CN102692460A

CN102692460A - 中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法

Info

Publication number: CN102692460A
Application number: CN2012101587911A
Authority: CN
Inventors: 孟宪生; 包永睿; 姚东; 王帅; 崔亚玲
Original assignee: Liaoning University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Liaoning University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2012-05-22
Filing date: 2012-05-22
Publication date: 2012-09-26

Abstract

本发明公开了中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法，它是将现代分析检测手段和信息处理手段结合起来，有效融合中药材指标成分的谱图信息，所测成分均为最大紫外吸收波长，增大检测成分的信噪比，可以克服单一波长单一指标检测时信息量不足的缺点，从而可以较完善地反映中药材的内在质量。本发明的四种成分质量控制方法操作简单、稳定可靠、重现性较好，可用于中药材质量评价和控制及中药新药研发中。特别是可将其作为金银花药材质量控制及真伪鉴别的指标之一。

Description

中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法

发明领域

本发明属于采用现代分析检测手段和信息处理手段对中药材的质量进行检测的技术领域，涉及一种中药材质量的控制方法，更具体的说是一种全时段三波长融合同时测定中药金银花四种成分含量的方法。

背景技术

据中华人民共和国药典2010年版一部记载：本品为忍冬科植物忍冬Lonicera Japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花。芳香的金银花是我国古老的药物，享有“药铺小神仙之誉”。本品性甘，寒。归肺、心、胃经。清热解毒，凉散风热。《神农本草经》载：“金银花性寒味甘，具有清热解毒、凉血化瘀之功效，主治外感风热、瘟病初起、疮疡疔毒、红肿热痛、便脓血”等。药理研究表明金银花具有抗病原微生物、抗炎、解热、保肝、抗生育、止血、免疫调节、降血脂、中枢兴奋等作用；临床上主要用于多种感染、各种炎症、高热症、高脂血症、肿瘤放疗、化疗口干症等。金银花在我国资源丰富，分布广泛，主产山东、河南等省，山东金银花产量大，俗称济银花、东银花；河南产品质佳，俗称密银花。至目前为止，已经发现的化学成分主要有挥发油、黄铜类、有机酸、三萜类、无机元素等。

随着科学技术的发展，现代先进分析检测仪器的普遍使用以及信息处理技术的逐步完善，使中药分析检测水平有了显著提高，中药质量控制方法得到不断改进。近年来通过建立指纹图谱对中药材指标成分进行含量测定成为中药质量控制和评价的一种发展趋势。中药指纹图谱是指某些中药材或中成药经过适当处理后，利用现代信息采集技术和质量分析手段得到的能够显现中药材或中成药化学特征的光谱图或色谱图。由于在三个不同色谱条件下使用不同的前处理方法对金银花中绿原酸、咖啡酸、芦丁和木犀草苷分别进行检测是无法实现对金银花指纹图谱进行全面和整体评价的，因此，遵循信息最大化原则建立金银花药材全时段三波长融合指纹图谱并对其指标成分进行含量测定可以获取一种较为有效的质量控制方法，从而保证金银花药材质量的安全、稳定和可靠。

金银花药材在中药材中占有十分重要的地位。目前，市售的金银花药材质量参差不齐，因此甘草药材的稳定性难以保证。2010版中国药典规定的含量测定：本品按干燥品计算，含绿原酸（C₁₆H₁₈O₉）不得少于1.5%；木犀草苷（C₂₁H₂₀O₁₁）不得少于0.050%。

发明内容

本发明目的在于采用现代分析检测手段和信息处理手段建立金银花药材的全新指纹图谱，及以该指纹图谱为基础的全时段多波长融合的含量测定方法，以确保金银花药材的质量控制方法更加简便、合理、可靠。

本发明是通过以下技术方案实现的：

中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：

（1）供试品溶液的制备：取金银花药材粉末(过40目筛)约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水20mL，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；

（2）对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、咖啡酸对照品、芦丁对照品和木犀草苷对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含绿原酸对照品2.413mg、咖啡酸对照品0.783mg、芦丁对照品0.235mg和木犀草苷对照品0.262mg的溶液，即得；

（3）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂的Agilent TC-C₁₈(4.6mm×250 mm, 5微米)色谱柱；以1％醋酸水为流动相A，以乙腈为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速1.0mL/min；柱温25℃；DAD检测器在波长254nm、327nm和350nm下同时进行检测；进样量20μL；理论塔板数计算，应不低于3000；

表1流动相梯度洗脱表

时间（min）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0	97	3
25	85	15
			30	82	18
38	81	19
			55	76	24

（4）全时段三波长融合：采用多波长融合指纹图谱技术将254nm、327nm和350nm三个波长下的谱图数据进行全时段融合，得到一张能够同时包含三个波长信息的色图谱。

（5）样品含量测定：应用融合后的指纹图谱数据，计算样品中四种指标成分的含量。

（6）对上述确定的含量测定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、线性范围以及耐用性。

本发明所述的金银花药材四种成分含量控制方法，将254nm、327nm和350nm三个波长下的谱图数据全时段融合后可获得一组谱图数据。其中指纹图谱数据见表2

表2 融合峰图谱数据

峰序	保留时间	峰高	峰面积
				1	23.8158	2829.068	43741.09
2	25.1891	1099.442	13230.42
				3	40.0958	116.9157	2221.027
4	42.4558	66.88166	2099.247

本发明所述的金银花药材四种成分含量控制方法，得到的指纹图谱数据，可以用于金银花药材指标成分的定量分析。

本发明所述的全时段三波长融合同时测定中药金银花四种成分含量的

方法与现有的中国药典规定的测定方法相比所具有的积极效果在于：

（1）本发明首次公开通过建立金银花药材全时段多波长融合指纹图谱并对其指标成分进行含量测定的方法，此方法对同一样品不同成分多波长同时定量分析，从而完善了金银花药材质量控制方法。

（2）本发明采用现代先进分析检测技术，对金银花药材四个指标成分进行分析检测，从而获得极其丰富的信息量。

（3）本发明通过信息处理手段将金银花药材三波长下的色谱图进行全时段融合，在保证数据信息损失最小的前提下，获得一张同时反应三个波长信息的色谱图。

（4）本发明的四种成分含量控制方法，其优点是操作简单，稳定可靠，精密度、重复性、回收率均达到定量分析要求，能够综合宏观地分析金银花药材的质量。

（5）本发明通过建立金银花药材全时段多波长融合指纹图谱，对金银花药材中的二类成分进行指纹定性和定量分析，较全面真实地揭示金银花药材的内在质量特征，从而保证了金银花药材的安全、有效、可靠、稳定，确保了其质量的均衡稳定和工艺的规范化。

附图说明

图1是254nm波长下对照品绿原酸、咖啡酸、芦丁和木犀草苷的HPLC色谱图。

图2是327nm波长下对照品绿原酸、咖啡酸、芦丁和木犀草苷的HPLC色谱图。

图3是350nm波长下对照品绿原酸、咖啡酸、芦丁和木犀草苷的HPLC色谱图。

图4是绿原酸的紫外扫描图。

图5是咖啡酸的紫外扫描图。

图6是芦丁的紫外扫描图。

图7是木犀草苷的紫外扫描图。

图8是金银花药材254nm波长下HPLC色谱图。

图9是金银花药材327nm波长下HPLC色谱图。

图10是金银花药材350nm波长下HPLC色谱图。

图11是金银花药材全时段多波长融合的HPLC色谱图。

具体实施方式

中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法，按如下步骤进行：

1、试品溶液的制备：取金银花药材粉末(过40目筛)2g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水20mL，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；

2、中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法，该方法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂的Agilent TC-C₁₈(4.6mm×250 mm, 5微米)色谱柱；以1％醋酸水为流动相A，以乙腈为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速1.0mL/min；柱温25℃；DAD检测器在波长254nm、327nm和350nm下同时进行检测；进样量20μL；理论塔板数计算，应不低于3000；

表1流动相梯度洗脱表

本发明所述的金银花药材四种成分含量控制方法，由分析检测仪器得到254nm、327nm和350nm三个波长下的谱图数据，运用信息处理手段全时段融合三个波长下的谱图数据，得到一张能够同时包含三个波长信息的色图谱。其中色谱图见图11。

Claims

1.中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：

（1）供试品溶液的制备：取过40目筛的金银花药材粉末2g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水20mL，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；

（3）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂的Agilent TC-C₁₈色谱柱，色谱柱规格为4.6mm×250 mm, 5微米；以1％醋酸水为流动相A，以乙腈为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速1.0mL/min；柱温25℃；DAD检测器在波长254nm、327nm和350nm下同时进行检测；进样量20μL；理论塔板数计算，应不低于3000；

流动相梯度洗脱技术参数为：

（4）全时段三波长融合：采用多波长融合指纹图谱技术将254nm、327nm和350nm三个波长下的谱图数据进行全时段融合，得到一张能够同时包含三个波长信息的色图谱；

（5）样品含量测定：应用融合后的指纹图谱数据，计算样品中四种指标成分的含量；

2.根据权利要求1所述的中药金银花全时段三波长融合同时测定四种成分含量的方法，其特征在于，全时段三波长融合：采用三波长融合指纹图谱技术将254nm、327nm和350nm三个波长下的谱图数据进行全时段融合，得到一张能够同时包含三个波长信息的色图谱。