CN103134883A - 一种药物组合物及其制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了中药健康补脾丸及其配方原料制成的制剂的检测方法。本发明检测方法包括鉴别和/或含量测定方法，其中鉴别方法为显微鉴别、黄芪的鉴别、黄柏的鉴别、苍术的鉴别、白术的鉴别、党参的鉴别、茯苓的鉴别中的一种或几种，含量测定方法为黄芪甲苷的含量测定方法。本发明所述检测方法均表现良好的线性关系、精密度、专属性、耐用性和准确性，对于严格控制健康补脾丸及其制剂的质量具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物的检测方法，特别涉及健康补脾丸及其制剂的检测方法。
背景技术
健康补脾丸为《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第三册收载的品种，是临床常用的中成药，是由黄芪、龙骨、党参、白术、茯苓、黄柏、车前子、苍术等十一味药组成。具有健脾利湿的功效，用于臌症后期脾胃虚弱，食欲不振，湿热黄疸，小便不利。原标准仅收载了一项显微鉴别，检测指标少且没有含量测定指标，不能有效的控制产品质量。
发明内容
本发明目的在于公开健康补脾丸及其配方原料制成的制剂的检测方法。
本发明目的是通过如下方案实现的：
本发明检测方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种：
鉴别包括如下方法中的一种或几种：
A.显微鉴别
取健康补脾丸制剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径4-6μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞1-2个；
B.黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取6-10克，置索式提取器中，加无水乙醚60-100ml，加热回流提取2-6小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇60-100ml浸渍过夜，加热回流提取6-10小时，收集提取液蒸干，残渣加水10-30ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取3-5次，每次30-50ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2-4次，每次30-50ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
C.黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂4-6g，研细，加甲醇20-40ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.05-0.15g，加甲醇3-7ml，250W 40KHz的超声处理20-40分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.4-0.6mg的溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5-15∶4-8∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
D.苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂2-7g，研细，加正己烷20-40ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.4-0.6g，加正己烷3-7ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷0.5-1.5ml使溶解，作为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60-90℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
E.白术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂10-30g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水200-400ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入60-90℃的石油醚1-3ml，加热回流1-3小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.3-0.7g，加正己烷0.5-1.5ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60～90℃的石油醚-乙酸乙酯10-30∶0.05-0.15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-7％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
F.党参的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂4-6g，加正丁醇20-30ml，超声处理20-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材0.5-1.5g，加正丁醇20-30ml，超声处理20-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷5-15％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
G.茯苓的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂1-3g加三氯甲烷-甲醇-水5-15∶1-3∶0.5-1.5的下层溶液20-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5-1.5ml溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取茯苓对照药材0.5-1.5g，加三氯甲烷-甲醇-水5-15∶1-3∶0.5-1.5的下层溶液20-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5-1.5ml溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以60-90℃的石油醚-乙醚2-4∶1-3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点；
含量测定包括如下方法：
A.黄芪甲苷的含量测定
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水20-40∶60-80为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算3000-5000；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2-0.3mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取6-10克，置索式提取器中，加无水乙醚60-100ml，加热回流提取2-6小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇60-100ml浸渍过夜，加热回流提取6-10小时，收集提取液蒸干，残渣加水10-30ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取3-5次，每次30-50ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2-4次，每次30-50ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：精密吸取对照品溶液10μg，20μg与供试品溶液20μg，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；健康补脾丸制剂每1g含黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.035mg/g；
鉴别优选包括如下方法中的一种或几种：
A.显微鉴别
取健康补脾丸制剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
B.黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
C.黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI的B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水10∶6∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
D.苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂5g，研细，加正己烷30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点：
E.白术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙酸乙酯20∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
F.党参的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂5g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材1g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
G.茯苓的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂2g加三氯甲烷-甲醇-水10∶2∶1的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取茯苓对照药材1g，加三氯甲烷-甲醇-水10∶2∶1的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙醚3∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点；
含量测定优选包括如下方法：
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水30∶70为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4500；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取8克，精密称定，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：精密吸取对照品溶液10μg，20μg与供试品溶液20μg，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；健康补脾丸制剂每1g含黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.035mg/g；
本发明健康补脾丸配方制剂的原料药组成为：
黄芪120-150重量份龙骨(煅)120-150重量份党参120-150重量份
牡蛎(煅)120-150重量份白术(麸炒)120-150重量份肉豆蔻(煨)120-150重量份
茯苓120-150重量份黄柏15-20重量份车前子(炒)120-150重量份茵陈15-20
重量份苍术(炒)120-150重量份
本发明健康补脾丸配方制剂的原料药组成优选为：
黄芪135重量份龙骨(煅)135重量份党参135重量份
牡蛎(煅)135重量份白术(麸炒)135重量份肉豆蔻(煨)135重量份
茯苓135重量份黄柏17.2重量份车前子(炒)135重量份茵陈
17.2重量份苍术(炒)135重量份
本发明健康补脾丸配方制剂的原料药组成优选为：
黄芪122重量份龙骨(煅)148重量份党参148重量份
牡蛎(煅)122重量份白术(麸炒)122重量份肉豆蔻(煨)148重量份
茯苓148重量份黄柏15.2重量份车前子(炒)122重量份茵陈
19.8重量份苍术(炒)148重量份
本发明健康补脾丸配方制剂的原料药组成优选为：
黄芪148重量份龙骨(煅)122重量份党参122重量份
牡蛎(煅)148重量份白术(麸炒)148重量份肉豆蔻(煨)122重量份
茯苓122重量份黄柏19.8重量份车前子(炒)148重量份茵陈
15.2重量份苍术(炒)122重量份
本发明所述的质量检测方法中的健康补脾丸配方制剂是取上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于丸剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。
本发明原料中黄芪的别名为：黄耆、绵黄耆、戴芪、独椹、百本、百药绵、元芪、黄耆、棉芪、红芪、西芪、口芪、抽芪、卜奎芪、浑源芪、大岚芪、炮台芪、大有芪、炙耆、独根、芰草、王孙；龙骨的别名为：陆虎遗生、那伽骨、生龙骨、煅龙骨、五花龙骨、青化龙骨、花龙骨、白龙骨；党参的别名为：上党人参、防风党参、黄参、防党参、上党参、狮头参、中灵草、黄党、台党、潞党参、西党、汉中党、文党、文元党、晶党、东党、辽党；牡蛎的别名为：蛎蛤、左顾牡蛎、牡蛤、海蛎子壳、海蛎子皮、左壳、海蛎子、蛎黄、生蚝、鲜蚵、蚝仔、古贲、生牡蛎、蚝、蠔、蚝壳、左牡蛎、海蛎壳；白术的别名为：山蓟、杨枹蓟、山芥、天蓟、山姜、乞力伽、山精、山连、冬白术、白大寿、沙邑条根、枹杨、枹蓟于术、冬术、浙术、种术、白茱、於术、于术、广术、贡术、杭术、于潜术、仙居术、吃力伽；肉豆蔻的别名为：肉果、玉果、肉蔻、肉叩、肉豆蔻、肉豆叩、迦枸勒、煨肉蔻、顶头肉、煨玉果；茯苓的别名为：茯菟、茯灵、茯蕶、伏苓、伏菟、松腴、绛晨伏胎、云苓、茯兔、松薯、松木薯、松苓、白茯苓、福临、更生、不死面、朱茯苓；黄柏的别名为：川黄柏、关黄柏、黄檗、元柏、檗木、檗皮、川柏、柏皮、檀柜、川柏皮；车前子的别名为：车前实、虾蟆衣子、猪耳朵穗子、凤眼前仁、车前、车前仁、车辙子、牛舌草、当道；茵陈的别名为：绵茵陈、白蒿、绒蒿、松毛艾、田耐里、因尘、茵陈蒿、安吕草；苍术的别名为：赤术、青术、仙术、茅术、茅苍术、关苍术、北苍术、泔苍术。
本发明在原有质量标准的基础上增加了黄芪、黄柏、苍术、白术、党参、茯苓的薄层鉴别，并建立了黄芪中黄芪甲苷(C41H68O14)的含量测定方法。改进了原有质量标准的不足，提高了产品质量的可控性和产品的稳定性，有利于工业化生产的质量控制。
附图说明：
图1：黄柏的薄层图
图2：苍术的薄层图
图3：白术的薄层图
图4：党参的薄层图
图5：茯苓的薄层图
图6：线性图
图7：专属性---对照品
图8：专属性---供试品
图9：专属性---阴性对照液
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明
实验例1鉴别实验
A.显微鉴别
取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截(黄芪)；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径4-6μm(茯苓)；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚(黄柏)；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列(车前子)；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物(肉豆蔻)；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞1-2个(茵陈)；
B.黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
C.黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)5g，研细，加甲醇30ml超声处理(250W 40KHz)15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml超声处理(250W 40KHz)30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
黄柏阴性溶液的制备：按比例取除黄柏外的其他药材粉碎成细粉，过筛，混匀。取健康补脾丸制剂5g，研细，加甲醇30ml超声处理(250W 40KHz)15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为黄柏阴性溶液；
吸取上述供试品溶液5μl，对照品、对照药材溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，经黄柏的阴性试验无干扰(见附图1)。此方法鉴别专属性好；
D.苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)5g，研细，加正己烷30ml超声处理(250W 40KHz)15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml超声处理(250W 40KHz)15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
苍术阴性溶液的制备：按比例取除苍术外的其他药材粉碎成细粉，过筛，混匀。取健康补脾丸制剂5g，研细，加正己烷30ml超声处理(250W 40KHz)15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为苍术阴性溶液；
吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以80℃石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经苍术的阴性试验无干扰(见附图2)。此方法操作简便，专属性强。
E.白术的鉴别
供试品溶液的制备：取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml超声处理(250W 40KHz)15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
白术阴性溶液的制备：按比例取除白术外的其他药材粉碎成细粉，过筛，混匀。取健康补脾丸制剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为阴性溶液；
白术含挥发油。中国药品生物制品检定所有对照药材提供。先采用药典原料的方法，试验结果样品于对照药材相应的位置上，无相应的斑点。加大取样量，用乙醚、乙酸乙酯溶剂，超声处理，都未检出斑点，后采用05年药典《附子理中丸》中的鉴别白术的方法，用挥发油测定器，加热回流2小时，以80℃石油醚层作为供试品溶液。取白术对照药材用乙酸乙酯超声15分钟，作为对照药材溶液。分别点于同一硅胶G薄层板上，以80℃石油醚-乙酸乙酯(20∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液。加热至斑点清晰，供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经白术的阴性试验无干扰(见附图3)。此方法鉴别专属性好；
F.党参的鉴别
供试品溶液的配置：取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)5g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液的配置：另取党参对照药材1g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
党参中大部分是糖类，还有苷类，中国药品生物制品检定所有对照药材提供。分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。经党参的阴性试验无干扰(见附图4)。此方法操作简便，专属性强；
G.茯苓的鉴别
供试品溶液的配置：取本发明健康补脾丸配方制剂(实施例1制备)2g加三氯甲烷-甲醇-水(10∶2∶1)的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的配置：另取茯苓对照药材1g，加三氯甲烷-甲醇-水(10∶2∶1)的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液。
茯苓含多糖。中国药品生物制品检定所有对照药材提供。分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以80℃石油醚-乙醚(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。经茯苓的阴性试验无干扰(见附图5)。此方法操作简便，专属性强；
实验例2黄芩甲苷含量测定方法学实验
1、仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪Uitimate 3000，包括：蒸发光散射检测器PL-ELS2100；试药：乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯，黄芪甲苷对照品为中国药品生物制品检定所提供，使用前置五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时以上方可使用；对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取8克，精密称定，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
2、色谱条件
(1)实验条件选择
色谱柱：资生堂4.6nm×150nm；流动相：乙腈-水(30∶70)；流速：1.0ml/min；柱温：室温；灵敏度0.01AUFS；在选定条件下，黄芪甲苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离。黄芪甲苷与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，黄芪甲苷峰理论塔板数为4500以上，拖尾因子(T)为0.99；
(2)前处理条件的选择
①除杂溶剂的选择：在用三氯甲烷或乙醚等溶剂除杂时，要保证溶剂中不能有水存在，要用无水氯化钙脱水后使用。比较了无水三氯甲烷和无水乙醚的脱酯结果相差无几，选择无水乙醚是其更易挥发，可减少试验时间。
②提取时间的选择：在其他条件相同的条件下，分别提取6、8、10、12小时测定含量，结果见表1。
表1提取时间的选择结果
| 提取时间(h) | 6 | 8 | 10 | 12 |
| 结果含量(mg/g) | 0.11239 | 0.13815 | 0.13720 | 0.13827 |
试验表明：经过8小时的加热回流提取，样品中的有效成分被提取完全。
③萃取次数的选择：在用水饱和正丁醇萃取时，单独收集第4次和第5次的正丁醇液，分别进行后续步骤。结果第4次萃取液中有黄芪甲苷，第5次萃取液中无黄芪甲苷。试验表明：4次提取已把黄芪甲苷萃取完全。
3、方法学验证
(1)准确度
量取已知黄芪甲苷含量的同一批样品4克，精密称定，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(0.12904mg/ml、0.22582mg/ml、0.3226mg/ml)各2ml，按上述条件测定，试验结果见表2.
表2准确度实验
实验结果表明回收率良好。
(2)精密度
仪器精密度：精密吸取对照品溶液20μg，重复进样5次，测得黄芪甲苷峰面积值，结果见表3.
表3精密度实验
实验结果表明仪器精密度良好。
取同一批样品6份，精密称定，按上述条件制备供试品溶液，测得峰面积并计算含量，结果见表4.
表4精密度实验
实验结果表明方法重复性良好.
(3)线性
精密量取黄芪甲苷对照品溶液(1.032mg/ml)0.4μg、1μg、2μg、4μg、10μg、20μg，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，结果见表5.
表5线性实验
| 试验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 进样量(μg) | 0.4128 | 1.032 | 2.064 | 4.128 | 10.32 | 20.64 |
| 峰面积 | 32475 | 108344 | 265698 | 712666 | 2755301 | 6938963 |
以黄芪甲苷微克数为横坐标，峰面积为纵坐标，得一直线，计算回归方程，Y＝1.38145x+11.55710，r＝0.999715，见附图6。
结果表明黄芪甲苷在0.418-20.26μg范围内呈良好的线性关系。
(4)专属性
按处方中药味的比例，称取不含黄芪的群药，按制剂工艺制成阴性对照，再按供试品溶液制备方法制备黄芪的阴性对照溶液，吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液，分别注入色谱仪，依法测定，结果阴性对照溶液与黄芪甲苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。(见附图7-9)
(5)耐用性
取样品按上述条件制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，然后每隔1小时测定一次，结果见表6。
表6耐用性实验
实验结果表明供试品溶液在6h内稳定性较好。
4、结果
黄芪中黄芪甲苷的含量中国药典2010年版一部规定：“健康补脾丸制剂按干燥品计算，含黄芪甲苷(C41H68O14)不得少于0.040％”。如果按中国药典2010年版一部黄芪项下规定的低限投料，健康补脾丸中每1g含黄芪甲苷0.0432mg，因考虑到原料的产地、加工、水分、炮制、贮藏不同及大生产中的诸多问题对成品含量的影响，将含量下浮20％，将含量限度定为0.035mg/g，结果见表7。
表7含量测定结果
| 序号 | 批号 | 黄芪甲苷含量(mg/g) |
| 1 | 107001 | 0.046 |
| 2 | 107002 | 0.041 |
| 3 | 107003 | 0.049 |
| 4 | 107004 | 0.050 |
| 5 | 107013 | 0.071 |
| 6 | 107014 | 0.082 |
| 7 | 107015 | 0.073 |
| 8 | 107016 | 0.062 |
| 9 | 107017 | 0.058 |
| 10 | 107018 | 0.045 |
下述实施例均能实现上述实验例所述效果
具体实施方式
实施例1：
黄芪135g 龙骨(煅)135g 党参135g 牡蛎(煅)135g 白术(麸炒)135g 肉豆蔻(煨)135g 茯苓135g 黄柏17.2g 车前子(炒)135g茵陈17.2g 苍术(炒)135g
上十一味，粉碎成细粉，过筛，混匀，用水泛丸，干燥，即得。
鉴别方法A为：显微鉴别
取上述丸剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
鉴别方法B为：黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取上述丸剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
鉴别方法C为：黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取上述丸剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
鉴别方法D为：苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述丸剂5g，研细，加正己烷30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法E为：白术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述丸剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙酸乙酯(20∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法F为：党参的鉴别
供试品溶液的制备：取上述丸剂5g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材1g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法G为：茯苓的鉴别
供试品溶液的制备：取上述丸剂2g加三氯甲烷-甲醇-水(10∶2∶1)的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取茯苓对照药材1g，加三氯甲烷-甲醇-水(10∶2∶1)的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙醚(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点；
含量测定方法A为：黄芪甲苷的含量测定
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30∶70)为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4500；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取上述丸剂适量，研碎，取8克，精密称定，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：精密吸取对照品溶液10μg，20μg与供试品溶液20，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；本品每1g含黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.035mg/g；
实施例2：
黄芪122g 龙骨(煅)148g 党参148g 牡蛎(煅)122g 白术(麸炒)122g 肉豆蔻(煨)148g 茯苓148g 黄柏15.2g 车前子(炒)122g茵陈19.8g 苍术(炒)148g
以上各味原药按常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂。
鉴别方法A均为：显微鉴别
取上述颗粒剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
鉴别方法B均为：黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取上述颗粒剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
鉴别方法C均为：黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取上述颗粒剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
实施例3：
黄芪148g 龙骨(煅)122g 党参122g 牡蛎(煅)148g 白术(麸炒)148g 肉豆蔻(煨)122g 茯苓122g 黄柏19.8g 车前子(炒)148g茵陈15.2g 苍术(炒)122g
以上各味原药按常规工艺，加入常规辅料制成散剂。
鉴别方法A均为：显微鉴别
取上述散剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
鉴别方法B均为：黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取上述散剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；鉴别方法C均为：黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取上述散剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
鉴别方法D均为：苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述散剂5g，研细，加正己烷30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法E均为：白术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述散剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙酸乙酯(20∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法F均为：党参的鉴别
供试品溶液的制备：取上述散剂5g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材1g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
实施例4：
黄芪135g 龙骨(煅)135g 党参135g 牡蛎(煅)135g 白术(麸炒)135g 肉豆蔻(煨)135g 茯苓135g 黄柏17.2g 车前子(炒)135g茵陈17.2g 苍术(炒)135g
以上各味原药按常规工艺，加入常规辅料制成片剂。
鉴别方法A为：显微鉴别
取上述片剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
鉴别方法B为：黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取上述片剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
鉴别方法C为：黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取上述片剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
鉴别方法D为：苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述片剂5g，研细，加正己烷30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥于，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法E为：白术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述片剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙酸乙酯(20∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法F为：党参的鉴别
供试品溶液的制备：取上述片剂5g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材1g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法G为：茯苓的鉴别
供试品溶液的制备：取上述片剂2g加三氯甲烷-甲醇-水(10∶2∶1)的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取茯苓对照药材1g，加三氯甲烷-甲醇-水(10∶2∶1)的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙醚(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点；
实施例5：
黄芪122g 龙骨(煅)148g 党参148g 牡蛎(煅)122g 白术(麸炒)122g 肉豆蔻(煨)148g 茯苓148g 黄柏15.2g 车前子(炒)122g茵陈19.8g 苍术(炒)148g
以上各味原药按常规工艺，加入常规辅料制成胶囊剂。
鉴别方法A为：显微鉴别
取上述胶囊剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
鉴别方法B为：黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取上述胶囊剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
鉴别方法C为：黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取上述胶囊剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
含量测定方法A为：黄芪甲苷的含量测定
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30∶70)为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4500；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取上述胶囊剂适量，研碎，取8克，精密称定，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：精密吸取对照品溶液10μg，20μg与供试品溶液20，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；本品每1g含黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.035mg/g；
实施例6：
黄芪148g 龙骨(煅)122g 党参122g 牡蛎(煅)148g 白术(麸炒)148g 肉豆蔻(煨)122g 茯苓122g 黄柏19.8g 车前子(炒)148g茵陈15.2g 苍术(炒)122g
以上各味原药按常规工艺，加入常规辅料制成缓释制剂。
鉴别方法A为：显微鉴别
取上述缓释制剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
鉴别方法B为：黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取上述缓释制剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
鉴别方法C为：黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取上述缓释制剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
鉴别方法D为：苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述缓释制剂5g，研细，加正己烷30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别方法E为：白术的鉴别
供试品溶液的制备：取上述缓释制剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入60～90℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙酸乙酯(20∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
Claims (7)
1.一种健康补脾丸制剂的检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定方法：
A.黄芪甲苷的含量测定
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水20-40∶60-80为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算3000-5000；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2-0.3mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取6-10克，置索式提取器中，加无水乙醚60-100ml，加热回流提取2-6小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇60-100ml浸渍过夜，加热回流提取6-10小时，收集提取液蒸干，残渣加水10-30ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取3-5次，每次30-50ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2-4次，每次30-50ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：精密吸取对照品溶液10μg，20μg与供试品溶液20μg，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；健康补脾丸制剂每1g含黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.035mg/g。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定方法：
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水30∶70为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4500；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取8克，精密称定，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：精密吸取对照品溶液10μg，20μg与供试品溶液20μg，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；健康补脾丸制剂每1g含黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于0.035mg/g。
3.如权利要求1-2任一所述的检测方法，其特征在于该方法还包括如下鉴别方法中的一种或几种：
A.显微鉴别
取健康补脾丸制剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径4-6μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞1-2个；
B.黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取6-10克，置索式提取器中，加无水乙醚60-100ml，加热回流提取2-6小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇60-100ml浸渍过夜，加热回流提取6-10小时，收集提取液蒸干，残渣加水10-30ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取3-5次，每次30-50ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2-4次，每次30-50ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
C.黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂4-6g，研细，加甲醇20-40ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.05-0.15g，加甲醇3-7ml，250W 40KHz的超声处理20-40分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.4-0.6mg的溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5-15∶4-8∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
D.苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂2-7g，研细，加正己烷20-40ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.4-0.6g，加正己烷3-7ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷0.5-1.5ml使溶解，作为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60-90℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
E.白术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂10-30g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水200-400ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入60-90℃的石油醚1-3ml，加热回流1-3小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.3-0.7g，加正己烷0.5-1.5ml，250W 40KHz的超声处理10-20分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以60～90℃的石油醚-乙酸乙酯10-30∶0.05-0.15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-7％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
F.党参的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂4-6g，加正丁醇20-30ml，超声处理20-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材0.5-1.5g，加正丁醇20-30ml，超声处理20-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷5-15％硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
G.茯苓的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂1-3g加三氯甲烷-甲醇-水5-15∶1-3∶0.5-1.5的下层溶液20-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5-1.5ml溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取茯苓对照药材0.5-1.5g，加三氯甲烷-甲醇-水5-15∶1-3∶0.5-1.5的下层溶液20-30ml，超声处理10-30分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5-1.5ml溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以60-90℃的石油醚-乙醚2-4∶1-3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。
4.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于该方法还包括如下鉴别方法中的一种或几种：
A.显微鉴别
取健康补脾丸制剂，置显微镜下观察，纤维束或散离，壁厚，表面有纵裂纹、两端裂成帚状或较平截；不规则分枝团块无色，遇水合氯醛液溶化，菌丝无色，直径5μm；纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚；种皮下皮细胞表面观狭长，壁稍波状，以数个细胞为一组，略作镶嵌状排列；外胚乳细胞多角形，胞腔内含棕红色、鲜红色或黄棕色物；T形毛众多，多碎断，臂细胞较平直，壁极厚，胞腔常呈细缝状，柄细胞2个；
B.黄芪的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂适量，研碎，取8克，置索式提取器中，加无水乙醚80ml，加热回流提取4小时，弃去提取液，样品挥干乙醚；加90％甲醇80ml浸渍过夜，加热回流提取8小时，收集提取液蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml；合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得；
对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
照[含量测定]项下方法试验，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品色谱应呈现与黄芪甲苷对照品保留时间相同的色谱峰；
C.黄柏的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂5g，研细，加甲醇30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1g，加甲醇5ml，250W 40KHz的超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI的B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水10∶6∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
D.苍术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂5g，研细，加正己烷30ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取苍术对照药材0.5g，加正己烷5ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
E.白术的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂20g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水300ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入80℃的石油醚2ml，加热回流2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，加正己烷1ml，250W 40KHz的超声处理15分钟，静置，取上清液为对照药材溶液；
照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙酸乙酯20∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
F.党参的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂5g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为供试品溶液；
对照药材溶液制备：取党参对照药材1g，加正丁醇25ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
G.茯苓的鉴别
供试品溶液的制备：取健康补脾丸制剂2g加三氯甲烷-甲醇-水10∶2∶1的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取茯苓对照药材1g，加三氯甲烷-甲醇-水10∶2∶1的下层溶液25ml，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为对照药材溶液；
照薄层色谱法试验，分别吸取上述二种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以80℃的石油醚-乙醚3∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。
5.如权利要求1-4任一所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的健康补脾丸制剂的原料药组成为：
黄芪120-150重量份龙骨(煅)120-150重量份党参120-150重量份
牡蛎(煅)120-150重量份白术(麸炒)120-150重量份肉豆蔻(煨)120-150重量份茯苓120-150重量份黄柏15-20重量份车前子(炒)120-150重量份茵陈15-20重量份苍术(炒)120-150重量份。
6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于该方法中所述的原料药组成优选为如下组成中的一种：
黄芪135重量份龙骨(煅)135重量份党参135重量份
牡蛎(煅)135重量份白术(麸炒)135重量份肉豆蔻(煨)135重量份
茯苓135重量份黄柏17.2重量份车前子(炒)135重量份茵陈17.2重量份
苍术(炒)135重量份；
或
黄芪122重量份龙骨(煅)148重量份党参148重量份
牡蛎(煅)122重量份白术(麸炒)122重量份肉豆蔻(煨)148重量份
茯苓148重量份黄柏15.2重量份车前子(炒)122重量份茵陈19.8重量份
苍术(炒)148重量份；
或
黄芪148重量份龙骨(煅)122重量份党参122重量份
牡蛎(煅)148重量份白术(麸炒)148重量份肉豆蔻(煨)122重量份
茯苓122重量份黄柏19.8重量份车前子(炒)148重量份茵陈15.2重量份
苍术(炒)122重量份。
7.如权利要求5或6所述的的检测方法，其特征在于该方法中所述的原料药加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的丸剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或注射剂。
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: HANDAN MOLUODAN PHARMACEUTICAL CO., LTD. TO: HANDAN PHARMACY CO., LTD. |
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