CN103079598A

CN103079598A - 罗丹明(rhodamine)染料的单一同分异构结合物

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Publication number: CN103079598A
Application number: CN2011800221193A
Authority: CN
Inventors: 乌尔夫·布伦贝里; 埃里克·林贝里; 卫·贝尔茨; 安东尼·德贝尔代; 詹姆斯·S·斯特里克兰
Original assignee: Pharmacophotonics Inc
Current assignee: Pharmacophotonics Inc
Priority date: 2010-04-02
Filing date: 2011-04-01
Publication date: 2013-05-01
Anticipated expiration: 2031-04-01
Also published as: JP2015063693A; US20160208101A1; US11618825B2; US11130865B2; BR112012025165A2; US8809531B2; JP6240058B2; US20210403719A1; JP2013523964A; BR112012025165B1; EP2552492A2; CN105412945B; JP5980199B2; CN105412945A; AU2011235868A1; CN103079598B; US20190016896A1; WO2011123820A2; WO2011123820A3; US9169398B2

Abstract

概括来说，本发明涉及新颖罗丹明(rhodamine)染料，其在与另一分子结合时形成单一同分异构结合产物。这些新颖罗丹明染料在所述罗丹明分子上仅含有一个用于结合的单一官能团，因此其结合产物是单一同分异构结合产物。

Description

罗丹明(RHODAMINE)染料的单一同分异构结合物

相关申请案交叉参考

本申请案主张2010年4月2日申请的美国临时专利申请案第61/320,571号的权利，此案件的内容以引用方式并入本文中。

技术领域

概括来说，本发明涉及新颖罗丹明(rhodamine)染料，其在与另一分子结合时形成单一同分异构结合产物。

背景技术

罗丹明染料发荧光，且已作为游离染料和与诸如蛋白质和抗体等较大分子的结合物二者广泛地用于研究(李S(Lee S)，麦克奥利菲DJ(McAuliffe DJ)，柯达玛T(Kodama T)，道卡斯AG(Doukas AG)，使用激波管的活体内经皮递送(In vivo transdermal deliveryusing a shock tube)，激波(Shock Waves)(2000)10：307-307；杰森LW(Janson LW)，雷格斯戴尔K(Ragsdale K)，卢比-菲尔斯K(Luby-Phelps K)，富肌动蛋白胞质结构域的空间排阻的机制和大小截止值(Mechanism and size cutoff for steric exclusion from actin-richcytoplasmic domains)，生物物理学期刊(Biophys J)(1996)71：1228-1234；普R(Pu R)，鲁宾逊KR(Robinson KR)，岩藻扁鹿角菜的早期发育中的胞质钙梯度和钙调蛋白(Cytoplasmic calcium gradients and calmodulin in the early development of the fucoid algaPelvetia compressa)，细胞科学期刊(J Cell Sci)(1998)111(第21篇)：3197-3207；西屋T(Nishiya T)，熊本E(Kajita E)，堀之内T(Horinouchi T)，西本A(Nishimoto A)，美和S(Miwa S)，TIR和非TIR区域在MyD88的亚细胞定位和信号传导特性中的不同角色(Distinct roles of TIR and non-TIR regions in the subcellular localization and signalingproperties of MyD88)，欧洲生物化学学会联合会快报(FEBS Lett)(2007)581：3223-3229；坦纳GA(Tanner GA)，森杜瓦RM(Sandoval RM)，邓恩KW(Dunn KW)，正常和囊性大鼠肾脏中磺基荧光素分泌的两光子活体内显微镜检查(Two-photon in vivo microscopy ofsulfonefluorescein secretion in normal and cystic rat kidneys)，美国生理学与肾生理学期刊(Am J Physiol Renal Physiol)(2004)286：F152-F160)。

在结构上，罗丹明是一族具有呫吨核心的相关多环状荧光酮(flurone)染料。

呫吨

罗丹明的一般结构如下：

罗丹明。

罗丹明的胺可为伯胺、仲胺或叔胺。

一种常用的荧光罗丹明染料是含有久洛尼定(julolidine)结构元素的磺基罗丹明101：

久洛尼定结构元素磺基罗丹明101含有如下所示的二官能磺酰基：

磺基罗丹明101

磺酰基罗丹明101已经用于包含钙成像方法以及星形胶质细胞的复染色的神经生理学实验中(尼默加翰A.(Nimmerjahn，A.)，科奇豪伏F.(Kirchhoff，F.)，科尔J.N.(Kerr，J.N.)，海默翰F.(Helmchen，F.)，磺基罗丹明101作为活体内新皮质中的星形胶质的特定标记(Sulforhodamine 101 as a specific marker of astroglia in the neocortex in vivo)，自然方法(Nature Methods)(2004)1：31-7)。

磺基罗丹明101的磺酰氯衍生物以商标德克萨斯红(Texas Red)

由西格玛-奥德里奇(Sigma Aldrich)公司(圣路易斯(St.Louis)，密苏里州(MO))出售。其用于与诸多官能团、尤其与伯胺结合。德克萨斯红

在约615nm下发荧光，且峰吸收在589nm处。德克萨斯红

通常作为SO₃和SO₂Cl基团可如下文所示交换的两种单磺酰氯的混合物获得：

其它罗丹明衍生物还揭示于(例如)PCT国际申请案(PCT Int.Appl.)(2009)，WO2009108905A220090903；美国专利申请公开案(U.S.Pat.Appl.Publ.)第2004054162 A120040318号；美国专利第5728529号；美国专利第5686261号；PCT国际申请案(1997)，WO 9700967A119970109；英国专利申请案(1995)，GB 2283744A 19950517中；以及由金(Kim)等人(金T.G.(Kim，T.G.)；卡斯特罗J.C(Castro，J.C)；娄德特A.(Loudet，A.)；焦J.G.-S.(Jiao，J.G.-S.)；豪彻斯哈勒R.M.(Hochstrasser，R.M.)；伯吉斯K.(Burgess，K.)；托普M.R.(Topp，M.R.)，物理化学期刊A(Journal of Physical Chemistry A)(2006)，110(1)，20-27)揭示。

尽管数个出版物显示使用二官能罗丹明染料用于结合的可能性，例如通过德克萨斯红

中的一个磺酰氯基团的选择性反应(泰特斯JA(Titus JA)，郝格兰R(Haugland R)，莎茹SO(Sharrow SO)，西格尔DM(Segal DM)，德克萨斯红，一种与荧光素一起用于双参数流动显微荧光测定和荧光显微镜研究的亲水性发红光荧光团(Texas Red，a hydrophilic，red-emitting fluorophore for use with fluorescein in dual parameter flow microfluorometricand fluorescence microscopic studies)，免疫学方法期刊(J.Immunol.Methods)(1982)50(2)：193-204)，但双重反应性的可能性使得难以建立可靠的仅获得单一同分异构体产物的方法，此显示于图1中，其中具有两个磺酰基的二官能罗丹明染料与伯胺反应而形成两种结合同分异构产物。在一个工艺中两种同分异构结构而不是仅一种结构造成两个主要缺点：1)各批间同分异构体的比率有所变化，且产物影响效应，和2)监管要求(毒性数据、稳定性、表征等)将加倍以涵盖两种物质而不是一种物质。

本发明通过使用在罗丹明分子上仅具有一个用于结合的单一官能团的罗丹明染料的新颖单官能衍生物由此其结合产物是单一同分异构结合产物而避开这些困难。

本发明的这些和其它方面和属性将参照以下图式和随附说明书予以论述。

发明内容

附图说明

图1显示二官能罗丹明染料与高分子结合形成两种同分异构结合产物；

图2显示单官能罗丹明染料与高分子结合形成仅一种单一同分异构结合产物；

图3显示从8-羟基久洛尼定(2当量)和经取代苯甲醛(1当量，其中R₁、R₂、R₃、R₄和R₅可为H或任一基团)形成本发明的新颖罗丹明染料；

图4显示在Ugi反应条件下具有单官能团的罗丹明染料与高分子之间的一般结合反应；且

图5是具有单一官能伯氨基的单官能2-磺基罗丹明(2-SHR)染料与羧甲基化葡聚糖经由Ugi反应结合形成单一同分异构结合产物的实例；

图6是以400nm/分钟的扫描速度从200nm扫描到800nm时化合物18的UV吸收光谱；

图7是化合物18的荧光发射扫描；

图8是化合物18的荧光激发扫描；

图9是化合物18的三维荧光扫描，其中EM是发射波长且EX是激发波长；

图10是以400nm/分钟的扫描速度从200nm扫描到800nm时实例26的结合物的UV吸收光谱；

图11是实例26的结合物的荧光发射扫描；

图12是实例26的结合物的荧光激发扫描；且

图13是实例26的结合物的三维荧光扫描，其中EM是发射波长且EX是激发波长。

具体实施方式

尽管本发明容许呈许多不同形式的实施例，但本文将详细阐述特定实施例，应理解，本发明视为本发明原理的范例且不打算将本发明限于所阐释的特定实施例。

应理解，用于界定本发明化合物的化学结构是可表示每一给定结构的可能共振结构中的一者的各自表示。此外，应理解，根据定义，共振结构仅为所属领域的技术人员用于表示电子离域的图示，且本发明并不以任何方式通过显示给定结构的一种特定共振结构加以限制。

还应理解，用于界定本发明化合物的化学结构还包括其各别盐形式的结构。

概括来说，本发明涉及新颖罗丹明染料，其在与另一分子结合时形成单一同分异构结合产物。

中的一个磺酰氯基团的选择性反应(泰特斯JA，郝格兰R，莎茹SO，西格尔DM，德克萨斯红，一种与荧光素一起用于双参数流动显微荧光测定和荧光显微镜研究的亲水性发红光荧光团，免疫学方法期刊(1982)50(2)：193-204)，但双重反应性的可能性使得难以建立可靠的仅获得单一同分异构体产物的方法。如图1中所示，具有两个磺酰基的二官能罗丹明染料与伯胺反应而形成两种结合同分异构产物。在一个工艺中两种同分异构结构而不是仅一种结构造成两个主要缺点：1)各批间同分异构体的比率有所变化，且产物影响效应，和2)监管要求(毒性数据、稳定性、表征等)将加倍以涵盖两种物质而不是一种物质。

本发明通过使用在罗丹明分子上仅具有一个用于结合的单一官能团的罗丹明染料的新颖单官能衍生物由此其结合产物是单一同分异构结合产物而避开这些困难，如图2中所阐释。图2阐释本发明的实例，其中具有单一磺酰基的罗丹明衍生物与伯胺反应而仅形成单一同分异构结合产物。“官能团”意指适于结合的基团。适于结合的官能团可与另一分子(例如高分子)反应，以经由共价键形成结合物。仅含有一个“官能团”的罗丹明衍生物称为单官能化或单官能衍生物(例如图2中的单磺酰基罗丹明)，其有别于含有一个以上“官能团”的诸如磺酰基罗丹明101或德克萨斯红

等罗丹明衍生物。适于结合的官能团的实例包括但不限于胺、异氰酸酯、异硫氰酸酯、硫醇、羧酸等。本文中的“经官能化”意指罗丹明衍生物已经衍生化以含有“官能团”。实例是“经氨基官能化”，其意指官能团含有反应性氨基。

在实施例中，本发明的新颖罗丹明染料具有以下一般结构：

其中R1、R2、R3、R4和R5可为H或任一基团。然而，在R1、R2、R3、R4和R5中，这些基团中仅一个基团可具有“官能团”，由此罗丹明染料仅具有一个能够与另一分子(例如高分子)结合的单一“官能团”，以形成单一结合同分异构产物。此一般结构可通过如图3中所示使8-羟基久洛尼定(2当量)与经取代苯甲醛(1当量)反应来形成。可将8-羟基久洛尼定和经取代苯甲醛与60％硫酸水溶液混合(11.1mL/mmol苯甲醛)，并在150℃下在空气气氛中搅拌24h。可将反应混合物添加到冰中(28g/mmol苯甲醛)，此后可小心地添加60％NaOH到pH 6到7以使粗产物沉淀。可在二氯甲烷(DCM)与水之间萃取粗产物。可分离有机相，并用盐水洗涤。可移除有机溶剂，且通过与乙醇和甲苯一起蒸发五次来干燥终产物，以得到粗产物。用于制备本发明罗丹明染料的特定实例的详细方法阐述于下文实例中。

适于形成单一同分异构结合产物的单官能罗丹明衍生物的一般结构的一些实例显示于下文，其中2-磺基罗丹明的通式：

或4-羧基罗丹明的通式：

或3-羧基罗丹明的通式：

或4-芳基罗丹明的通式：

其中对于上文所有4个通式，Ar是芳基，且R1和/或R2形成在R1或R2上具有适于与另一分子结合的单一官能团的间隔基团，其中间隔基团可为(但不限于)氢、烷基、芳基、酰胺、烷基磺酰胺、烷基醚、烷基酰胺等，或其组合。上文所提及的烷基优选地具有1到20的碳链长度。R1和R2还可经连接以形成环状结构，例如但不限于下文所显示的结构：

尽管上文所显示的实例显示磺基在2位上，羧基在3位或4位上且芳基在4位上，但应注意，含有“官能”基团的这些和其它基团可在2位、3位或4位上。下文的实例(实例4到24)阐释属于上文所示群组的一些成员的合成。然而，根据实例中的阐释，具有定位于本发明新颖罗丹明染料中的任一期望位置的磺基-、羧基-、芳基-或任一其它基团的其它相关化合物的合成对于所属领域的技术人员来说应显而易见。

在一优选实施例中，新颖罗丹明衍生物呈以下盐形式，例如但不限于三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。在另一优选实施例中，盐是三氟乙酸盐或氯化物。在再一优选实施例中，盐是医药上可接受的盐。

这些新颖单官能罗丹明衍生物的应用中的一者是其与另一分子(例如高分子)结合的能力。所述分子(例如高分子)与罗丹明染料结合后可被容易地检测到和/或定量。本文中的常用高分子包括(但不限于)聚合物、蛋白质(例如抗体)、葡聚糖、纤维素、碳水化合物、脂质、核酸(例如DNA和RNA)等。罗丹明染料与高分子的结合以及其应用已为所属领域的技术人员所熟知，且已详细阐述于科学文献中，例如由泰特斯(Titus)等人(泰特斯JA，郝格兰R，莎茹SO，西格尔DM，德克萨斯红，一种与荧光素一起用于双参数流动显微荧光测定和荧光显微镜研究的亲水性发红光荧光团，免疫学方法期刊50(1982)2：193-204)揭示以及由郝格兰(Haugland)等人揭示于美国专利第5,798,276号中。罗丹明与高分子(例如抗体)的结合物可容易地从市面购得，例如来自艾碧康(Abcam)(剑桥市(Cambridge)，马萨诸塞州(MA))的与罗丹明结合的人类IgG抗体以及来自西格玛-奥德里奇(圣路易斯，密苏里州)的与罗丹明染料结合的各种蛋白质。在染料的官能团与高分子之间产生共价键的任一合成方法均可用于结合。罗丹明染料与高分子在Ugi反应条件下的一般结合反应阐释于图4中，其以经氨基官能化的磺酰胺染料(显示于实例6中的化合物1)与羧甲基化的葡聚糖经由Ugi反应的结合来例示，如图5中所示。

为阐释本发明，已合成诸多种适于结合的结构(化合物1到19)，其显示于下文实例6到24中。其它结合实例的实验细节在下文以实例25到28显示，其使用与羧甲基化葡聚糖(CM-葡聚糖)结合的来自合成实例(化合物18、化合物3、化合物15和化合物16)的染料。

尽管已结合目前认为是最实用且优选的实施例来阐述本发明，但应了解，本发明并不限于所揭示实施例，且打算涵盖包括在权利要求书的精神和范围以内的各种修改和等效改编。可对本发明作出修改和变化，此并不背离如权利要求书中所界定的本发明的新颖方面。所附权利要求书应广泛地且以与本发明的精神和范围一致的方式来解释。

实例

溶剂和试剂分别按从里布坎(Labscan)(格利维策(Gliwice)，波兰(Poland))和西格玛-奥德里奇(圣路易斯，密苏里州)接受时的状态使用。使用来自安捷伦科技(AgilentTechnologies)(圣克拉拉(Santa Clara)，加利福尼亚州(CA))的液相色谱-质谱(LCMS)系统，其由G1379B脱气器、G1312A二元泵、G1329A自动注射器、G1316A柱式加热炉、G1365BUV-Vis检测器(用于检测最大吸光度)和6110四极MS检测器组成。用保持在35℃下的ACE-C8柱(50×4.6mm)测量高效液相色谱(HPLC)的纯度，并用存于0.1％三氟乙酸(TFA)中的10％到97％乙腈经3分钟梯度进行洗脱。

下文实例中的化合物是基于马文略图(Marvin Sketch)5.2.6来命名，其中使用优选IUPAC命名设置来命名结构。然而，可使用其它命名系统来命名这些化合物。

实例1：中间体1的制备

制备以下化合物：

中间体1

将8-羟基久洛尼定(1.1g，5.8mmol)与2-甲酰基苯-1-磺酸钠(0.6g，2.9mmol)存于60％H₂SO₄水溶液(10mL)中的反应混合物在150℃下在空气气氛中搅拌2小时，此后，起始材料已完全转化成预期产物。用60％NaOH水溶液将反应的pH调节到约7，在此程序期间预期产物沉淀。过滤沉淀，并用甲苯(3×50mL)洗涤，并在真空中干燥。将粗产物溶解于温乙醇(EtOH)中并过滤。弃除不溶性固体，且滤液在真空中与甲苯(3×50mL)一起蒸发，且以90％的HPLC纯度和73％的产率获得1.1g标题分子。

实例2：中间体2的制备

制备以下化合物：

中间体2

将8-羟基久洛尼定(1.4g，7.2mmol)和4-甲酰基苯甲酸(500mg，3.6mmol)与60％硫酸水溶液(40mL)混合，并在空气气氛中在150℃下搅拌24小时。将反应混合物添加到冰(100g)中，此后小心地添加60％NaOH到pH 6-7，从而使粗产物沉淀。在二氯甲烷(DCM)与水之间萃取粗产物。分离有机相，并用盐水洗涤。移除有机溶剂，且通过与EtOH和甲苯一起蒸发五次来干燥终产物，以得到1.1g产物(61％产率)。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]=491。

实例3：中间体3的制备

制备以下化合物：

中间体3

将8-羟基久洛尼定(1.4g，7.2mmol)和3-甲酰基苯甲酸(500mg，3.6mmol)与60％硫酸水溶液(40mL)混合，并在空气气氛中在150℃下搅拌24小时。将反应混合物添加到冰(100g)中，此后小心地添加60％NaOH到pH 6-7，从而使粗产物沉淀。在DCM与水之间萃取粗产物。分离有机相，并用盐水洗涤。移除有机溶剂，且通过与EtOH和甲苯一起蒸发五次来干燥终产物，以得到1.7g 3-酸产物(94％产率)。通过HPLC测定纯度为95％。MS(ESI)[M+]=491。

实例4：中间体4的制备

制备以下化合物：

中间体4

将8-羟基久洛尼定(1.4g，7.2mmol)和4-溴苯甲醛(670mg，3.6mmol)与60％硫酸水溶液(40mL)混合，并在空气气氛中在150℃下搅拌24小时。将反应混合物添加到冰(100g)中，此后小心地添加60％NaOH到pH 6-7，从而使粗产物沉淀，并在真空中干燥过夜得到1.12g黑色固体。将粗产物溶解于90/10CHCl₃/甲醇(5mL)中，并施加到二氧化硅柱(35×100mm)上，并用存于CHCl₃中的10％到18％甲醇洗脱。集中纯净流份，并在减压下蒸发溶剂得到448mg产物。

实例5：中间体5的制备

制备以下化合物：

中间体5

将如实例4中所述制备的中间体4(236mg，0.45mmol)和N-{[4-(二羟基硼烷基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁基酯(225mg，0.90mmol)转移到50mL烧瓶中，并添加乙醇和2MK₂CO₃水溶液(672μL，1.34mmol)。将反应混合物短暂脱气并[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)。添加DCM(18mg，0.022mmol))，再次脱气，并在室温下在氮气中搅拌。搅拌50分钟后，添加更多[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)。添加DCM(13mg，0.016mmol)，并将混合物加热到65℃，保持1小时。随后蒸发并溶解于DCM中，添加4g二氧化硅并蒸发，并经由装有DCM并用存于DCM中的5％到20％甲醇(MeOH)洗脱的12×2.5cm柱实施二氧化硅色谱，并蒸发纯净流份，得到236mg金褐色粘性固体，HPLC纯度为90％。

实例6：2-磺基罗丹明三氟乙酸盐(化合物1)的制备

制备以下化合物：

化合物1

根据使用的命名系统，化合物1是16-{2-[(6-氨基己基)氨磺酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。将中间体1(0.66mmol，350mg)溶解于DCM(10mL)和一滴二甲基甲酰胺(DMF)中。添加草酰氯(3.98mmol，500mg)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。立即观察到气体逸出。蒸发溶剂，与甲苯(10mL)混合，并再次蒸发，将残留物溶解于DCM(12mL)中，在冰浴中冷却，并分成两等份。将一份小心地(在5分钟以内)添加到己二胺(1.06mmol，120mg)存于DCM(5mL)中且三乙胺(0.40mmol，40mg)存于DCM(5mL)中的冰冷溶液中。暗浅蓝色溶液立即变成暗红色。反应在30分钟内完成。一部分粗混合物在制备型HPLC ACE-C8柱上用存于0.1％TFA水溶液中的甲醇梯度进行纯化，得到58mg(24％)暗蓝色发铜微光的玻璃状产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]＝625。最大吸光度在586nm。

实例7：2-磺基罗丹明三氟乙酸盐(化合物2)的制备

制备以下化合物：

化合物2

根据使用的命名系统，化合物2是16-{2-[3-(氨基甲基)吡咯烷-1-磺酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。将中间体1(0.66mmol，350mg)溶解于DCM(10mL)和一滴DMF中。添加草酰氯(3.98mmol，500mg)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。立即观察到气体逸出。蒸发溶剂，与甲苯(10mL)混合，并再次蒸发，将残留物溶解于DCM(12mL)中，在冰浴中冷却，分成两等份。将一份小心地(在5分钟以内)添加到N-(吡咯烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁基酯(1.06mmol，90mg)存于DCM(5mL)中且三乙胺(0.40mmol，40mg)存于DCM(5mL)中的冰冷溶液中。暗浅蓝色溶液立即变成暗红色。反应在30分钟内完成。添加TFA(1mL，存于约2mL DCM中)，去保护在1小时内完成。一部分粗物质在制备型HPLC ACE-C8柱上用存于0.1％TFA水溶液中的甲醇梯度进行纯化，得到95mg(39％)暗蓝色发铜微光的玻璃状物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]＝605。最大吸光度在590nm。

实例8：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物3)的制备

制备以下化合物：

化合物3

根据使用的命名系统，化合物3是16-{4-[(2-氨基乙基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。将中间体2(150mg，0.31mmol)溶解于DMF-CH₃CN(1-4，7mL)中。添加三乙胺(94mg，0.93mmol)和2，4，6-三丙基-1，3，5，2，4，6-三氧杂三磷杂环己烷(phosphorinane)-2，4，6-三氧化物存于乙酸乙酯中的溶液(592μL，0.93mmol)，并将混合物在室温下搅拌15分钟。取出1/6部分，并添加到1，2-二氨基乙烷(19mg，0.31mmol)中，并将反应混合物在室温下搅拌1.5小时。在制备型HPLC ACE-C8柱上用存于0.1％TFA水溶液中的甲醇梯度进行纯化，得到24mg(72％)暗蓝色黑色玻璃状物。通过HPLC测定纯度为93％。MS(ESI)[M+]=533。最大吸光度在586nm。

实例9：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物4)的制备

制备以下化合物：

化合物4

根据使用的命名系统，化合物4是16-{4-[(3-氨基丙基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物3的程序相同的程序来制备，但是用1，3-二氨基丙烷代替1，2-二氨基乙烷(23mg，0.31mmol)，获得25mg(73％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]=547。最大吸光度在584nm。

实例10：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物5)的制备

制备以下化合物：

化合物5

根据使用的命名系统，化合物5是16-{4-[(2，2-二甲氧基乙基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物3的程序相同的程序来制备，但是用2，2-二甲氧基乙-1-胺代替1，2-二氨基乙烷(33mg，0.31mmol)，获得26mg(73％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]=578。最大吸光度在584nm。

实例11：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物6)的制备

制备以下化合物：

化合物6

根据使用的命名系统，化合物6是16-{4-[(6-氨基己基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物3的程序相同的程序来制备，但是用1，6-二氨基己烷代替1，2-二氨基乙烷(36mg，0.31mmol)，获得32mg(88％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]=589。最大吸光度在586nm。

实例12：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物7)的制备

制备以下化合物：

化合物7

根据使用的命名系统，化合物7是16-[4-({[4-(氨基甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)苯基]-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物3的程序相同的程序来制备，但是用[4-(氨基甲基)苯基]甲胺代替1，2-二氨基乙烷(42mg，0.31mmol)，获得36mg(96％产率)产物。通过HPLC测定纯度为99％。MS(ESI)[M+]＝609。最大吸光度在590nm。

实例13：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物8)的制备

制备以下化合物：

化合物8

根据使用的命名系统，化合物8是16-{4-[(4-侧氧基哌啶-1-基)羰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物3的程序相同的程序来制备，但是用哌啶-4-酮代替1，2-二氨基乙烷(31mg，0.31mmol)，获得28mg(79％产率)产物。通过HPLC测定纯度为82％。MS(ESI)[M+]＝572。最大吸光度在588nm。

实例14.3-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物9)的制备

制备以下化合物：

化合物9

根据使用的命名系统，化合物9是16-{3-[(2-氨基乙基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物3的程序相同的程序来制备，但是用中间体3代替1，2-二氨基乙烷作为酸且以1，2-二氨基乙烷(19mg，0.31mmol)作为胺，获得20mg(60％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]＝533。最大吸光度在586nm。

实例15：3-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物10)的制备

制备以下化合物：

化合物10

根据使用的命名系统，化合物10是16-{3-[(3-氨基丙基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物9的程序相同的程序来制备，但是用1，3-二氨基丙烷代替1，2-二氨基乙烷(23mg，0.31mmo1)，获得19mg(56％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]＝547。最大吸光度在584nm。

实例16：3-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物11)的制备

制备以下化合物：

化合物11

根据使用的命名系统，化合物11是16-{3-[(6-氨基己基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物9的程序相同的程序来制备，但是用1，6-二氨基己烷代替1，2-二氨基乙烷(36mg，0.31mmol)，获得27mg(74％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]=589。最大吸光度在584nm。

实例17：3-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物12)的制备

制备以下化合物：

化合物12

根据使用的命名系统，化合物12是16-[3-({[4-(氨基甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)苯基]-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物9的程序相同的程序来制备，但是用[4-(氨基甲基)苯基]甲胺代替1，2-二氨基乙烷(42mg，0.31mmol)，获得32mg(86％产率)产物。通过HPLC测定纯度为100％。MS(ESI)[M+]=609。最大吸光度在587nm。

实例18：3-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物13)的制备

制备以下化合物：

化合物13

根据使用的命名系统，化合物13是16-{3-[(4-侧氧基哌啶-1-基)羰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物9的程序相同的程序来制备，但是用哌啶-4-酮代替1，2-二氨基乙烷(36mg，0.31mmol)，获得34mg(96％产率)产物。通过HPLC测定纯度为80％。MS(ESI)[M+]=572。最大吸光度在584nm。

实例19：3-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物14)的制备

制备以下化合物：

化合物14

根据使用的命名系统，化合物14是16-{3-[(2，2-二甲氧基乙基)氨甲酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且使用与用于制备化合物9的程序相同的程序来制备，但是用2，2-二甲氧基乙-1-胺代替1，2-二氨基乙烷(33mg，0.31mmol)，获得29mg(81％产率)产物。通过HPLC测定纯度为98％。MS(ESI)[M+]=578。最大吸光度在588nm。

实例20：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物15)的制备

制备以下化合物：

化合物15

根据使用的命名系统，化合物15是16-{4-[4-(氨基甲基)苯基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。将中间体5(236mg，0.35mmol)溶解于4mLDCM/TFA(3/1)中。30分钟后，用空气吹出溶剂。在ACE-C8(150×30mm)柱上用存于0.1％TFA中的20％到100％甲醇洗脱来纯化粗产物。蒸发纯净流份，得到115mg(％产率)带有绿色调的深蓝色/红色固体。通过HPLC测定纯度为98％。MS(ESI)[M+]＝552。最大吸光度在578nm。

实例21：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物16)的制备

制备以下化合物：

化合物16

根据使用的命名系统，化合物16是16-[4-(2-氨基-4-甲基苯基)苯基]-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。将中间体4(152mg，0.29mmo1)和5-甲基-2-(4，4，5，5-四甲基)-(1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-苯基胺(135mg，0.58mmol)溶解于乙醇(10mL)中，并用2M K₂CO₃(434μL，0.87mmol)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)DCM(11mg，0.015mmol)处理。将反应混合物在65℃下加热1小时。粗产物经由硅藻土过滤，并在ACE-C8(150×30mm)柱上用存于0.1％TFA中的60％到100％甲醇洗脱进行纯化，蒸发纯净流份，得到80mg(50％产率)带有绿色调的深蓝色/红色固体。通过HPLC测定纯度为90％。MS(ESI)[M+]=552。最大吸光度在580nm。

实例22：4-羧基罗丹明三氟乙酸盐(化合物17)的制备

制备以下化合物：

化合物17

根据使用的命名系统，化合物17是16-[4-(4-乙酰基苯基)苯基]-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。将中间体4(152mg，0.29mmol)和4-乙酮苯基硼酸(95mg，0.58mmol)溶解于乙醇(10mL)中，并用2M K₂CO₃(434μL，0.87mmol)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)DCM(11mg，0.015mmol)处理。将反应混合物在65℃下加热1小时。粗产物经由硅藻土过滤，并在ACE-C8(150×30mm)柱上用存于0.1％TFA中的60％到100％甲醇洗脱进行纯化，蒸发纯净流份，得到54mg(33％产率)带有绿色调的深蓝色/红色固体。通过HPLC测定纯度为92％。MS(ESI)[M+]=565。最大吸光度在580nm。

实例23：2-磺基罗丹明二氯化物(化合物18)的制备、纯化和结晶

制备以下化合物：

化合物18

根据使用的命名系统，化合物18是16-{2-[(6-氨基己基)氨磺酰基]苯基}-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的2，2，2-三氟乙酸盐，且如下来制备。

合成步骤1：将8-羟基久洛尼定(200g)与2-甲酰基苯-1-磺酸钠(110g)的混合物添加到1.8L在150℃下预加热的60％H2SO4水溶液中，并搅拌4小时。在通过LC-MS监测反应结束之后，将反应混合物冷却到0℃。缓慢地添加60％氢氧化钠(水性)，直到反应混合物的pH值达到2(产物沉淀)。将硅藻土(800g)添加到含有经沉淀粗产物的反应混合物中，并过滤反应混合物。将含有硅藻土的所得固体用甲苯(3×500mL)洗涤，并添加到无水乙醇(4L)中，并在搅拌下在60℃下加热0.5小时。随后过滤反应混合物。在真空中浓缩滤液且随后与甲苯共蒸发，以除去痕量水并得到暗蓝色固体状粗罗丹明磺酸中间体(270g)。

合成步骤2：将来自步骤1的粗罗丹明磺酸中间体(100g，0.19mol)溶解于溶剂二氯甲烷(500mL)与DMF(13.9g)的混合物中。将反应溶液冷却到0℃，并逐滴添加草酰氯(48.1g，0.379mol)。将反应混合物在0℃下再搅拌2小时。随后在真空中浓缩反应混合物，并向所得残留物中重复添加四次甲苯(100mL)，并蒸发。粗罗丹明磺酰氯中间体在减压下干燥6h后直接用于下一步骤中。

合成步骤3：将己-1，6-二胺(176g，1.52mol)存于二氯甲烷(800mL)中的溶液冷却到0℃。逐滴添加步骤2中获得的所有粗罗丹明磺酰氯中间体存于二氯甲烷(500mL)中的溶液，同时持续冷却到0℃。将反应混合物在0℃下再搅拌4小时。在用薄层色谱(TLC)控制反应完成后，通过经由硅藻土纸过滤来骤冷反应混合物，并在真空中将滤液蒸发四次，其中每次均添加甲苯(150mL)。在减压下干燥所得固体。

纯化：通过硅胶色谱进行的纯化是使用溶剂二氯甲烷与MeOH的混合物(梯度从15∶1到1∶1)来实施，用HCl气体使所述混合物饱和。第二硅胶色谱获得12.5g绿色-黑色固体状2-磺基罗丹明二氯化物(化合物18)(通过HPLC测定纯度大于98％)。对于所有3个步骤，总产率为11.0％。

结晶：将2.5g约88％纯度的2-磺基罗丹明二氯化物(化合物18)溶解于乙醇(约50mL)中，并添加乙酸乙酯(约150mL)，这使得粘性固体沉淀。上清液用硅胶(5g)处理并过滤。用1M HCl(200mL)沥滤二氧化硅，随后使用所得紫色溶液来溶解前一步骤中用乙酸乙酯沉淀的粘性固体。将溶液加热到接近沸腾，并用温盐水(400mL，在室温下饱和的NaCl水溶液)处理。使溶液冷却到室温且观察到少量沉淀。通过小心地添加固体NaHCO₃将pH从-0.2调节到+0.3。将混合物加热到沸腾，溶液的经冷却分液经分析pH为0.0。向温溶液中添加固体NaHCO₃，直到经冷却试样显示pH为0.1。使悬浮液冷却到室温，两天后，上清液经分析pH为0.0。向混合物中小心地添加固体NaHCO₃，未观察到任何更多沉淀(使用红色灯！)。经由离心来分离固体，并弃除上清液(pH 0.0)。将固体悬浮于相同体积的先前沉淀时所用的20％NaCl水溶液中并离心，弃除上清液(pH 0.5)。再次将固体悬浮于相等体积中，离心并弃除上清液(pH 0.55)。第二上清液并非无色的，且停止洗涤程序。将固体在真空加热炉中干燥得到1.8g金绿色物质，经由斯塔金(Syntagon)的HPLC方法测得纯度为96％。在2-磺基罗丹明的乙酸盐(例如三氟乙酸盐，如在化合物1中)代替化合物18的二氯化物盐的情况下可使用上文的结晶方法。

图6是以400nm/分钟的扫描速度从200nm扫描到800nm时化合物18的UV吸收光谱。最大UV吸收在586nm。图7是化合物18的荧光发射扫描且图8是荧光激发扫描。图9是化合物18的三维荧光扫描，其中EM是发射波长且EX是激发波长。激发(max)(其为最大吸光度波长)是566nm，且发射(max)(其为最大发射强度时的波长)是618nm。

实例24：化合物18重排以形成同分异构体(化合物19)

制备以下化合物：

化合物19

化合物18可经历重排以形成同分异构体化合物19，其可以与其母体化合物化合物18和本发明的其它新颖罗丹明染料相同的方式用于与其它分子(例如高分子)形成结合物，以形成单一同分异构结合产物。根据使用的命名系统，化合物19是16-[N-(6-铵基(azaniumyl)己基)苯磺酰胺基]-3-氧杂-9λ⁵，23-二氮杂七环[17.7.1.1^5，9.0^2，17.0^4，15.0^23，27.0^13，28]二十八-1(27)，2(17)，4，9(28)，13，15，18-七烯-9-鎓的二氯化物，且如下来制备。将二氯化物盐形式的化合物18(1.16g，1.6mmol)溶解于甲醇(30mL)中。在室温下，向2-SHR溶液中逐滴添加氢氧化钠水溶液(1.0M，16mL)。将所得无色溶液在室温下搅拌30min，且随后与乙醇(10mL)和甲苯(10mL)一起蒸发得到无色固体。将固体溶解于甲醇(20mL)中，并添加盐酸水溶液(1.0M，16mL)，重新形成深红色。蒸发混合物，并用二氧化硅色谱用存于含有0.1％浓盐酸的氯仿中的甲醇(10％到12.5％)洗脱来纯化固体残留物。将所选纯净流份与乙醇和甲苯一起蒸发，在高度真空中干燥过夜，得到120mg金属绿色固体状2-SHR-iso(11％产率)。通过HPLC测定纯度为97.8％。MS(ESI)[M+]＝625。最大吸光度在586nm。

同样，化合物1或2-磺基罗丹明的任一其它盐可经历与化合物18相同的重排以形成对应盐的对应同分异构产物。

实例25：化合物15和羧甲基化葡聚糖(CM-葡聚糖)的结合物的合成

在搅拌下，向化合物15(Mw：665.77g/mol，n：0.038mmol，m：25mg)溶解于二甲基亚砜(DMSO)(3ml)中的溶液中添加来自储备溶液的冷乙醛(118μl)。15分钟后，在快速搅拌下添加CM-葡聚糖150(300mg)存于蒸馏水(3ml)中的溶液，随后添加环己基-异腈(Mw：109.1g/mol，n：0.21mmol，m：22.9mg，δ：0.878g ml，V：26.5μL)。用数滴1M HCl水溶液将pH调节到5.9。将反应混合物搅拌4小时。

4小时后，pH增加到6.02。添加乙醇胺(Mw：61.08g/mol，n：3.34mmol，m：0.204g，δ：1.02，V：200μL)，并在搅拌下反应90分钟。

添加乙醇胺后90分钟，pH增加到11.2。添加饱和氯化钠(0.5ml)后，在快速搅拌下将反应混合物缓慢地倾倒到乙醇(96％，50ml)中，然后使沉淀的蓝色固体沉降过夜。轻轻倒出上清液，并在玻璃过滤漏斗(p3)上过滤残留物。沉淀用乙醇(3×10ml)洗涤并过滤。产物再次沉淀，直到没有未反应的染料。将其在真空中在60℃下干燥15小时。产量是225mg。

激发(max)是587nm；发射(max)是608。

实例26：化合物18与CM-葡聚糖的结合物的合成

在搅拌下，向化合物18(氯化物盐，Mw：697.7g/mol，n：0.136mmol，m：95.4mg)溶解于DMSO(14mL)中的溶液中添加来自储备溶液的冷乙醛(391μL)。15分钟后，在快速搅拌下添加CM-葡聚糖150(1.8g)存于蒸馏水(19.2mL)中的溶液，随后添加环己基-异腈(Mw：109.1g/mol，n：1.4mmol，m：152.6mg，δ：0.878g/mL，V：172μL)。用数滴1M HCl水溶液将pH调节到5。将反应混合物搅拌过夜。

添加乙醇胺(Mw：61.08g/mol，n：6.64mmol，m：0.40g，δ：1.02，V：400μL)，并在搅拌下反应60分钟。

添加乙醇胺后90分钟，pH增加到11.2。添加饱和氯化钠(0.5ml)后，在快速搅拌下将反应混合物缓慢地倾倒到乙醇(96％，50ml)中，然后使沉淀的蓝色固体沉降过夜。

轻轻倒出上清液，并在玻璃过滤漏斗(p3)上过滤残留物。沉淀用乙醇(3×10ml)洗涤并过滤。产物再次沉淀，直到没有未反应的染料。将其在真空中在60℃下干燥15小时。产量是1.3g。

图10是以400nm/分钟的扫描速度从200nm扫描到800nm时结合物的UV吸收光谱。最大UV吸收在589.5nm。图11是结合物的荧光发射扫描且图12是荧光激发扫描。图13是结合物的三维荧光扫描，其中EM是发射波长且EX是激发波长。

激发(max)是589nm；发射(max)是608nm。

实例27：化合物3与CM-葡聚糖的结合物的合成

在搅拌下，向化合物3(TFA盐，Mw：646.7g/mol，n：0.037mmol，m：24mg)溶解于DMSO(3mL)中的溶液中添加来自储备溶液的冷乙醛(118μL)。15分钟后，在快速搅拌下添加CM-葡聚糖150(300mg)存于蒸馏水(3mL)中的溶液，随后添加环己基-异腈(Mw：109.1g/mol，n：0.21mmol，m：22.9mg，δ：0.878g/mL，V：26.5μL)。用数滴1M HCl水溶液将pH调节到5。将反应混合物搅拌4小时。

添加乙醇胺(Mw：61.08g/mol，n：6.64mmol，m：0.20g，δ：1.02，V：200μL)，并在搅拌下反应60分钟。添加饱和氯化钠(0.5ml)后，在快速搅拌下将反应产物缓慢地倾倒到乙醇(96％，50ml)中，然后使沉淀的蓝色固体沉降过夜。

轻轻倒出上清液，并在玻璃过滤漏斗(p3)上过滤残留物。沉淀用乙醇(3×10ml)洗涤并过滤。产物再次沉淀，直到没有未反应的染料。将其在真空中在60℃下干燥15小时。产量是339mg。

激发(max)是588nm；发射(max)是609nm。

实例28：化合物16与CM-葡聚糖的结合物的合成

在搅拌下，向化合物16(TFA盐，Mw：665.7g/mol，n：0.038mmol，m：25mg)溶解于DMSO(3mL)中的溶液中添加来自储备溶液的冷乙醛(118μL)。15分钟后，在快速搅拌下添加CM-葡聚糖150(300mg)存于蒸馏水(3mL)中的溶液，随后添加环己基-异腈(Mw：109.1g/mol，n：0.21mmol，m：22.9mg，δ：0.878g/mL，V：26.5μL)。用数滴1M HCl水溶液将pH调节到5。将反应混合物搅拌4小时。

添加乙醇胺(Mw：61.08g/mol，n：6.64mmol，m：0.20g，δ：1.02，V：200μL)，并在搅拌下反应60分钟。添加饱和氯化钠(0.5ml)后，在快速搅拌下将反应产物缓慢地倾倒到乙醇(96％，50ml)中，然后使沉淀的蓝色固体沉降过夜。轻轻倒出上清液，并在玻璃过滤漏斗(p3)上过滤残留物。沉淀用乙醇(3×10ml)洗涤并过滤。产物再次沉淀，直到没有未反应的染料。将其在真空中在60℃下干燥15小时。产量是167mg。

激发(max)是585nm；发射(max)是606nm。

参考文献

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Claims

1.一种组合物，其包含新颖罗丹明(rhodamine)染料或其盐，其中所述罗丹明染料仅含有一个单一官能团且其中所述罗丹明染料能够经由所述官能团与另一分子结合以形成单一同分异构结合产物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述新颖罗丹明染料含有久洛尼定(julolidine)结构元素。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述官能团选自由下列组成的群组：胺、醇、异氰酸酯、异硫氰酸酯、硫醇和羧酸。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述另一分子是高分子。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述高分子选自由下列组成的群组：聚合物、蛋白质、葡聚糖、纤维素、碳水化合物、脂质和核酸。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述蛋白质是抗体。

7.根据权利要求5所述的组合物，其中所述核酸是DNA或RNA。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐或氯化物。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

11.一种组合物，其包含具有以下一般结构的新颖罗丹明染料或其盐：

其中R1、R2、R3、R4和R5可为H或任一基团，且其中仅R1、R2、R3、R4或R5中的一者含有单一官能团，且其中所述罗丹明染料能够经由所述官能团与另一分子结合以形成单一同分异构结合产物。

12.一种组合物，其包含具有以下通式的具有单一官能团的新颖罗丹明染料：

其中Ar是芳基，且R1和/或R2形成在R1或R2上含有适于与另一分子结合的单一官能团的间隔基团。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述官能团选自由下列组成的群组：胺、异氰酸酯、异硫氰酸酯、硫醇和羧酸。

14.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料呈盐形式。

15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

16.根据权利要求14所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐或氯化物。

17.根据权利要求14所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

18.根据权利要求12所述的组合物，其中所述间隔基团选自由下列组成的群组：氢、烷基、芳基、酰胺、烷基磺酰胺、烷基醚和烷基酰胺。

19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述烷基具有1到20的碳链长度。

20.根据权利要求12所述的组合物，其中R1和R2连接形成环状结构。

21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述环状结构是

22.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

25.根据权利要求23所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐或氯化物。

26.根据权利要求23所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

27.根据权利要求22所述的组合物，其经历重排以形成具有以下结构的同分异构体：

28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述盐是二氯化物。

30.根据权利要求27所述的组合物，其中所述罗丹明染料能够经由氨基官能团与另一分子结合以形成单一同分异构结合产物。

31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述另一分子是高分子。

32.根据权利要求31所述的组合物，其中所述高分子选自由下列组成的群组：聚合物、蛋白质、葡聚糖、纤维素、碳水化合物、脂质和核酸。

33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述蛋白质是抗体。

34.根据权利要求32所述的组合物，其中所述核酸是DNA或RNA。

35.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

36.根据权利要求35所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

37.根据权利要求36所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

38.根据权利要求36所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

39.根据权利要求36所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

40.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

41.根据权利要求40所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

42.根据权利要求41所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

43.根据权利要求41所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

44.根据权利要求41所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

45.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

46.根据权利要求45所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

47.根据权利要求46所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

48.根据权利要求46所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

49.根据权利要求46所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

50.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

51.根据权利要求50所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

52.根据权利要求51所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

53.根据权利要求51所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

54.根据权利要求51所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

55.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

56.根据权利要求55所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

57.根据权利要求56所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

58.根据权利要求56所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

59.根据权利要求56所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

60.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

61.根据权利要求60所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

62.根据权利要求61所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

63.根据权利要求61所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

64.根据权利要求61所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

65.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

66.根据权利要求65所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

67.根据权利要求66所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

68.根据权利要求66所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

69.根据权利要求66所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

70.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

71.根据权利要求70所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

72.根据权利要求71所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

73.根据权利要求71所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

74.根据权利要求71所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

75.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

76.根据权利要求75所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

77.根据权利要求76所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

78.根据权利要求76所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

79.根据权利要求76所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

80.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

81.根据权利要求80所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

82.根据权利要求81所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

83.根据权利要求81所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

84.根据权利要求81所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

85.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

86.根据权利要求85所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

87.根据权利要求86所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

88.根据权利要求86所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

89.根据权利要求86所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

90.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

91.根据权利要求90所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

92.根据权利要求91所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

93.根据权利要求91所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

94.根据权利要求91所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

95.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

96.根据权利要求95所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

97.根据权利要求96所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

98.根据权利要求96所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

99.根据权利要求96所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

100.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

101.根据权利要求100所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

102.根据权利要求101所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

103.根据权利要求101所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

104.根据权利要求101所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

105.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

106.根据权利要求105所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

107.根据权利要求106所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

108.根据权利要求106所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

109.根据权利要求106所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

110.根据权利要求12所述的组合物，其中所述罗丹明染料具有以下结构：

111.根据权利要求110所述的组合物，其中所述罗丹明染料是盐。

112.根据权利要求111所述的组合物，其中所述盐选自由下列组成的群组：三氟乙酸盐、氯化物、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。

113.根据权利要求111所述的组合物，其中所述盐是三氟乙酸盐。

114.根据权利要求111所述的组合物，其中所述盐是医药上可接受的盐。

115.一种组合物，其包含由使根据权利要求1、8或12所述的组合物与另一分子结合而形成的结合产物。

116.根据权利要求115所述的组合物，其中所述另一分子是高分子。

117.根据权利要求116所述的组合物，其中所述高分子选自由下列组成的群组：聚合物、蛋白质、葡聚糖、纤维素、碳水化合物、脂质和核酸。

118.根据权利要求116所述的组合物，其中所述蛋白质是抗体。

119.根据权利要求116所述的组合物，其中所述核酸是DNA或RNA。