CN104083427A - 防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒，可有效解决禽流感用药的问题，其解决的技术方案是，是由以下重量计的：黄芪多糖550-650g、牛膝多糖180-220g、猫爪草多糖110-130g和木鳖子霜75-85g作原料药物，再添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糖粉、糊精的一种或两种以上的混合，本发明原料丰富，价格低廉，用药安全，无毒副作用，使用效果好，是防治禽流感的中兽药物上的创新。

Description

防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒。

背景技术

    禽流感病毒感染的对象主要为禽类，但近年来，尤其是 H5N1 高致病性禽流感病毒可致多种哺乳动物感染与死亡，如发生于我国动物园中虎以及泰国动物园中虎、豹禽流感的感染发病，造成了大量死亡，其他动物如猪、猫、犬等的感染发病与死亡也时有报道。当然，在许多哺乳动物的禽流感病毒感染中，以猪禽流感的感染对人类的危害为最大。一旦人流感病毒和禽流感病毒共同感染猪后，很可能产生在人之间传播与流行的变异株。研究认为， 1957 至 1968 年亚洲流行的 H2N2 亚型病毒，其 HA、NA和PB1基因皆来自于禽流感病毒，其它基因保留了当时流行于人群中的 H1N1 病毒的基因；1968 年香港流行的 H3N2 亚型病毒，其 HA 和 PB1 也来自禽流感病毒，其它基因来自于当时流行于人群中的 H2N2 病毒。即引起两次人流感大流行的病毒，都是人源毒株和禽源毒株的杂合病毒。由于猪在这种杂合病毒的形成过程中起重要作用，被认为是“混合器”。另外，禽流感病毒感染哺乳动物后，在体内经过一段时间的适应后，其受体特异性可能发生改变，也有可能变成可感染人类的毒株。

    从目前哺乳动物的感染与发病情况来看，猫科动物中的虎、豹、猫等动物和鼬科动物中的貂类动物如雪貂、水貂、石貂等对禽流感病毒非常敏感，雪貂也是流感病毒的理想实验动物。结合水貂在我国特种经济动物养殖上的重要地位以及我国不断有高致病性禽流感发生的现实，提醒我们对水貂禽流感的发生与影响必须要给予高度的重视。 

    遗传和变异是任何一种生物的基本特性；尤其在不良环境压力下，更会促进其变异，如抗体的压力会导致病毒抗原性的改变。在我国，应用 H9N2 亚型禽流感疫苗已至少有10年的历史，而目前流行的H9亚型禽流感病毒至少有3组不同类型的抗原群，不同抗原组之间交叉反应性较差；而H5亚型流感疫苗的应用也有一定时间，依据现有的报道资料，我国广西、云南、江西以及湖南等地的高致病性禽流感血凝素抗原性都存在较大的差别，而且动物实验表明，对鸭接种的病毒，后期所排放的病毒与原接种病毒相比就有数量不等氨基酸的差异，充分说明了H5亚型禽流感病毒抗原容易发生变异，而且禽流感病毒抗原变异似乎进入了一个活跃期。因此，禽流感病毒抗原性的改变，无论是对动物还是对人类疫苗免疫防控都造成了很大的困难。 

    目前对于禽流感的防治药物缺乏：金刚烷胺等西药作为人和畜禽治疗流感的药物已经用了几十年了。但是，人的H3N1、H3N2已经产生了抗金刚烷胺的毒株。最近有媒体报道，有人用“达菲”也已经开始产生新的毒株，这是我们非常关心的，但是这主要出现在人的身上。对于西药抗病毒用于防治禽流感我国是不允许使用的。按照现行的兽药管理条例，只要发现把金刚烷胺等西药抗病毒药用于兽药销售和生产，就要给予行政处罚。所以，目前在防治禽类的禽流感方面尚无抗病毒兽药。

     部分养殖场户违反国家规定仍采用金刚烷胺等西药抗病毒药用于防治禽流感：①由于禽类感染禽流感后首先破坏机体的免疫防御系统，导致机体的抵抗力和自身修复能力丧失；②西药抗病毒药用于临床后对病毒颗粒有部分拮抗作用，但是对于禽类的机体细胞也同样有毒副作用，所以，兽医临床上西药抗病毒药物用于对禽类的禽流感防治效果并不理想；③在禽类的饲养过程中使用西药抗病毒药物后会导致食品安全等严重问题，从而影响到了人类的身体健康和人类疾病的防控安全。在人类对于禽类的禽流感的临床防治研究与探索中发现部分中兽药品种如黄芪、木鳖子等用于防治禽类的禽流感的临床效果尚且不错，而且研究还发现黄芪等中兽药不但具有较强的临床抗病毒能力，同时还具有增强机体免疫力和抗病力，提高机体自身的修复能力。传统的中兽药由于加工工艺比较简单，相对加工粗糙，多以简单的粗粉或细粉或传统熬制后直接拌入禽类饲料或饮水中，中兽药的有效成分得不到充分有效的吸收利用，导致临床应用效果不太理想。因此，防治禽流感的药物上的改进是目前亟需解决的问题。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒，可有效解决禽流感用药的问题。

    本发明解决的技术方案是，是由以下重量计的：黄芪多糖550-650g、牛膝多糖180-220g、猫爪草多糖110-130g和木鳖子霜75-85g作原料药物，再添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的黄芪多糖为干燥的黄芪，加水，浸提三次，第一次浸提，先用黄芪12倍重量的水浸泡30-60min，煎沸，再文火煮1.5小时，过滤，得第一滤液，药渣加入黄芪10倍重量的水，进行第二次浸提，煮沸，再文火煮1.5小时，过滤，得第二滤液，药渣再加黄芪10倍重量的水，进行第三次浸提，煮沸，再文火煮1小时，过滤，得第三滤液，合并三次滤液，浓缩至1：1的浓缩液，用浓缩液4倍体积量的无水乙醇沉淀，沉淀物干燥，得黄芪多糖；所述的牛膝多糖是，将干燥的牛膝，加水，料液比1:15，100℃浸提2h，浸提液加牛膝5倍重量的质量浓度95%的乙醇，浸提2次，每次2小时，合并滤液，浓缩，干燥，得牛膝多糖；所述的猫爪草多糖是，将猫爪草加水，浸提2次，每次加水量为猫爪草重量的12倍，每次浸提3小时，合并两次浸提液，浓缩至相当于含生药800g/L的浓缩液，加浓缩液体积50%的无水乙醇，净置6小时，弃去上部液体，得沉淀物，沉淀物干燥，即为猫爪草多糖；所述的木鳖子霜为将木鳖子仁，装入挤压式制霜机压制，控制温度为100℃，待含油量达17-20％时，停止压榨，将药渣粉碎混合均匀，得木鳖子霜；所述的辅料为淀粉、糖粉、糊精的一种或两种以上的混合。

本发明原料丰富，价格低廉，用药安全，无毒副作用，使用效果好，是防治禽流感的中兽药物上的创新。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实施例1

    本发明在具体实施时，可由以下重量计的：黄芪多糖550g、牛膝多糖180g、猫爪草多糖110g和木鳖子霜75g作原料药物，添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糖粉、糊精，按重量比1：3：1混配均匀而成。

实施例2

 本发明在具体实施时，可由以下重量计的：黄芪多糖600g、牛膝多糖200g、猫爪草多糖120g和木鳖子霜80g作原料药物，添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糖粉，按重量比淀粉：糖粉=1：3混匀而成。

实施例3

 本发明在具体实施时，还可由以下重量计的：黄芪多糖650g、牛膝多糖220g、猫爪草多糖130g和木鳖子霜85g作原料药物，添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糊精，按重量比1：1混配均匀而成。

上述本发明组方中，

黄芪：为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus memeranaceus (Fisch.) Bge . var .  mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪 A . membranaceus (Fisch.) Bge.的根。主产于内蒙古、山西、黑龙江等地。

药性： 甘，微温。归脾、肺经。 功效 ：补气健脾，升阳举陷，益卫固表，利尿消肿，脱毒生肌。

现代研究 ：主要含苷类、多糖、黄酮、氨基酸、微量元素等。黄芪能促进机体代谢、抗疲劳、促进血清和肝脏蛋白质的更新；有明显的利尿作用，能消除实验性肾炎尿蛋白；能改善贫血动物现象；能升高低血糖；能兴奋呼吸；能增强和调节机体免疫功能，对干扰素系统有促进作用可提高机体的抗病力；对流感病毒等多种病毒所致细胞病变有轻度抑制作用，对流感病毒感染小鼠有保护作用；有较广泛的抗菌作用；黄芪子啊细胞培养中，可使细胞数明显增多，细胞生长旺盛，寿命延长；能增强心肌收缩力，保护心血管系统，抗心律失常，扩张冠状动脉和外周血管，降低血压，能降低血小板粘着力，减少血栓形成；还有降血脂、抗衰老、抗缺氧、抗辐射、保肝等作用。近年来的研究发现黄芪中含多糖、皂甙、黄酮、氨基酸等多种有效成分，这些活性成分均有促进抗体生成和免疫反应的作用，其中以对黄芪多糖（Astragalus Polysacharin，APS）的研究报道为多。黄芪多糖是黄芪的主要活性成分之一，经过高科技萃取、分离而得到的。黄芪多糖是黄芪发挥作用的主要成分。

    牛膝：为苋科植物牛膝（怀牛膝） Achyranthes  bidentata Bl. 和川牛膝（甜牛膝） Cyathula  officinalis   Kuan 的根。

药性：苦、甘、酸、平。归肝、肾经。功效：活血通经、补肝肾、强筋骨、利水通淋、引火（血）下行。

现代研究：牛膝含有三萜皂苷（经水解后成为齐墩果酸和糖）、蜕皮甾酮、牛膝甾酮、紫茎牛膝甾酮等甾体类成分和多糖类成分。此外，牛膝还含有精氨酸等12种氨基酸以及生物碱类、香豆素类等化合物及铁、铜等微量元素。牛膝总皂苷对子宫平滑肌有明显的兴奋作用，怀牛膝苯提取物有明显的抗生育、抗着床及抗早孕的作用，抗生育的有效成分为蜕皮甾醇。牛膝醇提物对试验小动物心脏有抑制作用，煎剂对麻醉犬心肌亦有抑制作用。煎剂和醇提液有短暂的降压和轻度利尿作用，并伴有呼吸兴奋作用。怀牛膝能降低大鼠全血黏度、血细胞比容、红细胞聚集指数，并有抗凝作用。蜕皮甾酮有降脂作用，并能明显降低血糖。牛膝具有抗炎、镇痛作用，能提高机体免疫功能。

    猫爪草：为毛茛科植物小毛茛 Rununculus  ternatus   Thunb.的块根。

药性：甘、辛，微温。归肝、肺经。功效：化痰散结，解毒消肿。

现代研究：猫爪草含小毛茛内酯、原白头翁素、花生酸、肉豆蔻酸十八烷基酯、豆甾醇、β-谷甾醇、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖，还含油类及植物碱。

1.抗结核菌和其他细菌：猫爪草的抗结核菌机制，有人通过对其进行微量元素分析后认为，结核患者头发中微量元素Zn、Fe、Mn含量明显比正常人低，猫爪草中较高的Zn(40．1)、Fe(1306．4)、Mn(74．6)含量对抗了由于Zn降低导致的肌体免疫细胞抑制，从而减弱了对感染的易感性，但这种杀菌机理的理由并不充分。詹莉等采用反转录聚合酶链反应半定量(QC-RT PCR)方法及PCR方法，对猫爪草的有效成分小毛莨内酯(Tern)进行了抗结核菌分子免疫学机理的研究，结果表明Tern可能诱导周围血管GLS基因高水平表达，杀灭胞内致病菌MTB，并呈剂量依赖性，对耐药的与未治疗的肺结核患者诱导水平无显著差异。进一步研究表明，Tern可能通过促进GLSmRNA的表达，增强机体细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀菌能力，从而达到抗结核体眠落的作用，另外还可能通过减少结核体眠16KDa小热体克蛋蠡(16KDaSHSP)基因的表达，在激活体眠菌的同时促进GLS高水平表达，增强机体CTL杀菌能力，达到抗耐药菌的作用H引．谢建平等利用双向电泳技术，发现猫爪草提取物作用盾的结核分枝杆菌临床分离株的企细胞蛋臼表达图谱中，有22个蛋白质斑点的浓度具有差异，利用基质辅助激光鳃吸／电离飞行时间质谱技术分橱，其中孓腺营甲硫氨酸合成酶、碍|哚一3一甘油磷酸合酶、烯酰一CoA水合酶、琥珀酰辅酶A合成酶表达明显下调，其研究表明，猫瓜草提取物作用在结核菌的多条途径的多个靶标，这蝗途径包括氮基酸代谢及相关的多胺合成、脂肪酸代谢、中枢代谢途径以及可能参与蹑自质分泌、运输和免疫的分子伴侣n引，这与中药提取物多成分的性质棚符。在应用上，猫瓜草豹永蘸裁、生药粉末及醇提液在试警内对强毒入登结核蔼(H37RV)均有不同程度的抑制作用．猫爪草的煎剂及生药粉末的抑菌浓度为1：10，其醇提液的抑菌浓度为1：1000，且抑菌作用较异烟肼稍强。"将猫爪草、青篙水浸液过滤后以1：200浓度制成改良罗氏中药培养基和对照培养基，经灭菌后分剃接释结核蓊混悬液，放置予37℃恒瀑温箱中培养，络果对照培养基中结核菌生长良好，两中药培养基无结核菌生长．猫爪草水提液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、四链球菌、痢疾杆菌等均有抑制作用，且可抑制耐药性结核杆菌、能抗约氏鼠癌杆菌、降低原虫感染率。

2.抗肿瘤研究

    猫爪草注射液对小鼠S180、$37、EAC等肿瘸株有显著的抑制作用。有关其抗肿瘤的机制，曾有人从微量元素与健康的角度认为，癌症患者血清中Cu／Zn值升高，而猫爪草Cu／Zn值趋向与癌症患者Cu／Zn相反，因此可能有助予调节患者体内Cu、Zn平衡而发挥抗癌效果。

3.抗炎作用

复方猫爪草水提物的抗急性炎症作用显著，原因可能是通过抑制毛细血管的扩张，降低遥透性，使渗出液减少以达到抗炎作用∞引，猫爪草既粟毛壳本用于治疗菲结核性的淋巴结炎。

4.保护性抑制作用

研究认为猫爪草对动物中枢神经系统、心脏、呼吸系统及肠壁具有不同程度的抑制作用，并可使血压一时性下降，对血管却无扩张作用，推断该药对人体可能起保护性抑制作用，有利于改善体质和增强对疾病的抵抗力。

    木鳖子：为葫芦科植物木鳖Momordica  cochinchinensis  (Lour.)  Spreng. 的成熟种子。

药性：苦、微甘，凉。有毒。归肝、脾、胃经。功效：攻毒疗疮，消肿散结。

现代研究：含木鳖子皂苷、木鳖子酸、木鳖子素、齐墩果酸、甾醇、氨基酸，以及油35.72%、蛋白质30.59%、海藻糖等。木鳖子皂苷有抗炎及降血压作用，并能抑制离体蛙心和离体兔十二指肠。水浸液.乙醇-水浸出液和乙醇浸出液，试验于狗、猫及兔等麻醉动物，有降压作用。但毒性较大，无论静脉或肌肉注射，动物均于数日内死亡。大鼠静脉注射木鳖子皂甙，血压暂时下降，呼吸短暂兴奋，心搏加快。注射于狗股动脉可暂时增加下肢血流量，其作用强度约为罂粟碱的1/8。对离体蛙心和离体兔十二指肠均为抑制作用，而对豚鼠回肠则能加强乙酰胆碱的作用、拮抗罂粟碱的作用,高浓度时且引起不可逆性收缩。大鼠口服或皮下注射木鳖子皂甙，能显著抑制角叉菜胶引起的足臊浮肿。对兔红细胞有溶血作用。种子的皂甙：6.6mg/kg给大鼠静脉注射可致短暂的呼吸兴奋和血压下降，并能增加狗后肢末梢血管的血流，对离体蛙心有抑制作用；2×10（-4)g/ml浓度能增加乙酰胆碱对豚鼠回肠的兴奋作用；灌胃或皮下注射对角叉菜胶引起的大鼠足部肿胀炎症有抑制作用；有溶血作用；对小鼠的半数致死量静脉注射为32.35mg/kg，腹腔注射为37.34mg/kg。木鳖子提取物对麻醉狗，猫及兔等有降压作用，大鼠静脉注射木鳖子皂甙，可使血压暂时下降，心搏加快，呼吸短暂兴奋。注射于狗股动脉可暂时增加下肢血流量，其作用强度约为罂粟碱的1/8。另外具有抗炎及溶血作用。

    木鳖子脂肪油含量测定：分别取样品粗粉1g,精密称定,用滤纸包好,置索氏提取器中,加入乙醚80ml安装提取装置,水浴加热回流提取8 h,至提净脂肪油,收集提取液置恒重好的蒸发皿中,在水浴上低温挥干乙醚,置电热恒温干燥箱内, 100℃干燥1 h,取出移置干燥器内,冷却30 min,精密称定,计算，得出木鳖子生品中脂肪油平均含量为40. 74%,木鳖子霜脂肪油平均含量17.13%,平均去油率19.80%。本发明控制木鳖子霜含17～20%的脂肪油，是有一定道理的。

本发明组分使用黄芪多糖、牛膝多糖、猫爪草多糖及木鳖子霜科学、合理配伍，互相支持，有效用于治疗禽流感，疗效好，用药安全，并经试验得到了充分证明，有关试验资料如下：

一、黄芪多糖药理活性试验：

1.1  试验材料

本发明黄芪多糖。

1.2  试验方案

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平黄芪多糖对蛋鸡免疫功能及肠道菌群的影响。试验选取健康且生产性能相近的380日龄海兰灰商品蛋鸡1440只,随机分为6组,每组4个重复,每个重复60只鸡。以玉米-豆粕型饲粮为基础饲粮,各组分别在基础饲粮中添加0(Ⅰ,对照组)、50(Ⅱ组)、100(Ⅲ组)、150(Ⅳ组)、200(Ⅴ组)和250 mg/kg(Ⅵ组)黄芪多糖,预试期1周，试验期8周。自由采食和饮水，按常规免疫程序免疫。基础饲粮组成及营养水平见表1。观察各实验组蛋鸡脾脏和法氏囊系数、盲肠扁桃体淋巴小结数量和绒毛长度，观察对蛋鸡免疫功能的影响（见表2）。

表1 基础饲粮组成

项目	含量
		玉米	59.35
豆粕	17.60
		棉籽粕	3.8
葵粕	4.0
		玉米蛋白粉	3.0
植物油	1.3
		石粉	8.0
磷酸氢钙	1.6
		食盐	0.3
蛋氨酸	0.05
		预混料	1.0
合计	100.0

1.3 样品的采集与处理

试验第4周接种疫苗禽流感H5N1疫苗,接种疫苗后第29天早晨空腹采血,每组随机抽取4只鸡,翅下静脉采血5 mL,倾斜静置于4℃下30 min后, 4℃, 3 000 r/min离心10 min得血清,分装到1 mL离心管中-20℃保存,待测血清免疫抗体。屠宰后,取脾脏称重,计算脾脏系数(脾脏系数=脾脏重/鸡的活体重)。在无菌条件下剖腹取盲肠内容物0.5g用于微生物培养。双歧杆菌:BL琼脂培养基,37℃,厌氧培养72 h;乳酸杆菌:改良MC培养基,37℃厌氧培养48 h;大肠杆菌:麦康凯培养基, 37℃培养24 h。

1.4 数据处理

采用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理,方差分析使用One-way ANOVA,多重比较采用LSD法,数据以平均值±标准差表示,P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著。

结果

2.1 饲粮添加黄芪多糖对蛋鸡免疫功能的影响

表2 饲粮添加黄芪多糖对蛋鸡脾脏系数和禽流感免疫抗体水平的影响

组别	脾脏系数	禽流感免疫抗体水平
			Ⅰ(0 mg/kg)	0. 71±0. 06b	9. 13±0. 75
Ⅱ(50 mg/kg)	0. 85±0. 08a	9. 25±1. 06
			Ⅲ(100 mg/kg)	0. 83±0. 03a	9. 14±1. 17
Ⅳ(150 mg/kg)	0. 88±0. 03a	9. 20±0. 92
			Ⅴ(200 mg/kg)	0. 89±0. 09a	9. 27±0. 79
Ⅵ(250 mg/kg)	0. 80±0. 07ab	9. 58±1. 24

（同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0·05),不同大写字母表示差异极显著(P<0·01),相同字母或未标字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。）

由表2可见,在蛋鸡饲粮中添加不同水平的黄芪多糖,可以不同程度地提高脾脏系数,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组均显著高于对照组(P<０.05)。禽流感血清免疫抗体水平各组之间无显著差异(P>0.05)。

2.2 饲粮添加黄芪多糖对蛋鸡肠道菌群的影响

表3 饲粮添加黄芪多糖对蛋鸡肠道菌群的影响

组别	大肠杆菌	乳酸菌	双歧杆菌
				Ⅰ(0 mg/kg)	7.06±0.14Aab	6.93±0.01Aab	7.47±0.15ABa
Ⅱ(50 mg/kg)	6.68±0.04Ab	6.69±0.28Aab	7.30±0.38ABa
				Ⅲ(100 mg/kg)	7.21±0.10Aa	7.15±0.02Aa	7.58±0.18Aa
Ⅳ(150 mg/kg)	5.90±0.00Bc	6.50±0.28ABb	7.31±0.25ABa
				Ⅴ(200 mg/kg)	6.87±0.43Aab	6.86±0.30Aab	7.18±0.29ABb
Ⅵ(250 mg/kg)	6.69±0.04Ab	5.95±0.07Bc	7.14±0.16Bb

由表3可见,盲肠大肠杆菌数量,试验Ⅳ组极显著低于对照组(P<0.01),试验Ⅲ组与对照组差异不显著(P>0.05)。盲肠乳酸菌数量,试验Ⅲ组极显著高于试验Ⅵ组(P<0.01),显著高于试验Ⅳ组(P<0.05),与对照组相比无显著差异(P>0.05)。盲肠双歧杆菌数量,试验Ⅲ组与试验Ⅵ组相比差异极显著(P<0.01),与对照组相比无显著差异(P>0.05),试验Ⅴ组和试验Ⅵ组与试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组相比差异显著(P<0.05)。

结论

免疫器官主要由中枢免疫器官骨髓、胸腺、腔上囊、外周免疫器官脾脏及淋巴组织等组成。张春辉等报道,在光镜下观察到腹腔注射黄芪多糖后小鼠脾脏中血髓增大、淋巴增多。梁华平等发现,黄芪多糖经腹腔注射(250 mg/kg体质量,每天1次,连续5 d)不仅可显著常小鼠的脾脏指数(脾脏质量/体质量, SI)和胸腺指数(胸腺质量/体质量,TI),还可使烧伤小鼠的SI和TI恢复正常。本试验结果表明,黄芪多糖可以使脾脏系数增加,与上述研究结果一致。

    禽流感抗体水平反映鸡禽流感疫苗免疫后鸡特异性体液的免疫反应。抗体水平的高低直接反映机体的体液免疫状态。本试验在产蛋阶段蛋鸡的饲粮中添加黄芪多糖,禽流感免疫抗体水平有一定升高,但未达到显著水平。

动物肠道中的正常菌群是重要的非特异性防御屏障,对于某些入侵的病原微生物具有明显的拮抗作用。正常菌群彼此之间保持着一种动态平衡,与宿主的正常生理功能有着密切的关系。李树鹏等报道,黄芪多糖能够增加雏鸡肠道乳酸菌和双歧杆菌数量，减少大肠杆菌数量,还能使雏鸡回肠和盲肠绒毛显著变长、变粗、排列紧密,上皮细胞间杯状细胞和淋巴细胞增多。本试验结果表明,适量黄芪多糖可降低盲肠中大肠杆菌数量,增加乳酸菌和双歧杆菌数量,与前人的试验结果基本一致，证明：饲粮中添加不同水平的黄芪多糖可在一定程度上提高脾脏系数；添加适量的黄芪多糖可以降低盲肠大肠杆菌数量,增加乳酸菌和双歧杆菌数量；综合试验结果,蛋鸡饲粮中添加100 mg/kg黄芪多糖效果较佳。

二、牛膝多糖药理活性试验：

试验牛膝多糖对免疫功能的影响，将鸡分为空白对照组、模型组、牛膝多糖组及香菇菌多糖阳性对照组，ip环磷酰胺 3d 造成鸡免疫抑制模型，同时分别ig生理盐水及相应药物7 d后测定牛膝多糖对鸡胸腺、脾脏质量、吞噬百分率、吞噬指数、溶血素、溶血斑以及淋巴细胞转化率的影响。

材料

1.1 动物  

种鸡 150 只。

1.2 仪器

BI-2000 医学图像分析系统 ( 成都泰盟科技公司) ; TDL-40B 型低速台式离心机( 上海安亭科学仪器厂) ; DY89-1 型电动玻璃匀浆机( 宁波新芝生物科技股份有限公司) ; UV-2201 紫外-可见分光光度计( 日本岛津) 等。

1.3 药品及试剂 

本发明牛膝多糖; 环磷酰胺( cyclophosphamide，CTX 江苏恒瑞医药股份有限公司，批号 08110921) ; 香菇菌多糖片( 湖北广仁药业有限公司，批号 080702) ; 植物血凝素( 上海伊华医学科技有限公司，批号 20085601) ; 瑞氏染液( 四川省迈克科技有限公司，批号 0908033) ; 柠檬酸钠( 天津化学试剂三厂，批号 20020228) 等。

1.4阳性对照溶液的制备   

取香菇多糖片0. 261 3 g，用 0. 5% 羧甲基纤维素钠溶液制成 6 g·L^－1的混悬液。储存冰箱备用。

试验方案

2.1 腹腔巨噬细胞吞噬功能测定  

鸡 40 只，随机分为 4 组，每组 10 只，分别为空白对照组，模型组，牛膝多糖组，香菇菌多糖阳性对照组。除空白对照组外，其余各组鸡 ip CTX 0. 08 g·kg^－1，每日 1 次，连续 3 d。同时 ig 给药，空白对照组和模型组给予生理盐水，香菇菌多糖阳性对照组给予香菇菌多糖片混悬液 0.12 g·kg^－1，牛膝多糖组给予牛膝多糖水溶液 0.5g·kg^－1，每天给药 1 次，连续 7 d。第 7 天早上每只 ip 5% 红细胞生理盐水混悬液 0. 5 mL，于给红细胞后 4h，末次 ig 后 2 h 处死鸡，按文献方法取结果并计算吞噬率和吞噬指数。

吞噬率= ( 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 /100 个巨噬细胞) × 100%

吞噬指数=100个巨噬细胞所吞噬的红细胞的总数 /100

2.2 胸腺和脾脏质量测定

方法 2.1中的各组鸡取出胸腺和脾脏并称重，计算胸腺、脾脏指数:脾脏(胸腺)指数 = 脾脏(胸腺) 质量(mg)/体重(g)

2.3 鸡溶血素形成测定  

鸡分组、造模及给药同 2.1。于给药第 1 天，每鼠 ip 5% 红细胞生理盐水混悬液 0. 2 mL/只(进行免疫) ，于最后1次给药后2 h，取血离心，取血清。按文献方法取结果，测定各组溶血素形成情况。

2.4 溶血斑形成测定   

方法 2.3 中的各组鸡处死，解剖鸡，取出脾脏，将同一组鸡脾脏随机两两放在一起，用匀浆器匀浆调整脾细胞混悬液中脾细胞数为 5 × 106个 /mL。按文献方法取结果，测各组溶血空斑形成情况。

2.5 淋巴细胞转化测定   

鸡分组、造模及给药同2.1。于给药前3 d，每天每只均肌注植物血凝素( phytohaemagglutinin，PHA) 0.008 g·kg^－1，于最后 1次给药后 2 h，取血，推片，瑞士染液染色，油镜观察外周血淋巴细胞的转化率。

2.6 统计学处理   

数据以x±s表示，用SPSS 13.0对数据进行方差分析，采用 t 检验进行组间比较。P ＜ 0.05 有统计学意义。

结论

3.1 对环磷酰胺免疫抑制鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能及胸腺、脾脏质量的影响   结果表明模型组吞噬率、吞噬指数及胸腺、脾脏指数均明显降低，证明造模成功; 与模型组比牛膝多糖组均可明显提高免疫抑制鸡腹腔巨噬细胞的吞噬百分率、吞噬指数及脾脏指数( P＜0.01 或 P＜0.05) ，牛膝多糖组的胸腺指数变化显著( P＜0.05)，见表1。

表 1 样品对环磷酰胺免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及胸腺、脾脏质量的影响(x± s，n = 10)

组别	剂量 /g·kg－1	吞噬率 /%	吞噬指数	胸腺指数 /mg·g－1	脾脏指数 /mg·g－1
						正常对照	－	57.18± 16．024)	0.59± 0．164)	1.39±0.534）	4. 90 ± 2. 304)
模型	0.08	35.82±10.002)	0.39± 0.102)	0.78 ± 0.502)	2.94 ± 1.052)
						香菇菌多糖	0.12	75.25±6．612，4)	0.83±0.082，4)	1.02±0.27	3.93±1.18
牛膝多糖	0.5	71.88±4.582 ，4)	0.84±0. 092，4)	1.25±0.343)	4.65±1.053)

注: 与正常对照组比较1 )P＜0.05，2 )P＜0. 01; 与模型组比较3 )P＜0. 05 4 )P＜0.01。

    3.2 对环磷酰胺致免疫抑制鸡溶血素、溶血斑形成及淋巴细胞转化的影响     结果表明，模型组较生理盐水组及牛膝多糖组在促进溶血素、溶血斑形成及淋巴细胞转化率方面作用差异显著( P ＜ 0. 05 或 0. 01) ，说明造模成功，且牛膝多糖组在改善这 3 个指标上作用显著，见表2。

表2 样品对环磷酰胺免疫抑制小鼠溶血素、溶血斑形成及淋巴细胞转化的影响( x ± s，n = 10)

组别	剂量 /g·kg－1	溶血素形成/A	溶血斑形成/A	淋巴细胞转化率/%
					正常对照	－	0.110±0.0354)	0.249±0.0424)	74.73±15.104)
模型	0.08	0.027±0.0362)	0.125±0.0822)	37.30±12.282)
					香菇菌多糖	0.12	0.086±0.0224)	0.258±0.0454)	79.18±13.754)
牛膝多糖	0.5	0.077±0.0151，4)	0.267±0.0424)	89.42±4.064)

     注: 与正常对照组比较1 )P＜0.05，2 )P＜0. 01; 与模型组比较3 )P＜0. 05 4 )P＜0.01

    实验结果表明，牛膝多糖在提高免疫方面有着较强的活性。在提高免疫功能上牛膝多糖同样可以起到提高免疫抑制鸡免疫功能的作用。

三、猫爪草多糖药理活性试验：    

本项目采用环磷酰胺造模法制作免疫抑制模型,灌胃给药,观察和比较猫爪草多糖对其腹腔巨噬细胞吞噬功能、溶血素形成以及外周血T淋巴细胞数的影响。本试验主要提取猫爪草多糖确定是否具有免疫活性。

器材

1.1 材料

本发明猫爪草多糖。

1.2 试剂

环磷酰胺(山西普德药业有限公司,批号20051201,规格200 mg×5瓶);生理盐水(郑州化学药业有限公司,批号010409,规格500 ml/瓶);瑞氏色素(上海试剂三厂,批号99030);其余试剂药品均为分析纯。

1.3 仪器

BS210S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司,max210 g, d 0. 1 mg);KQ-500DV型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司); TDL-40 B型低速台式大容量离心机(上海安亭科学仪器厂); SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂);数码生物显微摄影系统(上海彼爱姆光学仪器制造有限公司);DHG-9076A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);载玻片(盐城市丽帆玻璃有限公司)。

1.4 动物

种鸡;红细胞和豚鼠血清(郑州大学医学院动物实验中心)。

1.5 猫爪草多糖试液配制

1.5.1 Hank’s应用液的配制取

Hank’s原液1份加双蒸水9份混合分装, 69. 75kPa(10P/cm2) 20 min高压灭菌, 4℃冰箱备用。

1.5.2 孵育液(酯酶染色液)的配制取

1/15mol/L pH 7. 6的磷酸缓冲液89 ml缓缓加入六偶氮副品红6ml充分混匀后,再慢慢滴加2%α2醋酸萘酯溶液2.5 ml充分混匀,最后呈琥珀色混浊样液，调节pH到6.4。

试验方案

2.1 猫爪草多糖对鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

取鸡按体重随机分为:①空白组,②CTX模型组,③治疗组,④多糖100 mg·kg^-1。按0. 2 ml·kg^-1灌胃给药, 1次/d,连续7d,空白组给等量生理盐水。除空白组、多糖组外,均ip CTX 40 mg·kg^-1制备免疫低下模型。第7天每只腹腔注射5%的红细胞生理盐水混悬液(0.2 ml/10g),于注射红细胞6h和最后1次灌胃2h后,处死鸡,用酒精棉球消毒腹部皮肤,腹腔注射Hank’s液2.5ml,轻揉鸡腹部,在腹膜上剪一小孔,吸出腹腔液后滴少许在载玻片上并推片,稍干后瑞氏染液染色,自来水冲洗,晾干,显微镜下观察。计算鸡腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数，其中吞噬百分率=(吞噬鸡红细胞的吞噬细胞数/100个巨噬细胞)×100%;吞噬指数=100个巨噬细胞所吞噬的鸡红细胞数/100。结果见表1。

表1 猫爪草多糖对正常及免疫抑制鸡腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响                

组别	剂量C/mg·kg-1	吞噬百分率(%)	吞噬指数
				空白对照	-	64.6±11.8	0.69±0.11
模型	40	32.6±8.35*	0.36±0.09*
				治疗	40(环)+600(多糖)	59.5±6.24△	0.68±0.05△
多糖	600	70.8±7.09*	0.79±0.11*

与对照组比较,*P<0. 05;与模型组比较,△P<0. 05;n=10

    上述结果说明，猫爪草多糖可明显提高正常鸡腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数,并能拮抗环磷酰胺所致的免疫抑制作用。

2.2 猫爪草多糖对正常及免疫抑制鸡溶血素形成的影响

取鸡按上述方法分组,各组均于第1天每鼠腹腔注射5%的鸡红细胞、生理盐水混悬液0. 2 ml进行免疫,于第7天给药后2 h,鸡眼眶取血,离心取血清,用生理盐水1∶100稀释后,取1ml与5%的鸡红细胞混悬液0.5 ml 10%补体0.5 ml混匀,另设不加血清的对照管,将混悬液充分混匀,在37℃恒温箱中温育30min,在冰水中中止反应,离心,取上清液于540 nm处比色,以空白管调“0”点,测各管的吸收度。结果见表2。

表2 猫爪草多糖对正常及免疫抑制鸡溶血素形成的影响

组别	剂量C/mg·kg-1	溶血素(A)
			空白对照	-	0.306±0.125
模型	40	0.038±0.289*
			治疗	40(环)+600(多糖)	0.210±0.114△
多糖	600	0.509±0.254*

     与对照组比较,*P<0. 05;与模型组比较,△P<0. 05;n=10

    结果表明，猫爪草多糖能提高正常鸡血清溶血素的含量，并能拮抗环磷酰胺对体液免疫的抑制作用。

2.3 猫爪草多糖对正常免疫抑制鸡外周血T淋巴细胞数的影响

取鸡按上述方法分组,于灌胃的第1天每鼠腹腔注射环磷酰胺(40 mg/kg, 0.1 ml/10g),连续8d，另设一完全空白对照组,腹腔注射并灌服同体积的生理盐水。于末次给药后1 h,摘眼球取血推片,自然风干燥后,浸入孵育液(预热30 min)中37℃孵育3 h,自来水冲洗片刻(以冲洗沉渣为度),用滤纸收干水珠,加1%孔雀绿溶液染色5～10s,自来水冲洗,滤纸轻吸,晾干后油镜检查。淋巴细胞核较大且呈圆形不分叶,染成绿色,胞浆呈紫蓝色。T淋巴细胞胞浆中呈现大小和数量不等的黑红色颗粒(一般2～5个),非T淋巴细胞的胞浆中无颗粒。计数100个淋巴细胞,计算T淋巴细胞的百分比,比较给药组与对照组鸡外周血中T淋巴细胞百分比的差异。结果见表3。

表3 猫爪草多糖对正常及免疫抑制鸡外周血T淋巴细胞数的影响

组别	剂量C/mg·kg-1	外周血中T细胞百分比(%)
			空白对照	-	57.70±5.83
模型	40	35.56±5.13*
			治疗	40(环)+600(多糖)	55.75±7.99△
多糖	600	63.80±3.26*

     与对照组比较,*P<0. 05;与模型组比较,△P<0. 05;n=10

从上述实验数据可以看出，环磷酰胺组T细胞百分比明显低于空白组，而治疗组的T细胞与空白组比较均无明显差异，这说明猫爪草多糖可以拮抗环磷酰胺对细胞免疫的抑制作用。并且多糖还对正常鸡的细胞免疫有明显的增强作用。

结论

    经鸡红细胞致敏过的动物血清中的另一循环抗体-溶血素(IgM)，与鸡经细胞一起体外温育，在补体参与下产生溶血反应。致敏动物血清中溶血素的含量可以通过溶血过程中释放的血红蛋白量来检测。溶血素水平反映体液免疫能力，与机体体液免疫能力呈正相关系。猫爪草多糖能提高鸡血清溶血素的含量，并能拮抗环磷酰胺所致的体液免疫抑制，说明猫爪草多糖能提高机体体液免疫能力，临床具有抗肿瘤和抗结核作用，具有兴奋免疫活性，为临床应用和开发提供了技术基础。

四、木鳖子霜对禽流感抗原的佐剂作用：    

选取60只两周龄雏鸡，根据如下分组1)禽流感H5N1疫苗对照组；2)禽流感H5N1疫苗+20μg木鳖子霜组；3)禽流感H5N1疫苗+40μg 木鳖子霜组；4)禽流感H5N1疫苗+80μg 木鳖子霜组。在免疫前和免疫后第7、14和28天分别采血，测定总抗体OD值。

    结果表明，所有木鳖子霜组的总抗体平均OD值都高于对照组，但仅在免疫后第28天的木鳖子霜组与对照相比有统计学差异(P<0.05)。同时，20μg木鳖子霜组的鸡平均日增重显著地高于对照组(P<0.05)。表明木鳖子霜的使用不会对日增重产生不良影响。

五、本发明复方黄芪多糖颗粒对禽流感的临床试验    

1 材料与方法

   1.1 试验材料

    本发明复方黄芪多糖颗粒；金刚烷胺购自北京北药医药化工公司。

   1.2 试验鸡选择与分组

    试验安排在某鸡场处于不同发病阶段的3栋封闭式鸡舍,采病料、血样经AGP、HI试验、细菌培养、病毒分离结合临床症状、病理剖检确诊为禽流感(AI)H9亚型。甲栋3036只,完全随机分成试验组1520只,对照组1516只;乙栋3057只完全随机分成试验组1530,对照组1527只;丙栋3086只,完全随机分成试验组1540只,对照组1546只。3栋供试鸡均为28周龄罗曼褐商品代产蛋鸡。甲栋鸡群为发病第3日龄，乙栋鸡群尚未出现症状(已处于潜伏期),丙栋鸡群为发病后第14日龄。

1.3 饲养管理

每栋舍按正常的饲养管理办法进行饲养管理,各栋饲养管理条件相同,各试验组与其相应的对照组管理办法亦完全一样。

1.4 试验方案

各对照组用160 mg/L的金刚烷胺饮水,试验组用复方黄芪多糖饮水,试验甲栋剂量为200 mg/L,试验乙、丙组剂量为160 mg/L,连续用药14d。每天观察并记录各组鸡的精神、采食、饮水、粪便、产蛋数、发病数和死亡数等情况。在本试验中,乙栋鸡群在试验的第4天两组均开始发病,丙栋鸡群的对照组在试验的第6天即初发后第20天复发禽流感H9亚型。

2 结果与分析

试验结果见表1。从试验结果可以看出,试验开始时各试验组与对照组产蛋率水平相当(P>0.05),试验期中，各试验组在所有指标上明显优于相应的对照组,各试验组与相应的对照组比较,在发病率上甲栋表现相同,乙栋表现显著性差异(P<0.05),丙栋表现极显著性差异(P<0.01);在死亡率上甲、乙两栋表现差异不显著(P>0.05),丙栋表现差异极显著(P<0.01);在产蛋率下降幅度上甲、乙、丙3栋表现差异均极显著(P<0.01);在畸形(软壳蛋等)蛋率上甲、乙、丙3栋表现差异均显著(P<0.05)。

表1 试验结果

3 结论

   通过本次防治试验的结果结合本病在当地的流行特点，可以得出下面几点结论:

    (1)在禽流感发病的前、中、后3个阶段应用本发明复方黄芪多糖颗粒添加防治，均可大大降低鸡的死亡率和产蛋率下降的幅度,复方黄芪多糖有明显的抗病毒、抗炎症作用；明显优于金刚烷胺；

    (2)初次发病的耐过鸡群显然对本病能获得一定的免疫力,但因本病破坏鸡免疫系统,不少鸡群往往在初发20～30d后会有不同程度地复发本病,如果初发后添加复方黄芪多糖可有效防止本病的复发；

    (3)应用复方黄芪多糖防治本病在降低产蛋率下降、蛋壳质量恢复方面明显优于金刚烷胺；

    (4)中医认为黄芪具有“补中益气，固表升阳，生肌，扶内固本”的药效。复方黄芪多糖是由中药黄芪通过精致提练而成，主要成分为黄芪多糖Ⅰ、黄芪多糖Ⅱ等多种免疫增强物质，再配以牛膝多糖、猫爪草多糖和木鳖子霜，互相支持，能激发机体产生大量白细胞干扰素和吞噬细胞、淋巴细胞；而且能强化体内的体液免疫途径，产生大量的免疫球蛋白和补体，改善微循环，有效地调理和增强机体的体液免疫和细胞免疫，提高机体免疫功能，对病毒产生干扰、吞噬、结合作用，多种途径杀灭病毒和细菌，并有清热解毒和调节机体代谢机能紊乱之功效，增强禽类抗病能力。

本发明在临床应用中取得明显疗效，为了更好地应用于临床申请人按照《新药注册管理办法》中注册申报资料要求，对该制剂进行小鼠急性毒性实验和大鼠长期毒性实验。试验结果说明复方黄芪多糖颗粒剂的小鼠急性毒性较小，提示临床一日内较大剂量应用该制剂不会产生毒性反应。对大鼠长期经口给药的毒性较低，安全性较好。

六、本发明复方黄芪多糖颗粒的功效

    本发明复方黄芪多糖的功效：具有较强的清热解毒，扶正祛邪，培补脾肾，益气养血，广谱抗病毒、抗菌，能诱导机体产生干扰素，促进抗体形成，增强机体的免疫力和机体各系统修复能力，抗病促长、抗应激等功能。尤其对禽类的禽流感防治效果最佳。

1）广谱抗病毒的应用：复方黄芪多糖颗粒是一种广谱的抗病毒和干扰素诱导剂，它可刺激巨噬细胞和T细胞的功能，使E环形成细胞数增加，诱生细胞因子，促进白细胞介素诱生。从而使动物机体产生内源性干扰素，从而达到抗病毒的目的。用于治疗禽流感、传染性法氏囊病等病毒性传染病。黄芪可预防感冒降低发病率80％以上，黄芪多糖与牛膝多糖、猫爪草多糖、木鳖子霜联合应用可降低发病率90％以上；

2）增强疫苗免疫力的应用：复方黄芪多糖颗粒除本身具有增强机体名疫力外，还使疫菌苗的免疫力大大增强，并且对疫菌苗具有很好的保护效果，据研究报道黄芪多糖能增强马立克氏病疫苗的血清拉体效价。复方黄芪多糖颗粒与NDV、IV疫苗联合使用能提高免疫后鸡的血清HI抗体效价，在使用球虫疫苗时配合复方黄芪多糖颗粒，能增强鸡球虫免疫保护力；

3）对肝脏的作用：复方黄芪多糖颗粒可促进肝细胞DNA、RNA合成，减轻肝毒性物质引起的病变，增强肝脏解毒功能，对肝细胞有保护作用。对鸡脂肪肝、心包积水肝炎综合症、大肝脾病、肝炎脾肿大综合症均有良好的防治效果，同时可提高畜禽采食量，从而促使畜禽的生长发育；

4）对肾脏作用：复方黄芪多糖颗粒可改善肾细胞代谢和肾功能，降低血肌酐水平，可缓解肾切除后肾功能衰竭。对肾病综合征、急性肾功能衰竭、肾病综合征、肾肿大尿酸盐沉积等症均有良好的防治效果。同时可起到健肾目的，有利于畜禽生长繁育功能的发挥； 

5）提高繁殖性能：复方黄芪多糖颗粒具有稳定细胞、抗衰老、抗自由基和过氧化的作用，长期定期使用，可明显提高种鸡的使用寿命和使用效率。此外，复方黄芪多糖颗粒具有促性腺作用，对雌性动物可以使子宫内膜增厚、子宫腔扩大、子宫角和卵巢的重量增加。复方黄芪多糖颗粒还可以提高雄性动物的繁殖性能，可使精子活性、精子存活率、精子密度等有显著提高；

6）是雏禽保健的第四需要：当前幼禽保健大多在三方面做文章：⑴预防病毒病的疫苗；⑵预防细菌病的抗生素；⑶增强体质、提高免疫力的营养物质。通过长期的实践研究发现，在满足雏禽以上三种保健需要的同时，实质上雏禽保健还存在有“第四需要”，那就是复方黄芪多糖颗粒。它不但可以充分发挥以上三种保健作用，还能满足雏禽保健无药物残留，充分发挥其生长潜力的需要；

7）具有提高营养物质利用，促进动物生长的功能。复方黄芪多糖颗粒内含氨基酸、维生素、微量元素等多种营养物质，以及未知生长因子（UGF）。作为饲料添加剂可显著提高畜禽的生长速度，提升机体抵抗力，提高鸡蛋品质及产量。

    总之，本发明复方黄芪多糖颗粒具有：

1）用于防治禽类的低致病性禽流感的临床预防和治疗及高致病性禽流感的有效免疫防控；

2）有效治疗和预防家禽机体免疫功能低下（胸腺、肝脏、肾脏、法氏囊等器官萎缩）；

3）对肉禽生长速度缓慢、采食量低落、整齐度差，蛋禽无产蛋高峰或不明原因减蛋及顽固性水泻、脱肛等有特效；

4）本品对疫苗有保护及协同作用，明显提升免疫效价，可以与疫苗同时使用；

5）本品与抗球虫药物连用能明显提高抗球虫指数；

6）防治畜禽各种病毒性疾病，如圆环病毒、蓝耳病、流行性感冒、伪狂犬、病毒性腹泻、反复发作性哮喘及无名高热等；

7）临床应用效果好，颗粒剂市场稀缺，比大众化的粉剂更有竞争力，科技含量高，附加值大；

8）超微螺旋颗粒制剂工艺，优势鲜明，便于保存和临床应用，更易切入市场；

9）性状稳定，水溶性极好，无毒，无害，无药残；

10）拌料方便均匀，产品开发前景广阔。

 本发明复方黄芪多糖颗粒经过多年研究、临床试验和对实践总结，确定本方组方可行，有效，值得推广，有效用于禽流感等病毒病的防治，本发明的研究成功与开发必将为社会创造出极大的经济效益和深远社会效益。

Claims (4)

1.一种防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒，其特征在于，是由以下重量计的：黄芪多糖550-650g、牛膝多糖180-220g、猫爪草多糖110-130g和木鳖子霜75-85g作原料药物，再添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的黄芪多糖为干燥的黄芪，加水，浸提三次，第一次浸提，先用黄芪12倍重量的水浸泡30-60min，煎沸，再文火煮1.5小时，过滤，得第一滤液，药渣加入黄芪10倍重量的水，进行第二次浸提，煮沸，再文火煮1.5小时，过滤，得第二滤液，药渣再加黄芪10倍重量的水，进行第三次浸提，煮沸，再文火煮1小时，过滤，得第三滤液，合并三次滤液，浓缩至1：1的浓缩液，用浓缩液4倍体积量的无水乙醇沉淀，沉淀物干燥，得黄芪多糖；所述的牛膝多糖是，将干燥的牛膝，加水，料液比1:15，100℃浸提2h，浸提液加牛膝5倍重量的质量浓度95%的乙醇，浸提2次，每次2小时，合并滤液，浓缩，干燥，得牛膝多糖；所述的猫爪草多糖是，将猫爪草加水，浸提2次，每次加水量为猫爪草重量的12倍，每次浸提3小时，合并两次浸提液，浓缩至相当于含生药800g/L的浓缩液，加浓缩液体积50%的无水乙醇，净置6小时，弃去上部液体，得沉淀物，沉淀物干燥，即为猫爪草多糖；所述的木鳖子霜为将木鳖子仁，装入挤压式制霜机压制，控制温度为100℃，待出油量达17-20％时，停止压榨，将药渣粉碎混合均匀，得木鳖子霜；所述的辅料为淀粉、糖粉、糊精的一种或两种以上的混合。

2.根据权利要求1所述的防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒，其特征在于，是由以下重量计的：黄芪多糖550g、牛膝多糖180g、猫爪草多糖110g和木鳖子霜75g作原料药物，添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糖粉、糊精，按重量比1：3：1混配均匀而成。

3.根据权利要求1所述的防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒，其特征在于，是由以下重量计的：黄芪多糖600g、牛膝多糖200g、猫爪草多糖120g和木鳖子霜80g作原料药物，添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糖粉，按重量比淀粉：糖粉=1：3混匀而成。

4.根据权利要求1所述的防治禽流感的复方黄芪多糖颗粒，其特征在于，是由以下重量计的：黄芪多糖650g、牛膝多糖220g、猫爪草多糖130g和木鳖子霜85g作原料药物，添加原料药物重量3%的辅料制备成颗粒，所述的辅料为淀粉、糊精，按重量比1：1混配均匀而成。