CN103070071A - 试管芋脱毒快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种试管芋脱毒快速繁殖的方法，以健康芋的顶芽或腋芽为外植体，经过丛芽分化、茎尖分生组织培养、芋花叶病毒检测、继代增殖、生根、诱导形成脱毒试管芋。本发明通过茎尖脱毒培养进行试管芋的繁殖，成功消除了严重危害芋生产的芋花叶病毒，解决了芋因病毒病而引起的芋种性退化问题，提高了芋的品质及产量。脱毒试管芋繁殖系数高、生产周期短，有利于芋新品种的推广应用。脱毒试管芋体积小，重量轻，便于运输和贮存。脱毒试管芋是在人工控制条件下进行规模化生产，不受自然气候条件的影响，可周年生产，及时为生产提供规格整齐一致的优质无病种苗。脱毒试管芋育苗简单，成活率高，可达95%以上。
Description
技术领域
本发明属于农业育种领域，具体地指一种试管芋脱毒快速繁殖的方法。
背景技术
芋是中国古老的作物之一，原产我国及印度马来半岛的热带沼泽地带。芋的球茎富含淀粉，是南太平洋许多国家的主要食物来源，在斐济、汤加、库克群岛等国家，芋不仅是基本食物，还是其外汇收入的稳定渠道。芋在我国栽培历史悠久，分布极广，南方地区以魁芋为主多种类型并存，长江流域以多子芋为主。芋既可鲜食，又可进行深加工。加工的产品出口日本、韩国及东南亚国家。2003年全世界芋的总出口量为12.03亿吨，主要出口国是中国，年出口量为11.45亿吨，占世界出口总量的95.18%。芋作为我国主要的土特产品，进一步发展其生产和出口业具有广阔的前景。
芋长期利用球茎进行营养繁殖，已普遍受到芋花叶病毒的侵染。据不完全统计，我国芋的种植面积约为200～300万亩，有70%左右的芋被芋花叶病毒感染，感染病毒的芋产量会下降30%~70%。另外，常规芋用种量大，每亩需用种100～150kg，繁殖系数低，一般为1：20，一年繁殖一代。这些问题不利于芋新品种的推广，严重制约了芋的生产、出口及国际间种质资源的交流。
进行脱毒试管芋诱导技术研究，是目前解决该问题的最好途径。20世纪70年代未，日本、美国、哥斯达黎加、菲律宾等国的科学家先后研究了芋花叶病毒对芋产量的影响，并采用茎尖离体培养、种子营救培养以及茎尖离体培养和热疗法相结合来生产芋脱毒苗。我国90年代初，也先后获得了脱毒试管苗。但是，这些芋脱毒苗或试管苗移栽成活率低，栽培技术要求高，不能直接应用于实际生产。
发明内容
本发明的目的是针对无性繁殖的荸荠的种球带病和种性退化问题，提供一种试管芋脱毒快速繁殖的方法，提高荸荠的品质。
本发明试管芋脱毒快速繁殖的方法，包括以下步骤：
1）丛芽分化：选取健康芋的顶芽或腋芽为外植体，剥去外层鳞片，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所述丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5～3.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～1.0mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度为26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生长成单芽或丛芽；
2）茎尖分生组织培养脱毒：从步骤1）中诱导的单芽或丛芽上切取0.3～0.5mm的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所述茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5～2.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生长出单芽或丛芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的单芽或丛芽进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的单芽或丛芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所述继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5～5.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～2.0mg/L、活性炭（AC）3.0～5.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所述生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5～1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.1～0.5mg/L、活性炭（AC）3.0～10.0g/L、蔗糖30～50g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生根形成试管苗；
6）诱导试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所述试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5～1.0mg/L、活性炭（AC）3.0～10.0g/L、蔗糖30～100g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度为26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，20~30天后即可形成脱毒试管芋。
本发明步骤3）芋花叶病毒的检测采用双抗体夹心法在405nm波长下对芋茎尖分生组织分化的丛芽进行检测，双抗体夹心法为检测芋花叶病毒的常用方法。阴性为不带有芋花叶病毒，阳性为带有芋花叶病毒。
本发明的茎尖分化培养基中6-BA浓度较低，低浓度的6-BA降低了丛芽变异的可能性，遗传稳定性更优。同时，又能保证茎尖分生组织生长出单芽或丛芽。本发明选择合适的继代增殖培养基可使脱毒试管芋的增殖系数为22。本发明中的生根培养基生根需要15～20天，生根率达100％，根系发达，试管苗的成活率可达95％。采用本发明的试管芋诱导的培养基配方及培养条件更优，诱导的试管芋整齐度高，培养成本低。
本发明通过茎尖脱毒培养进行试管芋的繁殖，具有以下优点：
第一，脱毒试管芋是由芋茎尖生长点组培快繁而来，成功消除了严重危害芋生产的芋花叶病毒，解决了芋因病毒病而引起的芋种性退化问题，提高了芋的品质及产量；
第二，脱毒试管芋繁殖系数高、生产周期短，脱毒试管芋的每代增殖系数为1：22，一年可繁殖6～8代，极大的提高了芋的繁殖速度，有利于芋新品种的推广应用；
第三，脱毒试管芋体积小，重量轻，便于运输。脱毒试管芋单个球茎重0.6～1.0g，每亩用种量1.8～3.0kg，便于芋种的长途运输，减少了芋种的损耗率及运输费用；
第四，脱毒试管芋是在人工控制条件下进行规模化生产，不受自然气候条件如风、雨、雹、霜冻及季节等因素的影响，可周年生产，及时为生产提供规格整齐一致的优质无病种苗；
第五，与芋脱毒试管苗相比，脱毒试管芋育苗简单，成活率高，可达95%以上，并且试管芋更耐贮存，远途运输时，对其成活率的影响不明显。
综上所述，本发明为芋产业的发展提供了一种快速、方便、有效的芋种繁殖方法，为国际和地区间芋种质资源提供交流，为芋组培技术应用于生产实际提供了更为有效的方法。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
实施例1
以多子芋类型品种鄂芋一号的顶芽为外植体，经过丛芽分化、茎尖分生组织培养、芋花叶病毒检测、继代增殖、生根、诱导形成脱毒试管芋，包括如下步骤：
1）丛芽分化：选取无病田块中健康鄂芋一号品种的顶芽为外植体，流水冲洗干净，用质量分数为70%的酒精浸泡10分钟后，用质量分数为0.1%氯化汞浸泡30秒钟，再用无菌水冲洗3次，用解剖刀剥去顶芽外的2层鳞片，切取0.4cm大小的茎尖，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所用丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）3.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为2000 lx，每天光照8h，30d后产生丛芽；
2）茎尖分生组织培养：从鄂芋一号品种的丛芽中切取0.5mm大小的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所用茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为2000 lx，每天光照8h，30d后产生丛芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的丛芽，采用双抗体夹心法在405nm波长下进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的丛芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所用继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）4.5mg/L、萘乙酸（NAA）1.0mg/L、活性炭（AC）4.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为2000lx，每天光照8h，25d生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所用生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.7mg/L、萘乙酸（NAA）0.1mg/L、活性炭（AC）5.0g/L、蔗糖40g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度为28℃，光照强度为2000 lx，每天光照8h，20d生根形成试管苗；
6）诱导脱毒试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所用试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5mg/L、活性炭（AC）8.0g/L、蔗糖70g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为2000 lx，每天光照8h，20天后即可形成脱毒试管芋。
实施例2
以多子芋类型品种鄂芋一号的腋芽为外植体，经过丛芽分化、茎尖分生组织培养、芋花叶病毒检测、继代增殖、生根、诱导形成脱毒试管芋，包括如下步骤：
1）丛芽分化：选取无病田块中健康鄂芋一号品种的腋芽为外植体，流水冲洗干净，用质量分数为70%的酒精浸泡15分钟后，用质量分数为0.1%氯化汞浸泡50秒钟，再用无菌水冲洗5次，用解剖刀剥去顶芽外的3层鳞片，切取0.6cm大小的茎尖，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所用丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0mg/L、萘乙酸（NAA）1.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，28d后产生丛芽；
2）茎尖分生组织培养：从鄂芋一号品种的丛芽中切取0.5mm大小的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所用茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.3mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，28d后产生单芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的单芽，采用双抗体夹心法在405nm波长下进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的单芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所用继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）3mg/L、萘乙酸（NAA）1.5mg/L、活性炭（AC）5.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，28d生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所用生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.9mg/L、萘乙酸（NAA）0.3mg/L、活性炭（AC）8.0g/L、蔗糖50g/L和琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，18d生根形成试管苗；
6）诱导脱毒试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所用试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.8mg/L、活性炭（AC）5.0g/L、蔗糖50g/L和琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，25天后即可形成脱毒试管芋。
实施例3
以魁芋类型（槟榔芋）品种荔蒲芋的顶芽为外植体，经过丛芽分化、茎尖分生组织培养、芋花叶病毒检测、继代增殖、生根、诱导形成脱毒试管芋，包括如下步骤：
1）丛芽分化：选取无病田块中健康荔蒲芋的顶芽为外植体，流水冲洗干净，用质量分数为70%的酒精浸泡10分钟后，用质量分数为0.1%氯化汞浸泡40秒钟，再用无菌水冲洗5次，用解剖刀剥去顶芽外的3层鳞片，切取0.5cm大小的茎尖，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所用丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0mg/L、萘乙酸（NAA）1.0mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为1800 lx，每天光照10h，30d后产生丛芽；
2）茎尖分生组织培养：从荔蒲芋的丛芽中切取0.4mm大小的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所用茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.5mg/L、萘乙酸（NAA）0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为2000lx，每天光照8h，25d后产生单芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的单芽，采用双抗体夹心法在405nm波长下进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的单芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所用继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.5mg/L、萘乙酸（NAA）0.5mg/L、活性炭（AC）3.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为2000lx，每天光照9h，30d生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所用生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5mg/L、萘乙酸（NAA）0.2mg/L、活性炭（AC）6.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为2000 lx，每天光照8h，16d生根形成试管苗；
6）诱导脱毒试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所用试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.8mg/L、活性炭（AC）8.0g/L、蔗糖90g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为2000lx，每天光照8h，25d诱导形成脱毒试管芋。
实施例4
以魁芋类型（槟榔芋）品种荔蒲芋的腋芽为外植体，经过丛芽分化、茎尖分生组织培养、芋花叶病毒检测、继代增殖、生根、诱导形成脱毒试管芋，包括如下步骤：
1）丛芽分化：选取无病田块中健康荔蒲芋的腋芽为外植体，流水冲洗干净，用质量分数为70%的酒精浸泡15分钟后，用质量分数为0.1%氯化汞浸泡40秒钟，再用无菌水冲洗5次，用解剖刀剥去顶芽外的3层鳞片，切取0.4cm大小的茎尖，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所用丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为2000 lx，每天光照10h，25d后产生丛芽；
2）茎尖分生组织培养：从荔蒲芋的丛芽中切取0.5mm大小的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所用茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5mg/L、萘乙酸（NAA）0.2mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为2000lx，每天光照10h，30d后产生单芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的单芽，采用双抗体夹心法在405nm波长下进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的单芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所用继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.5mg/L、萘乙酸（NAA）1.5mg/L、活性炭（AC）4.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为2000lx，每天光照10h，30d生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所用生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.1mg/L、活性炭（AC）9.0g/L、蔗糖50g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为2000 lx，每天光照10h，20d生根形成试管苗；
6）诱导脱毒试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所用试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.8mg/L、活性炭（AC）10.0g/L、蔗糖90g/L和琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照8h，20天后即可形成脱毒试管芋。
实施例5
以魁芋类型（槟榔芋）品种荔蒲芋的腋芽为外植体，经过丛芽分化、茎尖分生组织培养、芋花叶病毒检测、继代增殖、生根、诱导形成脱毒试管芋，包括如下步骤：
1）丛芽分化：选取无病田块中健康荔蒲芋的腋芽为外植体，流水冲洗干净，用质量分数为70%的酒精浸泡15分钟后，用质量分数为0.1%氯化汞浸泡60秒钟，再用无菌水冲洗5次，用解剖刀剥去顶芽外的3层鳞片，切取0.4cm大小的茎尖，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所用丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.2mg/L、萘乙酸（NAA）0.9mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，30d后产生丛芽；
2）茎尖分生组织培养：从荔蒲芋的丛芽中切取0.5mm大小的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所用茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.7mg/L、萘乙酸（NAA）0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为1800lx，每天光照10h，25d后产生丛芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的丛芽，采用双抗体夹心法在405nm波长下进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的丛芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所用继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0mg/L、萘乙酸（NAA）2.0mg/L、活性炭（AC）3.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为28℃，光照强度为2000lx，每天光照8h，25d生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所用生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.5mg/L、萘乙酸（NAA）0.5mg/L、活性炭（AC）3.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为6.0，培养温度为28℃，光照强度为2000lx，每天光照10h，20d生根形成试管苗；
6）诱导脱毒试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所用试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.6mg/L、活性炭（AC）3.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8，培养温度为26℃，光照强度为1500 lx，每天光照10h，30天后即可形成脱毒试管芋。
Claims (1)
1.一种试管芋脱毒快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）丛芽分化：选取健康芋的顶芽或腋芽为外植体，剥去外层鳞片，接种于芋丛芽分化培养基上进行培养，所述丛芽分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤0.5～3.0mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度为26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生长成单芽或丛芽；
2）茎尖分生组织培养脱毒：从步骤1）中诱导的单芽或丛芽上切取0.3～0.5mm的茎尖分生组织接种于茎尖分化培养基上培养，所述茎尖分化培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤0.5～2.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生长出单芽或丛芽；
3）芋花叶病毒检测：对芋茎尖分生组织分化的单芽或丛芽进行芋花叶病毒的检测，反应值与阴性值较接近的为阴性，反应值高于阴性值两倍的为阳性；
4）继代增殖：将阴性反应的单芽或丛芽转接到继代增殖培养基上进行继代增殖培养，所述继代增殖培养基为3/4MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤0.5～5.0mg/L、萘乙酸0.5～2.0mg/L、活性炭3.0～5.0g/L、蔗糖30g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生长出新的丛芽；
5）生根：将脱毒芋的丛芽分割成单芽，转接到生根培养基上诱导生根，所述生根培养基为2/3MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤0.5～1.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5mg/L、活性炭3.0～10.0g/L、蔗糖30～50g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，直至生根形成试管苗；
6）诱导试管芋：生根培养后，将试管苗接于试管芋诱导培养基上生长，所述试管芋诱导培养基为MS培养基、添加6-苄氨基嘌呤0.5～1.0mg/L、活性炭3.0～10.0g/L、蔗糖30～100g/L和琼脂5～6g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度为26～28℃，光照强度为1500～2000 lx，每天光照8～10h，20~30天后即可形成脱毒试管芋。
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