CN102961384A - 紫丹参甲素的医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种二萜醌类化合物紫丹参甲素在制备抗肿瘤血管新生药物中的应用，本发明将紫丹参甲素作为一种血管新生抑制剂和抗恶性肿瘤剂，血管新生抑制剂可通过抑制恶性肿瘤组织中的血管生成，从而抑制恶性肿瘤细胞的增殖扩散。经实验证明，本发明所述紫丹参甲素能够有效的抑制恶性肿瘤细胞的增殖，并且对血管的异常生长具有显著的抑制作用。因此本发明所述紫丹参甲素可用于制备抗肿瘤血管新生的药物。

Description

紫丹参甲素的医药用途

技术领域

本发明属于植物药用成分和抗血管新生化合物领域，特别是涉及紫丹参甲素在制备抗肿瘤血管新生药物中的用途。

背景技术

血管新生是体内一个重要的生理和病理过程，血管新生是指从已有血管发芽生成新血管的过程。胚胎发育过程中一直随着血管生成而进行，当个体发育完成后，除了伤口愈合、女性经期等正常生理过程以外，成人体内不会出现血管生成。近年来的研究表明，体内新血管的异常生成可能是导致癌症、风湿性关节炎、糖尿病性失明、系统性红斑狼疮等严重疾病发生的根源。

癌症已经被公认为威胁人类健康和生命的第一疾病，目前治疗癌症的主要手段有：手术治疗﹑放射治疗、化学治疗，但这些治疗手段都存在缺乏特异性的缺点，所以在肿瘤治疗运用方面受到了很大的限制。近年来，抑制肿瘤血管新生成为治疗癌症的新靶点，血管新生抑制剂有潜力成为特异性强、毒副作用小的一类新型抗癌药。从天然产物中分离制备新的有血管新生抑制作用的化合物成为医药领域的研究热点。

甘西鼠尾草（Salvia przewalskii Maxim）为唇形科鼠尾草属植物，其主要成分及活性与丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）类似，是一种传统的中药材，虽然鼠尾草属植物化学成分和药理活性的研究历史悠久，但主要仍集中在对丹参及其几个主要代用品种的研究，尤其是对于该属植物在血管新生方面的调控作用，除丹参外，目前尚未见关于其他品种的相关报道。紫丹参甲素是从甘西鼠尾草中分离得到的二萜醌类化合物，通过查阅文献发现该化合物具有抗氧化和抑制血管收缩的药理活性，目前尚未见报道该化合物可作为血管新生抑制剂及抗肿瘤药物。紫丹参甲素化学结构式如下：

发明内容

本发明的目的是提供一种紫丹参甲素的新医药用途，即紫丹参甲素在制备抗肿瘤血管新生药物中的应用，即在制备以抑制血管新生为治疗途径的抗癌药物中的应用，其作为抗肿瘤血管新生药物的主要活性成分制成药物，作为血管新生抑制剂来治疗癌症。

本发明所述应用中还可以加入一种或多种药物上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂和稳定剂等，必要时还可加入香味剂、色素和甜味剂等。

本发明所述应用除制成胶囊外，还可以制成丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液和注射液等多种形式。

本发明所述的紫丹参甲素从天然植物甘西鼠尾草中分离获得，实验采用溶剂超声提取、反复硅胶柱层析、过滤、重结晶等方法制备得到紫丹参甲素单体，实验所用试剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮、正相硅胶。实验成本低、操作简单、效率高。其结构通过¹H-NMR和¹³C-NMR数据来确定。

本发明利用人肝癌细胞株HepG-2，通过MTT实验，来检测紫丹参甲素对肿瘤细胞的增殖影响，实验结果显示，紫丹参甲素浓度在2.5、5.0、10 mg/L时能够有效的抑制肿瘤细胞的增殖。

本发明利用鸡胚尿囊膜实验模型，通过鸡胚尿囊膜上血管的生长情况，来测试紫丹参甲素对血管新生的影响，实验结果显示，紫丹参甲素能够有效的抑制鸡胚尿囊膜血管的生长，其中在给药浓度为10.0、15.0 mg/L时，可以显著抑制血管新生，其作用强于阳性药物，显示出较强的血管新生抑制活性。

以上实验结果表明：紫丹参甲素对血管的异常新生具有较强的抑制作用，并且能够抑制肿瘤细胞的增殖，所以其可以作为制备血管新生抑制剂的有效成分，用于治疗由血管新生引发的癌症及相关疾病。

附图说明

图1是本发明从甘西鼠尾草中分离得到紫丹参甲素的工艺流程示意图；

图2是本发明中不同紫丹参甲素给药浓度作用于人肝癌细胞株HepG-2后MTT试验测试结果示意图；

图3是本发明中不同浓度紫丹参甲素对HepG-2细胞株增殖影响的抑制率结果比较示意图；

图4是本发明中紫丹参甲素作用于鸡胚尿囊膜，抑制血管新生的实验标本示意图；

图5是本发明中紫丹参甲素作用于鸡胚尿囊膜，对鸡胚尿囊膜血管新生抑制作用的结果数据经IPP软件处理后血管面积比较柱状示意图。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但在本发明的保护范围不限于下述的实施例，实施例中，未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行实验。

实施例1 ：紫丹参甲素的制备（下述实施例中使用的紫丹参甲素是采用如下方法制备得到的）

实验采用干燥甘西鼠尾草（全草）7.3 kg，粉碎过60目筛，用100%丙酮（每次20 L）室温下超声提取5次，提取液减压浓缩得粗浸膏300 g；将所得到的粗浸膏上正相硅胶柱（80~100 目，青岛海洋化工）（干法上样），依次用纯石油醚、石油醚-乙酸乙酯混合液（石油醚:乙酸乙酯为9:1、3:1、1:1、3:7）洗脱，收集各部分洗脱液，减压浓缩，浓缩液分开转移至10mL青霉素瓶中，用TLC进行检测，将成分大致相同的馏分进行合并；对石油醚:乙酸乙酯 = 1:1洗脱液洗脱部分（52 g）进行分离，分离方法为正相硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯混合液（5:1、2:1、1:1、1:2）进行洗脱，在石油醚:乙酸乙酯为5:1的洗脱馏分中析出大量红色针晶，吸出母液，然后对析出的大量红色针晶进行重结晶，即得到紫丹参甲素300 mg，该化合物经核磁共振检测得到的¹H-NMR和¹³C-NMR数据与钱名堃在《紫丹参甲素和乙素的分离及甲素的化学结构》一文中所述紫丹参甲素（przewaquinone A）的¹H-NMR和¹³C-NMR数据基本一致，¹H-NMR和¹³C-NMR数据如下：

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ: 3.30 (2H, d, J = 1.45 Hz, H-1), 3.09 (2H, t, J = 6.2 Hz, H-2), 4.68 (2H, s, H-3), 7.73 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6), 7.57 (1H, s, H-7), 7.51 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-15), 1.82 (2H, m, J = 6.0 Hz, Me-17), 1.31 (6H, s, Me-18                                  and Me-19). ¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ: 31.12 (C-1), 20.15 (C-2), 38.96 (C-3), 35.67 (C-4), 151.66 (C-5), 134.99 (C-6), 121.49 (C-7), 128.37 (C-8), 127.64 (C-9), 145.53 (C-10), 183.82 (C-11), 176.21 (C-12), 127.42 (C-13), 163.61 (C-14), 143.32 (C-15), 119.45 (C-16), 56.05 (C-17), 32.11 (C-18 and C-19)。

   根据以上波谱数据，确定该化合物即为紫丹参甲素。

 

实施例2：紫丹参甲素对人肝癌细胞株HepG-2增殖的影响实验（MTT）

将人肝癌细胞株HepG-2在37 ℃，5% CO₂条件下培养24小时后，将其按照每孔3000个细胞的密度接种至96孔板中，在上述条件下再培养24小时后，将紫丹参甲素制成0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mg/L的不同浓度药液，并加至96孔板中，在37 ℃，5% CO₂ 的条件下继续培养72小时，加入MTT（3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐）每孔20 μL继续孵育4 h，弃上清液，每孔加入150 μLDMSO，震荡1 h，于酶标仪490 nm处测吸光度OD值。（见图2）

实验结果如图3所示，当紫丹参甲素浓度大于2.5 mg/L时，细胞的增殖活性明显下降，抑制率明显上升。(抑制率=1-加药组OD值/空白对照组OD值)

实施例3：紫丹参甲素对鸡胚尿囊膜血管新生抑制作用实验

取新鲜种鸡蛋在温度为37.8 ℃，CO₂浓度为5%，湿度适宜的条件下孵育7天，在气室端开窗（1×1 cm），用直径为6 mm的无菌滤纸片作为给药载体，放置于尿囊膜上，按照5.0、10.0、15.0 mg/L的不同浓度给药组给药，设置空白组（生理盐水组）和阳性对照药组（地塞米松组），用透明胶带封窗，在上述条件下继续孵育，48 h后，取下尿囊膜组织，将其放入脱水液（甲醇:丙酮=1:1）脱水固定处理15 min后，对尿囊膜组织表面血管用数码相机微距拍照，用IPP图像处理软件对图片中血管面积进行计算，结果显示紫丹参甲素15.0 mg/L可以显著抑制血管新生，其作用强于阳性药物。（见图4-5）

从图4原始标本的照片中可以明显看出，当紫丹参甲素的给药浓度为10.0、15.0 mg/L时，血管生长明显受到抑制；

图5显示了经面积计算后血管面积的柱状图，从图中可以看出当给药浓度为10.0、15.0 mg/L，血管面积较生理盐水组明显降低。

Claims (1)

1.紫丹参甲素在制备以抑制血管新生为治疗途径的抗癌药物中的应用。

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