CN103006832A - 一种升血小板中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种升血小板中药组合物及其制备方法，该中药组合物是由青黛、连翘、仙鹤草、牡丹皮、甘草共五味中药制备而成；该药具有清热解毒，凉血止血，散瘀消斑的功效；主要用于原发性血小板减少性紫癜；症见：全身瘀点或瘀斑，发热烦渴，小便短赤，大便秘结，或见鼻衄，齿衄，舌红苔黄，脉滑数或弦数。其临床药效学试验效果显著，生物利用度高，且无任何毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种升血小板中药组合物及其制备方法，属于制药技术领域。
技术背景
原发性血小板减少性紫癜属临床中比较常见和多发的一种疾病，临床治疗比较困难，严重的影响了人们的身体健康；目前临床上使用的中成药也较多，但大多疗效不理想。2005年1月12日中国专利公报公开了申请的发明名称为：“治疗原发性血小板减少性紫癜的药物及其制备方法”，公开号为CN1562271A的专利申请，组成发明所述中成药的各味药物原料的重量配比为：青黛20-300份、牡丹皮300-1200份、连翘200-800份、仙鹤草200-800份、甘草50-600份。但是在实际应用过程中我们发现这种中成药的效果还不够理想。在近几年的时间里，我们在此专利所公开处方的基础上，对处方用量进行了大量的试验摸索，找到了最佳的组方配比，临床药效学实验效果显著提高，我们制成了胶囊剂、片剂及颗粒剂。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种疗效更为显著的一种升血小板中药组合物及其制备方法。该中药组合物用于原发性血小板减少性紫癜的治疗效果更好。
本发明中药组合物，其配方组成如下：
青黛167g 连翘500g 甘草500g
牡丹皮833g 仙鹤草250g。
1、本发明中药组合物胶囊剂的制备方法如下：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
2、本发明中药组合物片剂的制备方法如下：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量淀粉，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，压片，制成1000片，即得。
3、本发明中药组合物颗粒剂的制备方法如下：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，制成1000g颗粒，即得。
主要药效学试验证明：本发明原料重量配比“青黛167g、牡丹皮833g、连翘500g、仙鹤草250g、甘草500g”同原发明重量配比1：青黛20份、牡丹皮300份、连翘200份、仙鹤草200份、甘草50份及原发明重量配比2：青黛300份、牡丹皮1200份、连翘800份、仙鹤草800份、甘草600份及原发明重量配比3：青黛167份、牡丹皮833份、连翘500份、仙鹤草500份、甘草250份相比，药效学试验结果有显著提高。
主要药效学试验
一、实验药物的制备：
1、原料：
a、本发明组：由青黛167g、牡丹皮833g、连翘500g、仙鹤草250g、甘草500g制备。(按本发明青黛167g、牡丹皮833g、连翘500g、仙鹤草250g、甘草500g配比)
b、原发明1组：由青黛58.44g、牡丹皮876.6g、连翘584.4g、仙鹤草584.4g、甘草146.1g制备。(按原发明重量配比1：青黛20份、牡丹皮300份、连翘200份、仙鹤草200份、甘草50份配比)
c、原发明2组：由青黛182.5g、牡丹皮729.9g、连翘486.6g、仙鹤草486.6g、甘草365.0g制备。(按原发明重量配比2：青黛300份、牡丹皮1200份、连翘800份、仙鹤草800份、甘草600份配比)
d、原发明3组：由青黛167g、牡丹皮833g、连翘500g、仙鹤草500g、甘草250g制备。(按原发明重量配比3：青黛167份、牡丹皮833份、连翘500份、仙鹤草500份、甘草250份配比)
2、a、b、c、d的制法为：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
二、：试验过程及试验结果
主要药效学实验
实验目的：通过对本发明a组和b、c、d组的抗炎、毛细血管通透性、血小板凝聚、外周血血小板数、凝血、抗疲劳及机体免疫力等作用的药理实验研究，将本发明a组与d组以及新处方b、c组进行对比，观察其药理作用的强弱。
试验方法：本发明a组和b、c、d组对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响；对小鼠毛细血管通透性的影响；对小鼠血小板的影响；对小鼠凝血时间的影响；对小鼠外周血血小板的影响；对小鼠血清溶血素生成的影响；对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响；对小鼠抗疲劳的作用。
一、对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药为5.0g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药前2h将每只小鼠左后脚足跖用1％角叉菜胶0.03mL。药后1h颈椎脱位处死动物，自踝关节0.5mm处剪下后足分别称重，以两足重量之差为肿胀度。实验结果：见表1
表1对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组可明显抑制角叉菜胶致小鼠足的肿胀，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明a组比b、c、d组的抗炎作用强。
二、对小鼠毛细血管通透性的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药5.0g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，给小鼠尾静脉注射0.5％伊文思兰5ml/kg，5min后腹腔注射0.5％醋酸10ml/kg。30min后脱椎处死，剖腹用蒸馏水冲洗腹腔，冲洗液稀释至10ml，加0.1mol/L NaOH0.1ml，放置30min。用721型分分光光度计(590nm)比色。实验结果：见表2
表2对小鼠毛细血管通透性的影响
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组均显著抑制腹腔毛细血管通透性增加，对抗非特异性炎症，从而有效地抑制血细胞渗出，有利于止血过程，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明a组比b、c、d组的抑制毛细血管通透性的作用强。
三、对小鼠血小板的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药5.0g生药/kg。连续给药7d，末次给药1h后，按剪尾法用毛细管取血10μl，用半自动血球记数仪进行血小板记数。实验结果：见表3
表3对小鼠血小板的影响
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组均明显增强血小板凝聚功能，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明a组比b、c、d组的增强血小板凝聚功能作用强，止血效果好。
四、对小鼠凝血时间的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药5.0g生药/kg。连续给药7d，每天1次，于末次给药1h后，摘眼球取血，滴于载玻片上，以针头挑到血丝为凝血终点时间，测定出凝血时间。实验结果：见表4
表4对小鼠凝血时间的影响
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组均可缩短凝血时间而起到止血作用，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明a组比b、c、d组的止血作用强。
五、对小鼠外周血小板的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
实验前预先制备豚鼠抗小鼠血小板血清。将昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成6组，每组10只。除空白对照组外，其余5组按照100ml/20g小鼠腹腔注射已制备好的抗血清，分别于1、2、4、5、7、9d注入小鼠腹腔内以造模。从第1d注射起开始灌胃给药，空白对照组和模型组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d、e组分别灌胃给药5.0g生药/kg。至造模第11d采血，进行外周血象检测。实验结果：见表5
表5对小鼠外周血小板的影响
与模型组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组可明显提高小鼠外周血血小板数，与模型组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明a组比b、c、d组升高外周血血小板数的作用强。
六、对小鼠血清溶血素生成的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药5.0g生药/kg。每日1次，连续给药7d，在给药第二天，各组小鼠腹腔注射羊红细胞悬液(20亿个/ml)0.2ml。末次给药次日，小鼠眼眶取血进行溶血素测定。实验结果：见表6
表6对小鼠血清溶血素生成的影响
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组可增强小鼠血清溶血素的生成，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明a组比b、c、d组的提高机体免疫功能作用强。
七、对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药5.0g生药/kg。连续给药7d，每天1次，末次给药1h后，每鼠腹腔注射5％鸡红细胞混悬液0.4ml，4h后处死小鼠，测腹腔巨噬细胞的吞噬指数。实验结果：见表7
表7对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。本发明a组比b、c、d组的提高机体免疫功能作用强。
八、对小鼠抗疲劳的作用
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。
2、药物：本发明a组和b、c、d组均为2.25g生药/粒；药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明a组和b、c、d组分别灌胃给药5.0g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，按体重的10％给小鼠尾部加负荷(铅丝)，将小鼠放人55cm×35cm×15cm的游泳池中水温25℃，室温27℃，观察小鼠尾部加负荷游泳时间，小鼠鼻部沉入水中10s不再浮出水面为溺水指标。实验结果：见表8
表8对小鼠抗疲劳的作用
与对照组相比＊＊P＜0.01；与本发明a组比ΔP＜0.05。
结果表明：本发明a组和b、c、d组可明显延长小鼠的负重游泳时间，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明a组与b、c、d组相比较有显著性差异(P＜0.05)。本发明a组比b、c、d组抗疲劳作用强。
实验结果：本发明a组和b、c、d组可明显抑制角叉菜胶致小鼠足的肿胀；显著抑制腹腔毛细血管通透性增加；明显增强血小板凝聚功能；可缩短凝血时间而起到止血作用；可明显提高小鼠外周血血小板数；可增强小鼠血清溶血素的生成；能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能；可明显延长小鼠的负重游泳时间。
结论：本发明a组比b、c、d组的抗炎、抑制毛细血管通透性、增强血小板凝聚、提高外周血血小板数、缩短凝血时间、抗疲劳及提高机体免疫力等药理作用强。因此，临床上本发明a组比b、c、d组的清热解毒，凉血止血，散瘀消斑的疗效好。
急性毒性实验结果表明：将本发明胶囊最大浓度、最大容积灌胃给药，在24h内连续给药3次，每次间隔4h，累积药物总量达72g生药/kg，相当于临床拟用量的186.7倍。给药后7d内，小鼠活动、进食、排泄均正常，生长良好，毛色光亮，其平均体重均随试验时间的延长而增加。第8d处死后解剖每只小鼠肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、胃、肠等均未发现颜色及形态异常。表明本发明胶囊无急性毒性反应。
长期毒性实验结果表明：本发明胶囊组分为低、中、高剂量分别为9、18、36g生药/kg/d，相当于临床剂量的23.3、46.7、93.3倍，灌胃给药12周后，本发明胶囊对动物的一般状况、血液学指标、血液生化指标均无明显的影响，系统解剖、脏器系数及组织病理学检查也未发现异常病理改变。停药2周也未见明显改变。本发明胶囊在长期毒性试验中，未发现明显毒性反应和延迟毒性反应。可见，本发明胶囊无毒性反应，长期用药安全可靠。
具体实施方式
1、本发明胶囊剂的制备：
处方：
青黛167g 连翘500g 甘草500g
牡丹皮833g 仙鹤草250g
制备方法：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
2、本发明片剂的制备：
处方：
青黛167g 连翘500g 甘草500g
牡丹皮833g 仙鹤草250g
制备方法：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量淀粉，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，压片，制成1000片，即得。
3、本发明颗粒剂的制备：
处方：
青黛167g 连翘500g 甘草500g
牡丹皮833g 仙鹤草250g
制备方法：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，制成1000g颗粒，即得。
Claims (6)
1.一种升血小板中药组合物，其特征在于所述中药组合物的配方组成为：
青黛167g 连翘500g 甘草500g
牡丹皮833g 仙鹤草250g。
2.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于所述中药组合物的剂型为：胶囊剂、片剂或颗粒剂。
3.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于所述中药组合物最佳剂型为：胶囊剂。
4.根据权利要求1或2或3所述中药组合物的制备方法，其特征在于：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
5.根据权利要求1或2所述中药组合物的制备方法，其特征在于：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量淀粉，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，压片，制成1000片，即得。
6.根据权利要求1或2所述中药组合物的制备方法，其特征在于：
以上五味药材，取青黛研成细粉；仙鹤草、牡丹皮以5倍量80％乙醇提取二次，每次2小时，合并二次乙醇提取液，滤过，回收乙醇并减压浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏；连翘浸泡4小时，水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，挥发油另器贮存，水煎液留用，药渣与甘草水煎提取2次，每次煎煮1.5小时，二次水煎液与上述水煎液合并，滤过，浓缩成60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，与上述醇提浸膏合并，加入青黛细粉，混匀，60℃烘干，粉碎成细粉，加入适量糊精，加入乙醇制成颗粒，烘干，整粒，喷入上述挥发油，混匀，制成1000g颗粒，即得。
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