CN103076450A - 一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法，试纸条由PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫及样品垫，PVC衬板设置在最底部，同时PVC衬板上部中段设置有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上部左端设置有吸收垫，硝酸纤维素膜上部右端设置有金标垫，金标垫上部右端设置有样品垫，硝酸纤维素膜左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线，硝酸纤维素膜右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线，金标垫上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白，该试纸条根据检测线和质控线是否出现色带来确定血清中是否存在副猪嗜血杆菌病的抗体，可检测所有血清型副猪嗜血杆菌感染产生的抗体，检测简便、快速。

Description

一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法。

背景技术

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起猪的以纤维素性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎为特征的传染病。该病在全世界均有发生，通常见于5～8周龄的猪，发病率一般在10％～15％，严重时死亡率可达50％。近年来此病在规模化猪场的感染率和所致的死亡率日益增高，已成为危害养猪业较严重的细菌性疾病之一。

副猪嗜血杆菌病是世界性分布的条件性疾病，许多猪场有该病的存在。近年来我国养猪业发展很快，而饲养管理技术水平却相对滞后，饲养环境条件恶劣，疫病日益复杂，猪群健康水平下降，大多处于亚健康状态，这就为本病的发生与流行创造了条件。及时、准确地诊断出该病以便采取相应的措施，是成功防制副猪嗜血杆菌病的关键。副猪嗜血杆菌的血清型众多，有15个血清型，还有20％分离株无法分型，所以给副猪嗜血杆菌病的诊断带了很大的困难，尤其是血清学诊断。

随着分子生物学技术的发展，分子技术在细菌诊断领域广泛的应用，分子诊断在副猪嗜血杆菌的诊断中得到了广泛的应用，如基因限制性片段长度多态性分型(RFLP)技术(de la 2003；del Rio 2006等)、限制性内切酶技术(ERP)(Smart 1988)、肠杆菌基因间保守重复序列(ERIC)(Rafiee 2000)、单基因座序列分型技术和多为点序列分型(MLST)(Olvera 2006)，由于这些诊断方法需要专业的设备和技术，所以在临床上很难推广应用。

Miniats(1991)等用副猪嗜血杆菌的煮沸物或超声波破碎物致敏新鲜绵羊红细胞建立了IHA和用副猪嗜血杆菌的煮沸物或热酚水透析物建立了ELISA诊断方法；石碧(2007)等用副猪嗜血杆菌血清5型荚膜多糖建立了IHA和ELISA诊断方法，检测效果明显优于前者。IHA和ELISA是目前国内外学者探索的主要副猪嗜血杆菌病抗体检测方法，所不同的是抗原的制备方法不同。但是这些诊断方法均具有一定的局限性，全菌超破抗原成分复杂，缺乏特异性，荚膜多糖抗原抗原虽有很好的特异性，但只能检测相应的血清型的单一抗体。

发明内容

本发明提供了一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法，旨在解决现有技术提供的诊断副猪嗜血杆菌的方法，需专业设备和技术，并且这些诊断方法应用的局限性较大，无法满足副猪嗜血杆菌诊断的最大化需求的问题。

本发明的目的在于提供一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条，该试纸条包括：PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫、样品垫，所述PVC衬板设置在最底部，同时PVC衬板上部中段设置有所述硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上部左端设置有所述吸收垫，所述硝酸纤维素膜上部右端设置有所述金标垫，所述金标垫上部右端设置有所述样品垫。

进一步，所述硝酸纤维素膜左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线，所述硝酸纤维素膜右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线，所述金标垫上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白。

进一步，该试纸条可以检测所有血清型的副猪嗜血杆菌感染产生的抗体。

本发明的另一目的在于提供一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

制备胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白；

制备胶体金垫及含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜，组装构成试纸条。

进一步，制备胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白的实现方法为：

将制备的胶体金用0.1mol/L KCO3调整pH值为7.0～7.8；

用目测法确定胶体金与待标记蛋白应标记的最佳量，得到最佳标记量为2.4mg/100ml，在胶体金溶液中按2.4mg/100ml加入纯化复性的His-OppA融合蛋白，静置30min；

将胶体金经2500r/min离心30min，除去沉淀物，得上清液；

将上清液经10000r/min离心30min，弃去上清收集沉淀物，将沉淀物悬浮于1/10倍初始胶体金体积的金胶缓冲液中，置4℃保存。

进一步，所述金胶缓冲液为含5‰蔗糖、1％BSA、1‰PEG20000、1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，0.02mol/L、pH7.4。

进一步，制备含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的实现方法为：

构建重组原核表达载体Pet-30a-OppA，在大肠杆菌中诱导表达OPPA重组蛋白，用Ni-柱纯化出His-OppA蛋白，用pH为7.2、0.15M的磷酸盐缓冲液分别将纯化复性的His-OppA融合蛋白和抗副猪嗜血杆菌IgG浓度调至2.0g/l和1.4g/l工作浓度，分别按0.90l/cm设置喷膜，将蛋白和抗体喷涂于硝酸纤维素膜上，形成检测线与质控线，37℃烘干或室温自然干燥后，置于封闭液中浸泡10min，取出后室温自然干燥，保存备用。

进一步，所述封闭液为含2.5％犊牛血清，1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，0.02mol/L、pH7.4。

进一步，制备胶体金垫的实现方法为：取玻璃纤维纸，按30l/cm将纯化复性的His-OppA融合蛋白喷涂于玻璃纤维纸上，干燥后贮存备用。

进一步，组装构成试纸条的实现方法为：

在PVC背衬板上由上至下分别将样品垫、胶体金垫、包括检测线及质控线的硝酸纤维素膜、吸收垫按顺序装配，切割成4mm宽的条状，即制成山羊接触传染性胸膜肺炎抗体检测试纸条；

其中，硝酸纤维素膜黏附于PVC衬板的底板上，长30mm；硝酸纤维素膜上部左端黏附吸收垫，长25mm，并与硝酸纤维素膜重叠2mm；金标垫长5mm，并且与硝酸纤维素膜重叠2mm；样品垫长20mm，并且与金标垫重叠2mm；用切条机切割成4mm宽的条形带，密封干燥保存。

本发明提供的检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法，试纸条由PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫及样品垫，PVC衬板设置在最底部，同时PVC衬板上部中段设置有所述硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上部左端设置有吸收垫，硝酸纤维素膜上部右端设置有金标垫，金标垫上部右端设置有样品垫，硝酸纤维素膜左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线，硝酸纤维素膜右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线，金标垫上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白，该试纸条根据检测线和质控线是否出现色带来确定血清中是否存在副猪嗜血杆菌病的抗体，并可检测所有血清型的副猪嗜血杆菌感染产生的抗体，检测过程简便、快速、准确，实用性强，具有较强的推广与应用价值。

附图说明

图1是本发明实施例提供的检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的结构示意图；

图2是本发明实施例提供的试纸条阴性结果的示意图；

图3是本发明实施例提供的试纸条阳性结果的示意图；

图4是本发明实施例提供的检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的制备方法的实现流程图。

1、PVC衬板；2、硝酸纤维素膜；3、吸收垫；4、金标垫；5、样品垫；6、质控线；7、检测线。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定发明。

图1示出了本发明实施例提供的检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的结构。为了便于说明，仅示出了与本发明相关的部分。

该试纸条包括：PVC衬板1、硝酸纤维素膜2、吸收垫3、金标垫4、样品垫5，PVC衬板1设置在最底部，同时PVC衬板1上部中段设置有硝酸纤维素膜2，硝酸纤维素膜2上部左端设置有吸收垫3，硝酸纤维素膜2上部右端设置有金标垫4，金标垫4上部右端设置有样品垫5。

在本发明实施例中，硝酸纤维素膜2左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线6，硝酸纤维素膜2右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线7，金标垫4上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白。

在本发明实施例中，该试纸条可以检测所有血清型的副猪嗜血杆菌感染产生的抗体。图2是本发明实施例提供的试纸条阴性结果的示意图，图3是本发明实施例提供的试纸条阳性结果的示意图。

图4示出了本发明实施例提供的检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的制备方法的实现流程。

该制备方法包括以下步骤：

在步骤S401中，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

在步骤S402中，制备胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白；

在步骤S403中，制备胶体金垫及含有检测线7和质控线6的硝酸纤维素膜2，组装构成试纸条。

在本发明实施例中，制备胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白的实现方法为：

将制备的胶体金用0.1mol/L KCO3调整pH值为7.0～7.8；

用目测法确定胶体金与待标记蛋白应标记的最佳量，得到最佳标记量为2.4mg/100ml，在胶体金溶液中按2.4mg/100ml加入纯化复性的His-OppA融合蛋白，静置30min；

将胶体金经2500r/min离心30min，除去沉淀物，得上清液；

将上清液经10000r/min离心30min，弃去上清收集沉淀物，将沉淀物悬浮于1/10倍初始胶体金体积的金胶缓冲液中，置4℃保存。

在本发明实施例中，金胶缓冲液为含5‰蔗糖、1％BSA、1‰PEG20000、1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，0.02mol/L、pH7.4。

在本发明实施例中，制备含有检测线7和质控线6的硝酸纤维素膜2的实现方法为：

构建重组原核表达载体Pet-30a-OppA，在大肠杆菌中诱导表达OPPA重组蛋白，用Ni-柱纯化出His-OppA蛋白，用pH为7.2、0.15M的磷酸盐缓冲液分别将纯化复性的His-OppA融合蛋白和抗副猪嗜血杆菌IgG浓度调至2.0g/l和1.4g/l工作浓度，分别按0.90l/cm设置喷膜，将蛋白和抗体喷涂于硝酸纤维素膜2上，形成检测线7与质控线6，37℃烘干或室温自然干燥后，置于封闭液中浸泡10min，取出后室温自然干燥，保存备用。

在本发明实施例中，封闭液为含2.5％犊牛血清，1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，0.02mol/L、pH7.4。

在本发明实施例中，制备胶体金垫的实现方法为：取玻璃纤维纸，按30l/cm将纯化复性的His-OppA融合蛋白喷涂于玻璃纤维纸上，干燥后贮存备用。

在本发明实施例中，组装构成试纸条的实现方法为：

在PVC背衬板上由上至下分别将样品垫5、胶体金垫、包括检测线7及质控线6的硝酸纤维素膜2、吸收垫3按顺序装配，切割成4mm宽的条状，即制成山羊接触传染性胸膜肺炎抗体检测试纸条；

其中，硝酸纤维素膜2黏附于PVC衬板1的底板上，长30mm；硝酸纤维素膜2上部左端黏附吸收垫3，长25mm，并与硝酸纤维素膜2重叠2mm；金标垫4长5mm，并且与硝酸纤维素膜2重叠2mm；样品垫5长20mm，并且与金标垫4重叠2mm；用切条机切割成4mm宽的条形带，密封干燥保存。

下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足之处，提供一种胶体金免疫层法检测副猪嗜血病抗体的试纸条及制备方法，包括副猪嗜血杆菌寡肽透明质酸酶ABC转运蛋白OppA体外表达、分离纯化和胶体金免疫层析法检测副猪嗜血杆菌15个血清抗体的试纸条，构建重组原核表达载体pET-30a-OppA，在大肠杆菌BL21中诱导表达OPPA重组蛋白，用Ni-柱纯化His-OppA融合蛋白，用不同浓度的尿素复性His-OppA融合蛋白。将纯化复性的His-OppA融合蛋白和抗副猪嗜血杆菌IgG喷在硝酸纤维膜上，分别作为检测线7(T线)和质控线6(C线)。将胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白喷在玻璃纤维上制成金标垫4，从而组装成胶体金试纸条。根据检测线7和质控线6是否出现色带来确定血清中是否存在副猪嗜血杆菌病的抗体。用本发明的试纸条检测，简便、快速、准确，适用于基层。

本发明的技术问题通过下述技术方案解决：一种胶体金免疫层析法检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法，包括副猪嗜血杆菌寡聚透明质酸酶转运蛋白OppA体外表达、分离纯化和胶体金免疫层析方检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条，其特征是：构建重组原核表达载体Pet-30a-OppA，在大肠杆菌中诱导表达OPPA重组蛋白，用Ni-柱纯化出His-OppA蛋白，将纯化复性的His-OppA融合蛋白和抗副猪嗜血杆菌IgG点样于硝酸纤维膜上，分别作为检测线7(T线)和质控线6(C线)，将胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白吸附于玻璃纤维制成金标垫4。

一种胶体金免疫层析法检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条及其制备方法，PCR法从副猪嗜血杆菌基因组DNA中成功扩增出oppA全长基因，构建了oppA原核表达载体，重组蛋白主要以不溶性包涵体在大肠杆菌中表达，表达的重组蛋白能与副猪嗜血杆菌15个标准菌株阳性血清发生反应；经尿素变性和复性后，用Ni-柱纯化法获得单一的His-OppA融合蛋白条带，纯化的重组蛋白具有良好的免疫反应性，用纯化复性的His-OppA融合蛋白作为抗原包被硝酸纤维膜，建立了检测副猪嗜血杆菌血清抗体的胶体金免疫层析法。

一种胶体金免疫层析法检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条，由PVC衬板1、硝酸纤维素膜2、吸收垫3、金标垫4、样品垫5部分组成，硝酸纤维素膜2左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线6，右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线7；金标垫4上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白。

金标垫4上喷的胶体金标记的OppA抗原蛋白为纯化复性的His-OppA融合蛋白，检测线7喷有的纯化复性的His-OppA融合蛋白，试纸条可以检测所有血清型的副猪嗜血杆菌感染产生的抗体。

一种胶体金免疫层析法检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条，由以下步骤制备而成：

a、胶体金的制备：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

b、胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白：首先将a步制备的胶体金用0.1mol/L KCO3调整pH值为7.0～7.8；然后用目测法确定胶体金与待标记蛋白应标记的最佳量，得到最佳标记量为2.4mg/100ml，在胶体金溶液中按2.4mg/100ml加入纯化复性的His-OppA融合蛋白，静置30min；将上述胶体金经2500r/min离心30min，除去沉淀物，得上清液；将上清液经10000r/min离心30min，弃去上清收集沉淀物，将沉淀物悬浮于1/10倍初始胶体金体积的金胶缓冲液中，置4℃保存；

c、组装抗体检测试纸条步骤：

1)硝酸纤维素膜2黏附于PVC衬板1底板上，长30mm；

2)黏附吸收垫3，长25mm，并与硝酸纤维素膜2重叠2mm；

3)5mm长的金标垫4与硝酸纤维素膜2重叠2mm；

4)样品垫5长20mm与金标垫4重叠2mm；

5)用切条机切割成4mm宽的条形带，密封干燥保存。

如图1所示，一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条由五个部分组成：PVC衬板1、硝酸纤维素膜2、吸收垫3、金标垫4、样品垫5，PVC衬板1设在最底部，PVC衬板1上部中段设有硝酸纤维素膜2，硝酸纤维素膜2上部左端贴有吸收垫3，硝酸纤维素膜2上部右端设有金标垫4，金标垫4的上部右端设有样品垫5。

该试纸条的制备按如下操作：

胶体金的制备：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白：首先将制备的胶体金用0.1mol/L KCO3调整pH值为7.0～7.8；然后用目测法确定胶体金与待标记蛋白应标记的最佳量，得到最佳标记量为2.4mg/100ml，在胶体金溶液中按2.4mg/100ml加入纯化复性的His-OppA融合蛋白，静置30min；将上述胶体金经2500r/min离心30min，除去沉淀物，得上清液；将上清液经10000r/min离心30min，弃去上清收集沉淀物，将沉淀物悬浮于1/10倍初始胶体金体积的金胶缓冲液中，置4℃保存；

试纸条的组装：

制备含有检测线7和质控线6的硝酸纤维素膜2：用0.15M的磷酸盐缓冲液(pH7.2)分别将纯化复性的His-OppA融合蛋白和抗副猪嗜血杆菌IgG浓度调至2.0g/l和1.4g/l工作浓度，分别按0.90l/cm设置喷膜，将上述蛋白和抗体喷涂于硝酸纤维素膜2上，形成质检测线7与控线，37℃烘干或室温自然干燥后，置于封闭液中浸泡10min，取出后室温自然干燥，保存备用；

制备胶体金垫：取玻璃纤维纸，按30l/cm将纯化复性的His-OppA融合蛋白喷涂于玻璃纤维纸上，干燥后贮存备用；

试纸条的组装：在PVC背衬板上由上至下分别将样品垫5、胶体金垫，包括检测线7、质控线6的硝酸纤维素膜2以及吸收垫3按顺序装配，切割成4mm宽的条状，即制成山羊接触传染性胸膜肺炎抗体检测试纸条。

金胶缓冲液为含5‰蔗糖、1％BSA、1‰PEG20000、1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液(0.02mol/L、pH7.4)。

封闭液为含2.5％犊牛血清，1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液(0.02mol/L、pH7.4)。

本发明实施例提供的检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的制备方法，试纸条由PVC衬板1、硝酸纤维素膜2、吸收垫3、金标垫4及样品垫5，PVC衬板1设置在最底部，同时PVC衬板1上部中段设置有硝酸纤维素膜2，硝酸纤维素膜2上部左端设置有吸收垫3，硝酸纤维素膜2上部右端设置有金标垫4，金标垫4上部右端设置有样品垫5，硝酸纤维素膜2左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线6，硝酸纤维素膜2右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线7，金标垫4上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白，该试纸条根据检测线7和质控线6是否出现色带来确定血清中是否存在副猪嗜血杆菌病的抗体，并可检测所有血清型的副猪嗜血杆菌感染产生的抗体，检测过程简便、快速、准确，实用性强，具有较强的推广与应用价值。

以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条，其特征在于，该试纸条包括：PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫、样品垫，所述PVC衬板设置在最底部，同时PVC衬板上部中段设置有所述硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上部左端设置有所述吸收垫，所述硝酸纤维素膜上部右端设置有所述金标垫，所述金标垫上部右端设置有所述样品垫。

2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜左端喷有抗副猪嗜血杆菌IgG作为质控线，所述硝酸纤维素膜右端喷有纯化复性的His-OppA融合蛋白作为检测线，所述金标垫上喷有胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白。

3.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，该试纸条可以检测所有血清型的副猪嗜血杆菌感染产生的抗体。

4.一种检测副猪嗜血杆菌病抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

制备胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白；

制备胶体金垫及含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜，组装构成试纸条。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，制备胶体金标记的纯化复性的His-OppA融合蛋白的实现方法为：

将制备的胶体金用0.1mol/L KCO3调整pH值为7.0～7.8；

用目测法确定胶体金与待标记蛋白应标记的最佳量，得到最佳标记量为2.4mg/100ml，在胶体金溶液中按2.4mg/100ml加入纯化复性的His-OppA融合蛋白，静置30min；

将胶体金经2500r/min离心30min，除去沉淀物，得上清液；

将上清液经10000r/min离心30min，弃去上清收集沉淀物，将沉淀物悬浮于1/10倍初始胶体金体积的金胶缓冲液中，置4℃保存。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述金胶缓冲液为含5‰蔗糖、1％BSA、1‰PEG20000、1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，0.02mol/L、pH7.4。

7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，制备含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的实现方法为：

构建重组原核表达载体Pet-30a-OppA，在大肠杆菌中诱导表达OPPA重组蛋白，用Ni-柱纯化出His-OppA蛋白，用pH为7.2、0.15M的磷酸盐缓冲液分别将纯化复性的His-OppA融合蛋白和抗副猪嗜血杆菌IgG浓度调至2.0g/l和1.4g/l工作浓度，分别按0.90l/cm设置喷膜，将蛋白和抗体喷涂于硝酸纤维素膜上，形成检测线与质控线，37℃烘干或室温自然干燥后，置于封闭液中浸泡10min，取出后室温自然干燥，保存备用。

8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述封闭液为含2.5％犊牛血清，1‰Tween-20的磷酸盐缓冲液，0.02mol/L、pH7.4。

9.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，制备胶体金垫的实现方法为：取玻璃纤维纸，按30l/cm将纯化复性的His-OppA融合蛋白喷涂于玻璃纤维纸上，干燥后贮存备用。

10.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，组装构成试纸条的实现方法为：

在PVC背衬板上由上至下分别将样品垫、胶体金垫、包括检测线及质控线的硝酸纤维素膜、吸收垫按顺序装配，切割成4mm宽的条状，即制成山羊接触传染性胸膜肺炎抗体检测试纸条；

其中，硝酸纤维素膜黏附于PVC衬板的底板上，长30mm；硝酸纤维素膜上部左端黏附吸收垫，长25mm，并与硝酸纤维素膜重叠2mm；金标垫长5mm，并且与硝酸纤维素膜重叠2mm；样品垫长20mm，并且与金标垫重叠2mm；用切条机切割成4mm宽的条形带，密封干燥保存。

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