CN103115974B - 赶黄祛斑胶囊中槲皮素的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种赶黄祛斑胶囊中槲皮素的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。以槲皮素为对照品，赶黄祛斑胶囊内容物为供试品，分别通过薄层色谱法、高效液相色谱法进行鉴别和含量检测。高效液相色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4%磷酸水溶液（46：54）为流动相，检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000。本发明采用薄层色谱法、高效液相色谱法分别对槲皮素进行鉴别和含量检测，方法更科学，检测手段更先进，定性定量更准确，不仅可以更好更全面的反映赶黄祛斑胶囊的有效成分，而且还可以杜绝采用其他药材代替赶黄草投料生产的情况，从而确保了该药品的质量，保证了用药的安全有效。

Description

赶黄祛斑胶囊中槲皮素的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种药物制剂中活性成分的质量检测方法，具体来说，涉及的是一种治疗黄褐斑的中药胶囊制剂中槲皮素的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。

背景技术

本发明具体涉及的治疗黄褐斑的中药胶囊制剂即赶黄祛斑胶囊，由赶黄草835g和丹参300g制成稠膏后，经加入适当的辅料制备得到，其具体制备方法及用途已记载于公开号为CN101700276的发明专利中，该制剂具有退黄、化瘀、祛斑的作用，临床上拟用于治疗由于肝气郁结引起的女性黄褐斑的治疗。

赶黄祛斑胶囊中含有赶黄草和丹参，经研究证明，赶黄草的主要有效成分—槲皮素具有祛斑、抗炎、抗过敏，增强皮肤毛细血管通透性功能；丹参中的主要成分有丹参酮Ⅱ_A和丹酚酸B，其中：丹参酮Ⅱ_A具有抗炎的功能，丹酚酸B具有强大的抗氧化的作用。在对赶黄祛斑胶囊的分析中也发现本品中的主要有效成分为槲皮素，丹参酮Ⅱ_A和丹酚酸B。

通过查询目前国内外的相关文献发现，仅有单独测定赶黄草制剂中的槲皮素或单独测定丹参制剂中的丹参酮Ⅱ_A和丹酚酸B的报道，还没有关于对由赶黄草、丹参两味药组成的复方制剂中的槲皮素，丹参酮Ⅱ_A和丹酚酸B进行检测的文献报道。为了更好的控制赶黄祛斑胶囊的质量，保证临床用药的安全性，有必要建立一套完整的质量控制标准以更好的控制本品的质量。

赶黄祛斑胶囊的制备工艺中主要涉及的稠膏制备方法为：丹参300g，加90%乙醇回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇至稠膏；丹参药渣与赶黄草835g，加水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.15～1.18（60～65℃）的清膏，冷却，加乙醇使含醇量达60%，搅拌，静置，滤过，沉淀用60%乙醇洗涤三次，合并洗液与滤液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.30～1.32的稠膏；合并上述两种稠膏，备用。

取稠膏，加入适量淀粉、微晶纤维素、滑石粉、硬脂酸镁等，混匀，制粒干燥后分装或浸膏直接干燥后打成粉末直接分装，即得。

这里得到的其实是胶囊的内容物，经过分析可以得知，整个生产工艺中质量控制比较简单和粗糙，可能会因为生产批次的不一样，或者就算是同一批次也会生产出含量各不相同、品质不均匀的产品。

如果在内容物制备完成或者在内容物制备过程中，就对内容物进行适当的鉴别和含量检测，这无疑对产品的质量稳定和疗效稳定起着至关重要的作用。

发明内容

本发明的目的是针对目前国内还没有上市的药物制剂赶黄祛斑胶囊，提供一种可以全面鉴别及检测该试剂有效成分之一槲皮素的质量检测方法，确保了该药物制剂的安全有效。

为实现上述发明目的，本发明采用的具体技术方案如下：

赶黄祛斑胶囊中槲皮素的质量检测方法，其特征在于：以槲皮素为对照品，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的混合物为展开剂，甲苯：乙酸乙酯：甲酸v/v/v=5：2：1，用薄层色谱法进行鉴别，并以甲醇和0.4%磷酸水溶液的混合物为流动相，磷酸水溶液：甲醇v/v=54：46，用高效液相色谱法测定含量。

所述高效液相色谱的条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4%磷酸水溶液（46：54）为流动相，检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000。

所述磷酸水溶液的浓度为质量百分比。

所述薄层色谱法鉴别的具体步骤如下：

A 供试品溶液的制备：精密称定赶黄祛斑胶囊内容物3g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴条件下回流30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加入2ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；

B 对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，以甲醇制成每1ml中含0.5mg的对照品溶液；

C 薄层色谱法鉴别：分别吸取供试品溶液与对照品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，展开后取出，晾干，喷以显色剂，并在105℃加热2-20分钟后取出，置365nm的紫外灯下检视，在与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱中显相同颜色的斑点。

所述含量检测的具体步骤如下：

A 对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，用80%甲醇水溶液制成每1ml中含0.04mg的对照品溶液；

B 供试品溶液的制备：精密称定赶黄祛斑胶囊内容物0.5g，置锥形瓶内，加入80%盐酸甲醇溶液50ml，精密称定后在水浴条件下回流1.0小时，取出，放冷，再次精密称定并采用80%甲醇水溶液补足重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；

C 液相色谱测定含量：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。

步骤B所述80%盐酸甲醇溶液由甲醇3份、盐酸1份混合而成。

发明人对鉴别方法和含量测定方法的可行性进行了验证研究；具体实验资料如下：

1、槲皮素的薄层鉴别研究

方法：薄层色谱法

样品和对照品处理方法：取赶黄祛斑胶囊内容物约30g，精密称定，加入25ml乙酸乙酯，在水浴条件下回流30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加入2ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品适量，以甲醇制成每1ml中含0.5mg的对照品溶液。

薄层板：硅胶G 薄层板，

展开剂：甲苯：乙酸乙酯：甲酸=5：2：1，

显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液

显色方法：喷以显色剂。在105℃加热2-20分钟后取出。

结果：在拟定条件下，样品中有与对照品斑点呈现一致性的斑点，并且申请人通过改变薄层展开剂确认了斑点纯度。

2、槲皮素的高效液相含量测定研究

2.1仪器与实验药

Alltech-426型高效液相，CQX25-06超声波清洗器。甲醇为色谱级，磷酸为分析纯。槲皮素对照品为中国药品生物制品检定所提供，赶黄祛斑胶囊由成都力思特药物研究有限公司提供。

2.2方法与结果

色谱条件：

色谱柱：月旭 XB-C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）

流动相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（46：54）

检测波长：370nm

流速：1.0ml/min

2.3溶液制备

2.3.1精密称取槲皮素对照品适量，加80%甲醇水溶液制成每1ml中含0.04mg的对照品溶液液。

2.3.2供试品溶液制备：称取供试品0.5g，精密称定，置                               锥形瓶内，加50ml 80%盐酸甲醇溶液，精密称定后在水浴条件下回流1.0小时，取出，放冷，再精密称定并采用80%甲醇水溶液补足重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.4系统适用性实验：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，结果槲皮素的保留时间为15.627min，槲皮素峰与前后色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板以槲皮素峰计算为7654。.

2.5 线性关系：分别精密吸取2.2.1项下对照品溶液2.5，5，7.5，10，15，20μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值A对进样量C进行回归，得标准曲线方程：A=647847C+11214 r=0.9995，结果表明槲皮素进样量在0.1-0.8ng

范围内峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.6 精密度研究，精密吸取2.2.1项下对照品溶液20μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，测得槲皮素峰面积RSD为1.02%，表明仪器精密度良好。

2.7稳定性研究, 精密吸取2.2.2项下对照品溶液20μl，分别在0，2，4，6，8小时注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，测得槲皮素峰面积RSD为0.82%，表明供试品溶液在8小时内稳定。

2.8重复性实验 精密吸取2.2.2项下样品溶液20μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，测得槲皮素峰面积RSD为0.92%，表明仪器精密度良好。

2.9 回收率实验：精密称取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3组，每组3份，分别紧密添加槲皮素对照溶液适量，在、按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件测定峰面积，计算回收率，回收率为98.25%，RSD=0.99%。实验结果表明本品具有良好的回收率。

本发明的优点是：采用薄层色谱法对槲皮素进行鉴别以及采用高效液相色谱法对槲皮素的含量进行检测，方法更科学，检测手段更先进，定性定量更准确，不仅可以更好更全面的反映赶黄祛斑胶囊的有效成分，而且还可以杜绝采用其他药材代替赶黄草投料生产的情况，从而保证该药品的质量，保证人民用药安全有效。

本发明的另一优点是，通过对槲皮素的鉴别和含量检测，可以在胶囊填充之前就进行质量控制，以便生产出质量合格的产品，同时，也可以为市售的流通产品提供一种科学合理的检测方法，以便从生产和流通领域控制产品质量。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明技术方案仅限于以下实施例。

实施例1   槲皮素的鉴别

取赶黄祛斑胶囊内容物适量研细，称取粉末3.0g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴条件下回流30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加入2ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品适量，用甲醇制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热2-20分钟后取出，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例2   槲皮素的含量测定

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸水溶液（46：54）为流动相；检测波长为370nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2000。精密称取槲皮素对照品适量，用80%甲醇水溶液制成每1ml中含0.04mg的对照品溶液。取赶黄祛斑胶囊内容物粉末约0.5g，精密称定，置于锥形瓶内，加50ml 80%盐酸甲醇溶液（配制方法：取甲醇3份，盐酸溶液1份混合而成），精密称定后在水浴条件下回流1.0小时，取出，放冷，再次精密称定并采用80%甲醇水溶液补足重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。

Claims (1)

1.赶黄祛斑胶囊中槲皮素的质量检测方法，其特征在于：以槲皮素为对照品，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的混合物为展开剂，甲苯：乙酸乙酯：甲酸v/v/v=5：2：1，用薄层色谱法进行鉴别，并以甲醇和0.4%磷酸水溶液的混合物为流动相，磷酸水溶液：甲醇v/v=54：46，用高效液相色谱法测定含量；

所述高效液相色谱的条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比46：54的甲醇-0.4%磷酸水溶液为流动相，检测波长为370nm，理论板数按槲皮素峰计算不低于2000；

所述薄层色谱法鉴别的具体步骤如下：

A 供试品溶液的制备：精密称定赶黄祛斑胶囊内容物3g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴条件下回流30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加入2ml甲醇使溶解，作为供试品溶液；

B 对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，以甲醇制成每1ml中含0.5mg的对照品溶液；

C 薄层色谱法鉴别：分别吸取供试品溶液与对照品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，展开后取出，晾干，喷以显色剂，并在105℃加热2-20分钟后取出，置365nm的紫外灯下检视，在与对照品色谱相应的位置上，供试品色谱中显相同颜色的斑点；

所述含量检测的具体步骤如下：

A 对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，用80%甲醇溶液制成每1ml中含0.04mg的对照品溶液；

B 供试品溶液的制备：精密称定赶黄祛斑胶囊内容物0.5g，置于锥形瓶内，加入80%盐酸甲醇溶液50ml，精密称定后在水浴条件下回流1.0小时，取出，放冷，再次精密称定并采用80%甲醇溶液补足重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；所述80%盐酸甲醇溶液由甲醇3份、盐酸1份混合而成；

C 液相色谱测定含量：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。