CN103154019A - 表面活性肽及其盐的制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种表面活性肽或其盐的制造方法，其包括以下工序：向含有式(1)：(式中，*表示光学活性位点。X表示选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸中的氨基酸，R表示碳原子数9～13的烷基及支链烷基。M表示碱金属、碱土金属、任选被取代的胺等)。所示的表面活性肽或其盐的培养液或从培养液中除去了不溶物的溶液中加入含有支链烷基醇的有机溶剂来萃取表面活性肽或其盐。

Description

表面活性肽及其盐的制造方法

技术领域

本发明涉及一种具有表面活性能的表面活性肽或其盐的制造方法。

背景技术

已有报告指出，表面活性肽除了具有高表面活性能以外，还具有抗菌活性、溶血性、蛋白变性抑制等多种多样的功能。这样的作为功能性材料而有用的表面活性肽，已知可由芽孢杆菌(bacillus)属微生物生产，并可通过对该芽孢杆菌属微生物进行培养而实现工业上对表面活性肽的批量生产(专利文献1等)。作为由含有该表面活性肽的培养液制造表面活性肽及其盐的方法，例如可以举出如下方法：

1)使培养液成为酸性，加入二氯甲烷和甲醇、并使(二氯甲烷:甲醇)＝2:1(体积比)，从而将表面活性肽萃取至有机层，进行浓缩，然后利用薄层色谱法(TLC)进行纯化的方法(专利文献2)；

2)在培养液(pH6)中加入辛烷后，对有机层进行浓缩并通过超滤来进行纯化的方法(非专利文献1)；

3)通过离心分离从培养液中分离出菌体等不溶物后，使滤液成为酸性而取得沉淀物，向其中加入二氯甲烷并对表面活性肽进行固液萃取后，对有机层进行浓缩。接着，在加入碱水后废弃有机层，使水层成为酸性而得到沉淀物，再对该沉淀物进行冷冻干燥的方法(专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2002-176993号公报

专利文献2：韩国公开专利第2005-0007670号公报

专利文献3：中国专利申请公开第101041846号说明书

非专利文献

非专利文献1：Biochemical Engineering Journal、2008、42、248-253

发明内容

发明要解决的问题

但是，这些从培养液中获得表面活性肽及其盐的制造方法由于以下原因而不能认为适于工业上实施。例如，1)的方法虽然可以直接从培养液中萃取表面活性肽，但由于使用了环境负担高的二氯甲烷作为萃取溶剂，而且要利用薄层色谱法进行纯化，因此，从操作方面上，不能认为适于工业上实施。就方法2)而言，相对于表面活性肽1重量份，需要2500重量份的溶剂(生产1kg表面活性肽时，溶剂为2.5吨)，从环境及成本方面上，不能认为适于工业上实施。就方法3)而言，在菌体分离后，要使滤液成为酸性来收集沉淀物，并且要用二氯甲烷从沉淀物中进行萃取等，操作繁琐，除此之外，还要使用环境负担大的溶剂，因此，不能认为适于工业上实施。

鉴于上述情况，本申请的课题在于提供一种不需要繁琐的操作、且经济方面有利的适于工业上实施的表面活性肽及其盐的制造方法。例如，本申请的课题在于提供一种不需要分离不溶物(菌体)而直接从培养液中萃取表面活性肽的方法。

除了上述课题以外、或者代替上述课题，本申请的目的还在于提供一种即使使用低环境负担型的溶剂也可以高效地从培养液中萃取表面活性肽的表面活性肽及其盐的制造方法。

解决问题的方法

本发明人等针对适于工业上实施的表面活性肽及其盐的制造方法进行了深入研究，结果发现，通过使用支链烷基醇作为萃取溶剂，即使不从培养液中除去不溶物也可以容易地对表面活性肽进行萃取、纯化。

即，本发明涉及一种表面活性肽或其盐的制造方法，该方法包括：向含有表面活性肽或其盐的培养液中或从培养液中除去了不溶物的溶液中，加入含有支链烷基醇的有机溶剂来萃取表面活性肽或其盐。其中，所述表面活性肽或其盐以下式表示。

[化学式1]

(式中，*表示光学活性位点。X表示选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸中的氨基酸，R表示碳原子数9～13的烷基及支链烷基。M表示碱金属、碱土金属、任选被取代的胺等。)

萃取时水层的pH优选为酸性(特别是1～5)，例如，优选支链醇的碳原子数为3～10，其在有机溶剂中的含量为30重量%以上。所述有机溶剂可以含有辅助溶剂，优选相对于培养液1重量份，支链烷基醇和辅助溶剂的总量为0.6～1.5重量份。

对于萃取后的液体，可以在使其与碱水溶液混合后，分离有机层而得到水溶液，接着，将该水溶液和无机酸混合，由此使表面活性肽以固体形式从该混合液中析出。另外，也可以在萃取后的液体中混合碱，从而从该混合液中得到固体形式的表面活性肽盐。还可以将通过以上的制造方法得到的表面活性肽和碱混合来得到表面活性肽盐或其溶液。

发明的效果

根据本发明的方法，无需繁琐的操作即可高效且经济方面有利地实现对表面活性肽及其盐的纯化。另外，用于萃取的支链烷基醇对环境的负担也小。因此，本发明的方法适宜用于工业生产。

具体实施方式

以下，对本申请发明进行详细叙述。

在本申请发明中，使用支链烷基醇从培养液中萃取表面活性肽或其盐。

从培养液中萃取的表面活性肽或其盐用下述式(1)表示(以下称为化合物(1))。

[化学式2]

需要说明的是，式中简称的含义如下所述。

L-Leu：L-亮氨酸

D-Leu：D-亮氨酸

L-Val：L-缬氨酸

式(1)中，*表示光学活性位点(Optically Active Center)。

X表示选自L-亮氨酸、L-异亮氨酸及L-缬氨酸中的任一种氨基酸。

R表示碳原子数9～13的直链烷基或支链烷基。这里，作为碳原子数9～13的直链烷基，可以例示：壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基等。另外，作为碳原子数9～13的支链烷基，例如可以举出：7-甲基辛基、8-甲基壬基、9-甲基癸基、10-甲基十一烷基、11-甲基十二烷基、6-甲基辛基、7-甲基壬基、8-甲基癸基、9-甲基十一烷基、10-甲基十二烷基等。这些基团也可以被1种或2种以上的取代基取代。作为取代基，可以举出：氨基、羟基、苯基、芳基、烷酰基、烯基、炔基、烷氧基、硝基、卤原子等。

M表示氢、碱金属、碱土金属、任选被取代的胺(包括任选被取代的铵)等。这里，所谓碱金属，没有特别限定，表示锂、钠、钾等。所谓碱土金属，没有特别限定，表示铍、镁、钙等。任选被取代的胺只要是与表面活性肽形成盐的胺就没有特别限定，除氨以外，还表示一取代胺(RNH3)、二取代胺、三取代胺。作为胺的取代基，例如可以举出：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基等烷基、苄基、甲基苄基、苯基乙基等芳烷基、苯基、甲苯基、二甲苯基等芳基等有机基团。具体可以举出：甲胺、乙胺、苄基胺、苯胺、二乙基胺、二环己基胺、吡咯烷、吗啉、N-苄基-N-乙基胺、N-乙基苯胺、三乙基胺、吡啶等。所述胺可以进一步结合质子而成为铵离子。这些有机基团也可以进一步被1种或2种以上的取代基取代。

优选的M为碱金属(钠、钾等)、特别是钠。

上述表面活性肽包含在微生物的培养液中。该培养液例如可以通过日本特开2002-176993中记载的方法适当地进行制备。更具体而言，作为上述微生物，可使用芽孢杆菌属微生物，优选使用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、更优选使用枯草芽孢杆菌SD901(国际保藏编号FERM BP-7666)。

上述微生物通常通过下述方法进行培养：预先在营养培养基(例如，包括1wt/v%聚胨、0.5wt/v%酵母提取物、0.5w/v%NaCl、其余部分为水的L培养基等)中进行预培养来增加菌数，并将该预培养液接种于主培养液。需要说明的是，在上述预培养中，出于防止其它微生的繁殖的目的，也可以根据需要适量(例如1～30ppm(质量标准；以下相同))添加抗生素(例如氯霉素、四环素等)。

主培养液通常含有碳源、氮源、金属离子、pH调节剂。碳源包括糖类(葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等)、淀粉类、醇类、有机酸类等。主培养液中的碳源的量例如为1～40质量%左右。

作为氮源，包括大豆粉或其提取物、铵盐、硝酸类、胨、肉膏、酵母提取物。可以单独使用大豆粉或其提取物、或与其它氮源(酵母提取物等)组合使用。氮源的量例如为0.1～20质量%左右。在将大豆粉或其提取物和酵母提取物组合使用的情况下，大豆粉或其提取物例如为0.1～20质量%左右，酵母提取物例如为0.001～1质量%左右。

金属离子(矿物质)包括镁离子、铁离子、锰离子、钙离子、锌离子、钴离子、镍离子、铜离子、钼离子等。它们通常可以组合2种以上使用，以金属盐(硫酸盐、盐酸盐、磷酸盐等)的形式添加。金属盐的量例如为10～1000ppm左右。需要说明的是，上述金属离子也包括钾离子、钠离子等碱金属离子，但它们多通过使用pH调节剂来实现大量的添加，因此，在规定金属离子的量时，金属离子不包括碱金属离子。

作为pH调节剂，可使用磷酸盐(磷酸钠、磷酸钾等)等。pH调节剂的量例如为0.1～10质量%左右。

需要说明的是，根据需要，也可以在上述主培养液中适量(例如1w/w%以下)添加氨基酸(例如L-色氨酸、L-精氨酸等)，还可以适量(例如100ppm以下)添加维生素类。

预培养及主培养的温度例如为25～42℃。主培养后的表面活性肽的浓度例如为1～10质量%左右。

最优选例如将枯草芽孢杆菌SD901(FERM BP-7666)在含有10ppm四环素的营养培养基中、在温度25～42℃条件下培养5～24小时左右。将上述中得到的培养液以0.1～10重量%接种于含有大豆粉或者其提取物作为氮源的培养基。通过将其在温度25～42℃下培养20～90小时，可以适宜地得到表面活性肽。

在本发明中，由于使用支链烷基醇作为萃取溶剂，因此，即使不从培养液中除去不溶物也可以容易地萃取表面活性肽。但是，也可以根据需要从培养液中除去不溶物。培养中生成的不溶物例如可通过离心分离、加压过滤、利用压滤机等的常规方法来除去。

以下，对萃取操作进行举例说明。需要说明的是，只要使用支链烷基醇作为萃取溶剂，则包含在本申请发明中，对于萃取方法没有特别限定。

在含有表面活性肽或其盐的培养液中加入含有支链烷基醇的有机溶剂，根据需要进一步加入酸已形成酸性条件后，搅拌给定时间。将其静置后，废弃水层。需要说明的是，对于培养液、含有支链烷基醇的有机溶剂的混合顺序没有特别限制，可以在含有支链烷基醇的有机溶剂中加入培养液。当然也可以分开加入支链烷基醇和其它溶剂。

作为所使用的支链烷基醇，例如可以举出：烷基部分的碳原子数为3～10、优选3～6、进一步优选3～5的支链烷基醇。成为支链基点的碳可以为仲碳及叔碳中的任一个，但优选为叔碳。支链数(仲碳或叔碳数)例如为1～3左右，优选为1～2左右，特别优选为1。作为这样的支链醇，具体可以举出例如：异丙醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、新戊醇、叔戊醇、异己醇、5-甲基己醇、6-甲基庚醇、7-甲基辛醇等。上述烷基可以为无取代，另外，也可以具有取代基。作为取代基，可以举出：氨基、羟基、苯基、芳基、烷酰基、烯基、炔基、烷氧基、硝基、卤原子等。上述醇中，尤其优选异丙醇、异丁醇、叔丁醇。通过使用如上所述的支链烷基醇，可使表面活性肽及其盐的萃取变得容易。

作为可用作萃取溶剂的有机溶剂，除了支链烷基醇以外，也可以进一步使用辅助溶剂。

作为辅助溶剂，可以使用例如：烃类溶剂、酯类溶剂、醚类溶剂、酮类溶剂、腈类溶剂等。作为烃类溶剂，可以举出：甲苯、苯、二甲苯、己烷、环己烷、庚烷等；作为酯类溶剂，可以举出：乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯等；作为醚类溶剂，可以举出：乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃、1,4-二

烷等；作为酮类溶剂，可以举出：丙酮、甲基乙基酮等；作为腈类溶剂，可以举出：乙腈、丙腈等。其中，优选甲苯、乙酸乙酯、四氢呋喃、丙酮、乙腈。

支链烷基醇和辅助溶剂的比例影响分液速度，可以根据支链烷基醇的种类、支链烷基醇和各辅助溶剂的组合对其比例进行适宜调整。

例如，对于支链基点为叔碳的醇(叔丁醇等)的情况而言，即使单独使用该支链烷基醇也能够分液，可以单独使用，但也可以根据需要与辅助溶剂组合使用。另一方面，使用诸如支链基点为仲碳的醇(特别是碳原子数为4以下的醇；例如异丙醇等)这样的不易与培养液分层的溶剂的情况下，优选用辅助溶剂稀释有机层。在组合使用支链基点为仲碳的醇和辅助溶剂(例如乙酸乙酯等酯类溶剂)的情况下，可以将有机溶剂中的支链基点为仲碳的醇(异丙醇等)的含量例如调整为90重量%以下，优选调整为80重量%以下。

在使用辅助溶剂的情况下，作为可适宜地进行分液的有机溶剂中的支链烷基醇含量的标准，例如为10～90重量%，优选为20～80重量%，更优选为30～80重量%，特别优选为45～60重量%的范围。

萃取溶剂量(有机溶剂量)根据使用的溶剂的种类而异，但如果过少，则可能导致分液速度变慢，效率变差。另一方面，过多时，在经济方面不利。作为适宜的量，相对于培养液1重量份，例如为0.2～2.5重量份，优选为0.4～2.0重量份，进一步优选为0.6～1.5重量份。

作为在培养液中加入酸时的酸性条件，通常使pH低于7即可。由此，可以良好地实施萃取。但是，在pH高于5的情况下，存在萃取率变低、需要过量的溶剂量、或萃取次数增加的倾向。因而会导致操作变得繁琐，在工业方面及经济方面不利。因此，在pH高于5的情况下，优选使用酸对pH进行调整。可以使上述pH为4以下。

另一方面，pH过低时，虽然在收率方面没有问题，但存在设备性的限制，因此，优选pH约为1以上(例如3以上)。

使用的酸没有特别限制，例如可以举出：盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸、甲酸、乙酸、丙酸等有机酸。

就分液温度而言，只要在培养液不发生固化或蒸发的情况下，就没有特别限制，通常在0～80℃、优选0～60℃、尤其是0～40℃下可以良好地实施分液。

在上述的优选条件下萃取表面活性肽或其盐时，通常其分液速度为也适于工业生产的速度。用有机层的液深/分层时间表示上层及下层完全分层的速度时，通常优选使该速度为0.01cm/分钟以上，进一步优选为0.05cm/分钟以上。通过适当地调节条件，也可以以0.10cm/分钟以上(例如0.5cm/分钟以上、进一步在1cm/分钟以上)的速度进行分液。

通过如上所述地对溶剂及pH进行调整等，可以以表面活性肽的游离体(M＝氢)的形式从有机层中高效地获取化合物(1)。

在上述的优选条件下进行萃取时，每萃取一次的收率通常为60mol%以上，通过调节支链烷基醇含量及溶剂量，可以以90mol%以上进行回收。

对于如上取得的萃取液(有机层)，可以直接进行浓缩、干燥来分离表面活性肽。或者，也可以加入碱使表面活性肽盐以固体形式析出再进行干燥，在表面活性肽盐不以固体形式析出的情况下，可以对其溶液进行浓缩、干燥。也可以根据需要对萃取液进行活性炭处理后，实施上述操作。

需要说明的是，用于形成表面活性肽盐的碱没有特别限定，可以使用例如含有锂、钠、钾等碱金属、铍、镁、钙等碱土金属的碱。具体可列举氢氧化钠、氢氧化钾等。另外，除氨以外，也可以使用如下所述的胺碱(包括任选被取代的铵)。需要说明的是，胺表示一取代胺、二取代胺、三取代胺。作为胺的取代基，例如可以举出：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基等烷基、苄基、甲基苄基、苯基乙基等芳烷基、苯基、甲苯基、二甲苯基等芳基等有机基团。具体可以举出：甲胺、乙胺、苄基胺、苯胺、二乙基胺、二环己基胺、吡咯烷、吗啉、N-苄基-N-乙基胺、N-乙基苯胺、三乙基胺、吡啶等。上述胺可以进一步结合质子而形成铵离子。这些有机基团也可以进一步被1种或2种以上的取代基取代。

碱的量只要是与表面活性肽形成盐的量就没有特别限制，通常，相对于表面活性肽为0.5～4摩尔当量。

另外，对于上述得到的萃取液及其浓缩液，可通过导入转溶(転溶)操作而进一步赋予纯化效果。即，与含有碱的水混合，使化合物(1)转变成水溶性的盐，分离有机层而得到表面活性肽盐的水溶液，然后，将该水溶液和酸混合，使溶液达到酸性。由此，可以使化合物(1)的游离体(M为氢)从溶液中以固体形式析出。

将萃取液和水及碱混合的方法没有特别限定，可以在萃取液或浓缩液中加入水后再加入碱，也可以将萃取液或浓缩液和含有给定量碱的水混合，还可以在最后加入萃取液或浓缩液进行混合。

在此使用的碱没有特别限制，例如可以使用含有锂、钠、钾等碱金属、铍、镁、钙等碱土金属的碱。另外，除了氨以外，还可以使用三乙基胺等有机碱。优选氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属盐。

碱的量只要为化合物(1)溶解于水层的量即可，通常，相对于化合物(1)，使用0.5～4摩尔当量的碱。

使游离体从水溶液中析出时使用的酸没有特别限制，例如可以举出：盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸、甲酸、乙酸、丙酸等有机酸。优选盐酸、硫酸等无机酸。

将表面活性肽盐的水溶液和酸混合时，可以在预先调整的酸性水溶液中添加表面活性肽盐的水溶液，也可以在表面活性肽水溶液中加入酸。其中，从操作性的观点考虑，优选在中和时的粘性更低的、向酸性水中加入表面活性肽盐的水溶液的方法。

就混合时的温度而言，只要不会导致表面活性肽分解的温度就没有特别限制，通常可以在0～80℃、优选在0～60℃、进一步在0～40℃的范围内适当地实施。

将表面活性肽盐的水溶液和酸混合后，暂时放置以使其熟化。

熟化时的温度可以在和与上述酸混合时同样的温度范围内适当地实施。

对于析出的表面活性肽的固体，可以通过离心分离机、加压过滤机等常规方法进行固液分离来加以分离。

如上得到的表面活性肽可以进一步在水溶液中或有机溶剂中与碱混合来制成表面活性肽盐。通过根据需要进行浓缩、干燥，可以得到表面活性肽盐的固体。另外，通过根据需要在干燥处理前实施活性炭处理，可以获得更高纯度的表面活性肽盐。

作为所使用的碱，可以举出与用于形成上述表面活性肽盐的碱相同的碱。

碱的量只要是与表面活性肽形成盐的量就没有特别限制，优选相对于表面活性肽使用0.5～4摩尔当量的碱。

所得固体的干燥方法没有特别限制，可以通过喷雾干燥法、冷冻干燥法等常规方法适当地实施。

通过上述方法，每1kg培养液可以获得35g以上的表面活性肽或其盐。

实施例

以下，结合实施例对本发明进行具体说明，但并不限定于这些实施例。

需要说明的是，在下述实施例中，使用如下制备的培养液。

将枯草芽孢杆菌SD901(FERM BP-7666)在添加了10ppm四环素的L平板培养基上画线，在35℃下繁殖一夜。然后在带挡板烧瓶中制作添加了10ppm四环素的L培养基100ml，接种1白金环，在35℃、150rpm下培养12小时。在5L容量的发酵槽中制作下述组成的培养基2L，添加L培养基的培养液，一边用20%NaOH将pH调整至6.5～7.5一边在35℃下进行培养。在达到给定表面活性肽钠浓度的时刻结束培养。

培养基组成(w/w%)

(实施例1)

在含有表面活性肽钠的培养液600g(纯分34g)中加入异丙醇264g、乙酸乙酯198g(有机溶剂/培养液＝0.77(质量比)、异丙醇/培养液＝0.44(质量比)、有机溶剂中的异丙醇浓度57质量%)。在25℃下加入15g的55%硫酸并调整pH至3.8，静置8分钟后，除去水层，得到有机层(萃取液)573g(纯分31g、萃取收率91mol%)。由有机层的深度6.4cm和分液时间8分钟计算此时的分液速度，结果为0.8cm/分钟。

(实施例2)

在含有表面活性肽的培养液20g(纯分：0.9g)中加入表1中记载的量的异丙醇和乙酸乙酯，用55%硫酸调整pH至4之后，比较各条件的分液速度。

分液速度由完全分层后的有机层的深度和达到完全分层为止的时间进行计算。如下可知：萃取溶剂中的异丙醇含量高时，分液速度快。

[表1]

(实施例3)

在含有表面活性肽的培养液30g(纯分：0.9g)中添加5g表2中记载的溶剂后，激烈振荡并静置2天后，确认有无分液。烷基分叉，越成为高级醇，分液越有利。

[表2]

溶剂	分液性
		正丁醇	可
异丁醇	可
		叔丁醇	优良

优良：分液性良好

可：乳液部分多、难以分液

(实施例4)

在与实施例1同样地得到的表面活性肽萃取液21g(纯分5g)中加入活性炭5g并搅拌17小时。过滤出活性炭，对滤液进行减压浓缩。向残渣中加入己烷并实施两次减压浓缩的操作后，进行真空干燥，得到表面活性肽4.8g。

(实施例5)

在与实施例1同样地得到的表面活性肽萃取液21g(纯分5g)中加入活性炭5g并搅拌17小时。过滤出活性炭，用30%氢氧化钠将滤液调整至pH7后，进行减压浓缩。向残渣中加入己烷并实施两次减压浓缩的操作后，进行真空干燥，由此得到表面活性肽钠盐的固体5.6g。

(实施例6)

在与实施例1同样地得到的培养液726g中加入异丙醇290g、乙酸乙酯290g，并用47%硫酸调整至pH4。静置3小时后进行分液，取得第1上层(有机层(含有水))532g。接下来，在下层(水层)中添加异丙醇145g、乙酸乙酯145g并进行混合，静置1小时后，取得第2上层(有机层(含有水))545g。将第1及第2上层混合后(纯分39g)，进行减压浓缩直至残渣为378g，向其中加入乙酸乙酯96g后，除去水层。对所得有机层进行过滤后，在滤液中加入活性炭39g并搅拌14小时。过滤出活性炭并用乙酸乙酯55g进行清洗后，在滤液中加入水83g、30%氢氧化钠水溶液7g。然后，除去有机层，将水层减压浓缩至143g。将如上得到的水溶液在13℃下经3小时滴加至2%硫酸水117g中，将浆料熟化13小时后，过滤出固体并进行水洗，得到了表面活性肽的湿固体92g(纯分28g)。在该固体92g中加入水108g，用30%氢氧化钠水溶液调整pH至7。加入活性炭9g并熟化14小时，过滤出活性炭后，对滤液进行冷冻干燥，得到表面活性肽钠盐的固体27g。

工业实用性

根据本发明，由于可以改善自表面活性肽的培养液的萃取，因此，对于表面活性肽或其盐的制造有用。表面活性肽具有高表面活性能，另外，还具有抗菌活性、溶血性、蛋白变性抑制等各种各样的功能，因此，在工业上有用。

Claims (9)

1.表面活性肽或其盐的制造方法，该方法包括以下工序：

向含有式(1)所示的表面活性肽或其盐的培养液或从培养液中除去了不溶物的溶液中，加入含有支链烷基醇的有机溶剂来萃取表面活性肽或其盐，

式中，*表示光学活性位点，X表示选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸的氨基酸，R表示碳原子数为9～13的烷基及支链烷基，M表示碱金属、碱土金属、任选被取代的胺等。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，萃取时水层的pH为酸性。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，萃取时水层的pH为1～5。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，支链烷基醇的碳原子数为3～10。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，有机溶剂中支链烷基醇的含量为30重量%以上。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，有机溶剂含有辅助溶剂，且相对于培养液1重量份，支链烷基醇和辅助溶剂的总量为0.6～1.5重量份。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其包括：

a)将所述含有表面活性肽的萃取液和碱水溶液混合，然后将有机层分离，得到含有表面活性肽盐的水溶液的工序；

b)将上述含有表面活性肽盐的水溶液和无机酸混合，从而使表面活性肽以固体形式从该混合液中析出的工序。

8.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其包括以下工序：将所述含有表面活性肽的萃取液和碱混合，从而由该混合液中得到固体形式的表面活性肽盐。

9.表面活性肽盐的制造方法，该方法包括将权利要求1～7中任一项得到的表面活性肽和碱混合，从而得到表面活性肽盐或其溶液。