TWI482630B - 抗人類ｔｗｅａｋ抗體及其用途 - Google Patents

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TWI482630B
TWI482630B TW100135935A TW100135935A TWI482630B TW I482630 B TWI482630 B TW I482630B TW 100135935 A TW100135935 A TW 100135935A TW 100135935 A TW100135935 A TW 100135935A TW I482630 B TWI482630 B TW I482630B
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Hendrik Knoetgen
Jens Niewoehner
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Hoffmann La Roche
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Description

抗人類TWEAK抗體及其用途
本發明係關於抗人類TWEAK抗體(TWEAK抗體)、其製造方法、含有該等抗體之醫藥組合物及其用途。
人類TWEAK(UniProtKB O43508，TNF相關之細胞凋亡弱誘導物；SEQ ID NO:60)為細胞表面相關的II型跨膜蛋白。Chicheportiche,Y.等人，J. Biol. Chem. 272(1997) 32401-32410；Marsters,S.A.等人，Curr. Biol. 8(1998) 525-528；Lynch,C.N.等人，J. Biol. Chem. 274(1999) 8455-8459中描述TWEAK。TWEAK之活性形式為可溶性均三聚物。人類及鼠類TWEAK之受體結合域顯示93%序列一致性。TWEAK受體Fn14(纖維母細胞生長因子誘導性14 kDa蛋白)為129 aa I型跨膜蛋白，其配位體結合域由一個單一半胱胺酸富集域組成。TWEAK之信號傳導經由NF-KB路徑活化而出現。TWEAK mRNA表現於多種組織中且發現於最重要的器官(如心臟、腦、骨骼肌及胰臟)及與免疫系統有關的組織(如脾、淋巴結及胸腺)中。已在心臟、腦、肺、胎盤、血管EC及平滑肌細胞中偵測出Fn14 mRNA。剔除TWEAK及剔除Fn14的基因剔除小鼠能存活、健康且有生殖能力且具有更多的自然殺手細胞，且顯示出增強的先天發炎反應。TWEAK參與細胞凋亡、增殖、血管生成、缺血性半影區、腦水腫及多發性硬化。
WO 1998/005783、WO 2000/042073、WO 2003/086311、WO 2006/130429、WO 2006/130374、WO 2006/122187、WO 2006/089095、WO 2006/088890、WO 2006/052926中提及抗TWEAK抗體。
本發明包含與人類TWEAK結合之抗體，其特徵在於包含選自由SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 24組成之群的CDR3區(CDR3H)作為重鏈可變域。
本發明包含以下抗體之嵌合、人類化或T細胞抗原決定基消除變異體：包含SEQ ID NO: 1之可變輕鏈及SEQ ID NO: 5之可變重鏈的抗體、包含SEQ ID NO: 9之可變輕鏈及SEQ ID NO: 13之可變重鏈的抗體或包含SEQ ID NO: 17之可變輕鏈及SEQ ID NO: 21之可變重鏈的抗體。
在一實施例中，抗體特徵在於包含SEQ ID NO: 6之CDR1H、SEQ ID NO: 7之CDR2H及SEQ ID NO: 8之CDR3H。
在一實施例中，特徵在於包含SEQ ID NO: 14之CDR1H、SEQ ID NO: 15之CDR2H及SEQ ID NO: 16之CDR3H。
在一實施例中，抗體特徵在於包含SEQ ID NO: 22之CDR1H、SEQ ID NO: 23之CDR2H及SEQ ID NO: 24之CDR3H。
在一實施例中，抗體特徵在於包含SEQ ID NO: 6之CDR1H、SEQ ID NO: 7之CDR2H、SEQ ID NO: 8之CDR3H及SEQ ID NO: 2之CDR1L、SEQ ID NO: 3之CDR2L、SEQ ID NO: 4之CDR3L。
在一實施例中，抗體特徵在於包含SEQ ID NO: 14之CDR1H、SEQ ID NO: 15之CDR2H、SEQ ID NO: 16之CDR3H及SEQ ID NO: 10之CDR1L、SEQ ID NO: 11之CDR2L、SEQ ID NO: 12之CDR3L。
在一實施例中，抗體特徵在於包含SEQ ID NO: 22之CDR1H、SEQ ID NO: 23之CDR2H、SEQ ID NO: 24之CDR3H及SEQ ID NO: 18之CDR1L、SEQ ID NO: 19之CDR2L、SEQ ID NO: 20之CDR3L。
在一實施例中，抗體特徵在於包含選自由以下組成之群的序列作為輕鏈可變域序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 56或SEQ ID NO: 58。
在一實施例中，抗體特徵在於包含選自由以下組成之群的序列作為重鏈可變域序列：SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 57或SEQ ID NO: 59。
在一實施例中，抗體特徵在於包含選自由以下組成之群的序列作為輕鏈可變域序列：SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35或SEQ ID NO: 36；以及選自由以下組成之群的序列作為重鏈可變域序列：SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47或SEQ ID NO: 48。
較佳為選自由以下組成之群的可變輕鏈與可變重鏈之組合：1/5、9/13、17/21、25/37、26/38、27/39、28/40、29/41、30/42、31/43、32/44；33/45、34/46、35/47；36/48、56/57、58/59。(舉例而言，17/21意謂抗體包含SEQ ID NO: 17之可變輕鏈及SEQ ID NO: 21之可變重鏈)。
本發明之一實施例為與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含SEQ ID NO: 6之CDR1H、SEQ ID NO: 7之CDR2H、SEQ ID NO: 8之CDR3H及SEQ ID NO: 2之CDR1L、SEQ ID NO: 3之CDR2L、SEQ ID NO: 4之CDR3L。
本發明之一實施例為與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含SEQ ID NO: 14之CDR1H、SEQ ID NO: 15之CDR2H、SEQ ID NO: 16之CDR3H及SEQ ID NO: 10之CDR1L、SEQ ID NO: 11之CDR2L、SEQ ID NO: 12之CDR3L。
本發明之一實施例為與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含SEQ ID NO: 22之CDR1H、SEQ ID NO: 23之CDR2H、SEQ ID NO: 24之CDR3H及SEQ ID NO: 18之CDR1L、SEQ ID NO: 19之CDR2L、SEQ ID NO: 20之CDR3L。
本發明之一實施例為與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含a)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 41之可變重鏈、b)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 44之可變重鏈、c)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 45之可變重鏈、d)SEQ ID NO: 26之可變輕鏈及SEQ ID NO: 47之可變重鏈、e)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 44之可變重鏈、f)SEQ ID NO: 31之可變輕鏈及SEQ ID NO: 45之可變重鏈或g)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 41之可變重鏈。
本發明之一實施例為與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含a)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 41之可變重鏈、b)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 44之可變重鏈、c)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 45之可變重鏈、d)SEQ ID NO: 26之可變輕鏈及SEQ ID NO: 47之可變重鏈、e)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 44之可變重鏈、f)SEQ ID NO: 31之可變輕鏈及SEQ ID NO: 45之可變重鏈、g)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 41之可變重鏈或h)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 39之可變重鏈。
在本申請案中如下指定此等抗體。
本發明之一實施例為與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含a)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 41之可變重鏈、b)SEQ ID NO: 27之可變輕鏈及SEQ ID NO: 45之可變重鏈、c)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 44之可變重鏈、d)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 41之可變重鏈或e)SEQ ID NO: 29之可變輕鏈及SEQ ID NO: 39之可變重鏈。
在一實施例中，特徵為上述胺基酸序列及胺基酸序列片段的與TWEAK結合之抗體屬於人類IgG1同型，在一實施例中具有突變L234A+L235A。在一實施例中，特徵為上述胺基酸序列及胺基酸序列片段的與TWEAK結合之抗體屬於人類IgG4同型，較佳具有突變S228P及L235E。
本發明抗體與人類TWEAK特異性結合，且較佳顯示，由Biacore所量測，可溶性鼠類TWEAK(SEQ ID NO: 61之胺基酸81-225)與抗體之複合物在25℃下的半衰期為15分鐘或超過15分鐘，且本發明抗體與鼠類TWEAK結合且以4.9 ng/ml或低於4.9 ng/ml之IC50 值抑制鼠類TWEAK與Fn14之間的相互作用。
本發明之抗體較佳顯示，由Biacore所量測，可溶性人類TWEAK(SEQ ID NO: 60之胺基酸99-249)與抗體之複合物的半衰期在25℃下為100分鐘或超過100分鐘，較佳為110分鐘或超過110分鐘。顯示該半衰期之抗TWEAK抗體尤其較佳用於治療自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明之抗體較佳以3.5 ng/ml或低於3.5 ng/ml、較佳2.5 ng/ml或低於2.5 ng/ml之IC50 值抑制人類TWEAK與Fn14之間的相互作用。如本文中所用，IC50 意謂阻斷50%人類TWEAK與Fn14之間相互作用的抗體之量。
抗體在一實施例中屬於人類IgG1同型，在一實施例中具有突變L234A+L235A。在一實施例中本發明之抗體屬於人類IgG4同型，較佳具有突變S228P及L235E。抗體較佳為人類化抗體或人類抗體。
本發明之另一實施例為包含本發明抗體之醫藥組合物。
本發明之另一實施例為本發明之抗體用於製造醫藥組合物的用途。
本發明之另一實施例為用於製造供治療以下疾病之藥物的本發明抗體：癌症、自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明之另一實施例為用於製造供治療以下疾病之藥物的本發明抗體：自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明之另一實施例為用於製造供治療結腸癌、肺癌或胰臟癌之藥物的本發明抗體。
本發明之另一實施例為本發明抗體用於製造供治療以下疾病之藥物的用途：癌症、自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明之另一實施例為本發明抗體用於製造供治療以下疾病之藥物的用途：自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明之另一實施例為本發明抗體用於製造供治療結腸癌、肺癌或胰臟癌之藥物的用途。
本發明之另一實施例為編碼本發明抗體之核酸。
本發明之另一實施例為編碼本發明抗體之重鏈可變域及/或輕鏈可變域的核酸。
本發明另外提供含有本發明核酸、能夠在原核或真核宿主細胞中表現該核酸的表現載體，以及用於重組製造該抗體之含有該等載體的宿主細胞。
本發明另外包含含有本發明載體之原核或真核宿主細胞。
本發明另外包含製造本發明之人類或人類化重組抗體之方法，其特徵為：在原核或真核宿主細胞中表現本發明之核酸，及自該細胞或細胞培養物上清液中回收該抗體。本發明另外包含可藉由該重組方法獲得之抗體。
本發明之抗體對需要TWEAK靶向治療之患者顯示出益處。本發明抗體之新穎發明特性有益於罹患以下疾病之患者：癌症疾病(尤其罹患結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明進一步提供治療罹患以下疾病之患者的方法：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷，該方法包含向診斷有該疾病(且因此需要該治療)之患者投與有效量之與TWEAK結合的本發明抗體。該抗體較佳含於醫藥組合物中投與。
本發明之另一實施例為治療罹患以下疾病之患者的方法：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷，該方法特徵為向患者投與本發明之抗體。
本發明另外包含本發明之抗體用於治療罹患以下疾病之患者的用途：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷；以及用於製造本發明之醫藥組合物的用途。另外，本發明包含製造本發明之醫藥組合物的方法。
本發明另外包含醫藥組合物，其包含本發明之抗體，視需要連同適用於調配抗體之緩衝劑及/或佐劑一起以用於醫藥目的。
本發明另外提供醫藥學上可接受之載劑中包含本發明抗體的醫藥組合物。在一實施例中，醫藥組合物可包括於製品或套組中。
術語「抗體」涵蓋抗體結構之各種形式，包括(但不限於)全抗體、雙特異性抗體及抗體片段。本發明之抗體較佳為人類化抗體、嵌合抗體或其他經遺傳工程改造之抗體，只要其保留本發明之特徵性質。
「抗體片段」包含全長抗體之一部分，較佳為其可變域，或至少其抗原結合位點。抗體片段之實例包括雙功能抗體、單鏈抗體分子及自抗體片段形成之多特異性抗體。scFv抗體描述於例如Huston,J.S.,Methods in Enzymol. 203(1991) 46-88中。另外，抗體片段包含特徵為VH 域(亦即能與VL 域組裝在一起)或與TWEAK結合之VL 域(亦即能與VH 域組裝成功能性抗原結合位點)的單鏈多肽。
如本文中所用之術語「單株抗體」或「單株抗體組合物」係指單一胺基酸組合物之抗體分子製劑。
術語「人類化抗體」係指構架及/或「互補決定區」(CDR)與親本免疫球蛋白相比已修飾成包含不同物種之免疫球蛋白CDR的抗體。在一較佳實施例中，將兔CDR移植至人類抗體之構架區中來製備「人類化抗體」。參見例如Riechmann,L.等人，Nature 332(1988) 323-327；及Neuberger,M.S.等人，Nature 314(1985) 268-270。
術語「嵌合抗體」係指包含來自小鼠之可變區(亦即結合區)及源自於不同來源或物種之恆定區之至少一部分的單株抗體，其通常藉由重組DNA技術製備。舉例而言，嵌合抗體包含小鼠可變區及人類恆定區。該等小鼠/人類嵌合抗體為包含編碼大鼠免疫球蛋白可變區之DNA區段及編碼人類免疫球蛋白恆定區之DNA區段的免疫球蛋白基因的表現產物。本發明所涵蓋之「嵌合抗體」之其他形式為類別或子類已修飾或改變而不同於原始抗體類別或子類的彼等抗體。該等「嵌合」抗體亦稱為「類別轉換抗體」。製造嵌合抗體之方法包括此項技術中現已熟知之習知重組DNA及基因轉染技術。參見例如Morrison,S.L.等人，Proc. Natl. Acad Sci. USA 81(1984) 6851-6855；美國專利第5,202,238號及第5,204,244號。
術語「T細胞抗原決定基消除抗體」係指藉由移除人類T細胞抗原決定基(蛋白質內具有與MHC II類分子結合之能力的肽序列)進行修飾以去除或降低免疫原性之抗體。利用此方法，鑑定肽之胺基酸側鏈與具有MHC II類結合槽之特異性結合凹穴之間的相互作用。所鑑定之免疫原性區突變以消除免疫原性。該等方法一般性描述於例如WO 98/52976中。
本發明之術語「抗TWEAK抗體」及「特異性結合至TWEAK的抗體」係指能夠以足夠親和力結合TWEAK的抗體，使得抗體適用作本發明之靶向TWEAK之治療劑。與TWEAK特異性結合之抗體具有10-9 M或低於10-9 M(例如10-9 M至10-13 M)之解離常數(Kd)。
如本文所用之「可變域」(輕鏈可變域(VL )、重鏈可變域(VH ))表示直接參與抗體與抗原結合的每對輕鏈與重鏈域。輕鏈及重鏈可變域具有相同的一般結構且各域包含由三個「高變區」(或互補決定區，CDR)連接之四個構架(FR)區，該等構架區之序列廣泛保守。構架區採取β片構形且CDR可形成連接β片結構的環。各鏈之CDR藉由構架區保持其三維結構，且與來自其他鏈之CDR一起形成抗原結合位點。抗體之重鏈及輕鏈CDR3區在本發明抗體之結合特異性/親和力中起尤其重要的作用且因此提供本發明之另一目標。
術語「抗體之抗原結合部分」當在本文中使用時係指抗體中負責結合抗原之胺基酸殘基。抗體之抗原結合部分包含來自「互補決定區」或「CDR」的胺基酸殘基。「構架」或「FR」區為除本文定義之高變區殘基外的彼等可變域區。因此，抗體之輕鏈及重鏈可變域自N末端至C末端包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。特定而言，重鏈之CDR3為對抗原結合貢獻最大且限定抗體特性之區域。CDR及FR區係根據Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，公共衛生服務部(Public Health Service)，國立衛生研究院(National Institutes of Health),Bethesda,MD(1991)之標準定義及/或來自「高變環」之彼等殘基來確定。
術語「CDR1H」表示根據Kabat所計算之重鏈可變區的CDR1區。CDR2L、CDR3H等意謂分別來自重鏈(H)或輕鏈(L)的區域。舉例而言，抗體特徵為包含SEQ ID NO: 6之CDR1H意謂該抗體在其可變重鏈中包含此胺基酸序列作為重鏈可變鏈CDR1區。舉例而言，抗體特徵為包含SEQ ID NO: 6之CDR1H、SEQ ID NO: 7之CDR2H、SEQ ID NO: 8之CDR3H意謂該抗體在其重鏈中包含作為CDR1序列的SEQ ID NO: 6、作為CDR2序列的SEQ ID NO: 7及作為CDR3序列的SEQ ID NO: 8。
如本文所用之術語「核酸」或「核酸分子」意欲包括DNA分子及RNA分子。核酸分子可為單股或雙股，但較佳為雙股DNA。
如本申請案中所用之術語「胺基酸」表示天然存在之羧基α胺基酸之群，包含丙胺酸(三字母碼：ala，一字母碼：A)、精胺酸(arg,R)、天冬醯胺(asn,N)，天冬胺酸(asp,D)、半胱胺酸(cys,C)、麩胺醯胺(gln,Q)、麩胺酸(glu，E)、甘胺酸(gly,G)、組胺酸(his，H)、異白胺酸(ile,I)、白胺酸(leu,L)、離胺酸(lys,K)，甲硫胺酸(met,M)、苯丙胺酸(phe,F)、脯胺酸(pro,P)、絲胺酸(ser,S)、蘇胺酸(thr,T)、色胺酸(trp,W)、酪胺酸(tyr,Y)及纈胺酸(val,V)。
一種核酸當與另一核酸呈功能關係置放時，為「可操作地連接」。舉例而言，前序列或分泌性前導序列之DNA若以參與多肽分泌之前蛋白形式受到表現，則可操作地連接至該多肽之DNA：啟動子或增強子若影響編碼序列之轉錄，則可操作地連接至該序列；或核糖體結合位點若經定位以便有助於轉譯，則可操作地連接至編碼序列。一般而言「可操作地連接」意謂所連接之DNA序列呈共線性，且在分泌性前導序列之情況下具連續性且位於閱讀框中。然而，增強子不必為連續的。連接藉由在適宜限制性位點處接合來實現。若該等位點不存在，則根據習知實務使用合成寡核苷酸接附子或連接子。
如本文所用之表述「細胞」、「細胞株」及「細胞培養物」可互換使用且所有該等名稱均包括子代。因此，「轉化體」及「經轉化之細胞」一詞包括個體初級細胞及自其衍生而不考慮轉移數目之培養物。亦瞭解，所有子代由於有意或無意突變而在DNA含量上可能不精確一致。本發明包括所篩選的與原始轉化之細胞具有相同功能或生物活性的變異體子代。
抗體之「Fc部分」不直接參與抗體與抗原之結合，但顯示出各種效應功能。「抗體之Fc部分」為熟習此項技術者所熟知之術語且基於番木瓜蛋白酶使抗體裂解的情況來定義。視其重鏈恆定區之胺基酸序列而定，抗體或免疫球蛋白分成以下類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且其中多類可進一步分成子類(同型；本文中表述「同型」或「子類」可互換使用)，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4、IgA1及IgA2。根據重鏈恆定區，免疫球蛋白的不同類別分別稱為α、δ、ε、γ及μ。抗體之Fc部分直接參與基於補體活化、C1q結合及Fc受體結合之ADCC(抗體依賴性細胞介導之細胞毒性)及CDC(補體依賴性細胞毒性)。補體活化(CDC)藉由補體因子C1q與多數IgG抗體子類之Fc部分的結合起始。雖然抗體對補體系統的影響視特定條件而定，但與C1q之結合係藉由Fc部分中之界定結合位點引起。該等結合位點在此項技術中已知且描述於例如Boackle,R.J.等人，Nature 282(1979) 742-743；Lukas,T.J.等人，J. Immunol. 127(1981) 2555-2560；Brunhouse,R及Cebra,J.J.,Mol. Immunol. 16(1979) 907-917；Burton,D.R.等人，Nature 288(1980) 338-344；Thommesen,J.E.等人，Mol. Immunol. 37(2000) 995-1004；Idusogie,E.E.等人，J. Immunol. 164(2000) 4178-4184；Hezareh,M.等人，J. Virology 75(2001) 12161-12168；Morgan,A.等人，Immunology 86(1995) 319-324；EP 0 307 434。該等結合位點為例如L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331及P329(根據Kabat之EU索引編號，參見下文)。子類IgG1、IgG2及IgG3之抗體通常顯示補體活化及C1q及C3結合，而IgG4不活化補體系統且不結合C1q及C3。
在一實施例中，本發明抗體包含自人類來源獲得之Fc部分，且較佳包含人類恆定區之所有其他部分。如本文所用之術語「自人類來源獲得之Fc部分」表示Fc部分為子類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之人類抗體之Fc部分，較佳為人類IgG1子類之Fc部分、人類IgG1子類之突變型Fc部分(較佳具有L234A+L235A之突變)、人類IgG4子類之Fc部分或人類IgG4子類之突變型Fc部分(較佳具有S228P及L235E之突變)。最佳為SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52(人類IgG1子類)、SEQ ID NO: 53(具有L234A及L235A突變之人類IgG1子類)、SEQ ID NO: 54(人類IgG4子類)或SEQ ID NO: 55(具有S228P及L235E突變之人類IgG4子類)之人類重鏈恆定區。
本發明抗體較佳屬於人類IgG1子類或人類IgG4子類。在一實施例中，本發明抗體屬於人類IgG1子類。在一實施例中，本發明抗體屬於人類IgG4子類。
本發明抗體之特徵在於恆定鏈屬於人類來源。該等恆定鏈在此項技術中已熟知且描述於例如Kabat(參見例如Johnson,G.及Wu,T.T.,Nucleic Acids Res. 28(2000) 214-218)中。舉例而言，有用的人類重鏈恆定區包含胺基酸序列SEQID NO: 51或SEQ ID NO: 28。舉例而言，有用的人類輕鏈恆定區包含κ輕鏈恆定區之胺基酸序列SEQ ID NO: 49。抗體更佳為兔來源且根據Kabat(參見例如Sequences of Proteins of Immunological Interest,Kabat,E.A.等人，第5版,DIANE Publishing(1992))包含兔抗體之抗體可變序列框架。
本發明包含治療需要治療之患者的方法，其特徵為向該患者投與治療有效量之本發明抗體。
本發明包含本發明抗體用於治療之用途。
本發明包含本發明抗體用於製備供治療以下疾病之藥物的用途：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明包含本發明之抗體用於治療癌症或發炎疾病的用途，較佳用於治療結腸癌、肺癌或胰臟癌或治療自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明之另一實施例為製造抗TWEAK抗體之方法，其特徵在於將編碼本發明抗體重鏈之核酸及編碼該抗體輕鏈之核酸的序列插入一或兩個表現載體中，將該載體插入真核宿主細胞，表現且自宿主細胞或上清液中回收所編碼抗體。
本發明之抗體較佳藉由重組方式製造。該等方法在此項技術中廣泛已知且包含在原核及真核細胞中表現蛋白質，隨後分離抗體多肽及通常純化至醫藥學上可接受之純度。為表現蛋白質，藉由標準方法將編碼輕鏈及重鏈或其片段之核酸插入表現載體中。表現在適當原核或真核宿主細胞中進行，諸如CHO細胞、NS0細胞、SP2/0細胞、HEK293細胞、COS細胞、酵母或大腸桿菌細胞，且自該等細胞(自上清液或細胞溶解後)回收抗體。
抗體之重組製造在此項技術中已熟知且描述於例如以下評論文章中：Makrides,S.C.,Protein Expr. Purif. 17(1999) 183-202；Geisse,S.等人，Protein Expr. Purif. 8(1996) 271-282；Kaufman,R.J.,Mol. Biotechnol. 16(2000) 151-160；Werner,R.G.,Arzneimittelforschung(Drug Res.) 48(1998) 870-880中。
抗體可存在於完整細胞中、細胞溶胞物中或以部分純化或實質上純的形式存在。藉由標準技術(包括管柱層析法及此項技術中熟知之其他技術)來進行純化，以便消除其他細胞組分或其他污染物(例如其他細胞核酸或蛋白質)。參見Ausubel,F.等人(編)，Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley Interscience,New York(1987)。
NS0細胞中之表現描述於例如Barnes,L.M.等人，Cytotechnology 32(2000) 109-123；Barnes,L.M.等人，Biotech. Bioeng. 73(2001) 261-270中。短暫表現描述於例如Durocher,Y.等人，Nucl. Acids. Res. 30(2002) E9中。可變域之選殖描述於Orlandi,R.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86(1989) 3833-3837；Carter,P.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89(1992) 4285-4289；Norderhaug,L.等人，J. Immunol. Methods 204(1997) 77-87中。較佳短暫表現系統(HEK 293)描述於Schlaeger,E.-J及Christensen,K.,Cytotechnology 30(1999) 71-83中及Schlaeger,E.-J.,J. Immunol. Methods 194(1996) 191-199中。
藉由習知免疫球蛋白純化程序將單株抗體適當地自培養基中分離出來，該等程序諸如瓊脂糖凝膠蛋白A、氫氧磷灰石層析法、透析或親和性層析法。編碼單株抗體之DNA及RNA使用習知程序容易分離及定序。融合瘤細胞可充當該DNA及RNA之來源。DNA一經分離，則可插入表現載體中，隨後轉染至宿主細胞中，諸如HEK 293細胞、CHO細胞或骨髓瘤細胞(否則不產生免疫球蛋白)，以便宿主細胞合成重組單株抗體。
編碼抗TWEAK抗體之胺基酸序列變異體之核酸分子係由此項技術已知之多種方法製備。此等方法包括(但不限於)自天然來源分離(在天然存在之胺基酸序列變異體之情況下)，或對早先製備之變異體或非變異體形式之人類化抗TWEAK抗體進行寡核苷酸介導(或定點)之突變誘發、PCR突變誘發及卡匣突變誘發來製備。
將本發明之重鏈及輕鏈可變域與啟動子序列、轉譯起始序列、恆定區序列、3'非轉譯區序列、聚腺苷酸化序列及轉錄終止序列組合以形成表現載體構築體。可將重鏈及輕鏈表現構築體合併成單一載體，共轉染、連續轉染、或分別轉染至宿主細胞中，隨後融合以形成表現雙鏈之單一宿主細胞。
在另一態樣中，本發明提供含有本發明之單株抗體或其抗原結合部分之一或其組合與醫藥學上可接受之載劑調配在一起的組合物，例如醫藥組合物。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑」包括生理學上相容之任何及全部溶劑、分散介質、包衣劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收/再吸收延遲劑及其類似物。載劑較佳適於注射或輸注。
本發明組合物可藉由此項技術中已知的各種方法投與。如熟習此項技術者所瞭解，投與途徑及/或模式將視所要結果而變化。
醫藥學上可接受之載劑包括無菌水溶液或分散液及用於製備無菌可注射溶液或分散液的無菌散劑。該等介質及藥劑用於醫藥活性物質之用途為此項技術中已知。除水之外，載劑可為例如等張性緩衝鹽水溶液。
不管選擇何種投藥途徑，藉由熟習此項技術者已知之習知方法將本發明化合物(其可以適合的水合形式使用)及/或本發明之醫藥組合物調配成醫藥學上可接受之劑型。
本發明之醫藥組合物中活性成分之實際劑量可變化以獲得有效達成特定患者之所要治療反應、組合物及投藥模式，而對患者無毒的活性成分之量(有效量)。所選劑量將視多種藥物動力學因素而定，包括所採用之本發明特定組合物、或其酯、鹽或醯胺之活性；投藥途徑；投藥時間；所採用之特定化合物之排泄速率；與所採用特定組合物組合之其它藥物、化合物及/或材料；所治療患者之年齡、性別、體重、病狀、一般健康及先前病史；及醫學技術中熟知之類似因素。
本發明包含本發明之抗體用於治療罹患以下疾病之患者的用途：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼退化)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明亦包含治療罹患該疾病之患者的方法。
本發明進一步提供製造包含有效量之本發明抗體連同醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物的方法及本發明抗體用於該方法的用途。
本發明另外提供有效量的本發明抗體(較佳連同醫藥學上可接受之載劑一起)用於製造供治療罹患以下疾病之患者之醫藥劑的用途：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼退化)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
本發明亦提供有效量的本發明抗體(較佳連同醫藥學上可接受之載劑一起)用於製造供治療罹患以下疾病之患者之醫藥劑的用途：癌症(尤其結腸癌、肺癌或胰臟癌)或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼退化)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
序列描述
提供以下實例及序列表以有助於理解本發明，本發明之真實範疇闡明於隨附申請專利範圍中。應瞭解，可在不偏離本發明精神之情況下對所述程序進行修改。
實例1 免疫接種描述 以人類/鼠類TWEAK免疫接種兔
紐西蘭白兔(穴兔(Oryctolagus cuniculus))在第0天以400μg重組人類TWEAK、經由完全傳氏佐劑(complete Freund's adjuvant)免疫，在第21天、第43天及第65天以200 μg人類TWEAK、經由不完全傳氏佐劑免疫且在第85天以200 μg鼠類TWEAK、經由不完全傳氏佐劑免疫。所有免疫接種均在若干部位皮下完成。在第77天及第98天製備血清用於測定力價。藉由靜脈內注射200 μg人類可溶性TWEAK及200 μg鼠類可溶性TWEAK來完成最終強化且基於抗體結合人類及小鼠TWEAK的能力(實例2)、中和人類及小鼠TWEAK-Fn14相互作用的能力(實例4及實例5)及抑制IL8分泌的能力(實例6)來選擇抗體。另外，研究抗體-TWEAK複合物的半衰期(實例3)。在B16BL6(鼠類黑色素瘤；B16之轉移性肺亞株)、SJSA(骨肉瘤，ATCC CRL-2098)及HCT-116(結腸，ATCC CCL-247)異種移植模型中測試抗體的抗腫瘤功效。
實例2 與人類及小鼠TWEAK結合(ELISA)
藉由ELISA測定抗TWEAK抗體與人類及小鼠TWEAK之結合。人類或小鼠重組TWEAK(含於0.5 M碳酸鹽塗覆緩衝液(pH值9.5)中，1 μg/ml，25微升/孔)藉由在2℃至8℃下培育隔夜而固著於384孔Nunc Maxisorp板上。培養板在室溫下以PBS/1% BSA阻斷1小時，繼之為兩個洗滌步驟(含0.1% Tween20之PBS)，且在室溫下與不同濃度的抗TWEAK抗體一起於阻斷緩衝液或該等抗體之融合瘤上清液中培育1小時。再洗滌四次之後，抗體在室溫下以於阻斷緩衝液中1:5000稀釋之抗兔HRP抗體偵測1小時。再經四個洗滌步驟之後，藉由添加ABTS(Roche Diagnostics GmbH)持續10分鐘至30分鐘來顯現信號。在405 nm下讀取吸光度。
實例3 使用Biacore測定抗體-TWEAK複合物之半衰期
使用Biacore 2000儀器，此系統中安裝塗有抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)之Biacore感測器。系統緩衝液HBS-ET(10 mM HEPES(pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA，0.05% Tween20)以100微升/分鐘之流速使用。樣品緩衝液為系統緩衝液。經生物素標記之人類可溶性TWEAK(SEQ ID NO: 60之胺基酸99-249)及經生物素標記之鼠類可溶性TWEAK(SEQ ID NO: 61之胺基酸81-225)以各150 RU固著於SA感測器之不同流槽上。流槽FC1用作空白參照槽。100 nM各抗體以100微升/分鐘注入系統中作為分析物，締合時間為2分鐘。持續5分鐘監測免疫複合物之解離。感測器表面以HBS-ET洗滌10秒且以10 mM甘胺酸(pH值2.25)、使用2×2分鐘注射進行再生。在25℃下完成此程序。利用複合物解離階段中時間間隔為[240秒至300秒]之動力學速率限制步驟來計算解離速率kd[1/s](Biacore評估軟體4.0)。根據方程式t1/2解離=ln(2)/(60×kd)計算免疫複合物之半衰期(分鐘)。結果顯示於表5a及表5b以及表6b中。
1) ：人類恆定區為SEQ ID NO: 49之人類κ輕鏈恆定區與SEQ ID NO: 51之人類IgG1恆定區
在另一實驗中，測定嵌合TW-305chi及WO 2006/130374之P2D10嵌合形式之抗體-TWEAK複合物的半衰期(t/2解離[分鐘]，25℃)(兩種嵌合抗體均具有SEQ ID NO: 49之人類κ輕鏈恆定區及SEQ ID NO: 51之人類IgG1恆定區作為人類恆定區)。
1) ：人類恆定區為SEQ ID NO: 49之人類κ輕鏈恆定區與SEQ ID NO: 51之人類IgG1恆定區
本發明之抗體顯示出有價值的特性，如可溶性人類TWEAK(SEQ ID NO: 60之胺基酸99-249)與抗體之複合物在25℃下之半衰期利用Biacore量測為100分鐘或超過100分鐘，較佳為110分鐘或超過110分鐘。顯示該半衰期之抗TWEAK抗體尤其較佳用於治療自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎、肌肉疾病(例如肌肉萎縮症)、多發性硬化、慢性腎病、骨骼疾病(例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性)、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
實例4 中和TWEAK-Fn14相互作用(人類)
藉由受體相互作用ELISA來顯示人類TWEAK/人類Fn14相互作用的阻斷。在室溫下將96孔Maxisorp板(Nunc)以每孔100 μl含1 μg/ml人類Fn14:Fc(人類Fn14之胞外域(胺基酸1-75)與人類IgG1之Fc部分融合)之PBS塗佈1.5小時，且在室溫下在震盪下以5% FBS於PBS中之溶液阻斷30分鐘。同時，將含2.5 ng/ml經人類Flag標記之可溶性TWEAK(胺基酸106-249)的阻斷溶液與不同濃度的抗TWEAK抗體或融合瘤上清液一起在室溫下在震盪下培育2小時。在用洗滌緩衝液(含0.1% Tween20之PBS)洗滌經Fn14塗佈之板一次後，將100 μl TWEAK-抗體溶液轉移至各孔中且將培養板在室溫下培育1小時，接著用洗滌緩衝液洗滌四次。用100 μl於阻斷緩衝液中1:5000稀釋之抗FLAG-HRP偵測抗體填充孔，且在室溫下培育1小時。再經四個洗滌步驟之後，藉由添加100 μl 3,3,5,5-四甲基聯苯胺(TMB)溶液持續約十分鐘來顯現信號。藉由添加100 μl 1 N HCl來中止反應，且在450 nm下量測吸光度(參考波長620 nm)。結果顯示於表6。
實例5 中和TWEAK-Fn14相互作用(小鼠)
按照與針對人類蛋白所述類似之原理進行小鼠TWEAK/小鼠Fn14相互作用ELISA，但因為小鼠可溶性TWEAK未經標記，所以使用不同的偵測系統。簡言之，如上針對人類Fn14:Fc所述，以小鼠Fn14:Fc(小鼠Fn14之胞外域(胺基酸1-75)與人類IgG1之Fc部分融合)塗佈Maxisorp板，隨後阻斷及洗滌。將4 ng/ml小鼠可溶性TWEAK與抗TWEAK抗體或融合瘤上清液在阻斷緩衝液中預培育，且經Fn14塗佈之板每孔添加100 μl混合物。在室溫下培育1小時且洗滌四次之後，在室溫下添加含125 ng/ml經生物素標記之抗小鼠TWEAK抗體的阻斷緩衝液持續1小時，隨後再進行四次洗滌步驟。藉由與於阻斷緩衝液中1:5000稀釋之抗生蛋白鏈菌素HRP一起在室溫下培育30分鐘來偵測TWEAK抗體。顯現信號且如上所述量測吸光度。結果顯示於表6a及表6b中。
實例6 IL-8分泌ELISA
使用A375黑色素瘤細胞在IL-8分泌檢定中顯示細胞系統中抗TWEAK抗體對TWEAK活性的阻斷。將10,000個A375細胞(ATCC #CRL1619)於100 μl生長培養基(具有4.5 g/L葡萄糖、丙酮酸及GlutaMAXTM /10% FBS之DMEM)中接種於96孔細胞培養板之每孔中，且在37℃/5% CO2 下培育48小時。300 ng/ml人類重組可溶性TWEAK與不同濃度的抗TWEAK抗體一起在生長培養基中在室溫下預培育30分鐘。隨後，將50 μl混合物添加至細胞板的各孔中，隨後再培育48小時以容許IL-8分泌。以200×g離心培養板五分鐘後，移出20 μl細胞上清液，且與來自「CXCL8 Quantikine ELISA」套組(R&D Systems)之980 μl RD5P校準稀釋劑混合。根據製造商說明書藉由ELISA偵測IL-8。結果顯示於表6a及表6b中。
實例7 測定TW-301、TW-304、TW-305之抗原決定基區
Biacore 2000儀器與Biacore評估軟體4.0一起使用。樣品及系統緩衝液為HBS-ET(pH 7.4)。由於TWEAK分析物與感測器表面的非特異性結合強，因此個別抗體的抗原決定基定位不能照例藉由如Johne,B.等人，J. Immun. Meth. 160(1993) 191-198所述之Biacore交叉競爭實驗完成。
由於TWEAK蛋白之個別生物化學特性，因此必須開發使用TWEAK作為配位體的另一方法。將經生物素標記之TWEAK固著於經抗生蛋白鏈菌素塗佈之晶片表面上，且量測經連續注射抗體(抗體1)之抗原決定基覆蓋率。目的為在已結合之一次抗體存在下偵測二次抗體(抗體2)的相對結合程度。由此等相對結合程度計算比值(Ab2/Ab1，莫耳比以%給出，表7)。
5 nM經生物素標記之TWEAK在經抗生蛋白鏈菌素塗佈之感測器流槽上以20微升/分鐘固著1分鐘。將各100 nM之一次mAb及二次mAb以10微升/分鐘連續注入系統中持續4分鐘，直至各別TWEAK抗原決定基達成飽和。使用經SA塗佈之流槽作為參照。
使用HBS-ET以30微升/分鐘洗滌系統20秒，隨後為兩次再生步驟(1分鐘，30微升/分鐘，6 M GuadHCl及100 mM HCl)。此等再生步驟將所結合mAb自感測器表面剝離且使所固著之經生物素標記之TWEAK不可逆地變性。藉由在相同流槽上固定經生物素標記之原生TWEAK蛋白(分批饋料模式)直至抗生蛋白鏈菌素感測器表面完全被經生物素標記之TWEAK飽和來重複該方法。
交叉阻斷實驗顯示各別抗體可達到的值小於10%，其在此檢定之雜訊內。明顯顯示，TW-301chi、TW-304chi及TW-305chi結合至相同的抗原決定基區。
實例8 活體內抑制膠原蛋白誘發之關節炎(類風濕性關節炎之鼠類模型)-抗體305(嵌合；TW305)抑制膠原蛋白誘發之關節炎(類風濕性關節炎之鼠類模型)
6週至8週齡雄性DBA1/J小鼠(Jackson Laboratory,Bal Harbor,Maine)以含II型牛膠原蛋白之完全傳氏佐劑免疫，且3週以後以不完全傳氏佐劑再次免疫(強化，第0天)。自強化前一天起，每隔一天向小鼠投與嵌合抗體305(=TW305，參見圖1)(10 mg/kg，n=12)，Enbrel(10 mg/kg，n=12)或媒劑(磷酸鹽緩衝鹽水，n=12)。在強化之後第0天、第2天、第5天、第7天、第9天、第12天及第14天檢驗小鼠之關節炎。關節炎之嚴重程度係基於以下標準計分：1=一個足趾腫脹及/或紅腫；2=兩個或兩個以上關節腫脹；3=涉及超過兩個關節的腳爪全部腫脹；4=全部腳爪及足趾之嚴重關節炎。與媒劑相比，TW-305顯著降低臨床計分(p<0.05，第14天)，與TNF阻斷劑Enbrel之臨床計分量值類似。結果顯示於圖1中。
<110>　瑞士商赫孚孟拉羅股份有限公司
<120>　抗人類TWEAK抗體及其用途
<130>　27057 FT
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圖1 本發明之抗體抑制膠原蛋白誘發之關節炎(類風濕性關節炎之鼠類模型)。
(無元件符號說明)

Claims (15)

  1. 一種與人類TWEAK結合之抗體，其特徵為包含SEQ ID NO：22之CDR1H、SEQ ID NO：23之CDR2H、SEQ ID NO：24之CDR3H及SEQ ID NO：18之CDR1L、SEQ ID NO：19之CDR2L、SEQ ID NO：20之CDR3L。
  2. 如請求項1之抗體，其特徵為包含a)SEQ ID NO：27之可變輕鏈及SEQ ID NO：41之可變重鏈、b)SEQ ID NO：27之可變輕鏈及SEQ ID NO：44之可變重鏈、c)SEQ ID NO：27之可變輕鏈及SEQ ID NO：45之可變重鏈、d)SEQ ID NO：26之可變輕鏈及SEQ ID NO：47之可變重鏈、e)SEQ ID NO：29之可變輕鏈及SEQ ID NO：44之可變重鏈、f)SEQ ID NO：31之可變輕鏈及SEQ ID NO：45之可變重鏈、g)SEQ ID NO：29之可變輕鏈及SEQ ID NO：41之可變重鏈或h)SEQ ID NO：29之可變輕鏈及SEQ ID NO：39之可變重鏈。
  3. 如請求項2之抗體，其特徵為包含a)SEQ ID NO：27之可變輕鏈及SEQ ID NO：41之可變重鏈、b)SEQ ID NO：27之可變輕鏈及SEQ ID NO：45之可變重鏈、c)SEQ ID NO：29之可變輕鏈及SEQ ID NO：44之可變重鏈、d)SEQ ID NO：29之可變輕鏈及SEQ ID NO：41之可變重鏈或e)SEQ ID NO：29之可變輕鏈及SEQ ID NO：39之可變重鏈。
  4. 如請求項1之抗體，其中可變輕鏈序列/可變重鏈序列之組合係選自由以下組成之群：SEQ ID NO：17/SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：25/SEQ ID NO：37、SEQ ID NO： 26/SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：27/SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：28/SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：29/SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：30/SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：31/SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：32/SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：33/SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：34/SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：35/SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：36/SEQ ID NO：48。
  5. 如請求項1之抗體，其特徵為包含選自以下可變重鏈或可變輕鏈之群的可變重鏈或可變輕鏈：SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：48。
  6. 一種醫藥組合物，其特徵為包含如請求項1至5中任一項之抗體。
  7. 一種如請求項1至5中任一項之抗體用於製造醫藥組合物的用途。
  8. 如請求項1至5中任一項之抗體，其用於治療癌症或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎；肌肉疾病，例如肌肉萎縮症；多發性硬化；慢性腎病；骨骼疾 病，例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性；全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
  9. 如請求項1至5中任一項之抗體，其用於治療結腸癌、肺癌或胰臟癌。
  10. 一種如請求項1至5中任一項之抗體的用途，其用於製造供治療以下疾病的藥物：癌症或自體免疫疾病、類風濕性關節炎、乾癬性關節炎；肌肉疾病，例如肌肉萎縮症；多發性硬化；慢性腎病；骨骼疾病，例如多發性骨髓瘤中之骨骼變性；全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎及血管損傷。
  11. 一種如請求項1至5中任一項之抗體的用途，其用於製造供治療結腸癌、肺癌或胰臟癌之藥物。
  12. 一種核酸，其編碼如請求項1至5中任一項之抗體。
  13. 一種表現載體，其特徵為包含如請求項12之核酸，用於在原核或真核宿主細胞中表現與TWEAK結合之抗體。
  14. 一種原核或真核宿主細胞，其包含如請求項13之載體。
  15. 一種製造如請求項1至5中任一項之重組抗體的方法，其特徵為在原核或真核宿主細胞中表現如請求項12之核酸且自該細胞或該細胞培養物上清液中回收該抗體。
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