CN103018384A - 一种红茶的质量分析评价方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种红茶特征图谱的质量分析评价方法及其应用，主要基于中药指纹图谱分析方法对红茶样品进行成分分析。本方法采用高效液相色谱法进行，固定相以十八烷基键合硅胶做填充剂，流动相由有机溶剂、水及调节剂组成，检测波长210nm至540nm，红茶特征图谱中应呈现9个特征峰，以咖啡因为参照峰，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。本发明方法可以用于红茶产品或由红茶加工制成的产品的质量分析。

Description

一种红茶的质量分析评价方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种红茶的质量分析评价方法，特别涉及采用中药指纹图谱分析方法对红茶样品进行成分分析。本发明的质量分析评价方法可以用于红茶或由红茶加工制成的产品的质量分析。 

  

技术背景

随着各种分析鉴定方法和仪器的发展，茶叶化学成分系统研究逐步深入，虽然中药指纹图谱的研究已经非常普遍，但将其移植到茶叶的研究和质量控制上比较鲜见。根据相关文献的检索发现，茶叶的指纹图谱研究主要集中在绿茶和普洱茶上，主要针对红茶成分分析的指纹图谱研究较少，乌龙茶和其他茶类的研究也未见报道。现有茶叶指纹图谱主要是多酚类的单体和咖啡碱的基础研究，并没有对整体的分析和应用于现实生产和质量控制等方面。专门以红茶为研究对象的全面反映物质成分组成及比例的指纹图谱分析和应用并未见有相关研究和报道。目前红茶的质量标准主要以国家标准为主，其中的质量分析主要侧重于传统的感官鉴别、评价以及卫生指标等项目，不足以说明红茶的内在品质。并且各类茶叶的标准特征性不强，较大的区别特征仅仅在于外观等主观的感官性状鉴别。虽然相关的国家标准中涉及茶叶中儿茶素、咖啡因成分的检测方法，但目前没有产品标准对其限量等进行规定，也不能对茶叶质量从整体上进行分析和评价。所以目前各类茶叶的质量分析评价标准普遍存在主观检验项目为主、客观检验项目专属性不强、成分测定无限量要求、质量评价无全面分析方法等缺陷。 

  

发明内容

在目前茶叶的检验标准以及研究现状基础上，总体考虑茶叶质量分析评价的方法，本发明力争解决质量分析评价不够全面且没有专属性的技术缺陷，建立一种以高效液相色谱为检验基础，应用指纹图谱技术对红茶及其产品进行整体的成分分析和评价方法。 

本发明涉及一种以红茶为研究对象，采用高效液相色谱分析的方法对红茶样品的成分进行整体的分析，本发明方法主要基于中药指纹图谱分析方法，红茶特征图谱的质量分析评价方法及其应用，对红茶样品进行成分分析。本发明方法可以用于红茶产品或由红茶加工制成的产品的质量分析。通过对多批红茶成分的分析比对总结出了本发明用于评价红茶相对质量的方法，本方法采用高效液相色谱法进行，固定相以十八烷基键合硅胶做填充剂，流动相由有机溶剂、水及调节剂组成，检测波长210nm至540nm，以咖啡因为参照峰，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。红茶的样本图谱中应呈现9个特征峰，以咖啡因为参照峰，相对保留时间以1.000min计算，分别计算各个特征峰的相对保留时间。 

一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，是采用高效液相色谱法对茶叶样品进行分析检测，通过计算特征峰的相对保留时间进行质量评价，其步骤如下： 

a．高效液相的色谱条件，固定相为十八烷基键合硅胶，流动相由有机相、水相、调节剂相中的一种或几种，检测波长210nm-540nm；

b．采集50分钟之内的色谱峰，呈现9个特征峰，并以咖啡因作为参照峰，即峰S，规定值1.000，计算9个特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内；9个特征峰的规定值分别为：特征峰1规定值0.493、特征峰2规定值0.808、特征峰3规定值1.000、特征峰4规定值1.115、特征峰5规定值1.166、特征峰6规定值1.283、特征峰7规定值1.359、特征峰8规定值1.915、特征峰9规定值3.371。即规定值为峰1为0.493、峰2为0.808、峰3为1.000、峰4为1.115、峰5为1.166、峰6为1.283、峰7为1.359、峰8为1.915、峰9为3.371。

本发明的一种红茶的质量分析评价方法，其中所述的高效液相分析检测方法特征在于的色谱条件固定相为十八烷基键合硅胶，流动相中的有机相为甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种、调节剂相为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种，检测波长210nm-540nm。其特征进一步为方法中高效液相的色谱条件采用十八烷基键合硅胶反相色谱柱，流动相中的有机相为甲醇、乙腈的一种或二种、调节剂为乙酸、三氟乙酸中的一种或二种。 

本发明方法中的高效液相色谱分析检测方法中的流动相可以为以下几种： 

1、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%乙腈的1-3%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的1-3%乙酸水溶液；

2、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-50%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液。

3、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、77-94%水组成、B相由70-95%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

4、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

5、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

本发明方法主要通过以下操作实现： 

一、高效液相分析检测：

1、供试品的前处理方法：取茶叶样品过40目筛的粉末加入10-25倍量的溶剂于60-90℃水浴浸提5-30分钟，浸提1-3次，离心或过滤，合并上清液或滤液于60-90℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液。其中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水中的一种或几种。

2、参照物的处理方法：取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得。 

3、色谱条件与系统适用性：以十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相分成A、B两个部分，按下述方法中规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为210nm-540nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。 

本发明方法色谱条件的流动相按以下两种方式组合而成：流动相分成A、B两部分，A部分可以是有机相或者是有机相、水相与调节剂组成；B部分可以是水相与调节剂组成或者是有机相、水相与调节剂组成。 

1）、A为有机相、B为水相与调节剂组成； 

其中A可以是甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种；B可以是甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种配制成的含酸1-3%的水溶液，当调节剂的组成由两种或两种以上构成时，各种酸的比例为1:1。

2）、A、B均为有机相、水相与调节剂组成。 

其中A、B分别是含有不同浓度有机溶剂及调节剂的水溶液，其中有机溶剂可以是甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种，调节剂为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种。A中有机溶剂的浓度为5-20%、B中有机溶剂的浓度为70-90%；A、B中含调节剂酸的浓度为1-3%，当调节剂的组成由两种或两种以上构成时，各种酸的比例为1:1。 

具体的流动相及梯度   洗脱的比例可以为： 

①、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%乙腈的1-3%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的1-3%乙酸水溶液。

②、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-50%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液。 

③、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、77-94%水组成、B相由70-90%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

④、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

⑤、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

也即是说本发明所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-12%乙腈的2%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的2%乙酸水溶液。 

或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-60%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液。 

或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、77-94%水组成、B相由70-90%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。 

检测波长进一步可以是210nm—366nm，更进一步可以是210nm—280nm。 

二、色谱中特征峰相对保留时间的计算： 

采集50分钟之内的色谱峰，呈现9个特征峰，并以咖啡因作为参照峰，即峰S，规定值1.000，计算9个特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内；9个特征峰的规定值分别为：特征峰1规定值0.493、特征峰2规定值0.808、特征峰3规定值1.000、特征峰4规定值1.115、特征峰5规定值1.166、特征峰6规定值1.283、特征峰7规定值1.359、特征峰8规定值1.915、特征峰9规定值3.371。即规定值为峰1为0.493、峰2为0.808、峰3为1.000、峰4为1.115、峰5为1.166、峰6为1.283、峰7为1.359、峰8为1.915、峰9为3.371。

本发明涉及一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于本分析方法可用于红茶及其加工品的质量分析评价方法。 

利用本发明方法分别就红茶、绿茶、乌龙茶、普洱茶的样品进行分析，以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，可以明显看出绿茶、乌龙茶、普洱茶样品中没有第九个特征峰，规定保留时间3.371，如图1所示，所以此方法可作为专属性鉴别红茶的方法。不同红茶按此方法进行分析，按照中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱的相似度不低于0.90，如图2所示。 

  

本发明方法的一种红茶的质量分析评价方法，进一步地讲流动相中的有机相为甲醇或乙腈、调节剂为乙酸或三氟乙酸，检测波长210nm-366nm。更进一步地讲流动相为乙腈、乙酸、水，检测波长为210-280nm。

具体的流动相选择及洗脱条件可以为： 

1、A为有机相、B为水相与调节剂组成；A为乙腈、B为2%乙酸水溶液按以下规定的时间和体积比进行梯度洗脱。

时间（分钟）	流动相A（%）乙腈	流动相B（%）2%乙酸水
			0～15min	9→16	91→84
15～35min	16→30	84→70
			35～50min	30	70

说明：其中0-15min、流动相A（%）9→16，表示在0-15min洗脱时，流动相A部分占流动相的体积由9%增加至16%。下同。 

2、A为有机相、B为水相与调节剂组成；A为甲醇、B为2%三氟乙酸水溶液按以下规定的时间和体积比进行梯度洗脱。 

时间（分钟）	流动相A（%）甲醇	流动相B（%）2%三氟乙酸水
			0～15min	10→18	90→82
15～35min	18→34	82→66
			35～50min	34	66

3、A为有机相、B为水相与调节剂组成；A为含9%乙腈及2%乙酸的水溶液、B为含80%乙腈及2%乙酸的水溶液按以下规定的时间和体积比进行梯度洗脱。 

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

本发明涉及一种红茶的指纹图谱质量分析评价方法，采用高效液相色谱法对茶叶样品进行检测，按以下步骤进行： 

一、高效液相分析检测：

1、供试品溶液的制备：取供试品过40目筛的粉末加入10-25倍量的溶剂于60-90℃水浴浸提5-30分钟，浸提1-3次，过滤，合并滤液于60-90℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液，其中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水中的一种或几种。

或者，取供试品过40目筛的粉末加入10-25倍量的溶剂于60-90℃水浴浸提5-30分钟，浸提1-3次，3000r/min离心8-10min，合并上清液60-90℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液，其中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水中的一种或几种。 

2、参照物溶液的制备：取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得。 

3、色谱条件与系统适用性：以十八烷基键合硅胶为填充剂（C18反相色谱柱）；流动相分成A、B两个部分，按具体实施例中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为210nm-540nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。 

流动相由有机相、水相、调节剂相中的一种或几种，检测波长210nm-540nm。 

进一步地，流动相由有机相、水相、调节剂相组成，有机相为甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种、调节剂为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种。 

二、质量评价方法：样品的色谱图中呈现9个特征峰，以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为特征峰1规定值0.493、特征峰2规定值0.808、咖啡因特征峰3规定值1.000、特征峰4规定值1.115、特征峰5规定值1.166、特征峰6规定值1.283、特征峰7规定值1.359、特征峰8规定值1.915、特征峰9规定值3.371。即规定值为峰1为0.493、峰2为0.808、峰3为1.000、峰4为1.115、峰5为1.166、峰6为1.283、峰7为1.359、峰8为1.915、峰9为3.371。 

本发明方法可用于红茶样品、红茶加工品及含红茶30%以上的产品的质量分析。如红茶袋泡茶、红茶茶粉、红茶茶膏、红茶抹茶、调味红茶等产品。 

附图说明

图1红茶对照特征图谱。 

图2不同类茶样的HPLC图谱对比。 

图3红茶茶样的HPLC图谱相似度对比。 

具体实施方式  

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于实施例。  

实施例1：

取滇红茶样品过40目筛的粉末加入10倍量的甲醇于60℃水浴浸提5分钟，浸提2次，过滤，合并滤液于60℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液。取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）乙腈	流动相B（%）2%乙酸水
			0～15min	9→16	91→84
15～35min	16→30	84→70
			35～50min	30	70

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为峰1为0.450、峰2为0.811、峰3为1.000、峰4为1.118、峰5为1.170、峰6为1.288、峰7为1.362、峰8为1.920、峰9为3.379。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例2： 

取祁门红茶样品过40目筛的粉末加入25倍量的乙醇于70℃水浴浸提20分钟，浸提1次，过滤，滤液于70℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液。取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为366nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）甲醇	流动相B（%）2%三氟乙酸水
			0～15min	10→20	90→80
15～35min	20→50	80→50
			35～50min	50	50

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为峰1为0.448、峰2为0.809、峰3为1.000、峰4为1.120、峰5为1.169、峰6为1.280、峰7为1.359、峰8为1.917、峰9为3.377。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例3： 

取普洱红茶样品过40目筛的粉末加入12倍量的正丁醇于80℃水浴浸提10分钟，浸提3次，过滤，合并滤液于80℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液。取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为278nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含9%及乙腈2%乙酸的水溶液	流动相B（%）含80%乙腈及2%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为峰1为0.496、峰2为0.812、峰3为1.000、峰4为1.119、峰5为1.170、峰6为1.287、峰7为1.363、峰8为1.921、峰9为3.379。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例4： 

取红茶茶膏样品过40目筛的粉末加入20倍量的90%乙醇于90℃水浴浸提30分钟，浸提1次，过滤，滤液于90℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液。取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为280nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含10%甲醇及2%乙酸的水溶液	流动相B（%）含88%甲醇及2%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

  

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为峰1为0.498、峰2为0.815、峰3为1.000、峰4为1.120、峰5为1.175、峰6为1.289、峰7为1.366、峰8为1.925、峰9为3.380。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。

实施例5： 

取斯里兰卡红茶样品过40目筛的粉末0.3g，加入5ml的70%甲醇于70℃水浴浸提10分钟，浸提2次，3000r/min离心10min，合并上清液用甲醇定容至10ml即得供试品待测液。取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为227nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含9%及乙腈2%乙酸的水溶液	流动相B（%）含91%乙腈及2%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.498、特征峰2保留时间0.815、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.120、特征峰5保留时间1.175、特征峰6保留时间1.289、特征峰7保留时间1.366、特征峰8保留时间1.925、特征峰9保留时间3.380。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例6： 

取坦洋工夫红茶样品过40目筛的粉末0.5g，加入7.5ml的水于90℃水浴浸提25分钟，浸提2次，3000r/min离心10min，合并上清液于90℃水浴蒸干，定容至10ml即得供试品待测液。取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每1ml含咖啡因0.2mg的溶液，即得参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为210nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含15%及乙腈1%乙酸的水溶液	流动相B（%）含80%乙腈及1%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

以咖啡因作为参照峰，即峰），计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.490、特征峰2保留时间0.814、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.118、特征峰5保留时间1.173、特征峰6保留时间1.282、特征峰7保留时间1.364、特征峰8保留时间1.922、特征峰9保留时间3.378。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例7： 

取红茶袋泡茶样品按实施例1的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为540nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）乙腈	流动相B（%）1%乙酸水
			0～15min	5→12	95→88
15～35min	12→28	88→72
			35～50min	28	72

实施例8： 

取红茶抹茶样品按实施例1的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为480nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）乙腈	流动相B（%）3%乙酸水
			0～15min	12→20	88→80
15～35min	20→40	80→60
			35～50min	40	60

实施例9： 

取荔枝红茶样品按实施例2的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为336nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）甲醇	流动相B（%）2%三氟乙酸水
			0～15min	5→15	95→85
15～35min	15→30	85→70
			35～50min	30	70

实施例10： 

取柠檬红茶样品按实施例3的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为271nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含20%及甲醇1%乙酸的水溶液	流动相B（%）含95%甲醇及1%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

 以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.478、特征峰2保留时间0.792、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.103、特征峰5保留时间1.155、特征峰6保留时间1.271、特征峰7保留时间1.348、特征峰8保留时间1.896、特征峰9保留时间3.359。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例11： 

取薰衣草红茶袋泡茶样品按实施例4的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为285nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含5%及乙腈3%乙酸的水溶液	流动相B（%）含70%乙腈及3%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.502、特征峰2保留时间0.814、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.123、特征峰5保留时间1.175、特征峰6保留时间1.289、特征峰7保留时间1.368、特征峰8保留时间1.929、特征峰9保留时间3.382。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例12： 

取CTC红茶样品按实施例5的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为278nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含8%及乙腈1%乙酸的水溶液	流动相B（%）含78%乙腈及3%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.495、特征峰2保留时间0.810、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.110、特征峰5保留时间1.169、特征峰6保留时间1.289、特征峰7保留时间1.365、特征峰8保留时间1.925、特征峰9保留时间3.380。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。 

实施例13： 

取印度红茶样品按实施例5的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为278nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含10%及甲醇及1%乙酸的水溶液	流动相B（%）含85%甲醇及3%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

  

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.488、特征峰2保留时间0.789、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.101、特征峰5保留时间1.154、特征峰6保留时间1.275、特征峰7保留时间1.343、特征峰8保留时间1.896、特征峰9保留时间3.356。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。

实施例14： 

取版纳红茶样品按实施例6的方法制备供试品待测液及参照物溶液。以十八烷基键合硅胶为填充剂，C18反相色谱柱；流动相分成A、B两个部分，按下表中的规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为278nm；柱温35℃；流速1ml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。采集50分钟之内的色谱峰。

时间（分钟）	流动相A（%）含10%及乙腈及1%乙酸的水溶液	流动相B（%）含75%乙腈及3%乙酸的水溶液
			0～15min	100→90	0→10
15～35min	90→70	10→30
			35～50min	70	30

以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，分别为特征峰1保留时间0.475、特征峰2保留时间0.864、咖啡因特征峰3保留时间1.000、特征峰4保留时间1.099、特征峰5保留时间1.150、特征峰6保留时间1.278、特征峰7保留时间1.347、特征峰8保留时间1.875、特征峰9保留时间3.359。九个特征峰的保留时间在规定值的±5%之内，符合红茶质量分析评价方法的要求。  

Claims (9)

1.一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，是采用高效液相色谱法对茶叶样品进行分析检测，通过计算特征峰的相对保留时间进行质量评价，其步骤如下：  

a．高效液相的色谱条件，固定相为十八烷基键合硅胶，流动相由有机相、水相、调节剂相中的一种或几种，检测波长210nm-540nm；

b．采集50分钟之内的色谱峰，呈现9个特征峰，并以咖啡因作为参照峰，即峰S，规定值1.000，计算9个特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内；9个特征峰的规定值分别为：特征峰1规定值0.493、特征峰2规定值0.808、特征峰3规定值1.000、特征峰4规定值1.115、特征峰5规定值1.166、特征峰6规定值1.283、特征峰7规定值1.359、特征峰8规定值1.915、特征峰9规定值3.371。

2.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱条件固定相为十八烷基键合硅胶，流动相中的有机相为甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种、调节剂相为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种，检测波长210nm-540nm。

3.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱条件固定相为十八烷基键合硅胶，流动相中的有机相为甲醇、乙腈的一种或二种、调节剂为乙酸、三氟乙酸中的一种或二种。

4.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%乙腈的1-3%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的1-3%乙酸水溶液。

5.如权利要求1所述的红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-50%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液。

6.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、77-94%水组成、B相由70-95%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。

7.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。

8.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱：流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为：0-15min，A相体积百分比由100%降至90%；15-30min，A相体积百分比由90%降至70%；30-50min，A相体积百分比为70%。

9.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于茶叶样品的前处理方法为取供试品过40目筛的粉末加入10-25倍量的溶剂于60-90℃水浴浸提5-30分钟，浸提1-3次，离心或过滤，合并上清液或滤液于60-90℃水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至10ml即得供试品待测液，其中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水中的一种或几种。

Images