CN102942605A

CN102942605A - 清香藤中环烯醚萜类化合物的制备方法及其应用

Info

Publication number: CN102942605A
Application number: CN2012105026085A
Authority: CN
Inventors: 孟大利; 张辘辘; 陈超; 徐丽焕
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2012-11-30
Filing date: 2012-11-30
Publication date: 2013-02-27
Anticipated expiration: 2032-11-30
Also published as: CN102942605B

Abstract

本发明涉及清香藤中环烯醚萜类化合物制备方法和抗炎、抗肿瘤应用,属于医药技术领域.本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，其方法为粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，得总提取液,总提取液经大孔树脂柱色谱处理,即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；采用正相硅胶柱色谱法分离,筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分,所得有效流分经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物。本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法简便可靠，提取分离效率高，可操作性强，易于实现工业化大生产，所制备的环烯醚萜类化合物具有抗炎、抗肿瘤活性。

Description

清香藤中环烯醚萜类化合物的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及清香藤中环烯醚萜类化合物制备方法和抗炎、抗肿瘤应用。

背景技术

清香藤（Jasminum lanceolarium Roxb.）又名川香茉莉、光清香藤、北清香藤，为木犀科素馨属植物, 清香藤的药用部位为根及茎，称为破骨风。据《新华本草纲要》记载破骨风有祛风除湿、凉血解毒功能，主治风湿痹痛、跌打损伤、头痛、外伤出血、无名疮毒、蛇伤。在我国民间，清香藤的根茎被用于治疗发热及风湿疼痛，其叶可用于消炎，治疗眼部疼痛。

目前国内外关于清香藤化学成分的报道很少。SHEN Ya-ching等在较早时期从中分离得到5个裂环环烯醚萜苷类及相关的甲基化、乙酰化衍生物；近年来，孙佳明对该植物的化学成分和药理活性进行了初步研究。本课题组重点对清香藤植物中的环烯醚萜类成分的提取制备工艺和抗炎、抗肿瘤活性进行了详细的研究。

环烯醚萜类化合物是含有环烯醚键的单萜类化合物，尤其包括裂环环烯醚萜类以及裂环内酯环烯醚萜类两种类型。环烯醚萜类化合物的稳定性很差，基本上以苷的形式存在居多。据文献报道，含有环烯醚萜类化合物的植物提取物具有一系列生物活性，如文献报道茉莉根的醇浸膏对小鼠具有减少自主活动，抑制扭体反应及延长戊巴比妥钠阈上剂量睡眠时间的作用，表明对中枢神经系统具有抑制作用；M. L. Balchin等利用豚鼠的回肠和小鼠的子宫在离体条件下研究了J.grandiflora的精油解痉挛作用；SHEN Ya-ching等在用豚鼠离体心脏作心血管药理方面活性筛选时发现，J.multiflorum植物内酯类成分具有很强的异丙肾上腺素样作用，李红及王振学等研究中药茉莉根的醇浸膏的戒毒效果，利用小鼠模型，采用醋酸扭体法观察，显示出明显的镇痛作用等。

为了能更充分的研究这类天然产物的药理活性，我们总结发现了一种快速、大量从植物界分离制备环烯醚萜类化合物并检测其抗炎、抗肿瘤活性的方法。

发明内容

本发明的目的是提供了清香藤中的环烯醚萜类化合物的制备方法及其抗炎、抗肿瘤应用。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，可以通过以下两种方法中任意一种制备环烯醚萜类化合物，

方法一：

(1)粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%-95%的乙醇提取，过滤，合并滤液, 减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液；

(2)总提取液经大孔树脂柱色谱(如XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100，X-5、D-201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD60等型号)处理，依次用不同比例的水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC 技术（210nm检测），筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％ -100％醇洗脱下来的流分为环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；

(3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷-甲醇-水，石油醚-乙酸乙酯/丙酮或氯仿/二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术（210nm检测），筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分；

(4)上述步骤(3) 中所得有效流分经半制备或制备型HPLC 色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物。

方法二：

(1) 粉碎干燥的清香藤茎，然后利用闪式提取技术，溶剂提取法或超声提取法，采用20%-95%的乙醇提取，过滤，合并滤液, 减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液；

(2)将上述总提取液分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，收集得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物经大孔吸附树脂柱色谱(如XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100，X-5、D-201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD60等型号)处理，依次用水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC 技术（210nm检测），筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％ -100％醇洗脱下来的环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；

(5)上述步骤(2)中将剩余水层溶液经活性炭色谱柱，先后利用水(100 ml)洗脱，醇(300 ml)洗脱。将醇洗脱得到的溶液进行浓缩，得到残渣。残渣经CH₂N₂甲基化后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一和方法二中的步骤(2)的醇为乙醇，其梯度洗脱浓度为10％ -100％。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一和方法二中的步骤（2）的大孔吸附树脂选自XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100，X-5、D-201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD600中的一种。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一中的步骤（3）为粗提物经正相硅胶柱色谱法处理，洗脱溶剂为氯仿或二氯甲烷-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯/丙酮、氯仿/二氯甲烷-甲醇，洗脱比例分别为50:1：0.1-1:5:1、10:1-1:1、20:1-1：1的洗脱部位富集环烯醚萜类化合物的流分。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法二中的步骤（3）为粗提物经正相硅胶柱色谱法处理，洗脱溶剂为氯仿或二氯甲烷-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯/丙酮、氯仿/二氯甲烷-甲醇，洗脱比例分别为50:1：0.1-1:5:1、10:1-1:1、20:1-1：1的洗脱部位富集环烯醚萜类化合物的流分。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一和方法二中的步骤（3）中反相色谱柱的填料可为RP-18，RP-8或RP-2。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一中的步骤（3）为粗提物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分为环烯醚萜类化合物的流分。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法二中的步骤（3）为步骤(2)的正丁醇萃取物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分富含环烯醚萜类化合物的流分。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法一中的步骤(4)为步骤（3）中所得流分经高效液相色谱分离，流动相为甲醇-水、乙腈-水或甲醇-乙腈-水，从甲醇-水混合溶剂比例为1:10-10:1、乙腈-水混合溶剂比例为1:10-3:1、甲醇-乙腈-水混合溶剂比例为1:1:10-4:4:2的流分中得到环烯醚萜类单体化合物。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法二中的步骤(4)为步骤（3）中所得流分经高效液相色谱分离，流动相为甲醇-水、乙腈-水或甲醇-乙腈-水，从甲醇-水混合溶剂比例为1:10-10:1、乙腈-水混合溶剂比例为1:10-3:1、甲醇-乙腈-水混合溶剂比例为1:1:10-4:4:2的流分得到环烯醚萜类单体化合物。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法，所述方法二中的步骤步骤(5)为步骤(2)中所剩水层溶液依次经水、醇洗脱，浓缩后的残渣经CH₂N₂甲基化结构修饰后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。

通过本发明的方法制备了如下清香藤中的环烯醚萜类化合物，该类化合物具有如下两种结构通式：

根据母核结构特征，大致将其分为I-IV四种类型:

各母核的主要取代基如下：

母核Ⅰ R1:Me,H R2:H,Me R3:H,MeO,Me, OAc R4:H,OH R5:H,Me R6:OH,Me,OGlc R7:H,MeO R8:H,MeO

母核Ⅱ R1:H,Me R2:OH,Me R3:OH,Me,H R4:OH,Me,H

母核Ⅲ R1:H,Me R2:H, OAc,Me, R3: H, Me，OAc

母核Ⅳ R1:H,Me R2:OH,H, OMe

环烯醚萜类化合物的基本母核包括I-IV四种类型，其中每一类型的母核根据母核中取代基的种类、位置等不同，将母核细划分为几个不同的亚型。I型化合物中，连于1位碳的b取代的羟基可与糖类形成单糖氧苷以及多糖氧苷，7、11位为羧基取代，且7位可与苯乙醇类、苯丙酸类等化合物成酯，多数8位为甲基取代，少数可为羟基、苯丙酸乙酰氧基取代，11位通常形成羧酸甲酯；II型化合物为非五元环开裂的特殊环烯醚萜类化合物，为环烯醚萜母核的氧杂六元环的2位氧原子处发生断裂开环而形成的，此类母核的6、7位常有取代基的取代，为a或b取代类型，8位甲基可为a或b取代；III型化合物基本为正常的环烯醚萜类，区别在于1位羟基为b取代，常与糖类形成氧苷，7位为b氧取代，8为甲基为b取代，11位形成羧基并连有取代基；IV型化合物为五元环转变为七元内酯环后的母核类型，1位为b羟基取代，10位甲基变为a羟基取代，且可能与苯乙醇类化合物形成醚键，11位形成羧基并连有取代基。I型母核结构的化合物最为常见。

综上所述，环烯醚萜类化合物的母核具有以下共同特征：1位羟基为b取代，8位甲基可为a或b取代，11位形成羧基并连有取代基，取代基可为苯乙醇类、苯丙酸类等化合物以及甲基；糖类一般与苷元1位的羟基形成单糖氧苷以及多糖氧苷，糖的种类为呋喃糖，葡萄糖醛酸，葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖，木糖，鼠李糖，甘露糖，岩藻糖，阿洛糖，来苏糖，核糖，果糖，糖的类型是呋喃糖或吡喃糖，糖之间的连接方式有1-2位连接，1-4位连接，1-3位连接和1-6位连接；呋喃糖上可有一个或二个酰基取代，酰基取代类型主要为乙酰基和/或当归酰基和/或惕恪酰基。

本发明提供的环烯醚萜类化合物的制备方法简便可靠，提取分离效率高，可操作性强，易于实现工业化大生产，所制备的环烯醚萜类化合物具有抗炎、抗肿瘤活性。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。

实施例1从清香藤茎中制备环烯醚萜类化合物

(1)清香藤茎粉碎后利用溶剂提取法，采用70％的乙醇回流提取三次，减压回收提取液至醇浓度低于5％，得总提取液；

(2)总提取液经大孔吸附树脂（HPD-100）处理，依次用水和40%，60%，90%乙醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱技术，以氯仿-甲醇-水为展开剂，以硫酸-乙醇溶液为显色剂，筛选确定60%和90%乙醇洗脱部位富集环烯醚萜类成分的有效部位，得粗提物；

(3)60%和90%乙醇洗脱部位的粗提物经正相硅胶柱色谱处理，以不同比列的氯仿-甲醇作为洗脱剂梯度洗脱，各洗脱流分利用薄层色谱技术或HPLC技术（210nm）筛选确定粗提物20:1-1:2的洗脱部位为环烯醚萜类化合物的流分；

(4)步骤(3)中所得流分经制备型HPLC色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水为洗脱剂洗脱，或采用重结晶等方法分离纯化得到如下所示的4个环烯醚萜类化合物。化合物1、2、3、4的¹H-NMR的信号归属见表1。

其中化合物2为文献中未报导的新化合物。

实施例2 从清香藤茎中制备环烯醚萜类化合物

(1) 清香藤茎粉碎后利用溶剂提取法，采用50%的乙醇回流提取三次，减压回收提取液至醇浓度低于5％，提取液分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，收集得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物；

(2) 乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物分别经大孔吸附树脂(D101）柱色谱处理，依次用水和40%，60%，90%乙醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱技术（210nm检测），筛选确定乙酸乙酯萃取物的大孔吸附树脂的60%、90%乙醇洗脱部位以及正丁醇萃取物的的大孔吸附树脂的40%、60%乙醇洗脱部位为富集环烯醚萜类成分的有效部位，即得粗提物；

(3)取上述粗提物采用快速中低压反相柱色谱处理，依次用20%，25%，30%，35%，40%，50%的甲醇梯度洗脱，各洗脱流分利用薄层色谱技术和高效液相色谱技术（210nm检测），筛选确定30%，35%，40%，50%的洗脱部位为环烯醚萜类化合物的流分；

(4)步骤(3)中所得流分经半制备型HPLC 色谱，正相硅胶柱色谱以甲醇-水为流动相等，得到如下所示的3个环烯醚萜类化合物。化合物5、6、7的的¹H-NMR的信号归属见表2。

实施例3从清香藤茎中环烯醚萜类化合物的肺炎克雷伯菌抑菌试验。

实验分为DMSO-菌液组，菌液组，抗生素-菌液组，样品-菌液组；除样品-菌液组外，各组均有7个附孔作平行试验，且DMSO、抗生素、样品的量均为2.5ul（除菌液组的各孔只加入100ul菌液），剩余的各个附孔加入97.5ul的菌液。将96孔板置于37℃的摇床中，静置培养16h，用酶标仪测得（620nm处）样品的OD值。

根据以下公式计算抑菌活性：

抑菌活性=1-(OD_{样品-菌液组}-OD_{DMSO-细菌组})/ OD_{DMSO-细菌组}

试验结果如表3中所示。

结论：化合物6对肺炎克雷伯菌有较强的抑菌作用，化合物2对肺炎克雷伯菌有轻微的抑菌作用。

实施例4从清香藤茎中环烯醚萜类化合物的肺癌A549细胞的细胞毒活性试验

细胞接种在含10%胎牛血清、2%谷氨酰胺的RPMI-1640培养液中，在37℃，5% CO₂培养箱中培养。以MTT比色法对化合物1、2、3、4、5、6、7进行筛选。取对数生长期的A549 细胞，以5Х10⁴个/ml的密度接种于 96 孔板，每孔100 μL，培养24h。加入不同浓度的化合物，48h后用MTT法测定细胞抑制率。根据以下公式计算细胞的抑制率：

抑制率(%)=[A492_(control)-A492_(compound)]/[A492_(control) -A492_(blank)]Х100%

试验结果如表4中所示。

结论：化合物6对肺癌A549细胞产生较强的细胞毒活性，化合物2对肺癌A549细胞产生中度的细胞毒活性，其他化合物无明显的细胞毒活性。

实施例5从清香藤茎中环烯醚萜类化合物的体外抗炎活性的测定

采用体外小鼠腹腔巨噬细胞筛选体系，测定了所分离得到的环烯醚萜类化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NO合成与释放的抑制作用及对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α合成与释放的抑制作用。

1）环烯醚萜类化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NO合成与释放的抑制作用

小鼠腹腔注射15mg/ml玉米淀粉盐水溶液1.5ml/只，3天后取腹腔巨嗜细胞，以内含10%（v/v）胎牛血清（FCS）的RPMI-1640培养液稀释为1×106个/ml的细胞悬液，接种于96孔平底培养板中，100μl/well，置于37℃、饱和湿度、0.05CO2培养箱中培养。供试药物溶解于DMSO 中，并用含10%（v/v）胎牛血清（FCS）的RPMI-1640培养液稀释为

0.3,1.0,8.0,30.0,100.0μg/ml五个梯度。对照组为100μM的NaNO₂用含10%（v/v）胎牛血清（FCS）的RPMI-1640培养液稀释为0.3,1.0,8.0,30.0,100.0μg/ml五个梯度。0.2%的N-1-萘基乙二胺双氯化物溶液（NED）与0.2%的磺胺溶液（SA）等体积混合配成Gress试剂，每孔中加入0.1mlGress试剂。混合均匀，10min后于550nm波长下测OD值。

数据处理：

Inhibition rate (IR) %=（

_LPS- _sample）/（

_LPS-

_{negativecontrol}）×100%。

结果如表5中所示。

表5

2）环烯醚萜类化合物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α合成与释放的抑制作用

取对数生长期的L929细胞，用0.1%胰蛋白酶及0.02%EDTA混合液消化。用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调整细胞浓度至2×105个/ml的细胞悬液，接种于96孔平底培养板中，100μl/well，置于37℃、饱和湿度、0.05CO2培养箱中培养24h。供试药物溶解于DMSO 中，并用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液稀释为0.3,1.0,8.0,30.0,100.0μg/ml五个梯度。对照品为磷酸盐缓冲液（PBS），并用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液稀释为0.3,1.0,8.0,30.0,100.0μg/ml五个梯度。

MTT染色，570nm下测OD值。

数据处理：

Inhibition rate (IR) %=（

_LPS-

_sample）/（ _LPS-

_{negativecontrol}）×100%。

结果如表6中所示。

表6

实施例5从清香藤茎中环烯醚萜类化合物的体内抗炎活性

采用昆明种小鼠为筛选体系，测定了环烯醚萜类化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀、棉球肉芽肿增生的抑制作用及对增高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用, 结果见表5、表6和表7。

1）环烯醚萜类化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用

昆明种小鼠60只，18-22g，雌雄各半，随机分为5组，每组12只，分别为空白对照组一组、总环烯醚萜类成分组低、中、高三组、吲哚美辛组。分别连续给药7天，第7天给药后1h，于小鼠右耳两面涂二甲苯25μl，左耳不涂为正常耳，2h后，脱颈椎处死，用直径8mm打孔器打下左耳和右耳同一部位的圆片，于扭力天平上称重。记录重量(mg)，并计算耳肿胀率及抑制率。

数据处理：

Edema Rate (ER)（%）= [Right Ear（mg）-Left ear（mg）]/Left Ear（mg）×100%；

Inhibitory Rate (IR)（%）=（ER_control-ER_samples）/ ER_control×100%。

试验结果如表7中所示。

表7

2）环烯醚萜类化合物对小鼠棉球肉芽肿增生的抑制作用

昆明种小鼠60只，18-22g，雌雄各半，随机分为5组，每组12只。分别为空白对照组一组、总环烯醚萜类成分组低、中、高三组、吲哚美辛组。在给药第一日分别手术植入10mg灭菌棉球（每个棉球含1000U青霉素和1000U链霉素），之后分别连续给药7天，第8天脱颈椎处死小鼠，剥离肉芽组织，并于60℃烘箱中烘12h，称重。

记录重量(mg)，并计算肉芽肿重。试验结果如表8中所示。

表8

3）环烯醚萜类化合物对增高小鼠腹腔毛细血管通透性的作用

昆明种小鼠60只，18-22g，雌雄各半，随机分为5组，每组12只。分别为空白对照组一组、总环烯醚萜类成分组低、中、高三组、吲哚美辛组。分别连续给药7天，第7天给药后1h，iv伊文思兰NS溶液0.1ml/10g（2%），立即ip0.6%醋酸0.2ml/只，20min后，脱颈椎处死小鼠，剪开腹腔，用5mlNS溶液冲洗腹腔数次，收集洗涤液。洗涤液在721分光光度计590nm处测定吸光度值。

试验结果如表9中所示。

表9

Claims

1.清香藤中环烯醚萜类化合物的制备方法，其特征在于：

方法一：

(2)总提取液经大孔吸附树脂柱色谱处理，依次用不同比例的水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC 技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％ -100％醇洗脱下来的流分为环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；

(3)上述粗提物采用正相硅胶柱色谱法分离，以不同比列的氯仿/二氯甲烷-甲醇-水，石油醚-乙酸乙酯/丙酮或氯仿/二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂洗脱，或反相柱色谱分离，或快速中低压反相柱色谱分离，以甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱，减压回收溶剂，所得流分利用薄层色谱和HPLC技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效流分；

(4)上述步骤(3) 中所得有效流分经半制备或制备型HPLC 色谱分离，以甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水为流动相洗脱，得到环烯醚萜类化合物；

方法二：

(2)将上述总提取液分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，收集得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物经大孔吸附树脂柱色谱处理，依次用水和醇梯度洗脱，各洗脱部位利用薄层色谱和HPLC 技术，筛选富集环烯醚萜类化合物的有效部位，得到10％ -100％醇洗脱下来的环烯醚萜类化合物的有效部位，即得富含环烯醚萜类成分的粗提物；

(5)上述步骤(2)中将剩余水层溶液经活性炭色谱柱，先后利用水(100 ml)洗脱，醇(300 ml)洗脱；

将醇洗脱得到的溶液进行浓缩，得到残渣；

残渣经CH₂N₂甲基化后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)的醇为乙醇，其梯度洗脱浓度为10％ -100％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）的大孔吸附树脂选自XAD-4，Diaion HP-20，D101、D102、D401，D1、D2、D3、D4，HPD-100，X-5、D-201，HPD-300，AB-8XAD-6、XAD-7、XAD-8、HPD400、HPD600中的一种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）为粗提物经正相硅胶柱色谱法处理，洗脱溶剂为氯仿或二氯甲烷-甲醇-水、石油醚-乙酸乙酯/丙酮、氯仿/二氯甲烷-甲醇，洗脱比例分别为50:1：0.1-1:5:1、10:1-1:1、20:1-1：1的洗脱部位富集环烯醚萜类化合物的流分。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，方法一中步骤（3）为粗提物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分为环烯醚萜类化合物的流分；方法二中步骤（3）为步骤(2)的正丁醇萃取物经反相柱色谱或快速中低压柱色谱法处理，洗脱溶剂为1:10-10:1的甲醇-水或乙醇-水，混合比例1:9-9:1的流分富含环烯醚萜类化合物的流分。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反相色谱柱的填料为RP-18，RP-8或RP-2。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，方法二中的步骤(4)为步骤（3）中所得流分经高效液相色谱分离，流动相为甲醇-水、乙腈-水或甲醇-乙腈-水，从甲醇-水混合溶剂比例为1:10-10:1、乙腈-水混合溶剂比例为1:10-3:1、甲醇-乙腈-水混合溶剂比例为1:1:10-4:4:2的流分得到环烯醚萜类单体化合物。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，方法二中步骤(5)为步骤(2)中所剩水层溶液依次经水、醇洗脱，浓缩后的残渣经CH₂N₂甲基化结构修饰后，利用制备薄层色谱法得到环烯醚萜类化合物。

9.权利要求1-8任何一项所述方法制备的环烯醚萜类化合物，其特征在于：所述的环烯醚萜类化合物具有如下结构：

各母核的主要取代基如下：

母核Ⅱ R1:H,Me R2:OH,Me R3:OH,Me,H R4:OH,Me,H

母核Ⅲ R1:H,Me R2:H, OAc,Me, R3: H, Me，OAc

母核Ⅳ R1:H,Me R2:OH,H, OMe。

10.权利要求9所述的环烯醚萜类化合物在制备抗炎、抗肿瘤药物中的应用。