CN103012420A

CN103012420A - 石蒜碱衍生物与以其为活性成分的兽药及其应用

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Publication number: CN103012420A
Application number: CN2012105454514A
Authority: CN
Inventors: 王跃虎; 尹革芬; 李文贵; 龙春林; 罗吉凤; 杨贵树
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS; Yunnan Agricultural University
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS; Yunnan Agricultural University
Priority date: 2012-12-17
Filing date: 2012-12-17
Publication date: 2013-04-03
Anticipated expiration: 2032-12-17
Also published as: CN103012420B

Abstract

本发明涉及以结构通式I与II代表的石蒜碱及其衍生物，以及它们药学上适用的盐为活性成分组成的兽药，化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱（KY-91），其制备方法，它们在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂，以及在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）的兽药中的应用。为感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪提供新的治疗药物，具有剂量适中、用药方便、疗效显著、经济适用、毒副作用小等优点。

Description

石蒜碱衍生物与以其为活性成分的兽药及其应用

技术领域：

本发明涉及兽药领域，具体地，涉及化合物石蒜碱及其衍生物，以其为活性成分的兽药，它们在制备猪繁殖与呼吸综合征抑制剂，以及在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）的兽药中的应用。

背景技术：

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratorysyndrome，PRRS）由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起，又称猪蓝耳病，以小猪呼吸紊乱与母猪繁殖障碍为特征。PRRS在世界的主要生猪产区传播，是引起养猪业损失的主要原因之一。在中国，仅2006年PRRS就传播到超过10个省、市、区，引起2,000,000多头猪感染，大约400,000头猪死亡[Tian et al. Plos One 2007, 6, 1]。到目前为止，尚无有效治疗猪繁殖与呼吸综合征的药物，而疫苗的发展也存在问题，还不能对养猪场提供有效的保护。

发明内容：

本发明的目的是提供石蒜碱衍生物，其药物组合物，它们在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂，以及在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）兽药中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

如下结构式所示的化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱，

。

兽药，以化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱或其药用盐为活性成分。

兽药，以下述结构通式所示的化合物或其药用盐为活性成分，

R₁与R₂为氢、烷基、芳烷基、含杂原子的烷基、烯烃基、酰基，或者R₁与R₂共同组成亚烷基或芳亚烷基。

化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂中的应用。

化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征的兽药中的应用。

化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱的制备方法：取2-O-乙酰石蒜碱加入二甲基亚砜和醋酸酐，室温下搅拌过夜，反应体系中加入水和氨水萃灭，然后用乙醚萃取，蒸干溶剂，硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯4׃1进行洗脱，得到化合物。

下述结构通式所示的化合物在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂中与在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征的兽药中的应用，

化合物石蒜碱、1,2-二-O-乙酰石蒜碱、2-O-乙酰石蒜碱或石蒜碱-2-酮在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂中的应用。

化合物石蒜碱、1,2-二-O-乙酰石蒜碱、2-O-乙酰石蒜碱或石蒜碱-2-酮在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征的兽药中的应用。

与现有技术相比，本发明具有下述的优益效果：

1、石蒜碱衍生物对猪繁殖与呼吸综合征病毒表现出强的抑制活性，均超过阳性对照磷酸替米考星的抑制活性，选择指数（SI）远高于磷酸替米考星的，即毒性较低。

2、本发明是关于化合物石蒜碱衍生物作为兽药以及在兽医临床上的用途。石蒜碱衍生物可为感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪提供新的治疗药物，具有剂量适中、用药方便、疗效显著、经济适用、毒副作用小等优点。

本发明的化合物石蒜碱衍生物可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成年猪来说，每天1-1000 mg比较合适。

经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药；非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。

具体实施方式：

下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱（KY-91）的制备：取2-O-乙酰石蒜碱50 mg（0.152 mmol）加入二甲基亚砜（0.5 mL）和醋酸酐（0.35 mL），室温下搅拌过夜。反应体系中加入水（0.5 mL）和氨水（0.5 mL）萃灭，然后用乙醚萃取，蒸干溶剂，硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯（4׃1）进行洗脱，得到化合物KY-91（15 mg, 0.0384 mmol, 25%）。

。

化合物KY-91为浅黄色固体；¹H-NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 7.09 (s, 1H, H-8), 6.62 (s, 1H, H-12), 5.90 (s, 2H,H₂-11), 5.75 (br s, 1H, H-2), 5.49 (br s, 1H, H-3), 4.70和4.65 (d, J = 12.0 Hz, 1H each, OCH₂SCH₃),4.57 (br s, 1H, H-1), 4.12和3.52 (d, J = 14.0 Hz,1H each, H₂-7), 3.46和2.44 (m, 1H each, H₂-5), 2.84(d, J = 10.4 Hz, 1H, H-12b), 2.72 (d, J = 10.4 Hz, 1H, H-12c), 2.66 (m, 2H, H₂-4), 2.17 (s, 3H, O(CO)CH₃), 1.86 (s, 3H, SCH₃); ¹³C-NMR (CD₃OD, 125 MHz): δ 172.2 (O(CO)CH₃),147.5 (C-10), 147.0 × 2 (C-3a,9), 130.0 (C-7a,12a),115.4 (C-3), 108.1 (C-8), 106.7 (C-12), 102.4 (C-11),74.5 (MeSCH₂O), 73.8 (C-1), 70.7 (C-2), 62.6 (C-12c), 57.8 (C-7), 54.5 (C-5), 42.2 (C-12b), 29.3 (C-4),21.0 (O(CO)CH₃), 14.0 (SCH₃); ESI-MS m/z: 390 [M +H]⁺; HR-EI-MS for C₂₀H₂₃NO₅S [M]⁺: calcd. 389.1297; found: 389.1306。

实施例2：

化合物石蒜碱（KY-01）[Wang et al. Chin Herb Med 2011,3: 60-63]、1,2-二-O-乙酰石蒜碱（KY-55）[Lee et al. Bioorg Med Chem 2007, 15 (2), 1034-1043]、2-O-乙酰石蒜碱（KY-71）[Toriizuka et al. Bioorg Med Chem 2008, 16 (24), 10182-10189]和石蒜碱-2-酮（KY-96）[Wang et al. ChemCent J 2012, 6: 96]按文献报道的方法制备。

石蒜碱（KY-01）制备方法：石蒜科植物石蒜（Lycoris radiata）的鳞茎与花用甲醇提取，回收溶剂得浸膏，加水制成混悬液，石油醚萃取，水相部分用1%盐酸调整pH值到大约2，用乙酸乙酯萃取。水相部分用5%氢氧化钠调整pH值到大约10，用氯仿萃取，回收溶剂得氯仿萃取物。将氯仿萃取物用C-18硅胶进行柱层析，甲醇-水梯度洗脱，甲醇-水（80׃20）洗脱部分用甲醇重结晶，得到石蒜碱（KY-01），得率0.033%。

1,2-二-O-乙酰石蒜碱（KY-55）制备方法：石蒜碱（1.0 g，3.484mmol）加入吡啶3 mL，醋酐3 mL，密封，50 ºC搅拌24小时，加入无水乙醇10 mL，室温搅拌3小时，浓缩，乙醇重结晶，得1,2-二-O-乙酰石蒜碱（KY-55，1.19 g，3.025 mmol，92%）。

2-O-乙酰石蒜碱（KY-71）制备方法：石蒜碱（300 mg, 1.045 mmol）加入无水吡啶15 mL，醋酐110 μL（1.170 mmol），4-二甲氨基吡啶（13 mg, 0.107 mmol），室温下搅拌12小时，然后加水萃灭，氯仿萃取，硅胶柱层析纯化，洗脱剂氯仿-乙酸乙酯-甲醇（80:20:1），得到2-O-乙酰石蒜碱（KY-71，141 mg，0.428 mmol，41%）。

石蒜碱-2-酮（KY-96）制备方法：石蒜碱1 g（3.481 mmol），氯铬酸吡啶嗡盐（6.657 g, 30.886 mmol），80-100目硅胶（6.657g），无水二甲基甲酰胺50 mL，室温下搅拌24小时，用硅藻土过滤。滤液用氨水调pH至9左右，氯仿萃取，回收氯仿后，硅胶柱层析分离，洗脱剂为氯仿-甲醇（20:1），得到石蒜碱-2-酮（KY-96，70 mg，0.245 mmol，7%)。

化合物KY-01、KY-55、KY-71、KY-91和KY-96结构式如下所示：

对化合物KY-01、KY-55、KY-71、KY-91和KY-96的猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制活性进行测定，其测定方法参照Liu等人[Liu et al. Helv Chim Acta 2012, 95 (7), 1231-1237]的方法。阳性对照药磷酸替米考星购自湖北恒硕化工有限公司。活性结果见表1。

表1 化合物对Marc-145细胞感染的猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒抑制效果

化合物	CC₅₀ (µM)	IC₅₀ (µM)	SI (CC₅₀/IC₅₀)
				石蒜碱（KY-01）	>1600	26.5	>60.4
1,2-二-O-乙酰石蒜碱（KY-55）	588.1	2.2	267.3
				2-O-乙酰石蒜碱（KY-71）	516.3	1.1	469.4
1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱（KY-91）	293.2	5.2	56.4
				石蒜碱-2-酮（KY-96）	733.9	7.4	99.2
磷酸替米考星（阳性对照）	855.4	225.1	3.8

注：CC₅₀表示半数细胞毒性浓度；IC₅₀表示半数抑制浓度；SI表示选择指数。

所测试的5个化合物对猪繁殖与呼吸综合征病毒表现出强的抑制活性，均超过阳性对照磷酸替米考星的抑制活性，且所测试的5个化合物选择指数（SI）远高于磷酸替米考星的，即毒性较低。其中，尤其是2-O-乙酰石蒜碱（KY-71）活性最好，其半数抑制浓度（IC₅₀）为1.1 µM，选择指数达到469.4。

实施例3：

按实施例1或2的方法先制得石蒜碱及其衍生物，按常规加注射液用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例4：

按实施例1或2的方法先制得石蒜碱及其衍生物，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后灭菌熔封得粉针剂。

实施例4：

按实施例1或2的方法先制得石蒜碱及其衍生物，按其与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。

实施例5：

按实施例1或2的方法先制得石蒜碱及其衍生物，按其与赋形剂重量比为1:5-1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。

上述的应用中，本发明的化合物石蒜碱及其衍生物可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成年猪来说，每天1～1000mg比较合适。在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征药物中的浓度为19.7～157.6 μM。

Claims

1.如下结构式所示的化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱，

。

2.兽药，以权利要求1所述的化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱或其药用盐为活性成分。

3.兽药，以下述结构通式I或II所示的化合物或其药用盐为活性成分，

4.如权利要求3所示的兽药，其特征在于所述化合物为：

。

5.权利要求1所示的化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂中的应用。

6.权利要求1所示的化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征的兽药中的应用。

7.权利要求1所示的化合物1-O-(甲硫)甲基-2-O-乙酰石蒜碱的制备方法：取2-O-乙酰石蒜碱加入二甲基亚砜和醋酸酐，室温下搅拌过夜，反应体系中加入水和氨水萃灭，然后用乙醚萃取，蒸干溶剂，硅胶柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯4׃1进行洗脱，得到化合物。

8.下述结构通式所示的化合物在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂中与在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征的兽药中的应用，

9.化合物石蒜碱、1,2-二-O-乙酰石蒜碱、2-O-乙酰石蒜碱或石蒜碱-2-酮在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制剂中的应用。

10.化合物石蒜碱、1,2-二-O-乙酰石蒜碱、2-O-乙酰石蒜碱或石蒜碱-2-酮在制备治疗猪繁殖与呼吸综合征的兽药中的应用。