CN102908341A

CN102908341A - 蔓荆子黄素作为具有抗血管新生作用的药物有效成分

Info

Publication number: CN102908341A
Application number: CN2012103315589A
Authority: CN
Inventors: 李梢
Original assignee: Tsinghua University
Current assignee: Tsinghua University
Priority date: 2009-09-25
Filing date: 2009-09-25
Publication date: 2013-02-06

Abstract

本发明涉及蔓荆子黄素（Vitexicarpin）这一具有抗血管新生作用的中药有效成分，属于药物开发技术领域。本发明发现蔓荆子黄素具有抑制血管内皮细胞增殖的显著效果，对于治疗肿瘤、类风湿性关节炎等血管新生相关疾病具有作用。

Description

蔓荆子黄素作为具有抗血管新生作用的药物有效成分

本申请是中国专利申请第200910092969.5号的分案申请。

技术领域

本发明涉及作为具有抗血管新生作用的药物有效成分的蔓荆子黄素（Vitexicarpin）。

背景技术

“血管新生”（angiogenesis，新生血管形成）是类风湿性关节炎、肿瘤等危害人民生命健康的重大疾病的共性病理环节。抗血管新生药物是阻断类风湿性关节炎病变进程，“饿死肿瘤”等的重要治疗途径，具有重要的科学价值和重大的现实意义。

络脉理论是中医学的经典理论之一，常用于类风湿关节炎、肿瘤等疑难疾病的治疗，并积累了丰富的中药方剂。发明人从络脉理论的角度出发，提出了“络”与血管新生有关的假说。据此假说，发现一种治疗络病的方剂“清络饮”确实具有抗血管新生作用，并对清络饮有效成分的抗血管新生作用开展了深入研究，取得了一些进展。如本发明人的中国专利第ZL200610114226.X.号中公布的，不仅已经确定苦参碱和青藤碱是清络饮抗血管新生的有效成分，而且进一步确定苦参碱和青藤碱具有抗血管新生的协同作用（超过简单加和的有益增强效果）。

然而，中药治疗络病的方剂众多，是否其他治疗络病的方剂中也有调节血管新生的有效成分？如何去发现？迄今尚不清楚。中药复方的药物成份复杂，其药效物质基础不够明确，药物作用机理不够清晰，这也是现有中药方剂所普遍存在的不足与局限。

具体地说，方剂名称或者功能主治中含“络”的中药复方数量巨大，其中仅本发明人整理、搜集、见诸记载的，就有3865首。例如活血通络方、活络效灵丹、桂枝活络汤、搜风通络方、小活络丹、通络蠲痹汤、散风活络丸、麝雄大活络散、熄风通络汤、解郁通络方、养阴宁络汤、紫肾通络汤、脉络宁、通心络、脑络通、消栓活络饮、复方通络止痛散、化痰通络汤、胃络宁、参芪通络合剂、温经通络汤、清络饮、温络饮等。

单以其中比较著名的清络饮为例，虽然清络饮对属于中医“络病”范畴的类风湿性关节炎、肿瘤等疾病具有较好疗效，但清络饮的化学成分十分复杂。清络饮的主要药物组成为：苦参，青风藤，黄柏，萆薢。据不完全统计，已知的苦参化学成分有54种，青风藤45种，黄柏46种，萆薢30种。其中：

苦参含有Matrine、Sophoridine、Isomatrine、7,11-Dehydromatrine、Sophocarpine、Isosophocarpine、Sophoramine、△⁷-Dehydrosophoramine、Sophoranol、9a-hydroxysophoramine、5a,9a-dihydroxymatrine、Oxymatrine、N-oxysophocarpine、Sophoranol-N-oxide、N-methylcytisine、Rhombifoline、Lupanine、Anagyrine、Baptifoline、mamanine、Kuraramine、Isokuraramine、Isoanhydroicaritin、Kushenol C、Kushenol G、Isoxanthohumol、Nor-kurarinone、Kurarinone、Iso kurarinone、Kurarinol、Neokurarinol、Nor-kurarinol、Sophoraflavanone、Kushenol A、Kushenol B、Kushenol E、Kushenol F、KushenolH、Kushenol I、Kushenol J、Kushenol K、Kushenol L、Kushenol M、Kushenol N、Formononetin、Kushenol O、Kuraridin、Kuraridinol、Kushenol D、Trifolirhizin、Kushenin、Maackiain等；

青风藤含有8-Oxocanadine、(-)-8-Oxotetrahydropalmatine、Cheilanthifoline、Acetamide,N-(1,7-dimethoxy-2-phenanthrenyl)-(9CI)、Caffeine、1,7-Dimethylxanthine、Acutupyrrocoline、(+)-menisperine、(+)-laurifoline、Dehydrodiscretine、Epiberberine、Palmatine、Menisdaurilide、Aquilegiolide、2(4H)-Benzofuranone,5,6,7,7a-tetrahydro-6-hydroxy-,(6R-trans)-、(+)-Dihydroaquilegiolide、8,14-dihydrosalutaridine、Stepharanine、Bianfugenine、Sinomendine、Magnoflorine、Salicylal dehyde、palmitic acid、6H-Dibenzo[de,g]quinoline-6-carboxaldehyde,4,5-dihydro-1,2-dimethoxy-(9CI)、(-)-stepholidine、Liriodenine、Allantoin、aristolochic acid、stepharine、N,O-diace-tylmichelalbine、N-acetylstepharine、Michelalbine、acutumidine、dl-Syringeresinol、Syringaresinol、sinoacutine、isosinomenine、(-)--Sitosterol、stigmasterol、tuduranine、sinactine、bisinomenine、sinomenine (discovered byIshiwara)、Diversine(discovered by Taguchi)等；

黄柏含有phellodensin G、phellodenol D、phellodenol E、obacunone、obaculactone、berberine、Palmatine、Daucosterol、Cyclohexanecarboxylic acid、3-acetyl-3,4-dihydro-5,6-dimethoxy-1H-2-benzopyran-1-one、quercetin-3-O--D-galactoside、Dihydrokaempferol、Phellochinin A、(E,E,Z)-N-(2-Methylpropyl)-2,4,8-tetradecatrienamide、N-methylflindersine、Melianone、Phellochin、(-)-Syringaresinol diglucoside、

-D-Glucopyranoside,2,6-dimethoxy-4-[tetrahydro-4-[(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)methyl]-3-(hydroxymethyl)-2-furanyl]phenyl,[2R-(2,3,4)]-(9CI)、Cyclohexanecarboxylic acid、Cathin-6-one、Friedelin、5-Cyclodecen-1-ol,4,10-bis(methylene)-7-(1-methylethyl)-(9CI)、Niloticin、dihydroniloticin、niloticinacetate、Hispidol B、Piscidinol A、Cneorin NP36、Sylvapine A,-Pinene、

-Geraniolene,-Myrcene、Cyclohexene,Limonene、NSC 319644,cis-Carveol、trans-Carveol、(+)-Carvone、trans-Limonene oxide、cis-Limonene oxide、-Elemene、Menisperine、phenllodendrine、ferulic acid、adenosine、Noroxyhydrastinine、jatrorrhizine、Berbithine、Anhydroberberilic acid等；

萆薢含有spongiosin B，Diospongin B、spongiosin C，Diospongin C、Piperitol、Sesaminone、hypoglaucin G、Dioscin、gracilin、-D-Glucopyranoside、(1R)-1-ethenylhexyl、6-O--L-arabinopyranosyl-(9CI)、-D-Glucopyranoside,(3,22,25R)-26-(-D-glucopyranosyloxy)-22-hydroxyfurost-5-en-3-yl、2-O-(6-deoxy--L-mannopyranosyl)-(9CI)、-D-Glucopyranoside,(3,22,25R)-、26-(-D-glucopyranosyloxy)-22-、hydroxyfurost-5-en-3-ylO-6-deoxy--L-、mannopyranosyl-(12)-O-[6-deoxy--L-mannopyranosyl-(14)]-(9CI)、Hypoglaucin、Hspongipregnoloside A、Spongipregnoloside B、SpongipregnolosidesC、Spongipregnolosides D、-D-Glucopyranoside,(1R)-1-ethenylhexyl6-O--L-arabinopyranosyl-(9CI)、Orbiculatoside B、Dumoside、Trigofoenoside D1、Zizyvoside I、Glycoside D、Lilioglycoside R;Protogracillin、Methylprotodioscin、Pregnadienolone,3-O--gracillimatriose、Gracilline;Lilioglycoside G、Lilioglycoside D;Prosapogenin A、Collettiside III;Dioscine;Polyphyllin III、Doursterol;Sitogluside、diospongins A、(+)-Lirioresinol B;+)-Syringaresinol等。

而上述数千种功能主治或方剂名称中含“络”的中药复方中，大多数组方都比清络饮更为复杂，其化学成分无疑也比清络饮更为庞杂。

而从疾病这方面看，类风湿性关节炎、肿瘤等则涉及十分复杂的病理生理过程。

一方面是极其庞杂的方剂成分，另一方面是复杂甚至包含未知因素的病理生理过程；分析、确定这些众多的方剂成分与复杂的病理环节之间的关系，从其中发现、确定针对某种病理生理过程的有效成分，是非常艰巨的任务，也是困扰中医药现代研究的瓶颈问题。

发明内容

本发明人通过广泛、深入的研究探索，发现出现于含“络”方剂组方中的蔓荆子的主要成分，蔓荆子黄素（Vitexicarpin），具有显著的抗血管新生作用。本发明人进一步进行了检验蔓荆子黄素在体外对内皮细胞增殖影响的试验，结果证实了蔓荆子黄素的抗血管新生作用（IC50为3.2μM）。

由此，本发明人通过实验研究，确定和获得了蔓荆子黄素这种具有抗血管新生作用的药物有效成分。

本发明的药物成分蔓荆子黄素可采用常规的制备方法制成中、西药的各种剂型。

本发明所述蔓荆子黄素（英文名Vitexicarpin）具体为：

蔓荆子黄素英文名Vitexicarpin；CA名：4H-1-Benzopyran-4-one,5-hydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-3,6,7-trimethoxy-；IUPAC名：5-hydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-3,6,7-trimethoxychromen-4-one，分子式为C19H18O8；分子量为374.341420g/mol；CID号：5315263；CAS号：479-91-4。

蔓荆子黄素结构式为：

本发明的技术特点及效果：

采用代表血管新生的、血管内皮生长因子(VEGF)刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）过度生长模型（血管的生长主要依靠的是VEGF，VEGF是促进血管生成生长的主要因素，在机体病态情况下如出现肿瘤病灶、发生肿瘤转移等，VEGF会不受节制地大量分泌，因此肿瘤病人体内的VEGF含量往往要大大高于正常人，并促使病变组织中的血管以惊人的速度生成，导致血管新生。因此，利用VEGF刺激体外刺激HUVEC是经典的血管新生实验模型），蔓荆子黄素按照以下5个浓度梯度加入，0.1μM、1μM，2μM，5μM和10μM，观察蔓荆子黄素在体外对内皮细胞增殖影响。实验重复三次。结果发现蔓荆子黄素对内皮细胞增殖具有显著的抑制作用，半数抑制浓度（IC50）为3.2μM。

附图说明

图1显示了本发明人所做的蔓荆子黄素对HUVEC增殖的抑制作用实验的结果。

图2显示了蔓荆子黄素对HUVEC细胞生长的半数抑制浓度（IC50）为3.2μM。

具体实施方式

蔓荆子黄素具有显著的抗内皮细胞增殖活性。蔓荆子黄素对内皮细胞增殖具有显著的抑制作用，半数抑制浓度（IC50）为3.2μM。

本发明所述蔓荆子黄素（英文名Vitexicarpin）具体为：

蔓荆子黄素结构式为：

采用代表血管新生的、血管内皮生长因子(VEGF)刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）过度生长模型。（血管的生长主要依靠的是VEGF，VEGF是促进血管生成生长的主要因素，在机体病态情况下如出现肿瘤病灶、发生肿瘤转移等，VEGF会不受节制地大量分泌，因此肿瘤病人体内的VEGF含量往往要大大高于正常人，并促使病变组织中的血管以惊人的速度生成，导致血管新生。因此，利用VEGF刺激体外刺激HUVEC是经典的血管新生实验模型），蔓荆子黄素按照以下5个浓度梯度加入，0.1μM、1μM，2μM，5μM和10μM，观察蔓荆子黄素在体外对内皮细胞增殖影响。实验重复三次。结果发现蔓荆子黄素对内皮细胞增殖具有显著的抑制作用，半数抑制浓度（IC50）为3.2μM。

本发明的实施例及效果

实施例一.蔓荆子黄素在体外对内皮细胞增殖影响的实验检测

实验方案：观察蔓荆子黄素在体外对内皮细胞增殖影响。原代人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vascular Endothelial Cells，HUVEC）购自美国标准菌种收藏所（American Type Culture Collection，ATCC），完全培养基为内皮细胞生长基础培养基（endothelial cell medium，ECM），添加10%胎牛血清（fetal bovineserum，FBS），20μg/ml内皮细胞生长添加剂（endothelial cell growth supplement，ECGS），青霉素（50IU/L），链霉素（50mg/L），在100%空气湿度、95%/5%的空气/CO2比和37℃的条件下进行培养。

将蔓荆子黄素用二甲亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)配制成10mM储备液，-20℃避光贮存，加药前使用相应细胞培养液稀释到所需终浓度。

将生长至对数生长期的细胞接种于96孔板中，细胞在37℃，5%CO2培养箱中培养24小时，加药干预前用含0.1%胎牛血清的培养基饥饿12小时，然后更换成含不同浓度药物的培养基，按照以下浓度梯度加入：0.1μM、1μM，2μM，5μM和10μM，共设5个浓度，每孔中药物溶剂（DMSO）的体积不超过总体积的0.5%，每个浓度设4个复孔。加药2小时后在各个加药组和模型组中加入血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF），终浓度为5ng/ml。VEGF能直接刺激内皮细胞生长，可作为内皮细胞过度生长血管新生体外实验模型。继续培养24小时，使用CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8即CCK-8，Dojindo，Japan）染色细胞，通过酶标仪（MRX Revelation Absorbance Reader）测量每孔的吸光度值来定量细胞存活能力。以溶剂孔为对照，数据通过Excel中的t-test进行显著性统计，计算蔓荆子黄素对细胞生长抑制的半数抑制浓度（median inhibitoryconcentration，IC50）。实验重复三次。

实验结果：发现蔓荆子黄素对HUVEC增殖具有显著的抑制作用（图1，其中显示了不同浓度蔓荆子黄素对HUVEC增殖的抑制作用。）。即，在蔓荆子黄素的干预下，VEGF刺激的HUVEC增殖过程受到了显著的抑制，如图1所示，HUVEC细胞的存活能力明显下降。并且随着蔓荆子黄素用量的梯度式增加，HUVEC细胞存活能力的下降越发明显。经计算量效关系（图2），表明蔓荆子黄素可以抑制HUVEC的增殖，蔓荆子黄素对HUVEC细胞生长的半数抑制浓度（IC50）为3.2μM，表明蔓荆子黄素具有很强的抗血管新生作用。

Claims

1.蔓荆子黄素作为制备治疗肿瘤药物的用途，其特征在于蔓荆子黄素通过抗血管新生作用而起到治疗肿瘤的作用。