 한 태양은 (a) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, (b) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (c) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (d) 서열번호 26의 가변 경쇄 및 서열번호 47의 가변 중쇄, (e) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (f) 서열번호 31의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, 또는 (g) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체이다.
본 발명의 한 태양은 (a) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, (b) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (c) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (d) 서열번호 26의 가변 경쇄 및 서열번호 47의 가변 중쇄, (e) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (f) 서열번호 31의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (g) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, 또는 (h) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 39의 가변 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체이다.
상기 항체들은 본 출원에서 다음과 같이 지정된다.
Figure 112013038662081-pct00001
본 발명의 한 태양은 (a) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, (b) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (c) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (d) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, 또는 (e) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 39의 가변 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체이다.
한 태양에서, TWEAK에 결합하고 상기 언급한 아미노산 서열 및 아미노산 서열 단편을 특징으로 하는 항체는, 한 태양에서 돌연변이 L234A + L235A를 갖는 인간 IgG1 이소타입(isotype)의 항체이다. 한 태양에서, TWEAK에 결합하고 상기 언급한 아미노산 서열 및 아미노산 서열 단편을 특징으로 하는 항체는, 바람직하게는 돌연변이 S228P 및 L235E를 갖는 인간 IgG4 이소타입의 항체이다.
본 발명에 따른 항체는 인간 TWEAK에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, 비아코어(Biacore)로 측정하여, 25 ℃에서, 15 분 이상의, 가용성 뮤린 TWEAK(서열번호 61의 아미노산 81 내지 225)와 항체 사이 복합체의 반감기를 나타내며, 뮤린 TWEAK에 결합하고, 4.9 ng/ml 이하의 IC50 값 하에 뮤린 TWEAK와 Fn14 사이의 상호작용을 억제한다.
바람직하게, 본 발명에 따른 항체는 비아코어로 측정하여, 25 ℃에서, 100 분 이상, 바람직하게는 110 분 이상의, 가용성 인간 TWEAK(서열번호 60의 아미노산 99 내지 249)와 항체 사이 복합체의 반감기를 나타낸다. 상기 반감기를 나타내는 항-TWEAK 항체는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료에 사용하기에 특히 바람직하다.
바람직하게, 본 발명에 따른 항체는 3.5 ng/ml 이하, 바람직하게는 2.5 ng/ml 이하의 IC50 값 하에 인간 TWEAK와 Fn14 사이의 상호작용을 억제한다. 본원에서 사용된 바와 같이, IC50은 인간 TWEAK와 Fn14 사이의 상호작용의 50%를 차단하는 항체의 양을 의미한다.
한 태양에서, 상기 항체는, 한 태양에서, 돌연변이 L234A + L235A를 갖는 인간 IgG1 이소타입의 항체이다. 한 태양에서, 본 발명에 따른 항체는, 바람직하게는 돌연변이 S228P 및 L235E를 갖는 인간 IgG4 이소타입의 항체이다. 바람직하게, 항체는 인간화 또는 인간 항체이다.
본 발명의 다른 태양은 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학 조성물이다.
본 발명의 또 다른 태양은 약학 조성물의 제조를 위한, 본 발명에 따른 항체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 태양은 암, 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체이다.
본 발명의 다른 태양은 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체이다.
본 발명의 또 다른 태양은 결장, 폐 또는 췌장암의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체이다.
본 발명의 다른 태양은 암, 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 태양은 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 태양은 결장, 폐 또는 췌장암의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체의 용도이다.
본 발명의 다른 태양은 본 발명에 따른 항체를 암호화하는 핵산이다.
본 발명의 또 다른 태양은 본 발명에 따른 항체의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 핵산이다.
본 발명은 또한 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 상기 핵산을 발현시킬 수 있는, 본 발명에 따른 핵산을 함유하는 발현 벡터, 및 상기 항체의 재조합 생산을 위한 상기 벡터를 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 벡터를 포함하는 원핵 또는 진핵 숙주 세포를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 핵산을 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 발현시키고 항체를 상기 세포 또는 세포 배양 상등액으로부터 회수하는 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 재조합 인간 또는 인간화 항체의 제조 방법을 포함한다. 본 발명은 또한 상기 재조합 방법에 의해 수득될 수 있는 항체를 포함한다.
본 발명에 따른 항체는 TWEAK 표적화 치료를 필요로 하는 환자에게 이점을 나타낸다. 본 발명에 따른 항체는 암 질환, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 앓고 있는 환자에게 이점을 유발하는 신규성 및 진보성을 갖는다.
본 발명은 또한 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 갖는 것으로 진단된(따라서 상기 치료를 필요로 하는) 환자에게 본 발명에 따른 TWEAK에 결합하는 항체 효과량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환을 앓고 있는 환자의 치료 방법을 제공한다. 상기 항체는 바람직하게는 약학 조성물로 투여된다.
본 발명의 또 다른 태양은 환자에게 본 발명에 따른 항체를 투여하는 것을 특징으로 하는, 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 앓고 있는 환자의 치료 방법이다.
본 발명은 또한 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 앓고 있는 환자의 치료, 및 본 발명에 따른 약학 조성물의 제조를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다. 또한, 본 발명은 본 발명에 따른 약학 조성물의 제조 방법을 포함한다.
본 발명은 또한, 선택적으로 약학적 목적으로 항체의 제형에 유용한 완충제 및/또는 보조제와 함께, 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 약학적으로 허용되는 담체 중에 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 한 태양에서, 약학 조성물은 제조품 또는 키트에 포함될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 항체에 의한, 류마티스성 관절염의 뮤린 모델인 콜라겐-유도성 관절염의 억제를 나타낸 것이다.
용어 "항체"는 전항체(whole antibody), 이중특이성 항체 및 항체 단편을 포함하나 이로 한정되지는 않는 다양한 형태의 항체 구조를 포함한다. 본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 인간화 항체, 키메라 항체, 또는 본 발명에 따른 특징적인 성질이 보유되는 한 추가로 유전 공학처리된 항체이다.
"항체 단편"은 전장(full length) 항체의 일부분, 바람직하게는 그의 가변 도메인, 또는 적어도 그의 항원 결합 부위를 포함한다. 항체 단편의 예로는 디아바디(diabody), 단일쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 생성된 다중특이성 항체가 포함된다. scFv 항체는, 예를 들면, 문헌 [Huston, J.S., Methods in Enzymol. 203, 46-88 (1991)]에 기술되어 있다. 또한, 항체 단편은 VH 도메인의 특징을 갖는, 즉, VL 도메인과 함께 구성될 수 있는 단일쇄 폴리펩티드, 또는 TWEAK에 결합하는 VL 도메인의 특징을 갖는, 즉, VH 도메인과 함께 기능성 항원 결합 부위로 구성될 수 있는 단일쇄 폴리펩티드를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "단클론성 항체" 또는 "단클론성 항체 조성물"은 단일 아미노산 조성의 항체 분자 제제를 말한다.
용어 "인간화 항체"는 프레임워크(framework) 및/또는 "상보성 결정 영역(complementary determining regions, CDR)"이 모 면역글로불린과 비교할 때 상이한 종의 면역글로불린의 CDR을 포함하도록 변형된 항체를 말한다. 바람직한 태양에서, "인간화 항체"를 제조하기 위해 토끼 CDR이 인간 항체의 프레임워크 영역 중에 그래프팅(grafting)된다(예를 들면, 문헌 [Riechmann, L., et al., Nature 332, 323-327 (1988); and Neuberger, M.S., et al., Nature 314, 268-270 (1985)] 참조).
용어 "키메라 항체"는, 마우스로부터의 가변 영역, 즉, 결합 영역, 및 상이한 공급원 또는 종으로부터 유도된 불변 영역의 적어도 일부분을 포함하는, 통상적으로 재조합 DNA 기술에 의해 제조된 단클론성 항체를 말한다. 키메라 항체는, 예를 들면, 마우스 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함한다. 상기 마우스/인간 키메라 항체는 래트 면역글로불린 가변 영역을 암호화하는 DNA 단편, 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 암호화하는 DNA 단편을 포함하는 발현된 면역글로불린 유전자의 산물이다. 본 발명에 포함되는 "키메라 항체"의 다른 형태는 부류 또는 하위부류(subclass)가 원래 항체로부터 변형되거나 변화된 것들이다. 상기 "키메라" 항체는 또한 "부류-전환 항체"로도 지칭된다. 키메라 항체의 제조 방법은 현재 당해 분야에 공지되어 있는 통상적인 재조합 DNA 및 유전자 형질감염 기술을 포함한다(예를 들면, 문헌 [Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81, 6851-6855 (1984)]; 미국 특허 제 5,202,238 호 및 제 5,204,244 호 참조).
용어 "T 세포 에피토프 결핍 항체"는 인간 T 세포 에피토프(MHC 부류 II 분자에 결합하는 능력을 갖는 단백질 내의 펩티드 서열)를 제거함으로써 면역원성을 제거하거나 감소시키도록 변형된 항체를 말한다. 이 방법에 의해, 펩티드의 아미노산 측쇄와 MHC 부류 II 결합 그루브(groove)를 갖는 특이 결합 포켓(pocket) 사이의 상호작용이 확인된다. 확인된 면역원성 영역은 면역원성을 제거하도록 돌연변이된다. 상기 방법은 일반적으로, 예를 들면, WO 98/52976 호에 기술되어 있다.
본 발명에 따른 용어 "항-TWEAK 항체" 및 "TWEAK에 특이적으로 결합하는 항체"는, 항체가 본 발명에 따라 TWEAK를 표적화하는데 치료제로서 유용하도록 충분한 친화성하에 TWEAK에 결합할 수 있는 항체를 말한다. TWEAK에 특이적으로 결합하는 항체는 10-9 M 이하, 예를 들면, 10-9 내지 10-13 M의 해리 상수(Kd)를 갖는다.
본원에서 사용된 "가변 도메인"(경쇄의 가변 도메인(VL), 중쇄의 가변 도메인(Vh))은 항체를 항원에 결합시키는데 직접 수반되는 경쇄 및 중쇄 도메인의 쌍 각각을 의미한다. 가변 경쇄 및 중쇄 도메인은 동일한 일반 구조를 가지며, 각각의 도메인은 3개의 "초가변(hypervariable) 영역"(또는 상보성 결정 영역, CDR)에 의해 연결된, 그 서열이 광범위하게 보존되는 4개의 프레임워크(FR) 영역을 포함한다. 프레임워크 영역은 β-시트 형태를 취하며, CDR은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄에서 CDR은 프레임워크 영역에 의해 그의 3차원 구조로 유지되며 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR3 영역들은 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화성에 있어 특히 중요한 역할을 하며, 따라서 본 발명의 다른 목적을 제공한다.
용어 "항체의 항원-결합부"는 본원에서 사용될 때 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 말한다. 항체의 항원-결합부는 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "프레임워크" 또는 "FR" 영역은 본원에 정의된 바와 같은 초가변 영역 잔기가 아닌 다른 가변 도메인 영역들이다. 그러므로, 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 도메인은 N-말단으로부터 C-말단까지 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 특히, 중쇄의 CDR3은 주로 항원 결합에 기여하고 항체의 성질을 결정하는 영역이다. CDR 및 FR 영역은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991)]의 표준 정의 및/또는 "초가변성 루프"로부터의 상기 잔기들에 따라 결정된다.
용어 "CDR1H"는 카밧(Kabat)에 따라 추정된 중쇄 가변 영역의 CDR1 영역을 의미한다. CDR2L, CDR3H 등은 중쇄(H) 또는 경쇄(L)로부터의 각각의 영역을 의미한다. 예를 들면, 서열번호 6의 CDR1H를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체는 상기 항체가 그의 가변 중쇄에 중쇄 가변 CDR1 영역으로서 상기 아미노산 서열을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들면, 서열번호 6의 CDR1H, 서열번호 7의 CDR2H, 서열번호 8의 CDR3H를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체는 상기 항체가 그의 중쇄내에 CDR1의 서열로서 서열번호 6, CDR2의 서열로서 서열번호 7, 및 CDR3의 서열로서 서열번호 8을 포함하는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "핵산" 또는 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함한다. 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있지만, 바람직하게는 이중-가닥 DNA이다.
본원에서 사용된 용어 "아미노산"은 알라닌(3 문자 코드: ala, 1 문자 코드: A), 아르기닌(arg, R), 아스파라긴(asn, N), 아스파트산(asp, D), 시스테인(cys, C), 글루타민(gln, Q), 글루탐산(glu, E), 글리신(gly, G), 히스티딘(his, H),이소류신(ile, I), 류신(leu, L), 라이신(lys, K), 메티오닌(met, M), 페닐알라닌(phe, F), 프롤린(pro, P), 세린(ser, S), 트레오닌(thr, T), 트립토판(trp, W), 티로신(tyr, Y) 및 발린(val, V)을 포함하는 천연 카복시 α-아미노산의 군을 의미한다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 작용적 관계에 놓일 때 "작용가능하게 연결"된다. 예를 들면, 전서열(presequence) 또는 분비 리더에 대한 DNA는 폴리펩티드의 분비에 관여하는 전구단백질로서 발현되는 경우 폴리펩티드에 대한 DNA에 작용가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 상기 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 암호화 서열에 작용가능하게 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위는 번역을 촉진하기 위해 위치하는 경우 암호화 서열에 작용가능하게 연결된다. 일반적으로, "작용가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 동일선상(colinear)에 있으며, 분비 리더의 경우 해독 프레임에 인접하여 상기 프레임내에 존재함을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접되어서는 안된다. 연결은 편리한 제한효소 부위에서 접합에 의해 수행된다. 상기 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 연결기를 통상적인 관행에 따라 사용한다.
본원에서 사용된 "세포", "세포주" 및 "세포 배양물"이란 표현은 상호교환적으로 사용되며, 모든 상기 호칭들은 자손을 포함한다. 따라서, "형질전환체" 및 "형질전환 세포"란 용어는 1차 대상 세포, 및 전이 수에 관계없이 그로부터 유도된 배양물을 포함한다. 또한 모든 자손은 의도적이거나 의도하지 않은 돌연변이로 인해 DNA 함량에 있어 정확하게 일치할 필요는 없는 것으로 이해된다. 원래 형질전환된 세포에서 선별된 바와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 변이체 자손이 포함된다.
항체의 "Fc 부분"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 수반되지는 않지만, 다양한 작동인자 기능을 나타낸다. "항체의 Fc 부분"은 숙련된 전문가에게 공지되어 있으며 항체의 파파인 절단을 근거로 정의된 용어이다. 그 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라서, 항체 또는 면역글로불린은 다음의 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 분류되며, 이들 중 몇몇은 하위부류(이소타입; "이소타입" 또는 "하위부류"라는 표현은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, IgA1 및 IgA2로 더 분류될 수 있다. 중쇄 불변 영역에 따라서, 상이한 부류의 면역글로불린들은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다. 항체의 Fc 부분은 보체 활성화, C1q 결합 및 Fc 수용체 결합에 근거하여 ADCC(항체-의존성 세포-매개 세포독성, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) 및 CDC(보체-의존성 세포독성)에 직접 수반된다. 보체 활성화(CDC)는 대부분의 IgG 항체 하위부류의 Fc 부분에 대한 보체 인자 C1q의 결합에 의해 개시된다. 보체 시스템에 대한 항체의 영향은 특정 조건에 따라 달라지지만, C1q에 대한 결합은 Fc 부분내 정의된 결합 부위에 의해 야기된다. 상기 결합 부위는 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들면, 문헌 [Boackle, R.J. et al., Nature 282, 742-743 (1979); Lukas, T.J. et al., J. Immunol. 127, 2555-2560 (1981); Brunhouse, R. and Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16, 907-917 (1979); Burton, D.R. et al., Nature 288, 338-344 (1980); Thommesen, J.E. et al., Mol. Immunol. 37, 995-1004 (2000); Idusogie, E.E. et al., J. Immunol. 164, 4178-4184 (2000); Hezareh, M. et al., J. Virology 75, 12161-12168 (2001); Morgan, A. et al., Immunology 86, 319-324 (1995)] 및 EP 0 307 434 호에 기술되어 있다. 상기 결합부위는, 예를 들면, L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 및 P329이다(카밧(Kabat)의 EU 인덱스에 따른 번호지정, 하기 참조). 하위부류 IgG1, IgG2 및 IgG3의 항체들은 통상적으로 보체 활성화, 및 C1q 및 C3 결합을 나타내는 반면, IgG4는 보체 시스템을 활성화시키지 않으며 C1q 및 C3에 결합하지 않는다.
한 태양에서, 본 발명에 따른 항체는 인간 기원으로부터 유래된 Fc 부분 및 바람직하게는 인간 불변 영역의 모든 다른 부분을 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "인간 기원으로부터 유래된 Fc 부분"은 하위부류 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 인간 항체의 Fc 부분, 바람직하게는 인간 IgG1 하위부류로부터의 Fc 부분, 인간 IgG1 하위부류로부터의 돌연변이된 Fc 부분(바람직하게는, L234A + L235A 상의 돌연변이를 갖는), 인간 IgG4 하위부류로부터의 Fc 부분 또는 인간 IgG4 하위부류로부터의 돌연변이된 Fc 부분(바람직하게는 S228P 및 L235E 상의 돌연변이를 갖는)인 Fc 부분을 의미한다. 서열번호 51 또는 서열번호 52(인간 IgG1 하위부류), 서열번호 53(돌연변이 L234A 및 L235A를 갖는 인간 IgG1 하위부류), 서열번호 54(인간 IgG4 하위부류), 또는 서열번호 55(돌연변이 S228P 및 L235E를 갖는 인간 IgG4 하위부류)의 인간 중쇄 불변 영역이 주로 바람직하다.
바람직하게, 본 발명에 따른 항체는 인간 IgG1 하위부류 또는 인간 IgG4 하위부류의 항체이다. 한 태양에서, 본 발명에 따른 항체는 인간 IgG1 하위부류의 항체이다. 한 태양에서, 본 발명에 따른 항체는 인간 IgG4 하위부류의 항체이다.
본 발명에 따른 항체는 불변 쇄들이 인간 기원을 갖는 것을 특징으로 한다. 상기 불변 쇄들은 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들면, 카밧에 의해 기술되었다(예를 들면, 문헌 [Johnson, G. and Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28, 214-218 (2000)] 참조). 예를 들면, 유용한 인간 중쇄 불변 영역은 서열번호 51 또는 28의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들면, 유용한 인간 경쇄 불변 영역은 서열번호 49의 카파-경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 항체가 토끼 기원을 가지며 카밧에 따른 토끼 항체의 항체 가변 서열 프레임을 포함하는 것이 더 바람직하다(예를 들면, 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, E.A. et al., 5th edition, DIANE Publishing (1992)] 참조).
본 발명은 치료 효과량의 본 발명에 따른 항체를 환자에게 투여하는 것을 특징으로 하는, 치료를 필요로 하는 환자의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은 치료를 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다.
본 발명은 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암의 치료, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다.
본 발명은 암 또는 자가면역 질환의 치료, 바람직하게는 결장, 폐 또는 췌장암의 치료, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료를 위한, 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다.
본 발명의 또 다른 태양은, 본 발명에 따른 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산 및 상기 항체의 경쇄를 암호화하는 핵산의 서열이 1 또는 2개의 발현 벡터내에 삽입되고, 상기 벡터가 진핵 숙주 세포에 삽입되고, 암호화된 항체가 발현되고 숙주 세포 또는 상등액으로부터 회수되는 것을 특징으로 하는, TWEAK에 대한 항체의 제조 방법이다.
본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 재조합 방법에 의해 제조된다. 상기 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며, 원핵 및 진핵 세포에서의 단백질 발현 및 항체 폴리펩티드의 후속 분리 및 통상적으로 약학적으로 허용되는 순도로의 정제를 포함한다. 단백질 발현을 위해, 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 핵산 또는 그의 단편을 표준 방법에 의해 발현 벡터내에 삽입한다. 발현은 적절한 원핵 또는 진핵 숙주 세포, 예를 들면, CHO 세포, NS0 세포, SP2/0 세포, HEK293 세포, COS 세포, 효모 또는 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli) 세포에서 수행되며, 항체는 세포(상등액으로부터 또는 세포 용해 후에)로부터 회수된다.
항체의 재조합 생산은 당해 분야에 공지되어 있으며, 예를 들면, 문헌 [Makrides, S.C., Protein Expr. Purif. 17, 183-202 (1999); Geisse, S. et al., Protein Expr. Purif. 8, 271-282 (1996); Kaufman, R.J., Mol. Biotechnol. 16, 151-160 (2000); Werner, R.G., Arzneimittelforschung (Drug Res.) 48, 870-880 (1998)]의 종설 논문에 기술되어 있다.
항체는 전세포(whole cell) 중에, 세포 용해물 중에, 또는 부분 정제된 형태 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 정제는 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들면, 다른 세포성 핵산 또는 단백질을 컬럼 크로마토그래피 및 당해 분야에 공지된 다른 방법을 포함한 표준 기술에 의해 제거하기 위해 수행된다(예를 들면, 문헌 [Ausubel, F. et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)] 참조).
NS0 세포에서의 발현은, 예를 들면, 문헌 [Barnes, L.M., et al., Cytotechnology 32, 109-123 (2000); Barnes, L.M., et al., Biotech. Bioeng. 73, 261-270 (2001)]에 기술되어 있다. 일시적 발현은, 예를 들면, 문헌 [Durocher, Y., et al., Nucl. Acids. Res. 30, E9 (2002)]에 기술되어 있다. 가변 영역의 클로닝은 문헌 [Orlandi, R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 3833-3837 (1989); Carter, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 4258-4289 (1992); Norderhaug, L., et al., J. Immunol. Methods 204, 77-87 (1997)]에 기술되어 있다. 바람직한 일시적 발현 시스템(HEK 293)은 문헌 [Schlaeger, E.-J. and Christensen, K., Cytotechnology 30, 71-83 (1990); and Schlaeger, E.-J., J. Immunol. Methods 194, 191-199 (1996)]에 기술되어 있다.
단클론성 항체는, 예를 들면, 단백질 A-세파로스(Sepharose), 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 투석 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지로부터 적절히 분리된다. 단클론성 항체를 암호화하는 DNA 및 RNA는 통상적인 절차를 이용하여 용이하게 분리되고 서열화된다. 하이브리도마 세포는 상기 DNA 및 RNA의 공급원으로 작용할 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터내로 삽입될 수 있으며, 상기 벡터는 이어서 숙주 세포에서 재조합 단클론성 항체의 합성을 달성하기 위해, HEK293 세포, CHO 세포, 또는 달리 면역글로불린 단백질을 생성하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포내로 형질감염된다.
항-TWEAK 항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당해 분야에 공지되어 있는 다양한 방법에 의해 제조된다. 상기 방법으로는 천연 공급원으로부터의 분리(천연 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 인간화 항-TWEAK 항체의 조기 제조 변이체 또는 비-변이체 버전의 올리고뉴클레오티드-매개(또는 부위-지향) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조가 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.
본 발명에 따른 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 프로모터, 번역 개시, 불변 영역, 3' 미번역 영역, 폴리아데닐화 및 전사 종료 서열과 조합되어 발현 벡터 구조물을 형성한다. 중쇄 및 경쇄 발현 구조물은 단일 벡터내로 조합되고, 숙주 세포내로 동시-형질감염되거나, 순차 형질감염되거나, 또는 별도로 형질감염되고, 상기 숙주 세포는 이어서 융합되어 두 쇄를 모두 발현하는 단일 숙주 세포를 생성한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의, 하나의 단클론성 항체 또는 단클론성 항체들의 혼합물, 또는 그의 항원-결합부를 함유하는, 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된 조성물, 예를 들면, 약학 조성물을 제공한다.
본원에서 사용된 "약학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균 및 항진균제, 등장화제 및 흡수/재흡수 지연제 등을 포함한다. 바람직하게, 담체는 주사 또는 주입에 적합하다.
본 발명의 조성물은 당해 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 숙련된 전문가에 의해 인지되듯이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 달라질 것이다.
약학적으로 허용되는 담체는 멸균 주사액 또는 분산액의 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 약학적으로 활성 물질을 위한 상기 매질 및 약제의 사용은 당해 분야에 공지되어 있다. 물 이외에, 담체는, 예를 들면, 등장성 완충 식염수 용액일 수 있다.
선택된 투여 경로와 무관하게, 적합한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 발명의 화합물, 및/또는 본 발명의 약학 조성물은 숙련된 전문가에게 공지되어 있는 통상적인 방법에 의해 약학적으로 허용되는 투여 형태로 제형화된다.
본 발명의 약학 조성물 중 활성 성분의 실제 투여 수준은, 환자에게 독성이 없이, 특정 환자, 조성물 및 투여 방식에 목적하는 치료 반응을 달성하기에 효과적인 활성 성분의 양(효과량)을 수득하기 위해 달라질 수 있다. 선택된 투여 수준은 사용된 본 발명의 특정 조성물 또는 그의 에스터, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출률, 사용되는 특정 조성물과 함께 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 건강상태, 일반적인 건강상태 및 이전의 병력, 및 의료 분야에서 공지되어 있는 유사 요인들을 포함한 다양한 약동학적 요인들에 따라 달라질 것이다.
본 발명은 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 앓고 있는 환자의 치료를 위한, 본 발명에 따른 항체의 용도를 포함한다.
본 발명은 또한 상기 질환을 앓고 있는 환자의 치료 방법을 포함한다.
본 발명은 또한 약학적으로 허용되는 담체와 함께 효과량의 본 발명에 따른 항체를 포함하는 약학 조성물의 제조 방법 및 상기 방법을 위한 본 발명에 따른 항체의 용도를 제공한다.
본 발명은 더욱, 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 앓고 있는 환자의 치료를 위한, 바람직하게는 약학적으로 허용되는 담체와 함께, 약제의 제조에 효과적인 양의 본 발명에 따른 항체의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 암, 특히 결장, 폐 또는 췌장암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상을 앓고 있는 환자의 치료를 위한, 바람직하게는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 약제의 제조에 효과적인 양의 본 발명에 따른 항체의 용도를 제공한다.
서열 설명
[표 1]
항체 301
Figure 112013038662081-pct00002
[표 2]
항체 304
Figure 112013038662081-pct00003
[표 3]
항체 305
Figure 112013038662081-pct00004
[표 4a]
인간 불변 영역
Figure 112013038662081-pct00005
[표 4b]
인간 및 뮤린 TWEAK
Figure 112013038662081-pct00006
하기의 실시예 및 서열표는 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공되며, 본 발명의 진정한 범위는 첨부한 특허청구범위에 나타나 있다. 본 발명의 진의로부터 벗어나지 않고 나타낸 절차에 변형이 이루어질 수 있는 것으로 이해된다.
실시예 1
면역화 설명
인간/ 뮤린 TWEAK 를 사용한 토끼의 면역화
뉴질랜드 화이트(New Zealand White) 토끼(오릭토라구스 쿠니쿨러스(Oryctolagus cuniculus))를 제 0 일에 완전 프로인트(Freund) 보조제와 함께 400 ㎍의 재조합 인간 TWEAK로, 제 21, 43 및 65 일에 불완전 프로인트 보조제와 함께 200 ㎍의 인간 TWEAK로, 및 제 85 일에 불완전 프로인트 보조제와 함께 200 ㎍의 뮤린 TWEAK로 면역화시켰다. 모든 면역화는 피하에 여러 부위에 행하였다. 역가 측정을 위해 제 77 및 98 일에 혈청을 준비하였다. 최종 추가접종(boost)은 200 ㎍의 인간 및 200 ㎍의 뮤린 가용성 TWEAK의 정맥내 주사에 의해 수행하였으며, 인간 및 마우스 TWEAK에 결합하고(실시예 2), 인간 및 마우스 TWEAK-Fn14 상호작용을 중화시키고(실시예 4 및 5), IL-8 분비를 억제하는(실시예 6) 그의 능력을 기준으로 항체를 선택하였다. 또한, 항체-TWEAK 복합체의 반감기를 조사하였다(실시예 3). 항체의 항-종양 효능을 B16BL6(뮤린 흑색종; B16의 전이성 폐 아세포주(subline)), SJSA(골육종, ATCC CRL-2098) 및 HCT-116(결장, ATCC CCL-247) 이종이식 모델에서 시험하였다.
실시예 2
인간 및 마우스 TWEAK 에 대한 결합( ELIS(a)
인간 및 마우스 TWEAK에 대한 항-TWEAK 항체의 결합을 ELISA로 측정하였다. 인간 또는 마우스 재조합 TWEAK를 2 내지 8 ℃에서 밤새 배양하여, 0.5 M 카보네이트 코팅 완충액(pH 9.5) 중에서, 1 ㎍/ml, 25 ㎕/웰로 384-웰 눈크 맥시소프(Nunc Maxisorp) 플레이트 상에 고정화시켰다. 실온에서 PBS/1% BSA로 1 시간동안 플레이트를 차단한 다음 2회 세척 단계(PBS중 0.1% 트윈(Tween, 등록상표)) 및 실온에서 1 시간동안 차단 완충액중 상이한 농도의 항-TWEAK 항체 또는 상기 항체의 하이브리도마 상등액과 함께 배양하였다. 4회 더 세척한 후, 차단 완충액중에 1:5000으로 희석시킨 항-토끼-HRP 항체를 사용하여 실온에서 1 시간동안 항체를 검출하였다. 추가로 4회 세척 단계 후에 10 내지 30 분동안 ABTS(등록상표, 로슈 다이아그노스틱스 게엠베하(Roche Diagnostics GmbH))를 첨가하여 신호를 발생시켰다. 흡광도는 405 nm에서 판독하였다.
실시예 3
비아코어를 사용한 항체- TWEAK 복합체의 반감기 측정
비아코어 2000 기기를 시스템내에 탑재된 비아코어 스트렙타비딘 코팅된 센서와 함께 사용하였다. 시스템 완충액 HBS-ET(10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.05% 트윈(등록상표) 20)를 100 ㎕/분의 유량으로 사용하였다. 샘플 완충액은 시스템 완충액이었다. 비오틴화 인간 가용성 TWEAK(서열번호 60의 아미노산 99 내지 249) 및 비오틴화 뮤린 가용성 TWEAK(서열번호 61의 아미노산 81 내지 225)를 각각 150 RU에서 SA 센서 상에서 상이한 유동 셀 상에 고정화시켰다. 유동 셀 FC1을 블랭크 기준 셀로 사용하였다. 각각의 항체를 2 분의 결합 시간동안 100 nM에서 100 ㎕/분으로 분석물로서 시스템 내에 주입하였다. 면역복합체의 해리를 5 분간 모니터링하였다. 센서 표면을 HBS-ET로 10 초동안 세척하고, 10 mM 글라이신(pH 2.25)으로 2x2 분 주입을 이용하여 재생시켰다. 상기 절차는 25 ℃에서 수행하였다. 그 사이[240 내지 300 초]에 복합체 해리 상의 동역학적 속도 제한 단계를 취하여 해리 속도 kd[1/s]를 산출하였다(비아코어 평가 소프트웨어 4.0). 식 t1/2 해리 = ln(2)/(60 x kd)에 따라서, 면역복합체의 반감기(분)를 계산하였다. 결과를 표 5a 및 5b, 및 표 6b에 나타내었다.
[표 5a]
Figure 112013038662081-pct00007
또 다른 실험에서, 키메라 TW-305chi 및 WO 2006/130374 호의 P2D10의 키메라 버전의 항체-TWEAK 복합체의 반감기(25 ℃에서 t/2 해리[분])를 측정하였다(두 키메라 항체 모두 인간 불변 영역으로 서열번호 49의 인간 카파 경쇄 불변 영역 및 서열번호 51의 인간 IgG1 불변 영역을 갖는다).
[표 5b]
Figure 112013038662081-pct00008
본 발명에 따른 항체는 25 ℃에서 비아코어에 의해 측정하여, 100 분 이상, 바람직하게는 110 분 이상의, 가용성 인간 TWEAK(서열번호 60의 아미노산 99 내지 249)와 항체 사이 복합체의 반감기와 같은 유용한 성질을 나타낸다. 상기 반감기를 나타내는 항-TWEAK 항체는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 예를 들면, 근이영양증, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 예를 들면, 다발성 골수종에서의 골 변성, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료에 사용하기에 특히 바람직하다.
실시예 4
TWEAK - Fn14 상호작용의 중화(인간)
인간 TWEAK/인간 Fn14 상호작용의 차단을 수용체 상호작용 ELISA에 의해 확인하였다. 96-웰 맥시소프(등록상표) 플레이트(눈크)를, 실온에서 1.5 시간동안, 웰 당 PBS 중 1 ㎍/ml 인간 Fn14:Fc(인간 IgG1의 Fc 부분에 융합된 인간 Fn14의 세포외 도메인(아미노산 1 내지 75)) 100 ㎕로 코팅하고 실온에서 교반하에 30 분동안 PBS중 5% FBS의 용액으로 차단하였다. 그 사이에, 차단액중 2.5 ng/ml의 인간 Flag-표지된 가용성 TWEAK(아미노산 106 내지 249)를 교반하에 실온에서 2 시간동안 상이한 농도의 항-TWEAK 항체 또는 하이브리도마 상등액과 함께 배양하였다. Fn14-코팅된 플레이트를 세척 완충액(PBS 중 0.1% 트윈(등록상표) 20)으로 1회 세척한 후, 100 ㎕의 TWEKA-항체 용액을 각 웰로 옮기고 플레이트를 실온에서 1 시간동안 배양한 다음 세척 완충액으로 4회 세척하였다. 웰에 차단 완충액에 1:5000으로 희석시킨 항-FLAG-HRP 검출 항체 100 ㎕를 채우고 실온에서 1 시간동안 배양하였다. 4회 추가 세척 단계 후에, 약 10 분동안 100 ㎕의 3,3,5,5-테트라메틸벤지딘(TMB) 용액을 첨가하여 신호를 발생시켰다. 100 ㎕의 1 N HCl을 가하여 반응을 중단시키고, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다(기준 파장 620 nm). 결과를 표 6에 나타내었다.
실시예 5
TWEAK - Fn14 상호작용의 중화(마우스)
마우스 가용성 TWEAK를 표지화하지 않았기 때문에 상이한 검출 시스템을 사용하는 것을 제외하고 인간 단백질에 대해 기술한 바와 유사한 원리에 따라 마우스 TWEAK/마우스 Fn14 상호작용 ELISA를 행하였다. 간략하게, 맥시소프 플레이트를 인간 Fn14:Fc에 대해 전술한 바와 같이 마우스 Fn14:Fc(인간 IgG1의 Fc 부분에 융합된 마우스 Fn14의 세포외 도메인(아미노산 1 내지 75))로 코팅한 다음, 차단 및 세척하였다. 4 ng/ml의 마우스 가용성 TWEAK를 차단 완충액 중에서 항-TWEAK-항체 또는 하이브리도마 상등액과 함께 예비-배양한 후, 웰 당 100 ㎕의 혼합물을 Fn14-코팅된 플레이트에 첨가하였다. 실온에서 1 시간 배양하고 4회 세척한 후에, 차단 완충액중 125 ng/ml의 비오틴화 항-마우스 TWEAK 항체를 실온에서 1 시간동안 첨가한 다음 추가 4회 세척 단계를 수행하였다. TWEAK 항체를 차단 완충액에 1:5000으로 희석시킨 스트렙타비딘-HRP와 함께 실온에서 30 분간 배양하여 검출하였다. 전술한 바와 같이 신호를 발생시키고 흡광도를 측정하였다. 결과는 표 6a 및 6b에 나타내었다.
실시예 6
IL -8 분비 ELISA
세포 시스템내에서 항-TWEAK 항체에 의한 TWEAK 활성의 차단을 A375 흑색종 세포를 사용한 IL-8 분비 분석에서 확인하였다. 10,000개의 A375 세포(ATCC #CRL1619)를 96-웰 세포 배양 플레이트의 웰 당 100 ㎕의 성장 배지(4.5 g/L 글루코스 함유 DMEM, 피루베이트 및 글루타맥스(GlutaMAX(등록상표)/10% FBS 함유)에 접종하고 37 ℃/5% CO2에서 48 시간동안 배양하였다. 인간 재조합 가용성 TWEAK를 300 ng/ml에서 성장 배지중 상이한 농도의 항-TWEAK 항체와 함께 실온에서 30 분간 배양하였다. 이어서, 50 ㎕의 혼합물을 세포 플레이트의 각 웰에 첨가한 다음, 48 시간동안 더 배양하여 IL-8을 분비시켰다. 플레이트를 200 x g에서 5 분간 원심분리한 후 20 ㎕의 세포 상등액을 취하고 "CXCL8 콴티킨(Quantikine) ELISA" 키트(알앤드디 시스템즈(R&D Systems)로부터의 RD5P 캘리브레이터 딜루언트(Calibrator Diluent) 980 ㎕와 혼합하였다. 제조사의 지시에 따라 ELISA에 의해 IL-8을 검출하였다. 결과는 표 6a 및 6b에 나타내었다.
[표 6a]
Figure 112013038662081-pct00009
[표 6b]
Figure 112013038662081-pct00010
실시예 7
TW -301, TW -304, WT -305의 에피토프 영역의 결정
비아코어 2000 기기를 비아코어 평가 소프트웨어 4.0과 함께 사용하였다. 샘플 및 시스템 완충액은 HBS-ET(pH 7.4)이었다. 센서 표면에 대한 TWEAK 분석물의 강한 비특이적 결합으로 인해, 개개 항체들의 에피토프 지도작성은 문헌 [Johne, B. et al., J. Immun. Meth. 160, 191-198 (1993)]에 기술된 바와 같은 비아코어 교차-경쟁 실험에 의해 통상적으로 수행할 수 없었다.
TWEAK 단백질의 개별적 생화학적 성질로 인해, 리간드로서 TWEAK를 사용하는 또 다른 방법을 개발해야 했다. 비오틴화 TWEAK를 스트렙타비딘-코팅된 칩 표면 상에 고정화시키고, 연속 주입된 항체(항체 1)의 에피토프 커버리지(coverage)를 측정하였다. 목적은 이미 결합된 1차 항체의 존재하에 2차 항체(항체 2)의 상대적 결합 수준을 검출하는 것이었다. 상기 상대 결합 수준으로부터 비율을 산출하였다(Ab2/Ab1, %로 나타낸 몰비, 표 7).
5 nM의 비오틴화 TWEAK를 20 ㎕/분에서 1 분동안 스트렙타비딘 코팅된 센서 유동 셀 상에 고정화시켰다. 각각의 TWEAK 에피토프의 포화가 달성될 때까지, 1차 및 2차 mAb를 4 분동안 100 nM에서 10 ㎕/분으로 시스템내에 연속 주입하였다. 기준으로 SA 코팅된 유동 셀을 사용하였다.
시스템을 30 ㎕/분에서 HBS-ET로 20 초동안 세척한 다음, 30 ㎕/분에서 6 M GuadHCl 및 100 mM HCl로 1 분동안 2회 재생시켰다. 상기 재생 단계에 의해 센서 표면으로부터 결합된 mAb가 분리되었으며, 고정화된 비오틴화 TWEAK는 비가역적으로 변성되었다. 스트렙타비딘 센서 표면이 비오틴화 TWEAK로 완전히 포화될 때까지, 상기 과정을 동일 유동 셀 상에 천연 비오틴화 TWEAK 단백질을 고정화시켜 반복하였다(피드 배치 방식).
[표 7]
Figure 112013038662081-pct00011
교차차단 실험은 10% 미만의 각 항체의 접근성 값을 나타내며, 상기 값은 상기 분석의 노이즈 내에 든다. TW-301chi, TW-304chi 및 TW-305chi가 동일 에피토프 영역에 결합함이 명백하게 확인된다.
실시예 8
콜라겐-유도성 관절염( 류마티스성 관절염의 뮤린 모델)의 생체내 억제 - 항체 305( 키메라 ; TW305 )는 류마티스성 관절염의 뮤린 모델인 콜라겐-유도성 관절염을 억제한다.
6 내지 8 주령의 수컷 DBA1/J 마우스(잭슨 래버러토리(Jackson Laboratory), 미국 메인주 발 하버 소재)를 완전 프로인트 보조제 중의 II형 소 콜라겐으로 면역화시키고, 3 주후에 불완전 프로인트 보조제 중에서 다시 면역화시켰다(추가접종, 제 0 일). 마우스에게 추가접종 전날 시작하여 격일로 키메라 항체 305(=TW305, 도 1 참조)(10 mg/kg, n=12), 엔브렐(Enbrel)(10 mg/kg, n=12) 또는 비히클(포스페이트 완충 식염수, n=12)을 투여하였다. 마우스를 추가접종 후 제 0, 2, 5, 7, 9, 12 및 14 일에 관절염에 대해 검사하였다. 관절염의 중증도를 다음의 기준에 근거하여 점수를 매겼다: 1 = 1개 손가락의 종창 및/또는 발적; 2 = 2 개 이상의 관절에서 종창; 3 = 2개 초과의 관절이 수반된 상태에서 발의 전체적 종창; 4 = 발 전체 및 손가락들의 심한 관절염. 비히클과 비교하여, TW-305는 임상 점수(p<0.05, 제 14 일)를 TNF 차단제 엔브렐과 유사한 정도로 상당히 감소시켰다. 결과는 도 1에 나타내었다.
<110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Antibodies against human TWEAK and uses thereof <130> 27057 WO <140> PCT/EP2011/067070 <141> 2011-09-30 <150> EP 10186536.8 <151> 2010-10-05 <160> 61 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 111 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 1 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Phe Asp Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Gly Asn Ser 85 90 95 Trp Asp Gly Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Thr 100 105 110 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 2 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Ser Leu Ala 1 5 10 <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 3 Asp Ala Phe Asp Leu Ala Ser 1 5 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 4 Gln Ser Thr Asp Tyr Gly Asn Ser Trp Asp Gly Asn Pro 1 5 10 <210> 5 <211> 116 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 5 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ala Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Gly Gly Gly Asn Ser Gly Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ile Ser Arg Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Leu 115 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 6 Phe Thr Phe Asn Ala Asn Tyr 1 5 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 7 Tyr Gly Gly Gly Asn Ser 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 8 Gly Pro Ile Ser Arg Asp Leu 1 5 <210> 9 <211> 111 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 9 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Asp 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Val Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Ile Asp Tyr Gly Asn Asn 85 90 95 Tyr Val Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 10 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Asp Leu Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 11 Ser Val Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 12 Gln Cys Ile Asp Tyr Gly Asn Asn Tyr Val Gly Asn Thr 1 5 10 <210> 13 <211> 116 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 13 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Cys Ile Tyr Val Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Ala 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Val Cys 85 90 95 Thr Arg Ser Val His Phe Gly Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 14 Phe Ser Phe Ser Ser Thr Tyr 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 15 Tyr Val Gly Ser Ser Gly 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 16 Ser Val His Phe Gly Asp Leu 1 5 <210> 17 <211> 111 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 17 Ala Ile Glu Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Met 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys 100 105 110 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 18 Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 19 Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser 1 5 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 20 Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg Pro Asp Thr Val Ala 1 5 10 <210> 21 <211> 120 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 21 Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Asp 65 70 75 80 Leu Lys Met Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Pro 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Phe 115 120 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 22 Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 23 Tyr Val Arg Gln Gly Thr 1 5 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 24 Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile 1 5 10 <210> 25 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Chimeric light chain <400> 25 Ala Ile Glu Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Met 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 26 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC1 <400> 26 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 27 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC2 <400> 27 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 28 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC3 <400> 28 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Cys Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 29 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC4 <400> 29 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Cys Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 30 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC5 <400> 30 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 31 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC6 <400> 31 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 32 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC7 <400> 32 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 33 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC8 <400> 33 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 34 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC9 <400> 34 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 35 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC10 <400> 35 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 36 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of light chain (VL), 305-LC11 <400> 36 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Tyr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Thr Ala Tyr Tyr Asn Ser Arg 85 90 95 Pro Asp Thr Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 37 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Chimeric heavy chain <400> 37 Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Asp 65 70 75 80 Leu Lys Met Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Pro 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Phe Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro 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<210> 39 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC2 <400> 39 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC3 <400> 40 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 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Ala Arg Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC5 <400> 42 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 43 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC6 <400> 43 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 44 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC7 <400> 44 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 45 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC8 <400> 45 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asp 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 46 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC9 <400> 46 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Lys Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 47 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC10 <400> 47 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 48 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 305, Humanized variant of variable domain of heavy chain (VH), 305-HC11 <400> 48 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Val Tyr Val Arg Gln Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Leu 50 55 60 Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Tyr Asn Tyr Asp Asp Ala Phe Val Ile Trp 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Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 52 <211> 330 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 52 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val 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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 54 <211> 327 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 54 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 55 <211> 327 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 55 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 56 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 301, Chimeric light chain <400> 56 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Phe Asp Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Gly Asn Ser 85 90 95 Trp Asp Gly Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Thr Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 57 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 301, Chimeric heavy chain <400> 57 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ala Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Cys Ile Tyr Gly Gly Gly Asn Ser Gly Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro Ile Ser Arg Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 58 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 304, Chimeric light chain <400> 58 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Asn Asp 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Val Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Ile Asp Tyr Gly Asn Asn 85 90 95 Tyr Val Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 59 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Antibody 304, Chimeric heavy chain <400> 59 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Thr Tyr 20 25 30 Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Cys Ile Tyr Val Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Ala 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Val Cys 85 90 95 Thr Arg Ser Val His Phe Gly Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 60 <211> 249 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Met Ala Ala Arg Arg Ser Gln Arg Arg Arg Gly Arg Arg Gly Glu Pro 1 5 10 15 Gly Thr Ala Leu Leu Val Pro Leu Ala Leu Gly Leu Gly Leu Ala Leu 20 25 30 Ala Cys Leu Gly Leu Leu Leu Ala Val Val Ser Leu Gly Ser Arg Ala 35 40 45 Ser Leu Ser Ala Gln Glu Pro Ala Gln Glu Glu Leu Val Ala Glu Glu 50 55 60 Asp Gln Asp Pro Ser Glu Leu Asn Pro Gln Thr Glu Glu Ser Gln Asp 65 70 75 80 Pro Ala Pro Phe Leu Asn Arg Leu Val Arg Pro Arg Arg Ser Ala Pro 85 90 95 Lys Gly Arg Lys Thr Arg Ala Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Tyr Glu 100 105 110 Val His Pro Arg Pro Gly Gln Asp Gly Ala Gln Ala Gly Val Asp Gly 115 120 125 Thr Val Ser Gly Trp Glu Glu Ala Arg Ile Asn Ser Ser Ser Pro Leu 130 135 140 Arg Tyr Asn Arg Gln Ile Gly Glu Phe Ile Val Thr Arg Ala Gly Leu 145 150 155 160 Tyr Tyr Leu Tyr Cys Gln Val His Phe Asp Glu Gly Lys Ala Val Tyr 165 170 175 Leu Lys Leu Asp Leu Leu Val Asp Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys Leu 180 185 190 Glu Glu Phe Ser Ala Thr Ala Ala Ser Ser Leu Gly Pro Gln Leu Arg 195 200 205 Leu Cys Gln Val Ser Gly Leu Leu Ala Leu Arg Pro Gly Ser Ser Leu 210 215 220 Arg Ile Arg Thr Leu Pro Trp Ala His Leu Lys Ala Ala Pro Phe Leu 225 230 235 240 Thr Tyr Phe Gly Leu Phe Gln Val His 245 <210> 61 <211> 249 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 61 Met Ala Ala Arg Arg Ser Gln Arg Arg Arg Gly Arg Arg Gly Glu Pro 1 5 10 15 Gly Thr Ala Leu Leu Ala Pro Leu Val Leu Ser Leu Gly Leu Ala Leu 20 25 30 Ala Cys Leu Gly Leu Leu Leu Val Val Val Ser Leu Gly Ser Trp Ala 35 40 45 Thr Leu Ser Ala Gln Glu Pro Ser Gln Glu Glu Leu Thr Ala Glu Asp 50 55 60 Arg Arg Glu Pro Pro Glu Leu Asn Pro Gln Thr Glu Glu Ser Gln Asp 65 70 75 80 Val Val Pro Phe Leu Glu Gln Leu Val Arg Pro Arg Arg Ser Ala Pro 85 90 95 Lys Gly Arg Lys Ala Arg Pro Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Tyr Glu 100 105 110 Val His Pro Arg Pro Gly Gln Asp Gly Ala Gln Ala Gly Val Asp Gly 115 120 125 Thr Val Ser Gly Trp Glu Glu Thr Lys Ile Asn Ser Ser Ser Pro Leu 130 135 140 Arg Tyr Asp Arg Gln Ile Gly Glu Phe Thr Val Ile Arg Ala Gly Leu 145 150 155 160 Tyr Tyr Leu Tyr Cys Gln Val His Phe Asp Glu Gly Lys Ala Val Tyr 165 170 175 Leu Lys Leu Asp Leu Leu Val Asn Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys Leu 180 185 190 Glu Glu Phe Ser Ala Thr Ala Ala Ser Ser Pro Gly Pro Gln Leu Arg 195 200 205 Leu Cys Gln Val Ser Gly Leu Leu Pro Leu Arg Pro Gly Ser Ser Leu 210 215 220 Arg Ile Arg Thr Leu Pro Trp Ala His Leu Lys Ala Ala Pro Phe Leu 225 230 235 240 Thr Tyr Phe Gly Leu Phe Gln Val His 245

Claims (21)

  1. 서열번호 17의 가변 경쇄 및 서열번호 21의 가변 중쇄를 포함하는 항체의 키메라 또는 T-세포 에피토프 결핍 변이체.
  2. 서열번호 22의 CDR1H, 서열번호 23의 CDR2H, 서열번호 24의 CDR3H, 및 서열번호 18의 CDR1L, 서열번호 19의 CDR2L, 서열번호 20의 CDR3L을 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 항체.
  3. 제 2 항에 있어서,
    (a) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, (b) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (c) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (d) 서열번호 26의 가변 경쇄 및 서열번호 47의 가변 중쇄, (e) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (f) 서열번호 31의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (g) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, 또는 (h) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 39의 가변 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  4. 제 2 항에 있어서,
    (a) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, (b) 서열번호 27의 가변 경쇄 및 서열번호 45의 가변 중쇄, (c) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 44의 가변 중쇄, (d) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 41의 가변 중쇄, 또는 (e) 서열번호 29의 가변 경쇄 및 서열번호 39의 가변 중쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  5. 제 2 항에 있어서,
    서열번호 17/서열번호 21, 서열번호 25/서열번호 37, 서열번호 26/서열번호 38, 서열번호 27/서열번호 39, 서열번호 28/서열번호 40, 서열번호 29/서열번호 41, 서열번호 30/서열번호 42, 서열번호 31/서열번호 43, 서열번호 32/서열번호 44, 서열번호 33/서열번호 45, 서열번호 34/서열번호 46, 서열번호 35/서열번호 47 및 서열번호 36/서열번호 48로 이루어진 군에서 선택된 가변 경쇄 서열/가변 중쇄 서열의 조합을 특징으로 하는 항체.
  6. 제 2 항에 있어서,
    서열번호 17, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 21, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 및 48의 가변 중쇄 또는 경쇄의 군에서 선택된 가변 중쇄 또는 가변 경쇄를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  7. 제 1 항에 따른 항체의 키메라 또는 T-세포 에피토프 결핍 변이체, 또는 제 2 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 류마티스성 관절염의 치료를 위한 약학 조성물.
  8. 암, 또는 자가면역 질환, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 근육 질환, 다발성 경화증, 만성 신장 질환, 골 질환, 전신성 홍반성 루푸스, 루푸스 신염 및 혈관 손상의 치료를 위한, 제 1 항에 따른 항체의 키메라 또는 T-세포 에피토프 결핍 변이체, 또는 제 2 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 항체.
  9. 결장, 폐 또는 췌장암의 치료를 위한, 제 1 항에 따른 항체의 키메라 또는 T-세포 에피토프 결핍 변이체, 또는 제 2 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 항체.
  10. 제 1 항에 따른 항체의 키메라 또는 T-세포 에피토프 결핍 변이체, 또는 제 2 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 항체를 암호화하는 핵산.
  11. 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 TWEAK에 결합하는 항체의 발현을 위한, 제 10 항에 따른 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  12. 제 11 항에 따른 벡터를 포함하는 원핵 또는 진핵 숙주 세포.
  13. 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 제 10 항에 따른 핵산을 발현시키고 상기 세포 또는 세포 배양 상등액으로부터 항체를 회수하는 것을 특징으로 하는, 인간 TWEAK에 결합하는 재조합 항체의 제조 방법.
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