CN109674748A - 一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,黄芪、灵芝用水回流提取、浓缩后,加乙醇沉淀,再用水溶解并加入苯甲酸钠混匀,灌装灭菌即得。本发明的口服液在制备方法中,提取较完全,仅用了一次醇沉,不仅得到多糖,还保留了其他有效成份,操作简单、节约成本;其给药方式为混饮,使用更简单方便,给药效果好,与新城疫疫苗配合使用具有明显的免疫增效作用。

Description

一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液及其应用
技术领域
本申请涉及中兽药领域,具体而言,涉及一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液及其应用
背景技术
在养禽生产中,常常用疫苗来预防鸡的烈性传染病,但接种疫苗后,有时抗体效价达不到应有的水平,仍然会被强毒感染而致病。而影响疫苗免疫效果的因素主要包括母源抗体的干扰、营养缺乏、疫病影响、饲料中霉菌毒素含量超标、应激反应、激素药物的应用及烷化消毒剂的应用等,这些因素在养禽业中都是常见的、难以避免的。这就需要疫苗免疫增强剂来提高其免疫效价,并延长免疫期。免疫增强剂是指能够提高动物机体免疫功能的物质,该类物质可通过增强巨噬细胞活性、促进抗体合成与分泌等多种方式增强机体特异性与非特异性免疫。按其性质不同可以分为中药免疫增效剂、化学性免疫增效剂、生物性免疫增效剂和微生物来源的免疫增效剂,相对于其他几类免疫增效剂,中药免疫增效剂以其来源广、价格低、效果好、安全低毒等优点,得到越来越多的研究和应用,随着人们对动物源性食品“高品质、低残留、绿色无公害”这一消费理念的深入认识,中药免疫增效剂有着不可替代的作用,是今后免疫增效剂的研究应用热点。
中药免疫增效剂活性成分种类很多,主要包括生物碱、多糖、苷类、挥发油、鞣质、有机酸、类黄酮和生物类黄酮等,这些活性物质可具有显著的免疫增强作用,其中,多糖类物质在免疫功能方面的作用十分突出,故不少研究者从多糖角度下手,开发利用多糖提取物作为免疫增效剂,如黄芪多糖、人参多糖、板蓝根多糖、刺五加多糖、灵芝多糖等,但中药成分复杂,这些中药的其他成分也能够起到免疫增效作用,且多糖提取方法大多是水提醇沉,若想得到纯度较大的多糖,需多次醇沉,操作繁琐,浪费资源,例如在专利号为CN201810145067.2的专利中,提供的一种禽畜使用的中药免疫增强剂灵芝多糖,其提取方法较为复杂,用时较长,不适用于大规模生产,且以灌服的形式给药,对于大型养殖场来说,临床使用存在严重问题。
发明内容
本发明提供了一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,该中药口服液由以下配比的原料药组成:黄芪一份、灵芝两份。
该中药口服液通过以下制备方法制备而得:
1)取配方量的黄芪、灵芝,加入13倍重量份的水,100℃加热回流提取3h,过滤,重复回流提取三次,收集滤液;
2)将滤液在60℃下减压浓缩,浓缩至液料比为1:1,即得浓缩液;其中,液料比为1:1是指浓缩液的体积(ml):药材总重量(g)为1:1;
3)向浓缩液中加入乙醇,至浓缩液中乙醇浓度为75%,静置24h,分离收集沉淀物;
4)取沉淀物,用相当于浓缩液体积80%的水溶解沉淀物,形成溶解液;每1000ml溶解液中加入2g苯甲酸钠,混匀;加水至体积与浓缩液体积相等,即得半成品;
5)将制备好的半成品,灌装灭菌。
优选的,回流提取前,黄芪、灵芝先进行切片或粉碎处理;步骤3)中采用纱布过滤分离收集沉淀物;步骤5)中灭菌条件为118℃,高压灭菌20分钟。
本发明还提供一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液的应用,即采用新城疫疫苗免疫2天后,按0.2ml/Kg/d体重的剂量混饮给药,连用3d。
本发明的有益效果包括:
本发明的口服液在制备方法中,提取较完全,仅用了一次醇沉,不仅得到多糖,还保留了其他有效成份,操作简单、节约成本;其给药方式为混饮,使用更简单方便,给药效果好,与新城疫疫苗配合使用具有明显的免疫增效作用。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1、一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液的配方筛选
1材料
1.1试验动物
1日龄海兰白公雏鸡,体重30-35g,购自某孵化厂。
1.2试验药品
黄芪饮片(批号:1210393911,产地:内蒙,生产日期:20121004,安国市长安中药材有限公司),为将黄芪切片所得;
灵芝饮片(批号:1301474911;产地:吉林;生产日期:20130108安国市祁澳中药饮片有限公司),为将灵芝切片所得;
鸡新城疫活疫苗(LaSota株)(购自哈尔滨维科生物技术开发公司);
新城疫血凝抑制试验抗原(购自哈尔滨维科生物技术开发公司)。
1.3主要试剂
磷酸氢二钠(批号:20024,购自天津市天河化学试剂厂);
磷酸二氢钠(批号:20010825,购自北京精求化工厂);
氯化钠(批号:20121106,购自华北地区特种化学试剂开发中心)。
2组方筛选的药效学试验
2.1试验动物分组与处理
将1日龄海兰白公雏鸡饲喂7d后,随机分为7组,每组30只,具体分组情况见表1。7日龄,1-6组雏鸡用鸡新城疫活疫苗(LaSota株)滴鼻点眼免疫,100μl/只,1羽份/只;9日龄,1-5组口服不同配方的黄芪灵芝提取液,具体给药情况参见表1,第6组疫苗对照组和第7组空白对照组给予相应剂量的生理盐水,0.2ml/kg,每天1次,连服3天。
表1试验动物分组表
其中,黄芪灵芝提取液采用以下制备工艺获得:1)按表1中的配方量称取黄芪、灵芝,加入13倍重量份的水,100℃加热回流提取3h,过滤,重复回流提取三次,收集滤液;2)将滤液在60℃下减压浓缩,浓缩至液料比为1:1(液料比为1:1是指浓缩液的体积(ml):药材总重量(g)为1:1),即得浓缩液;3)向所述浓缩液中加入乙醇,至浓缩液中乙醇浓度为75%,静置24h,分离收集沉淀物;4)取所述沉淀物,用相当于浓缩液体积80%的水溶解沉淀物,形成溶解液;每1000ml所述溶解液中加入2g苯甲酸钠,混匀;加水至体积与所述浓缩液体积相等,即得半成品;5)将制备好的半成品,灌装灭菌。
2.2检测指标及方法
分别于免疫后第7、14、21、28d,各试验组随机抽取10只,颈静脉采血,分离血清,用血凝抑制法(参考姚火春“兽医微生物学实验指导”,中国农业出版社(北京),2002,p105-107)测定新城疫抗体效价的动态变化。首先测抗原血凝价(HA),主要步骤为:在96孔“V”形微量反应板上,用生理盐水50μL/孔自左向右将病毒抗原作2倍比稀释至第11孔(21~211),第12孔为生理盐水对照孔,向各孔加入1%鸡红血球悬液50μL,振荡混匀1min,37℃静置作用20min左右观察结果,以100%凝集(红血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底)的病毒抗原最大稀释孔为该病毒抗原的血凝价(即1个凝集单位)。实测病毒抗原的凝集价为1:28。其次用4单位(1:26即64倍稀释)病毒抗原测各时间点血清中新城疫抗体的红细胞凝集抑制效价(HI),主要步骤为:在96孔“V”形微量反应板上,用生理盐水50μL/孔自左向右将50μL/孔待检血清作2倍比稀释至第10孔(21~210),第11孔为病毒对照,第12孔阳性血清对照,1~11孔加入4单位病毒抗原50μL/孔,振荡混匀1min,置37℃温箱作用20min,再加入1%鸡红血球悬液50μL/孔,再振荡混匀1min,37℃静置作用20min左右观察结果,以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度,用-log2表示。
2.3数据处理
数据利用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较,以P<0.05为显著水平,试验结果以均数±标准差表示。
3试验结果
由表2可见,免疫后7-21天,所有免疫组抗体效价均逐渐升高,21-28天,所有免疫组抗体水平下降。不同时间段,给药组的抗体水平均高于疫苗对照组,说明黄芪、灵芝药材混合提取液,能够改善新城疫疫苗的免疫效果;各试验组峰值效价均出现在第21天,峰值效价由高到低的顺序依次为:4组>5组>3组>2组>1组>6组。第4组在免疫后14,21,28天,抗体水平高于其他组,并与疫苗对照组比较差异显著(P<0.05);在第21天,其抗体水平与1,2,3组比较,差异显著(P<0.05),说明第4组试药能明显提高新城疫抗体效价,效果优于1,2,3组试药。第5组在免疫后14,21,28天,抗体水平高于第1,2,3组,但差异不显著(P>0.05);其抗体水平低于第4组,但差异不显著(P>0.05),说明第5组试药提高新城疫抗体效价的作用,略高于1,2,3组试药,略低于第4组试药,差异均不显著(P>0.05)。
综上可知,第4组试药提高新城疫抗体效价的作用最强,使抗体维持的时间最长。所以确定最佳处方为黄芪、灵芝药材比例为1:2。
表2各试验组新城疫HI抗体效价的动态变化(n=10)
注:同列数据上标无相同字母者差异显著(P<0.05),有相同字母者差异不显著(P>0.05)
实施例2、一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液的临床试验
1材料与方法
1.1药物、试剂和仪器
受试药物 采用实施例1第4组的黄芪灵芝提取液。
对照药物 芪芍增免口服液,由保定市冀农动物药业有限公司生产。批号:2014070801。
疫苗及抗原 鸡新城疫低毒力活疫苗(LaSota株),批号:20130301。武汉中博生物科技股份有限公司出品。新城疫抗体效价测定(血凝抑制)病毒抗原(即NDV-LaSota),批号:20150305,哈尔滨生物制品国家工程研究中心有限公司出品。
单抗IL-2鼠抗鸡单克隆抗体(Mouse anti-Chicken Monoclonal Antibody,一抗),批号:LS-C44101/40388,LifeSpan BioSciences出品;Goat Anti-Mouse IgG,HRPconjugated(二抗),批号:bs-0296G,北京博奥森生物技术有限公司出品。
IFN-γ兔抗鸡多克隆抗体(Rabbit anti-Chicken Polyclonal Antibody,一抗),批号:LS-C43120/57089,LifeSpan BioSciences出品;Goat anti-Rabbit IgG(H+L),HRPconjugated(二抗),批号:bs-0295G,北京博奥森生物技术有限公司出品。
TMB底物显色试剂盒,北京索莱宝科技有限公司;RPMI1640培养液,Gibco公司产品;刀豆球蛋白A(ConA):Sigma公司产品;胎牛血清:杭州四季青生物材料公司;青链霉素:Sigma产品;淋巴细胞分离液:Solarbio公司产品;四唑盐(MTT):Solarbio公司产品;二甲基亚砜(DMSO):天津市科密欧化学试剂有限公司;其他相关试剂均为分析纯试剂。
主要仪器CO2恒温培养箱,核酸蛋白浓度检测仪(美国伯腾仪器有限公司),倒置显微镜,MP200A分析天平,XW-80微型漩涡混合仪,全自动高压锅,超净工作台等。
1.2动物
4日龄健康SPF来航鸡雏鸡,购自乾元浩生物有限公司南京生物药厂,许可证号:SCXK(苏)2013-0009,合格证编号:NO.201502158。试验前按常规饲养,喂不含任何药物的全价饲料,自由采食及饮水,5日龄断喙,饲养至7日龄用于试验。
1.3方法
1.3.1分组及处理方法
根据试验需要选定180只健康7日龄SPF雏鸡,称重、随机分为6组,具体如表3:
表3分组及处理方法
1~5组雏鸡用鸡新城疫低毒力活疫苗(LaSota株)滴鼻点眼免疫,1羽份/只(100μl/只)。免疫2天后1~3组混饮给予相应剂量的黄芪灵芝提取液,每天1次,连续3天;4组芪芍增免口服液按用法与用量混饮给药,3ml/L,每天1次,连续7天;5组给予相应的生理盐水;6组不作任何处理。
1.3.2新城疫抗体效价测定
分别于免疫后第7、14、21、28d,各试验组随机抽取10只,颈静脉采血,分离血清,用血凝抑制法(参考姚火春“兽医微生物学实验指导”,中国农业出版社(北京),2002,p105-107)测定新城疫抗体效价的动态变化。首先测抗原血凝价(HA),主要步骤为:在96孔“V”形微量反应板上,用生理盐水50μL/孔自左向右将病毒抗原作2倍比稀释至第11孔(21~211),第12孔为生理盐水对照孔,向各孔加入1%鸡红血球悬液50μL,振荡混匀1min,37℃静置作用20min左右观察结果,以100%凝集(红血球呈颗粒性伞状凝集沉于孔底)的病毒抗原最大稀释孔为该病毒抗原的血凝价(即1个凝集单位)。实测病毒抗原的凝集价为1:28。其次用4单位(1:26即64倍稀释)病毒抗原测各时间点血清中新城疫抗体的红细胞凝集抑制效价(HI),主要步骤为:在96孔“V”形微量反应板上,用生理盐水50μL/孔自左向右将50μL/孔待检血清作2倍比稀释至第10孔(21~210),第11孔为病毒对照,第12孔阳性血清对照,1~11孔加入4单位病毒抗原50μL/孔,振荡混匀1min,置37℃温箱作用20min,再加入1%鸡红血球悬液50μL/孔,再振荡混匀1min,37℃静置作用20min左右观察结果,以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的抗体滴度(即抗体效价),用-log2表示。
1.3.3细胞因子含量测定
分别于免疫后第7、14、21、28d,各试验组随机抽取10只鸡,同上采血分离血清,采用IL-2、IFN-γ的ELISA方法检测,即以50倍稀释的样品血清包被,5%脱脂乳封闭,10000倍稀释的IFN-γ兔抗鸡多克隆抗体为一抗,2000稀释HRP标记的Goat Anti-Rabbit IgG抗体为二抗;或8000倍稀释的IL-2鼠抗鸡单克隆抗体为一抗,2000倍稀释HRP标记的Goat Anti-Mouse IgG抗体为二抗,TMB为底物显色剂,于450nm处测定OD值,并严格按照试剂盒说明书操作测定。
1.3.4外周血淋巴细胞增殖测定
分别于免疫后第7、14、21、28d,每组随机抽取6只鸡,颈静脉无菌采血(肝素钠抗凝)1.5mL,用淋巴细胞分离液分离外周血淋巴细胞,采用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖。
1.3.5免疫器官指数测定
分别于免疫后第7、14、21、28d,每组随机抽取6只,称重,扑杀,分离胸腺、脾脏和法氏囊、称重,计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官(g)/体重(g)×100。
1.3.6生长性能测定
日均增重分别于免疫后第7、14、21、28d,各组称重,分别计算7~14、15~21、22~28、29~35日龄4个时间段的日均增重。日均增重(g/d/羽)=(平均末重-平均始重)/饲喂天数。
日均采食量分别于免疫7,14,21,28d,记录每组鸡的饲料消耗量,分别计算7~14、15~21、22~28、29~35日龄4个时间段的耗料量,计算日均采食量。日均采食量(g/d/羽)=耗料量/饲喂天数/羽。
料重比分别计算各组4个时间段的总耗料量和总增重,计算料重比。料重比(g/g)=总耗料/总增重。
1.3.7数据统计
数据用平均数±标准差表示,用SPSS17.0统计软件各组抗体效价、淋巴细胞增殖和生长性能进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较,以P<0.05为显著水平,比较各试验组间差异显著性;用卡方检验比较各组发病率、死亡率、保护率的差异。
2结果
2.1抗体效价变化免疫后7d~28d所有免疫组抗体效价均在渐渐升高,但免疫后的前14d抗体效价升高较快,之后趋于缓慢上升。其中黄芪灵芝提取液高、中、低3个剂量组和阳性药物对照组在免疫后7~14d抗体效价显著高于疫苗免疫对照组(P<0.05);免疫后21d芪芝口服液高、中2个剂量组抗体效价显著高于疫苗免疫对照组(P<0.05),而低剂量组和药物对照组抗体效价则略高于疫苗对照组,差异不显著(P>0.05);至免后28d芪芝口服液高、中剂量组抗体效价显略高于试药低剂量组、药物对照组和疫苗免疫对照组,但差异不显著(P>0.05);空白对照组由于没有免疫,其测得的抗体效价为残留的母源抗体,详细结果见表4。
表4各组新城疫抗体效价的动态变化(log2)n=10
注:同列数据上标字母相邻者差异显著(P<0.05),相间者差异极显著(P<0.01),有相同字母者差异不显著(P>0.05)。下类同,不注。
2.2细胞因子含量的变化
分别于免疫后第7、14、21、28d,各试验组10只鸡血清IFN-γ的ELISA检测结果显示:免疫后第7d黄芪灵芝提取液高、中剂量和药物对照组IFN-γ的OD值显著高于其他各试验组(P<0.05);免疫后第14d黄芪灵芝提取液高、中、低剂量组IFN-γ的OD值均极显著高于疫苗免疫对照组和空白对照组(P<0.01),并显著高于药物对照组(P<0.05);而免疫后第21、28d各试验组IFN-γ的OD值均无差异(P>0.05),详细结果见表5。同期10只鸡血清IL-2的含量变化趋势与IFN-γ基本一致,详细结果见表6。
表5各组鸡各测定时间点的IFN-γ变化(A450值)n=10
表6各组鸡各测定时间点的IL-2变化(A450值)n=10
2.3淋巴细胞增殖的变化14日龄至35日龄(即免后7d~28d)各时间点测定的淋巴细胞增殖活性的A570OD值均呈现:黄芪灵芝提取液高、中剂量组的A570OD值显著高于黄芪灵芝提取液低剂量组和药物对照组(P<0.05),极显著高于疫苗免疫对照组(P<0.01);黄芪灵芝提取液低剂量组和药物对照组的A570OD值又显著高于疫苗免疫对照组(P<0.05)。表明黄芪灵芝提取液和阳性对照药物均能提高鸡外周血淋巴细胞增殖活性,且黄芪灵芝提取液高、中剂量组作用效果最好。与空白对照组相比,所有其他试验组各时间的淋巴细胞增殖都显著高于同期空白对照组(P<0.05),表明新城疫LaSota苗的免疫对鸡外周血淋巴细胞增殖亦具有显著促进作用。详细结果见表7。
表7各组淋巴细胞增殖的变化(A570值)n=6
2.4免疫器官指数测定结果分别于免疫后第7、14、21、28d,每组随机抽取6只鸡测定的胸腺、脾脏和法氏囊指数分别如下:
2.4.1胸腺指数见表8,从表中可以看出,各时间点测得的胸腺指数均呈现:黄芪灵芝提取液高、中剂量显著高于其他各试验组(P<0.05)。表明高、中剂量芪芝口服液能提高鸡的胸腺指数。
表8各组鸡各测定时间点的胸腺指数n=6
注:同列数据上标字母不同者差异显著(P<0.05),有相同字母者差异不显著(P>0.05)。
2.4.2脾指数见表9,从表中可以看出,免疫后第7、14d测得的脾指数均呈现:黄芪灵芝提取液高、中剂量显著高于其他各试验组(P<0.05);免疫后第21d黄芪灵芝提取液高、中、低3个剂量组的脾指数均显著或极显著高于其他各试验组(P<0.05,P<0.01);免疫后第28d黄芪灵芝提取液高、中、低3个剂量组和阳性药物对照组的脾指数均显著高于疫苗对照组(P<0.05),极显著高于空白对照组(P<0.01)。表明高、中剂量黄芪灵芝提取液从免疫后7~28均能提高鸡的脾指数。
表9各组鸡各测定时间点的脾指数n=6
2.4.3法氏囊指数见表10,从表中可以看出,免疫后第7、14d测得的法氏囊指数均呈现:黄芪灵芝提取液高、中、低3个剂量组和阳性药物对照组的法氏囊指数均显著高于疫苗免疫对照组(P<0.05);免疫后第21、28d黄芪灵芝提取液高、中剂量法氏囊指数均显著高于疫苗免疫对照组(P<0.05)。表明高、中剂量黄芪灵芝提取液从免疫后7~28均能提高鸡的法氏囊指数。
表10各组鸡各测定时间点的法氏囊指数n=6
2.5生长性能测定结果分别于免疫7,14,21,28d,各组鸡只称重,记录每组鸡的饲料消耗量,分别计算7~14、15~21、22~28、29~35日龄4个时间段的日均增重、日均采食量和料重比,具体见表11。从表中可以看出,除7~14日龄时间段各试验组的日均增重无差异外,其他3个时间段在日均采食量基本相近的情况下,黄芪灵芝提取液高、中剂量组和阳性药物对照组的日均增重均显著高于疫苗免疫对照和空白组(P<0.05);而黄芪灵芝提取液高、中剂量组和阳性药物对照组的料重比则明显低于疫苗免疫对照和空白组。表明高、中剂量黄芪灵芝提取液和阳性药物均能提高试验期试验鸡的生产性能。
表11各组生长性能情况
注:同行数据上标无相同字母者差异显著(P<0.05)。
综合分析上述结果,表明黄芪灵芝提取液可以明显提高鸡新城疫苗的免疫抗体效价,并同时提高鸡血清IFN-γ和IL-2含量、外周血淋巴细胞增殖活性和胸腺、脾脏及法氏囊免疫器官指数等非特异性免疫的功能;同时又具有一定的促进生长和降低料重比作用,且以高、中剂量效果最好。鉴于高、中剂量之间多无显著差异,建议中剂量作为临床应用剂量,推荐按0.2ml/Kg/d体重的剂量混饮给药,连用3d,为临床应用之用量用法。
实施例3、一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液
采用如下制备方法制备而成:
1)取配方量的黄芪、灵芝,切片或粉碎,加入13倍重量份的水,100℃加热回流提取3h,过滤,重复回流提取三次,收集滤液;
2)将滤液在60℃下减压浓缩,浓缩至液料比为1:1,即得浓缩液;其中,液料比为1:1是指浓缩液的体积(ml):药材总重量(g)为1:1;
3)向浓缩液中加入乙醇,至浓缩液中乙醇浓度为75%,静置24h,用纱布过滤分离收集沉淀物;
4)取沉淀物,用相当于浓缩液体积80%的水溶解沉淀物,形成溶解液;每1000ml溶解液中加入2g苯甲酸钠,混匀;加水至体积与浓缩液体积相等,即得半成品;
5)将制备好的半成品,灌装,118℃,高压灭菌20分钟。
实施例4、一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液的应用
采用新城疫疫苗对7日龄雏鸡滴鼻点眼免疫,100μl/只,1羽份/只。免疫2天后,按0.2ml/Kg/d体重的剂量将实施例3中制备的中药口服液,混入饮用水给药,连用3d。

Claims (6)

1.一种增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,其特征在于由以下配比的原料药组成:黄芪一份、灵芝两份。
2.根据权利要求1所述的增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,其特征在于,所述中药口服液通过以下制备方法制备而得:
1)取配方量的黄芪、灵芝,加入13倍重量份的水,100℃加热回流提取3h,过滤,重复回流提取三次,收集滤液;
2)将滤液在60℃下减压浓缩,浓缩至液料比为1:1(液料比为1:1是指浓缩液的体积(ml):药材总重量(g)为1:1),即得浓缩液;
3)向所述浓缩液中加入乙醇,至浓缩液中乙醇浓度为75%,静置24h,分离收集沉淀物;
4)取所述沉淀物,用相当于浓缩液体积80%的水溶解沉淀物,形成溶解液;每1000ml所述溶解液中加入2g苯甲酸钠,混匀;加水至体积与所述浓缩液体积相等,即得半成品;
5)将制备好的半成品,灌装灭菌。
3.根据权利要求2所述的增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,其特征在于,回流提取前,对所述步骤1)中的黄芪、灵芝先进行切片或粉碎处理。
4.根据权利要求2所述的增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,其特征在于,所述步骤3)中采用纱布过滤分离收集沉淀物。
5.根据权利要求2所述的增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液,其特征在于,所述步骤5)中所述灭菌是指118℃,高压灭菌20分钟。
6.根据权利要求1-5任一项所述的增强新城疫疫苗免疫效果的中药口服液的应用,其特征在于,所述应用是采用新城疫疫苗免疫2天后,按0.2ml/Kg/d体重的剂量混饮给药,连用3d。
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