CN103142881B - 一种防治鸡球虫病的中药组合物及其制剂和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了防治鸡球虫病的中药组合物,按重量份计由常山15-40份、苍术15-30份、海芋15-30份、黄芪15-30份、无患子10-20份、白茅10-20份、乌梅10-15份和白芍10-15份组成,其配方合理,原料易得,成本低;该中药组合物及其制得的制剂能够抑制球虫的孢子化率、降低球虫孢子化卵囊的致病力、增强及调节机体的免疫力,同时有效缓解因球虫感染引起的体液电解质丢失所导致机体代谢紊乱,且无毒副作用。

Description

一种防治鸡球虫病的中药组合物及其制剂和应用
技术领域
本发明属于中药兽药领域,涉及一种防治鸡球虫病的中药组合物,还涉及由该中药组合物制得的制剂和应用。
背景技术
鸡球虫病是严重危害养鸡业生产最重要的寄生虫病之一,其病原为艾美耳球虫科艾美耳属球虫。寄生于鸡肠道的球虫共有7个种,分别为柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美尔球虫、堆形艾美尔球虫、布氏艾美尔球虫、和缓艾美尔球虫、毒害艾美尔球虫和早熟艾美尔球虫,其中以柔嫩艾美尔球虫致病力最强。鸡球虫病分布十分广泛,其发病率高达50%以上,病死率可达80%,全世界每年因防制球虫病而投入的经费以及因该病而导致直接经济损失累计超过70亿美元。在我国,几乎在所有雏鸡饲料中都添加有抗球虫药,仅每年用于防治鸡球虫病的药费就达20~30亿元人民币。
长期以来,化学合成类药物和离子载体类抗生素类抗球虫在防治球虫病中发挥了十分重要的作用。由于球虫对抗球虫药物极易产生耐药性,同时容易造成药物在鸡肉及蛋类产品中残留,给食品安全带来了潜在的威胁,迫切需要找到高效、安全、不易产生耐药性和药物残留的抗球虫药物。中药作为天然药物,在防治球虫病方面具有其独特的优势,如来源广泛,抗药性和药物残留少,对动物体兼有药物性及营养性的双重作用等,成为众多学者研究的热点。
鸡球虫主要寄生于鸡肠上皮细胞,由于球虫大量繁殖,造成细胞破裂,肠细胞脱落,肠道出血,同时一些细胞碎片等在鸡肠道内蓄积,易引起中毒。此外,肠道出血为一些肠道细菌如沙门氏菌、弯曲杆菌及产气荚膜梭菌等病原感染提供了天然培养基,造成肠道菌群失调,进而增加了球虫病鸡的死亡率。因此,急需一种既能抑制或杀灭病原球虫,又能调节动物机体的免疫功能、并对因球虫所造成的组织、细胞损伤及机能障碍有修复作用,以达到改善临床症候、对球虫病的有良好防治效果的中药组合物。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的之一在于提供一种防治鸡球虫病的中药组合物,其配方合理,充分考虑十八反和十九畏的中药配伍原则,各成份互相配伍后采长补短,互相协同。
为实现上述发明目的,技术方案为:
一种防治鸡球虫病的中药组合物,按重量份计由常山15-40份、苍术15-30份、海芋15-30份、黄芪15-30份、无患子10-20份、白茅10-20份、乌梅10-15份和白芍10-15份组成。 
优选的,按重量份计由常山20份、苍术15份、海芋15份、黄芪15份、无患子10份、白茅10份、乌梅10份、白芍10份组成。
优选的,按重量份计由常山15份、苍术25份、海芋20份、黄芪23份、无患子15份、白茅15份、乌梅12份和白芍12份组成。
优选的,按重量份计由常山40份、苍术30份、海芋30份、黄芪30份、无患子20份、白茅20份、乌梅15份和白芍15份组成。
为了方便使用并提高药物中有效成分的含量,降低中药组合物中的杂质,本发明的目的之二在于提供含有防治鸡球虫病的中药组合物的制剂,其技术方案为:
含有所述防治鸡球虫病的中药组合物的制剂。
优选的,所述制剂为粉剂。
本发明的目的之三在于提供中药组合物的应用,无毒副作用,技术方案为:
所述的中药组合物在制备防治鸡球虫病的药物中的应用。
本发明的有益效果在于:本发明公开的防治鸡球虫病的中药组合物,配方合理,充分考虑十八反和十九畏的中药配伍原则,以常山清热、截疟,苍术燥湿健脾,海芋清热解毒,黄芪补中益气,无患子清热、消积杀虫,白茅根清热、止血,乌梅涩肠生津,白芍养血柔肝,敛阴收汗;诸药相伍,以达清热解毒、杀虫止痢、补中益气、止血、收敛、养血生津的功效;按现代兽医学理论,即一方面抑制“外邪”病原球虫的发育或杀灭球虫,另一方面又能调节动物机体的免疫功能、并对因球虫所造成的组织、细胞损伤及机能障碍有修复和改善作用,以达到恢复机体的正常生理功能、改善临床症候和消除球虫病原体的作用,从而起到对球虫病具有良好的防治效果。
利用本发明公开的防治鸡球虫病的中药组合物防治球虫病,其效果明显,抗球虫指数达184.3以上,田间应用推广试验有效率达92.5%以上;将中药物制备成制剂,在生药浓度为5 g/mL,就能显著抑制球虫的孢子化率;用生药浓度为5 g/mL的中药提取物处理球虫卵囊感染鸡的存活率达100%,表明中药组合物能显著降低球虫孢子化卵囊的致病力;感染给中兽药组鸡的CD4 +T/CD8 +T平均值为1.20,提高球虫感染鸡的免疫水平;并能有效缓解球虫感染鸡因血清氯离子浓度下降引起的体液电解质丢失所导致机体代谢紊乱;本发明公开的中药组合物对小鼠脏器无毒性反应、LD50大于 19.2 g/kg。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件。
实施例 1
一种防治鸡球虫病的中药组合物,按重量份计由常山15份、苍术25份、海芋20份、黄芪23份、无患子15份、白茅15份、乌梅12份和白芍12份组成。
为方便添加和便于混合,将防治鸡球虫病的中药组合物加工成30目的粉末。具体方法为,按上述配比称取各组分,分别加入粉碎机中加工成30目的粉末,然后混合均匀,即得中药组合物的粉剂,包装,保存备用。
使用时,在鸡饲料中添加重量百分比为0.5-1%的中药组合物用于预防球虫病感染,当鸡出现轻度腹泻的球虫病前期症状时在饲料中添加重量百分比为2-5%的中药组合物进行饲喂。
实施例2
一种防治鸡球虫病的中药组合物,按重量份计由常山40份、苍术30份、海芋30份、黄芪30份、无患子20份、白茅20份、乌梅15份和白芍15份组成。
为方便添加和便于混合,将防治鸡球虫病的中药组合物加工成30目的粉末。具体方法为,按上述配比称取各组分,分别加入粉碎机中加工成100目的粉末,然后混合均匀,即得中药组合物的粉剂,包装,保存备用。
使用时,在鸡饲料中添加重量百分比为0.5-1%的中药组合物用于预防球虫病感染,当鸡出现轻度腹泻的球虫病前期症状时在饲料中添加重量百分比为2-5%的中药组合物进行饲喂。
实施例3
一种防治鸡球虫病的中药组合物,常山20份、苍术15份、海芋15份、黄芪15份、无患子10份、白茅10份、乌梅10份和白芍10份组成。
为方便添加和便于混合,将防治鸡球虫病的中药组合物加工成200目的粉末。具体方法为,按上述配比称取各组分,分别加入粉碎机中加工成200目的粉末,然后混合均匀,即得中药组合物的粉剂,包装,保存备用。
使用时,在鸡饲料中添加重量百分比为0.5-1%的中药组合物用于预防球虫病感染,当鸡出现轻度腹泻的球虫病前期症状时在饲料中添加重量百分比为2-5%的中药组合物进行饲喂。
实施例4
防治鸡球虫病的中药组合物对人工接种感染球虫病的防治
1、供试动物
每次试验购进400只刚出壳的1日龄罗曼公维鸡,在无球虫环境下饲养至14日龄,所用饲料中不含任何抗球虫药物,饮水经煮沸消毒,让鸡自由采食、饮水。
2、试验药物
按本发明实施例 1、实施例 2和实施例 3配方获得防治球虫病的中药组合物,分别为“抗球虫中药1”、“抗球虫中药2”和“抗球虫中药3”,同时以地克珠利为抗球虫对照药物。
3、供试球虫株
柔嫩艾美尔球虫,由西南大学荣昌校区动医系寄生虫病教研室惠赠,试验前经无球虫感染鸡繁殖、复壮。
4、试验分组及处理
进行2次独立试验,每次试验从400只供试动物中选取300只14日龄健康罗曼公雏,随机分为6组,分别为感染不给药(阳性对照)组、不感染不给药(阴性对照)组、地克珠利(药物对照)组(250mg/kg拌料),“抗球虫中药1”组、“抗球虫中药2”组和“抗球虫中药3”组(饲料中含有重量百分比为3%的中药组合物),每组50只。除不感染对照组外,其他5组鸡,每只经口接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊5.0×104个,于感染当天在饲料中拌入对应药物进行饲喂,连续用药5天。每天观察鸡的饮食情况、粪便情况。并在感染后第4、5、6和7天进行血便记分,第8天称重、捕杀,观察盲肠病变并记分,同时采取盲肠内容物测定OPG值(盲肠卵囊数)。
5、疗效判定标准
(1)相对增重率(%)=感染投药组的平均增重/不感染不投药组的平均增重×100%。
(2)存活率(%)=存活只数/参试鸡数×100%。
(3)病变值按Reid等的记分标准对盲肠病变记分,病变值=每组平均病变记分×10。
(4)卵囊值根据盲肠内容物的OPG值,按角田清方法换算卵囊值。即卵囊比数为0~1时,卵囊值为0;当卵囊比数为2~25时,卵囊值为5;当卵囊比数为26~50时,卵囊值为10;当卵囊比数为51~75时,卵囊值为20;当卵囊比数为76~100时,卵囊值为40。
(5)抗球虫指数(ACI=(增重率+存活率)-(病变值+卵囊值)。药效判定标准为:ACI小于120,判疗效差;ACI为120~160,疗效中等;ACI为160~180,疗效良好;ACI大于180疗效优秀。
6、结果与分析
在接种后第3天,除不感染不给药组(阴性对照)外,所有试验组鸡只均出现不同程度的下痢。感染不给药组(阳性对照)的鸡在第4天下午,出现4堆血便,病鸡精神沉郁,嗜睡,采食量减少,第5天,大量鸡出现严重的血便。“抗球虫中药1”组鸡在第5天,出现5堆血便,“抗球虫中药2”组和“抗球虫中药3”组仅出现1堆血便。第一次试验中:感染不给药组在第5天死亡6只鸡,第6天死亡10只鸡,为死亡高峰,第7天又死亡3只鸡。“抗球虫中药1”组在感染后第5天死亡2只鸡、第6天死亡1只鸡,抗球虫中药2组在感染后第5天、第6天死亡1只鸡,而“抗球虫中药3”组只在感染后第6天死亡1只鸡。在第二次试验中:感染不给药组分别在第5天死亡7只鸡、第6天死亡11只、第7天又死亡4只鸡;“抗球虫中药1”组和“抗球虫中药2”组在感染后第5天、第6天死亡1只鸡,而“抗球虫中药3”组只在感染后第6天死亡1只鸡。病死鸡剖解,见盲肠明显肿大,剖开肠管,里面有大量出血(血凝块)。在整个试验期间不感染不给药组鸡只采食、饮水、排便及精神状态未见异常,试验结束时未在粪便中检出球虫卵囊,具体结果见表1所示:
表1、中药组合物对鸡球虫病的疗效
由表1可知,感染不给药组的鸡只死亡率达38~54%,表明所用球虫虫株具有较强的致病力。地克珠利对照组抗球虫指数为180.00~183.05,“抗球虫中药1”组和“抗球虫中药2”组抗球虫指数略低于地克珠利组,但均达到良好水平,而“抗球虫中药3”组抗球虫指数达优秀水平,为184.30~184.68。试验数据说明,本发明防治鸡球虫病的中兽药对鸡球虫病具有可靠的防治效果。
(二)临床应用防治鸡球虫病的中药组合物对鸡球虫病的防治效果
应用实例 1:
2010年,四川遂宁市一养殖户养18日龄雏鸡2100只,由于连续多天降雨,鸡舍内阴暗潮湿,饲养卫生条件差,造成雏鸡发病,发病率高达31.9%,死亡87只,死亡率13.0%。临床检查发现,整个鸡群精神状态不佳,发病鸡羽毛松乱、双翅下垂、眼半闭、缩颈呆立、食欲减退而饮水增加。病情严重鸡甚至食欲废绝,排糊状粪便并带鲜血。后期带有神经症状如痉挛、昏迷,最后衰竭死亡。剖检急性死亡鸡及病情严重鸡,发现盲肠显著肿大到正常的2-5倍,肠内充满有红色的血液或血凝块。以饱和食盐水漂浮法检查鸡群粪便,发现有大量的球虫卵囊。结合流行病学、临床表现及剖检特点诊断为鸡球虫病。
治疗方案:在雏鸡饲料中添加本发明的防治球虫的中药组合物(添加实施例3配方的中药组合物,至饲料中中药组合物的重量百分比为5%),配合维生素A(每公斤饲料含有2500-4000国际单位的维生素A)和维生素C(占饲料的重量百分比为0.1%~0.5%),连续用药5天,病情得到了有效控制,对发病鸡治愈率达92.5%。之后在饲料中按饲料重量的1%添加中药组合物,用于预防鸡球虫病。1个月后回访,鸡群羽毛光亮,采食好、生长快,再未发生球虫病。
应用实例 2:
2011年8月,四川蓬溪县一养鸡场饲养蛋鸡6500余只,分别饲养于两栋鸡舍中。57日龄时,两栋鸡舍部分鸡只发病,在5天内死亡483只,死亡率为7.43%。经调查,发现鸡舍卫生条件差,十分潮湿,通风不良,氨气味重。起初病鸡精神不振,羽毛蓬松,鸡冠粘膜苍白,开始略有拉稀症状,随后拉稀带血,表现为严重血便,后期食欲废绝,运动失调、痉挛,泄殖腔周围羽毛污秽被粪便粘着,病程3~6天。剖检发病鸡及死亡鸡只16只,发现病鸡及死亡鸡的两根盲肠显著肿大,外观呈红色和暗红色,肠内充满有红色的血液或血凝块,肠壁薄,有许多的出血点。以饱和食盐水漂浮法检查鸡群粪便,发现有大量的球虫卵囊。结合流行病学、临床表现及剖检特点诊断为蛋鸡球虫病。
治疗方案:及时清除鸡舍粪便,加强通风换气,改善饲养环境。在雏鸡饲料中添加实施例3的中药组合物,至饲料中中药组合物的重量百分比为5%,配合维生素A(每公斤饲料添加2500-4000国际单位的维生素A)、维生素C(占饲料总重量的0.1%~0.5%)和维生素K(公斤饲料中含0.5毫克维生素K),连续用药6天后,病情得到了有效控制,对发病鸡治愈率达93.1%。之后在饲料中添加重量百分比为1%的中药组合物进行预防,用于预防鸡球虫病。1个月后回访,鸡群生长状态良好,再未发生球虫病。
实验例 5  
防治鸡球虫病的中药组合物对球虫发育的抑制作用
1.防治鸡球虫病的中药组合物对球虫卵囊孢子化率的影响
方法:取7支干净的大试管,每支试管中加入1mL含2.3×105个未孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊悬液。分别编号为1-7号,其中1、2、3号管中各加中药组合物提取液1mL和蒸馏水3mL,至生药终浓度为2.5g/mL的,4、5、6号管中各加中药组合物提取液1mL和蒸馏水3mL,至生药终浓度为5g/mL的,搅拌均匀。7管中加入重量百分比为2.5%重铬酸钾溶液4mL,作为对照。7支试管均置于温度为29℃左右环境中进行孢子化。分别在1号管和4号管处理卵囊1小时、2号管和5号管处理5小时、3号管和6号管处理10小时后离心去除中药,将球虫卵囊悬浮于5mL重量百分比为2.5%重铬酸钾溶液,置29℃恒温震荡器中继续培养使其孢子化。于第5 d 检查7支试管中球虫卵囊的孢子化率,结果如表2所示。
孢子化率的计算方法为:孢子化率 =(孢子化卵囊数/记数卵囊总数)×100%
表2、防治鸡球虫病的中药组合物对柔嫩艾美尔球虫孢子化率的影响
注:表中上标(**)表示与重铬酸钾组相比差异极显著(P<0.01)。
由表2可见,本发明防治鸡球虫病的中药组合物的提取液能显著抑制柔嫩艾美尔球虫的孢子化率,在生药浓度为5 g/mL时,抑制效果明显,说明防治鸡球虫病的中药组合物在体外对球虫卵囊的发育具有抑制作用。
2.防治鸡球虫病的中药组合物对孢子化球虫卵囊致病力的影响
方法:选取100只14日龄罗曼公维鸡随机分为5个组,每组20只。分别为处理组1、处理组2、福尔马林处理组、空白对照组和阳性对照组,5个组在同样条件下饲养。处理组1和处理组2中分别口服用生药浓度为2g/mL和5g/mL处理24h的5.0×104个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,福尔马林处理组口服经体积分数为10%福尔马林处理24h的5.0×104个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,空白对照组不口服柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,阳性对照组接种未经任何处理的5.0×104个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊。试验期间每日观察鸡只的精神状态、采食情况、血便、发病和死亡情况。于感染后第8天称重并剖解各组鸡,统计成活率、增重率、相对增重率、盲肠病变值、盲肠卵囊值,计算抗球虫指数(ACI),结果如表3所示。
表3、防治鸡球虫病的中药组合物对柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊致病力的影响
 由表3可知,球虫孢子化卵囊经中药组合物的水提液处理后,再接种雏鸡,能明显提高球虫感染鸡的存活率、减小盲肠病变值和卵囊值,药物处理卵囊组的抗球虫指数虽然低于空白对照组,但显著高于阳性对照组,表明本发明中兽药能降低球虫孢子化卵囊的致病力。由于中药组合物中含有与水提液中相同的活性成分,因此具有同样的效果。
实验例6
防治鸡球虫病的中药组合物增强机体的抗球虫及对鸡的生理生化的影响
1.防治鸡球虫病的中药组合物对鸡外周血CD4 +T、CD8 +T及CD4 +T/CD8 +T比值的影响
方法:选取60只13日龄的健康罗曼公雏鸡,随机分为3组,分别为感染给药组(给实施例3的中药提取物,至生药终浓度为5 g/mL)、感染不给药组和不感染不给药组,每组20只。15日龄时对感染组鸡接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊(5×104个/只)。各试验组鸡分别于感染后第3、6、9d各随机选取4只鸡,心脏采血,EDTA抗凝,以流式细胞仪测定CD4 +T、CD8 +T淋巴细胞亚群,结果如表4所示。
表4、防治鸡球虫病的中药组合物对球虫感染鸡外周血T淋巴细胞亚群动态变化的影响
由表4可知,防治鸡球虫病的中药组合物能提高球虫感染鸡的CD4 +T细胞的百分比,平衡CD4 +T/CD8 +T比值,表明本发明中药制剂对球虫感染鸡免疫水平具有良好的增强及调节作用。
2.防治鸡球虫病的中药组合物对鸡生理生化指标的影响
方法:选取60只14日龄的健康罗曼公雏鸡,随机分为3组,分别为感染给药组(给实施例3的中药提取物,至生药终浓度为5 g/mL)、感染不给药组和不感染对照组,每组20只。感染组鸡每只接种5×104个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊。分别于感染后第0、5、8d对每个试验组随机选取4只鸡,心脏采血,取1.0 mL血液以EDTA抗凝,利用全自动血球分析仪测定红细胞数量、白细胞数量及血红蛋白含量,结果如表5所示。
表5、防治鸡球虫病的中药组合物对球虫感染鸡部分血液生理指标的影响
另取1.0 mL血液于不加抗凝剂的离心管中,分离血清,利用钾钠氯钙/pH分析仪测定血清钾、氯、钙离子浓度,利用全自动生化分析仪测定血清磷离子浓度,结果如表6所示。
表6、防治鸡球虫病的中药组合物对球虫感染鸡部分血液生化指标的影响
由表5和表6可知,接种球虫后,球虫感染鸡的红细胞总数、血红蛋白浓度和红细胞压积均出现下降,明显低于不感染对照组,而球虫感染鸡的白细胞总数显著高于不感染对照组。此外,感染球虫鸡的血清钾明显升高,血清氯和磷略有降低。本发明的中药组合物可以有效缓解球虫感染鸡的红细胞总数、血红蛋白含量和血清氯离子浓度的下降,可以有效缓解球虫感染鸡的白细胞总数的升高,提示本发明中药能减轻球虫感染后因肠道出血、体液丢失所引起的机体代谢的紊乱程度。
实验例 7
防治鸡球虫病的中药组合物的急性毒性试验
方法:选择健康昆明小鼠60只,17~22g,在实验室饲养3d 后分为6组,分别为6个中药不同浓度灌胃组和1个空白对照组,每组10只,雌雄各半。小鼠禁食8 h,按照小鼠体重分别以生药浓度5.0 g/kg、7.0 g/kg、9.8 g/kg、13.7 g/kg和19.2 g/kg灌胃给药(实施例3制备的提取物),1次给药量≤0.6 mL。各组小鼠给药后连续观察一周, 随时观察小鼠精神、食欲、饮水、活动及有无中毒情况并及时记录小鼠的临床表现及动物死亡数。及时剖检死亡小白鼠,观察各脏器的变化。第8天断头处死全部存活小白鼠,剖检,逐一观察并记录脏器的变化。根据各剂量组小鼠死亡的只数,计算本发明防治球虫中兽药的半数致死量(LD50)。  
结果:各组小鼠的采食、饮水、精神状态活动情况及大小便等与空白对照组相比较无异常。各剂量给药组小白鼠的大体解剖结构及脏器即心、肝、脾、肾、胃和肠与空白对照组相比较均未见明显差异。说明本发明防治鸡球虫的中药制剂并未对小鼠的脏器产生明显的毒性反应。在小鼠灌胃给药剂量达19.2 g/kg体重时,小鼠的生存活动仍然与空白对照组无异,按毒理学评价标准,可不必测定半数致死量(LD50),即其LD50大于19.2 g/kg。依照《兽药试验技术规范汇编》中急性毒性试验规定,LD50大于5000 mg/kg时, 即可认为该药物无毒。因此,本发明防治鸡球虫的中兽药在临床应用中是安全的。
最后说明的是,以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述,但本领域技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (7)

1.一种防治鸡球虫病的中药组合物,其特征在于:按重量份计由常山15-40份、苍术15-30份、海芋15-30份、黄芪15-30份、无患子10-20份、白茅10-20份、乌梅10-15份和白芍10-15份组成。
2. 根据权利要求1所述的防治鸡球虫病的中药组合物,其特征在于:按重量份计由常山20份、苍术15份、海芋15份、黄芪15份、无患子10份、白茅10份、乌梅10份、白芍10份组成。
3.根据权利要求1所述的防治鸡球虫病的中药组合物,其特征在于:按重量份计由常山15份、苍术25份、海芋20份、黄芪23份、无患子15份、白茅15份、乌梅12份和白芍12份组成。
4.根据权利要求1所述的防治鸡球虫病的中药组合物,其特征在于:按重量份计由常山40份、苍术30份、海芋30份、黄芪30份、无患子20份、白茅20份、乌梅15份和白芍15份组成。
5.由权利要求1-4任一项所述防治鸡球虫病的中药组合物制备的制剂。
6.根据权利要求5所述的制剂,其特征在于:所述制剂为粉剂。
7.权利要求1-4任一项所述的中药组合物在制备防治鸡球虫病的药物中的应用。
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