CN103387939A - 一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法 - Google Patents

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张卫兵
康克龙
高维东
李晓鹏
刘兴龙
杨敏
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Abstract

本发明公开了一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法。本发明的德氏保加利亚乳杆菌干粉制备过程包括以下步骤：菌种活化、增殖培养、菌体收集、预冻和真空低温冷冻干燥。本发明方法采用的菌种分离自天然发酵的牦牛乳酸奶，具有自主知识产权。本发明的德氏保加利亚乳杆菌干粉制备方法，具有方法简单、易操作等优点。本发明方法制备的德氏保加利亚乳杆菌干粉适于在25℃下发酵酸奶或其它乳制品。

Description

一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法。
背景技术
生产发酵乳制品最重要的要素是发酵过程中使用的乳酸菌，只有好的乳酸菌菌种才能生产出优质的发酵乳制品。青藏高原牧区具有非常特殊的地理生态环境，海拔高、昼夜温差大。当地牧民采用千百年来沿袭古老而传统的方法制作牦牛酸奶，将新鲜的牦牛乳加热煮沸，冷却后接种上次制作预留的酸奶(接种量一般是3％～5％)，在室内放置(10～25℃)至凝乳，属于典型的低温发酵。在长期的自然进化过程中，牦牛乳酸奶中传代性好、抗逆性强、凝乳状态好、风味独特、低温发酵的的优良乳酸菌得到富集。
前期我们采用Elliker培养基分离得到的一株德氏保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii subsp.Bulgaricus，保藏号CGMCC NO.4774)。该菌株已在酸奶中进行了成功应用，在本申请人2011.8.3提交的CN102286407A专利申请中已经提交微生物保藏。目前国内酸奶和干酪制作所用的乳酸菌发酵剂大多采用国外菌株。本发明所涉及一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法，具有方法简单、易操作、活菌数高等优点，生产的德氏保加利亚乳杆菌干粉适合应用于发酵乳制品加工。
发明内容
本发明的目的是提供一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法。本发明涉及一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法。本发明的目的是按如下技术方案实现的，其特征是它包括以下步骤：
(1)菌种活化：将冷冻保藏的德氏保加利亚乳杆菌接种到灭菌乳中，37℃培养12h后再按3％(V/V)比例转接到灭菌乳中，37℃下培养至凝乳；
(2)增殖培养：将活化好的菌种按3～5％(V/V)的比例接入增殖培养基()，在37℃培养10h，得到培养液；
(3)菌体收集：将培养液在4℃、6000～8000r/mim离心10～15min得到菌泥；
(4)预冻：将得到的菌泥与保护剂(甘氨酸∶脱脂乳∶蔗糖∶谷氨酸钠＝1∶2∶1∶1)以1∶3比例混合，在-30℃预冷12小时；
(5)真空低温冷冻干燥：将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-40℃以下，冷冻干燥20～25小时，得到德氏保加利亚乳杆菌干粉；
本发明步骤(2)中采用的增殖培养基成分为：蛋白胨1％，牛肉膏1％，胰蛋白胨0.5％，K2HPO4·3H2O0.2％，葡萄糖2.3％，乙酸钠0.5％，柠檬酸钠0.2％，吐温-800.1％，MgSO4·7H2O0.058％，MnSO4·4H2O0.025％。
本发明的有益效果
(1)本发明方法采用的菌种分离自天然发酵的牦牛乳酸奶，具有自主知识产权。
(2)本发明的德氏保加利亚乳杆菌干粉制备方法，具有方法简单、易操作等优点。
(3)本发明生产的德氏保加利亚乳杆菌干粉适用于在25℃下发酵酸奶或其它乳制品。
具体实施方式
下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
将冷冻保藏的德氏保加利亚乳杆菌接种到灭菌乳中，37℃培养12h后再按3％(V/V)比例转接到灭菌乳中，37℃下培养至凝乳。将活化好的菌种按3％(V/V)的比例接入增殖培养基，在37℃培养10h，得到培养液。将培养液在4℃、6000r/mim离心10min得到菌泥。将得到的菌泥与保护剂以1∶3比例混合，在-30℃预冷12小时。将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-40℃以下，冷冻干燥20小时，得到德氏保加利亚乳杆菌干粉。
实施例2
将冷冻保藏的德氏保加利亚乳杆菌接种到灭菌乳中，37℃培养12h后再按3％(V/V)比例转接到灭菌乳中，37℃下培养至凝乳。将活化好的菌种按4％(V/V)的比例接入增殖培养基，在37℃培养10h，得到培养液。将培养液在4℃、7000r/mim离心12min得到菌泥。将得到的菌泥与保护剂以1∶3比例混合，在-30℃预冷12小时。将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-40℃以下，冷冻干燥23小时，得到德氏保加利亚乳杆菌干粉。
实施例3
将冷冻保藏的德氏保加利亚乳杆菌接种到灭菌乳中，37℃培养12h后再按3％(V/V)比例转接到灭菌乳中，37℃下培养至凝乳。将活化好的菌种按5％(V/V)的比例接入增殖培养基，在37℃培养10h，得到培养液。将培养液在4℃、8000r/mim离心15min得到菌泥。将得到的菌泥与保护剂以1∶3比例混合，在-30℃预冷12小时。将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-40℃以下，冷冻干燥25小时，得到德氏保加利亚乳杆菌干粉。

Claims (2)

1.一种德氏保加利亚乳杆菌干粉的制备方法，其特征是它包括以下步骤： 
(1)菌种活化：将冷冻保藏的德氏保加利亚乳杆菌接种到灭菌乳中，37℃培养12h后再按3％(V/V)比例转接到灭菌乳中，37℃下培养至凝乳； 
(2)增殖培养：将活化好的菌种按3～5％(V/V)的比例接入增殖培养基，在37℃培养10h，得到培养液； 
(3)菌体收集：将培养液在4℃、6000～8000r/mim离心10～15min得到菌泥； 
(4)预冻：将得到的菌泥与保护剂(甘氨酸∶脱脂乳∶蔗糖∶谷氨酸钠＝1∶2∶1∶1)以1∶3比例混合，在-30℃预冷12小时； 
(5)真空低温冷冻干燥：将预冻后的菌泥加入冻干机，保持-40℃以下，冷冻干燥20～25小时，得到德氏保加利亚乳杆菌干粉。 
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中采用的增殖培养基成分为：蛋白胨1％，牛肉膏1％，胰蛋白胨0.5％，K2HPO4·3H2O0.2％，葡萄糖2.3％，乙酸钠0.5％，柠檬酸钠0.2％，吐温-800.1％，MgSO4·7H2O0.058％，MnSO4·4H2O0.025％。 
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