CN102965321A - 一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法 - Google Patents

一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法 Download PDF

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梁琪
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杨敏
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Abstract

本发明公开了一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法，将乳酸乳球菌乳酸亚种与干酪乳杆菌复合，经过菌种活化、种子液制备、增殖培养、菌体收集、预冻和真空低温冷冻干燥制得。具有方法简单、易操作、活菌数高等优点，生产的复合乳酸菌冻干粉活菌数达到1011CFU/g，适合应用于酸奶和干酪等发酵乳制品的加工。

Description

一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法。
背景技术
生产发酵乳制品最重要的要素是发酵过程中使用的乳酸菌菌种，只有好的乳酸菌菌种才能生产出优质的酸奶和干酪等发酵乳制品。目前国内酸奶和干酪乳酸菌发酵剂大多采用国外菌株。
发明内容
本发明的目的是提供一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法。
本发明的目的是按如下技术方案实现的，一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
     A、菌种活化：菌株甲为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)1-3-5，保藏号CGMCC NO.4776，菌株乙为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，保藏号CGMCC NO. 4775，将冷冻的以上两菌株分别接种到MRS液体培养基中，25℃培养12h后再按体积比为3%的比例转接到脱脂乳培养基中，25℃恒温条件下培养至凝乳，重复以上操作4~6次以恢复菌株活力；
     B、种子液制备：两菌株充分活化后，分别以接种量体积比为3%的比例分别接入MRS液体培养基，于25℃恒温培养12～14h得到种子液；
     C、增殖培养：将菌株甲种子液和菌株乙种子液以体积比2:1的比例混合后按体积比为3%的接种量接入液体MRS培养基，在25℃培养14h；
     D、菌体收集：将培养液在4℃、5000 r/mim离心16～20 min得到菌泥；
E、预冻：将得到的菌泥与保护剂以1:3比例混合，在-30℃预冷12小时；
F、真空低温冷冻干燥：将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-30℃到-40℃，冷冻干燥16～24小时，得到复合乳酸菌冻干粉。
作为本发明的进一步改进：所述步骤E中采用的保护剂为甘氨酸、脱脂乳、蔗糖和谷氨酸钠的混合物，重量比为甘氨酸：脱脂乳：蔗糖：谷氨酸钠是1：2：2：1。
青藏高原牧区具有非常特殊的地理生态环境，海拔高、昼夜温差大。当地牧民采用千百年来沿袭古老而传统的方法制作牦牛酸奶，将新鲜的牦牛乳加热煮沸，冷却后接种上次制作预留的酸奶(接种量一般是3%～5%)，在室内放置 (10～25℃) 至凝乳，属于典型的低温发酵。在长期的自然进化过程中，牦牛乳酸奶中传代性好、抗逆性强、凝乳状态好、风味独特、低温发酵的的优良乳酸菌得到富集。本发明采用的菌株从甘肃省甘南自治州的发酵牦牛乳中分离得到。其中菌株甲为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)1-3-5，保藏号CGMCC NO.4776，在CN102321550A专利申请中已经保藏，该菌株在25℃下发酵12h即可凝乳，用该菌株生产的酸奶具有粘度高、贮藏时后酸化弱的特点。菌株乙为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，保藏号CGMCC NO. 4775，在CN102367428A专利中已经提交微生物保藏。在进一步的研究中，我们发现这两株菌在复配发酵时具有良好的共生关系，可用于酸奶和干酪等发酵乳制品。
本发明复合乳酸菌冻干粉的制备方法，具有方法简单、易操作、活菌数高等优点，生产的复合乳酸菌冻干粉活菌数达到1011CFU/g，适合应用于酸奶和干酪等发酵乳制品的加工。
具体实施方式
下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例中菌株甲为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)1-3-5，保藏号CGMCC NO.4776，菌株乙为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，保藏号CGMCC NO. 4775；MRS液体培养基采用现有技术，保护剂为甘氨酸、脱脂乳、蔗糖和谷氨酸钠的混合物，重量比为甘氨酸：脱脂乳：蔗糖：谷氨酸钠是1：2：2：1。
实施例1
将冷冻的菌株甲和菌株乙分别接种到MRS液体培养基中，25℃培养12h后再按3% (V/V) 比例转接到脱脂乳培养基中，25℃恒温条件下培养至凝乳，重复以上操作4次以恢复菌株活力；脱脂乳培养基为脱脂乳加水配成12%的体积溶液。
两菌株充分活化后，将菌株甲种子液和菌株乙种子液以体积比2:1的比例混合后按体积比为3%的接种量接入液体MRS培养基，于25℃恒温培养12h得到种子液。将种子液以球杆菌比例2:1 (V/V)、接种量3 % (V/V) 接入液体MRS培养基，在25℃培养14h。将培养液在4℃、5000 r/mim离心16 min得到菌泥。将得到的菌泥与保护剂以1:3比例混合，在-30℃预冷12小时。将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-30℃到-40℃，冷冻干燥16小时，得到复合乳酸菌冻干粉，其活菌数达到4.10×1011CFU/g。
实施例2
将冷冻的菌株甲和菌株乙分别接种到MRS液体培养基中，25℃培养12h后再按3% (V/V) 比例转接到脱脂乳培养基中，25℃恒温条件下培养至凝乳，重复以上操作5次以恢复菌株活力。脱脂乳培养基为脱脂乳加水配成12%的体积溶液。
两菌株充分活化后，将菌株甲种子液和菌株乙种子液以体积比2:1的比例混合后按体积比为3%的接种量接入液体MRS培养基，于25℃恒温培养13h得到种子液。将种子液以球杆菌比例2:1 (V/V)、接种量3 % (V/V) 接入液体MRS培养基，在25℃培养14h。将培养液在4℃、5000 r/mim离心18 min得到菌泥。将得到的菌泥与保护剂以1:3比例混合，在-30℃预冷12小时。将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-30℃到-40℃，冷冻干燥20小时，得到复合乳酸菌冻干粉，其活菌数达到4.20×1011CFU/g。
实施例3
将冷冻的菌株甲和菌株乙分别接种到MRS液体培养基中，25℃培养12h后再按3% (V/V) 比例转接到脱脂乳培养基中，25℃恒温条件下培养至凝乳，重复以上操作6次以恢复菌株活力。脱脂乳培养基为脱脂乳加水配成12%的体积溶液。
两菌株充分活化后，将菌株甲种子液和菌株乙种子液以体积比2:1的比例混合后按体积比为3%的接种量接入液体MRS培养基，于25℃恒温培养14h得到种子液。将种子液以球杆菌比例2:1 (V/V)、接种量3 % (V/V) 接入液体MRS培养基，在25℃培养14h。将培养液在4℃、5000 r/mim离心20 min得到菌泥。将得到的菌泥与保护剂以1:3比例混合，在-30℃预冷12小时。将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-30℃到-40℃，冷冻干燥24小时，得到复合乳酸菌冻干粉，其活菌数达到4.30×1011CFU/g。

Claims (2)

1.一种复合乳酸菌冻干粉的制备方法，其特征是它包括以下步骤：
     A、菌种活化：菌株甲为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)1-3-5，保藏号CGMCC NO.4776，菌株乙为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，保藏号CGMCC NO. 4775，将冷冻的以上两菌株分别接种到MRS液体培养基中，25℃培养12h后再按体积比为3%的比例转接到脱脂乳培养基中，25℃恒温条件下培养至凝乳，重复以上操作4~6次以恢复菌株活力；
     B、种子液制备：两菌株充分活化后，分别以接种量体积比为3%的比例分别接入MRS液体培养基，于25℃恒温培养12～14h得到种子液；
     C、增殖培养：将菌株甲种子液和菌株乙种子液以体积比2:1的比例混合后按体积比为3%的接种量接入液体MRS培养基，在25℃培养14h；
     D、菌体收集：将培养液在4℃、5000 r/mim离心16～20 min得到菌泥；
E、预冻：将得到的菌泥与保护剂以1:3比例混合，在-30℃预冷12小时；
F、真空低温冷冻干燥：将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-30℃到-40℃，冷冻干燥16～24小时，得到复合乳酸菌冻干粉。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤E中采用的保护剂为甘氨酸、脱脂乳、蔗糖和谷氨酸钠的混合物，重量比为甘氨酸：脱脂乳：蔗糖：谷氨酸钠是1：2：2：1。
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