CN103070077A

CN103070077A - 细胞大量培养结合组织培养获得北美红杉种苗的方法

Info

Publication number: CN103070077A
Application number: CN 201310046295
Authority: CN
Inventors: 杨树祥
Original assignee: Shilin Redwood Agriculture & Forestry Technology Development Co Ltd
Current assignee: Shilin Redwood Agriculture & Forestry Technology Development Co Ltd
Priority date: 2013-02-05
Filing date: 2013-02-05
Publication date: 2013-05-01

Abstract

细胞大量培养结合组织培养获得北美红杉种苗的方法，属植物种苗培养技术。北美红杉茎尖接种于愈伤组织诱导培养基MS+KT0.4～0.6mg/L+NAA0.2～0.4㎎/L+蔗糖28～32g/L,用0.6～0.7%琼脂固化，20天后可见明显芽；将芽研磨后接种，加入细胞悬浮液体培养基，容器放入摇床，于温度23±2℃，黑暗条件下进行细胞悬浮培养２～４天，细胞悬浮液体培养基是：MS+KT0.4～0.6mg/L+BA0.2～0.5㎎/L+NAA0.6～2㎎/L+LH0.5～1.5㎎/L+蔗糖19～22g/L，pH值5.8～6；对培养的细胞进行细胞生长测定；选取生长进入静止期的细胞，接入增殖培养基；选择生长良好的丛芽接入生根培养基，最后获得北美红杉苗。

Description

细胞大量培养结合组织培养获得北美红杉种苗的方法

技术领域

本发明属于植物种苗的培养技术。

背景技术

北美红杉（Sequoia sempervirens ）是一种松科落叶松属落叶乔木，原产美国加利福尼亚州海岸。北美红杉为特大乔木，树姿雄伟，枝叶密生，生长迅速，适用于湖畔、水边、草坪中孤植或群植，景观秀丽，也可沿园路两边列植，气势非凡。北美红杉常用繁殖方法为播种、或扦插、或分株。种子繁殖的种量受限，扦插繁殖的生根率低，分株繁殖费事费时效率低。

申请号为201210099272.2的中国专利文件公布了一种北美红杉树组织培养方法，对嫩枝茎尖进行诱导、增殖和生根培养，得再生苗。具体步骤是北美红杉树嫩枝经消毒处理，取普通茎尖做外植体，接种诱导培养基，培养温度26±l℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx，时间40天。然后截取茎段转接增殖培养基培养，培养温度26±l℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx，时间30天。茎尖转接生根培养基，培养温度24±l℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx，时间50天，得组培苗。组培苗移植于基质中，基质为草炭土：珍珠岩3：1。灭菌，驯化， 20天后移栽大田。诱导培养基是以MS为基础培养基，添加NAA 0.1mg/L，KT 0.5 mg/L，蔗糖3%，琼脂0. 6%, pH 6.8；增殖培养基是以MS为基础培养基，添加NAA 0.3mg/L，KT 0.5 mg/L，BA l.0 mg/L，蔗糖3%，琼脂0. 6%，pH 6.8；生根培养基是以1/2MS为基础培养基，添加NAA 0.3mg/L，KT 0.5 mg/L，BA l.0mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，pH 6.8。因此，北美红杉树的组织培养方法，包括激素种类和浓度等，尤其是增殖培养和生根培养的培养基、培养条件和方法均为现有技术。虽然采用组织培养技术繁育了北美红杉，但是繁育的效率和速度还有必要进一步提高。

植物细胞大量培养技术的具体做法，是对植物细胞给予适当的条件进行培养，使植物细胞像微生物一样大量繁殖。植物细胞具有全能性，一个小小的植物细胞能够分化成长为一棵完整的植物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞大量培养结合组织培养获得北美红杉种苗的方法,以进一步提高繁育的效率和速度。

本发明方法的技术方案是按以下步骤：

1、取北美红杉茎尖经消毒处理，将茎段剪成1～1.2㎝长的小段，接种于愈伤组织诱导培养基MS+ KT 0.4～0.6 mg/L+NAA0.2～0.4㎎/L+蔗糖28～32g/L,用0.6～0.7%（质量比）琼脂固化，高温灭菌前pH调为6.8，培养温度26±l℃，外植体接种20天后可见明显芽；

2、北美红杉细胞悬浮培养：将上步所得芽研磨后接种，加入2～3倍重量的细胞悬浮液体培养基，容器放入旋转式摇床，于温度23±2℃，黑暗条件下进行北美红杉细胞悬浮培养２～４天，摇床转速为100～１2０r/min，细胞悬浮液体培养基是：MS+ KT 0.4～0.6 mg/L + BA 0.2～0.5㎎/L + NAA 0.6～2㎎/L + LH 0.5～1.5㎎/L +蔗糖 19～22g/L，PH值 5.8～6；

3、对培养的北美红杉细胞进行细胞生长测定；

4、增殖培养：选取生长进入静止期的北美红杉细胞，接入增殖培养基，进行增殖培养；

5、生根培养：选择生长良好的丛芽接入生根培养基，进行生根培养，最后获得北美红杉苗。

所说增殖培养和生根培养的培养基、培养条件和方法均为现有技术。

本发明的有益效果：本发明将北美红杉的细胞大量培养和组织培养有机结合，周期短, 提高了繁育效率和速度。

具体实施方式

见如下实施例，按以下步骤进行：

1、选取北美红杉茎段，用洗洁精洗干净后，在流水下冲洗10min，转到洁净工作台上，吸干水分，先用70%（体积比）酒精灭菌30秒，再转入0.1%（体积比）的HgCl₂溶液中灭菌5分钟，无菌蒸馏水冲洗5次，将茎段剪成1㎝长的小段，接种于愈伤组织诱导培养基MS+ KT 0.5 mg/L+NAA0.3㎎/L+蔗糖30g/L,用0.7%（质量比）琼脂固化，高温灭菌前pH调为6.8，培养温度26±l℃，外植体接种20天后可见明显芽；

2、北美红杉细胞悬浮培养：将上步所得芽研磨后接种，加入3倍重量的细胞悬浮液体培养基，容器放入旋转式摇床，于温度23±2℃，黑暗条件下进行北美红杉细胞悬浮培养3天，摇床转速为110r/min，细胞悬浮液体培养基是：MS+ KT 0.5 mg/L + BA 0.3㎎/L + NAA1㎎/L + LH 01.2㎎/L + 蔗糖 20g/L，PH值 6；

3、对培养的北美红杉细胞进行细胞生长测定；

4、增殖培养：选取生长进入静止期的北美红杉细胞，接入增殖培养基，进行增殖培养30天，增殖培养基是以MS为基础培养基，添加NAA 0.3mg/L，KT 0.5 mg/L，BA l.0 mg/L，蔗糖3%，琼脂0. 6%，pH6.8；

5、生根培养：选择生长良好的丛芽接入生根培养基，进行生根培养50天，生根培养基是以1/2MS为基础培养基，添加NAA 0.3mg/L，KT0.5 mg/L，BA l.0mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，pH 6.8,最后获得北美红杉苗。

Claims

1.一种细胞大量培养结合组织培养获得北美红杉种苗的方法，其特征在于按以下步骤：

(1)、取北美红杉茎尖经消毒处理，将茎段剪成1～1.2㎝长的小段，接种于愈伤组织诱导培养基MS+ KT 0.4～0.6 mg/L+NAA0.2～0.4㎎/L+蔗糖28～32g/L,用0.6～0.7%（质量比）琼脂固化，高温灭菌前pH调为6.8，培养温度26±l℃，外植体接种20天后可见明显芽；

(2)、北美红杉细胞悬浮培养：将上步所得芽研磨后接种，加入2～3倍重量的细胞悬浮液体培养基，容器放入旋转式摇床，于温度23±2℃，黑暗条件下进行北美红杉细胞悬浮培养２～４天，摇床转速为100～１2０r/min，细胞悬浮液体培养基是：MS+ KT 0.4～0.6 mg/L +BA 0.2～0.5㎎/L + NAA 0.6～2㎎/L + LH 0.5～1.5㎎/L +蔗糖 19～22g/L，PH值 5.8～6；

(3)、对培养的北美红杉细胞进行细胞生长测定；

(4)、增殖培养：选取生长进入静止期的北美红杉细胞，接入增殖培养基，进行增殖培养；

(5)、生根培养：选择生长良好的丛芽接入生根培养基，进行生根培养，最后获得北美红杉苗。