CN103509071B - 女贞子活性成分的制备及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，公开了女贞子中大波斯菊苷和女贞酸的制备及两种活性成分的应用。一种制备大波斯菊苷和女贞酸的方法为女贞子干燥粉碎后，用含水乙醇回流提取或冷浸提取；提取液经大孔吸附树脂吸附、含水乙醇洗脱；洗脱液蒸除溶剂后经色谱柱纯化，根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品，收集洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液；然后分别纯化制备得到大波斯菊苷和女贞酸。与现有技术相比，本发明所述制备方法操作简单、快速，同时可以进行大批量的生产，制备得到的大波斯菊苷和女贞酸收率和纯度较现有方法均显著提高，适合于工业化生产；并且避免了毒性有机溶剂的使用，安全环保。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及女贞子活性成分的制备及其应用，尤其女贞子中大波斯菊苷和女贞酸的制备及两种活性成分的应用。
背景技术
女贞子为木犀科(Oleaeeae)植物女贞(Ligustrum lucidum Ait)的干燥成熟果实，在《神农本草经》中列为上品，是我国传统的扶正固本中药。女贞子味甘、苦，性凉，具有滋补肝肾，明目乌发的功效。临床主要用于治疗眩晕耳鸣，腰膝酸软，目暗不明，须发早白等症。
长期以来，女贞子中以齐墩果酸为代表的脂溶性三萜酸类成分，从化学到药理得到深入系统的研究。然而女贞子传统用药方法，是作为水煎液服用，因而其中的水溶性活性成份不容忽视。近年来发现女贞子中含有丰富的环烯醚萜苷如女贞苷、特女贞苷、女贞苷G13、女贞酸等，以及黄酮类化合物如槲皮素、圣草酚、芸香苷和大波斯菊苷等。
其中，大波斯菊苷，又名芹菜素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，英文名为Apigenin-7-glucoside；Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside，分子式为C21H20O10，分子量为432.3800，结构式如下：
研究表明大波斯菊苷具有抗菌、抗氧化、抗诱变(K Kanazawa,et al.,BiosciBiotechnol Biochem,1998)、保护DNA损伤(XX Xia,et al.,J Med Plant Res 6(26):4292-4298,2012)以及降血糖(NB Muppalaneni,et al.,)、增强3T3-L1细胞胰岛素β-受体酪氨酸磷酸化和脂肪细胞分泌的作用(YK Rao，et al.,Evidence-Based Complementaryand Alternative Medicine，2011)，诱导K562细胞凋亡及红系分化，表现出一定的抗肿瘤潜力(Tsolmon S，Mol Nutr Food Res，2011)。
大波斯菊苷由Fukuyama Y等分离得到（Fukuyama Y，Koshino K，Hasegawa T，etal.New secoiridoid glucosides fromLigustrumjaponicum［J］.Planta Med，1987，53：427.）。目前关于制备大波斯菊苷的方法报道较少，大多采用有机溶剂萃取得到，操作复杂，收率低，不利于环保。
女贞酸由吴立军等于1996年首次分离得到，又名达玛-24-烯-3β-乙酞氧基-20S-醇(II)（吴立军，尹双，王素贤，等.女贞子化学成分的研究（Ⅲ）［J］.中国药物化学杂志，1996，6（2）：117-120.），其结构式如下：
目前女贞酸的制备方法为女贞子经乙醇提取后依次用石油醚、CHCl3、EtOAc和n-BuOH萃取，再经大孔树脂柱处理及硅胶反复柱层析得到。同样存在操作复杂，收率低的问题。而且石油醚、CHCl3、EtOAc均为有毒溶剂，易造成水体等污染，不利于环保。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术存在的问题提供一种简单快速、高效环保、收率高的制备大波斯菊苷和女贞酸的方法。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种制备大波斯菊苷和女贞酸的方法，女贞子干燥粉碎后，用10-20倍重量的50～95v/v%的含水乙醇回流提取或冷浸提取；提取液经大孔吸附树脂吸附、含水乙醇洗脱；洗脱液蒸除溶剂后经色谱柱纯化，根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品，收集洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液；含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液分别纯化制备得到大波斯菊苷和女贞酸。
优选的，所述大孔吸附树脂为DIAION HP20、AMBERLITE XAD16N、AMBERLITEXAD7HP、D101大孔吸附树脂。
优选的，所述色谱柱纯化为凝胶柱、反相硅胶柱或中压制备柱层析纯化。
优选的，所述凝胶柱为Toyopeal HW-40C或Sephadex LH20。
优选的，所述凝胶柱纯化的洗脱剂为50～90%甲醇。
优选的，反相硅胶柱或中压制备柱填料为ODS。
优选的，所述反相硅胶或中压制备柱纯化的洗脱剂为30～90%甲醇。
优选的，所述色谱柱纯化前还包括聚酰胺柱层析初步纯化的步骤。
本发明还提供了大波斯菊苷在制备保护神经细胞药物、制备抗衰老药物或制备NF-κB信号抑制剂中的应用。
本发明还提供了女贞酸在制备保护神经细胞药物、制备抗衰老药物或制备NF-κB信号抑制剂中的应用。
与现有技术相比，本发明所述制备大波斯菊苷和女贞酸的方法采用大孔树脂吸附、色谱柱纯化，操作简单、快速，缩短了生产周期，同时可以进行大批量的生产，制备得到的大波斯菊苷和女贞酸收率和纯度较现有方法均显著提高，适合于工业化生产；并且不使用石油醚、CHCl3、EtOAc、n-BuOH萃取，避免了毒性有机溶剂的使用，对环境污染小，安全环保。
附图说明
图1示大波斯菊苷的13C-NMR检测结果图；
图2示女贞酸的13C-NMR检测结果图。
具体实施方式
本发明实施例公开了女贞子活性成分的制备及其应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法及应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种制备大波斯菊苷和女贞酸的方法，其特征在于，女贞子干燥粉碎后，用10-20倍重量的50～95v/v%的含水乙醇回流提取或冷浸提取；提取液经大孔吸附树脂吸附、含水乙醇洗脱；洗脱液蒸除溶剂后经色谱柱纯化，根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品，收集洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液；含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液分别纯化制备得到大波斯菊苷和女贞酸。
也就是说，一种制备大波斯菊苷的方法为女贞子干燥粉碎后，用10-20倍重量的50～95v/v%的含水乙醇回流提取或冷浸提取；提取液减压浓缩至无醇味，经大孔吸附树脂吸附、含水乙醇洗脱；洗脱液蒸除溶剂后色谱柱纯化，根据大波斯菊苷标准品收集洗脱液得到大波斯菊苷。
同样的，一种制备女贞酸的方法为女贞子干燥粉碎后，用10-20倍重量的50～95v/v%的含水乙醇回流提取或冷浸提取；提取液减压浓缩至无醇味，经大孔吸附树脂吸附、含水乙醇洗脱；洗脱液蒸除溶剂后色谱柱纯化，根据女贞酸标准品收集洗脱液得到女贞酸。
本发明所述制备方法首先以女贞子为原料用含水乙醇提取。
其中，所述含水乙醇优选为10-20倍重量的50～95v/v%乙醇水溶液。更优选为10倍重量的75～80v/v%乙醇水溶液。
优选的，所述提取可以为回流提取或冷浸提取。进一步地，所述回流提取优选为回流提取2～3次，每次1～3小时。所述冷浸提取优选为冷浸提取2～3次，每次12～48h。
含水乙醇提取后提取液利用大孔吸附树脂吸附，含水乙醇洗脱，得到洗脱液。
其中，所述大孔吸附树脂为DIAION HP20、AMBERLITE XAD16N、AMBERLITE XAD7HP或D101大孔吸附树脂。
优选的，所述含水乙醇洗脱为60～95%乙醇洗脱。在一些实施例中，所述含水乙醇为75%乙醇。所述含水乙醇的用量优选为提取液的5倍体积。
进一步的，所述含水乙醇洗脱60～95%前还包括依次用水和15%乙醇洗脱的步骤，以除去杂质。所述水和15%乙醇的用量优选为提取液的3倍体积。
洗脱液蒸除溶剂后经色谱柱纯化。其中，所述色谱柱纯化为凝胶柱层析纯化、反相硅胶柱层析纯化、中压制备柱层析纯化中的一种或几种。
凝胶柱层析又称凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子不能进入凝胶颗粒中的静止相中，只留在凝胶颗粒之间的流动相中，因此以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此就要花费较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。
凝胶的钟类很多，本发明所述凝胶柱纯化优选为Toyopeal HW-40C或羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)。
进一步的，所述凝胶柱纯化的洗脱剂优选为50～90%甲醇。更优选为20%～70%甲醇。在一些实施例中，所述洗脱剂为80%甲醇。
反相硅胶柱添加反相硅胶的层析柱。反相硅胶是在正相硅胶（普通硅胶，官能团为OH）的基础上进行化学反应把OH取代为OR（R是碳氢链或称作碳链，CH）的硅胶。常用的有C8，C18，ODS，RP-8和RP-18。
中压制备柱是在经典柱色谱与低压柱色谱的基础上增加了能够提供压力的恒流泵的色谱系统。中压制备柱可以提高制备色谱的分辨率同时又能保证有较快的分离速度。
优选的，所述反相硅胶柱或中压制备柱填料为ODS。是十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS），也叫C18柱。ODS可完成高效液相色谱70～80%的分析任务。由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力。
进一步的，所述反相硅胶或中压制备柱纯化的洗脱剂优选为30～90%甲醇。更优选为20%～70%甲醇洗脱，流速3-7mL/min。
本发明所述制备方法需要分别根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品，收集色谱柱纯化所得的洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液。所述含有大波斯菊苷的洗脱液或含有女贞酸的洗脱液可以通过上述色谱柱进一步纯化，经TLC检测，纯度符合要求的流分合并，蒸除溶剂得到大波斯菊苷或女贞酸。
在一些实施例中，所述色谱柱纯化前还包括聚酰胺柱层析初步纯化的步骤。
聚酰胺是一类结构中含有重复单位酰胺键（-CO-NH-）的高分子聚合物，酰胺基团上的O、N原子在酸性介质中结合质子而带正电荷，以静电引力形成吸附溶液中的阴离子，故可与酚类、酸类、醌类、黄酮类等富含酚羟基的化合物形成氢键而被吸附，与不能形成氢键的化合物分离。
进一步的，所述聚酰胺柱层析初步纯化的洗脱剂优选为乙醇水溶液。
采用本发明所述制备方法大波斯菊苷的得率为0.08～0.10%（即制得的大波斯菊苷与生药女贞子的重量比），女贞酸的得率为0.05～0.06%（即制得的女贞酸与生药女贞子的重量比），并且制得的大波斯菊苷和女贞酸纯度经HPLC归一化法测定，含量均在90%以上。与现有制备方法相比，收率和纯度均显著提高。
在具体实施例中，本发明采用MTT法检测大波斯菊苷与女贞酸对L-谷氨酸损伤PC-12细胞的神经保护作用。结果显示与模型组相比，大波斯菊苷组、女贞酸组均有较好的保护PC-12细胞作用，尤其是大波斯菊苷组保护作用更强。表明大波斯菊苷和女贞酸具有神经保护作用。因此本发明提供了大波斯菊苷和女贞酸在制备保护神经细胞药物中的应用。
在另一具体实施例中，本发明通过果蝇寿命实验和酶活实验考察大波斯菊苷与女贞酸对果蝇寿命及果蝇中CAT、SOD及MDA含量的影响。结果显示大波斯菊苷组、女贞酸组均可以延长果蝇寿命，尤其是大波斯菊苷组两种浓度的延寿率均超过了10%，明显优于女贞酸组。而对于果蝇中CAT、SOD及MDA的含量，大波斯菊苷组、女贞酸组均可以提高果蝇体内抗氧化酶CAT和SOD的水平，降低脂质过氧化物的降解产物MDA的含量，表明大波斯菊苷和女贞酸均具有较好的清除自由基活性和抑制脂质过氧化的能力。表明大波斯菊苷和女贞酸均具有抗衰老活性，所述抗衰老活性可能与抗自由基作用密切相关。因此本发明提供了大波斯菊苷和女贞酸在制备抗衰老药物中的应用。
在另一具体实施例中，本发明通过荧光素酶活性检测大波斯菊苷与女贞酸对稳定转染pNF-κB-luc的293细胞中NF-κB信号的抑制活性。结果显示，大波斯菊苷和女贞酸对NF-κB通路均具有显著的抑制作用，特别是女贞酸在12.5μg/mL浓度下，对NF-κB抑制率可达46.2%，在50μg/mL浓度下，对NF-κB抑制率可达75.1%。表明大波斯菊苷和女贞酸可用于制备NF-κB信号抑制剂。因此本发明提供了大波斯菊苷和女贞酸在制备NF-κB信号抑制剂中的应用。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：大波斯菊苷与女贞酸制备
将11月采集的女贞子5kg，晒干，粉碎至10目左右，用50kg 80%(v/v)的乙醇回流提取2次，每次3小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，静置过夜后上DIAION HP20大孔吸附树脂，依次用3倍体积的水、3倍体积15%乙醇、5倍体积75%乙醇洗脱。其中75%乙醇洗脱部位减压浓缩，回收溶剂得到悬浮液。所得悬浮液加入1/4体积的95%乙醇溶解，溶液经聚酰胺柱初步分离，乙醇梯度洗脱，TLC检测，根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品，收集洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液。
含有女贞酸的洗脱液经Toyopeal HW-40C柱层析分离，80%甲醇洗脱，经TLC检测，将纯度符合要求的流分合并，浓缩至少量液体，静置过夜，析出白色结晶3g，即为女贞酸的单体化合物。核磁检测mp.232-233℃，ESI-MS 451[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6,600MHz)和13C-NMR(DMSO-d6,150MHz)，具体数据见表1。经HPLC归一化法测定，女贞酸含量高于92%。
含有大波斯菊苷的洗脱液经硅胶柱纯化，体积比10:1～5:1的二氯甲烷与甲醇的混合溶液洗脱，经TLC检测，将纯度符合要求的流分合并，浓缩至少量液体，静置过夜，析出淡黄色粉末5g，即为大波斯菊苷的单体化合物。核磁检测mp.178-180℃，ESI-MS 431[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6,600MHz)和13C-NMR(DMSO-d6,150MHz)，具体数据见表1。经HPLC归一化法测定，大波斯菊苷含量高于92%。
表1.大波斯菊苷和女贞酸的核磁数据
实施例2：大波斯菊苷与女贞酸制备
将12月采集的女贞子4kg，晒干，粉碎至10目左右，用40kg 75%(v/v)的乙醇浸渍提取3次，每次12h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，静置过夜后上AMBERLITE XAD16N大孔吸附树脂，依次用3倍体积的水、3倍体积15%乙醇、5倍体积75%乙醇洗脱。其中75%乙醇洗脱液减压浓缩得悬浮液。所得悬浮液加入1/4体积的95%乙醇溶解，经Sephadex LH20柱层析分离，80%甲醇洗脱，TLC检测，根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品，收集洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液。
含有大波斯菊苷的洗脱液浓缩至少量液体，静置过夜，析出淡黄色的大波斯菊苷3.5g。核磁检测结果同实施例1。经HPLC归一化法测定，含量高于92%。
含有女贞酸的洗脱液浓缩至少量液体，静置过夜，析出白色结晶女贞酸2g。核磁检测结果同实施例1。经HPLC归一化法测定，含量高于92%。
实施例3：大波斯菊苷与女贞酸制备
将12月采集的女贞子3kg，晒干，粉碎至10目左右，用30kg 75%(v/v)的乙醇浸渍提取2次，每次48h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，静置过夜后上D101大孔吸附树脂，依次用3倍体积的水、3倍体积15%乙醇、5倍体积75%乙醇洗脱。其中75%乙醇洗脱液减压浓缩，回收溶剂得到悬浮液。经ODS柱层析，30～90%甲醇梯度洗脱，根据大波斯菊苷标准品和女贞酸标准品的出峰时间，收集洗脱液，分别得到含有大波斯菊苷的洗脱液和含有女贞酸的洗脱液。
含有大波斯菊苷的洗脱液经中压制备柱纯化，用20%～70%甲醇洗脱，流速4mL/min，TLC检测，将纯度符合要求的流分合并，蒸除溶剂得到淡黄色大波斯菊苷2.5g。核磁检测结果同实施例1。经HPLC归一化法测定，含量高于92%。
含有女贞酸的洗脱液经中压制备柱纯化，用20%～70%甲醇洗脱，流速4mL/min，TLC检测，将纯度符合要求的流分合并，蒸除溶剂得到白色结晶女贞酸1.5g。核磁检测结果同实施例1。经HPLC归一化法测定，含量高于92%。
实施例4：大波斯菊苷与女贞酸对L-谷氨酸损伤PC-12细胞的神经保护作用
PC-12细胞，培养于含体积分数为10%胎牛血清的高糖DMEM培养基中。于37℃、5%CO2条件下培养，每隔2天换液1次，3-4天传代1次。选取对数生长期细胞做实验。将处于对数生长期的PC-12细胞以2×104/孔接种于96孔培养板，用MTT法检测细胞活力。待细胞80%融合时，换新培养基将细胞分为8组：正常组(不含Glu的10%胎牛血清的高糖DMEM培养基)；模型组(10%胎牛血清的高糖DMEM培养基+Glu(终浓度为12.5mmol/L))；3个不同浓度大波斯菊苷给药组(10%胎牛血清的高糖DMEM培养基+不同浓度大波斯菊+Glu)。3个不同浓度女贞酸给药组(10%胎牛血清的高糖DMEM培养基+不同浓度女贞酸+Glu)
MTT法检测细胞活力取对数生长期细胞，以2×104/孔接种于96孔培养板，100μL/孔。在37℃、5%CO2条件下培养过夜后，按分组要求给以不同处理，给药组分别给予不同浓度药物（药物浓度分别为50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL），每组设4个平行孔。各给药组加入药物1h后加入Glu(终浓度为12.5mmol/L)诱导，继续培养24h后，倾除所有培养液，每孔加5g/LMTT 50μL，再培养4h，倾去液体，每孔加DMSO 100μL，待紫色结晶完全溶解后，用酶联免疫仪在波长570nm处读取吸光度(OD)。取4孔OD值的均数按公式计算细胞存活率。细胞存活率%=实验组OD/对照组OD×100%，重复3次。实验结果见表2。
表2.大波斯菊苷和女贞酸对谷氨酸诱导的PC-12细胞的保护作用
由表1结果可见，大波斯菊苷组、女贞酸组和模型组中含有终浓度为12.5mmol/L的谷氨酸。与模型组相比，大波斯菊苷组、女贞酸组均有较好的保护PC-12细胞作用，尤其是大波斯菊苷组保护作用更强。表明大波斯菊苷和女贞酸具有神经保护作用。
实施例5：大波斯菊苷与女贞酸对果蝇的抗衰老作用
无水葡萄糖（AR）72g、琼脂粉6g、玉米粉72g、防腐剂（1%对羟基苯甲酸乙酯的75%乙醇溶液）、酵母粉10g，配成基础培养基；在基础培养基中分别添加浓度为50mg/L大波斯菊苷和10mg/L女贞酸，作为实验培养基。
果蝇寿命实验收集48h羽化黑腹果蝇成虫，随机分组，每组果蝇400只，雌雄各半。每4天更换新鲜培养基。实验开始后，每天定点观察，记录果蝇死亡数，直到各组果蝇全部死亡为止。重复试验，计算果蝇的半数死亡时间、最高寿命、平均寿命和平均延寿率，其中平均延寿率(%)=(给药组平均寿命-对照组平均寿命)/对照组平均寿命×100%。实验数据见表3。
表3.大波斯菊苷和女贞酸对果蝇寿命的影响
注：**与对照组比较，p<0.01,*与对照组比较，p<0.05
CAT、SOD和MDA的测定收集48h羽化黑腹果蝇成虫，随机分组试验。每组果蝇200只，雌雄各半。每4天更换新鲜培养基。在给药后第30天时，用生理盐水制成8%的组织匀浆；以4000r/min离心10min，按照CAT、SOD和MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明分别测定每组上清液CAT、SOD及MDA水平。实验数据见表4。
表4.大波斯菊苷和女贞酸对果蝇中CAT、SOD及MDA的影响
注：**为与对照组比较，p<0.01；*为与对照组比较，p<0.05。
由表3结果可见，大波斯菊苷组、女贞酸组均可以延长果蝇寿命，尤其是大波斯菊苷组两种浓度的延寿率均超过了10%，明显优于女贞酸组。由表4结果可见，大波斯菊苷组、女贞酸组均可以提高果蝇体内抗氧化酶CAT和SOD的水平，降低脂质过氧化物的降解产物MDA的含量，表明大波斯菊苷和女贞酸均具有较好的清除自由基活性和抑制脂质过氧化的能力。综上所述，大波斯菊苷和女贞酸均具有抗衰老活性。
实施例6：大波斯菊苷和女贞酸对NF-κB的抑制活性
将稳定转染pNF-κB-luc的293细胞，以1×105cells/孔接种96孔板，加入不同浓度的大波斯菊苷、女贞酸或DMSO，加药15min后再加入LPS 10μg/mL刺激6h，荧光素酶活性用试剂盒(Promega公司)测定。上机检测(Berthold公司，Sirius单管光检测系统)发光值。雷公藤甲素(LGT，纯度≥99%)作阳性对照。具体数据见表5。
表5.大波斯菊苷和女贞酸对NF-κB信号通路的抑制作用
注：a)为LGT浓度为10μg/mL；**为与对照组（LPS）比较，p<0.01；*为与对照组（LPS）比较，p<0.05。
由表5结果可见，大波斯菊苷和女贞酸对NF-κB通路均具有显著的抑制作用，特别是女贞酸在12.5μg/mL浓度下，对NF-κB抑制率可达46.2%，在50μg/mL浓度下，对NF-κB抑制率可达75.1%。表明大波斯菊苷和女贞酸可用于制备NF-κB信号抑制剂。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (1)
1.女贞酸在制备保护谷氨酸诱导的PC-12神经细胞药物、制备抗衰老药物或制备NF-κB信号抑制剂中的应用。
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